LABORATORIO DE BIOQUIMICA I

PRACTICA 3
PROPIEDADES INICAS DE LOS AMINOCIDOS INTRODUCCIN Las protenas son macromolculas compuestas por unidades ms pequeas conocidas como aminocidos. En las protenas se encuentra bsicamente veinte aminocidos diferentes, los cuales contienen un grupo carboxilo y un grupo amino unidos al mismo tomo de carbono (carbono ) estos aminocidos difieren unos de otros solo por la naturaleza de sus cadenas laterales, o grupos R que varan tanto en estructura, como en tamao y carga elctrica e influyen en la solubilidad en agua. Los grupos carboxilo y amino de los aminocidos funcionan como cidos y bases dbiles, respectivamente, y como tales, se ionizan cuando estn en solucin. Cada grupo tiene un pK, el cual corresponde al pH en que se encuentra la misma cantidad de la forma ionizada que de la ionizada.

COOH H3N
+

COO pK 1 H3N
+

COO pK 2 H2N C R

C R

C R

Los aminocidos tienen al menos dos pK, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres a cuatro formas inicas diferentes. Cuando la forma inica tiene una carga neta de cero se dice que se encuentra en su punto isoelctrico o pI. Al variar de pH, cambia la proporcin de la formas inicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminocidos. Cada aminocido tiene sus propio pK, puesto que presenta diferentes sustituyentes en sus cadenas laterales. Mediante una titulacin, se puede determinar el pK de un aminocido. OBJETIVO GENERAL Que el alumno determine en forma prctica el pK de un aminocido mediante el mtodo de titulacin por neutralizacin cido-base. OBJETIVO PARTCULAR Determinar el pK de un aminocido mediante una titulacin. Comparar los valores de pK del aminocido problema, obteniendo experimentalmente, con los valores tericos para su identificacin. Aprender el uso del potencimetro.

PRACTICA 3 PROPIEDADES IICAS DE LOS AMINOACIDOS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA I

MATERIALES Y METODO
2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 MATERIALES Vaso de precipitados de 250 mL Bureta de 50 mL Soporte universal y pinzas para bureta Potenciometro Vaso de precipitados de 250 mL Probeta de 50 mL Piceta Parrilla elctrica Agitador magntico Palangana MATERIALES REACTIVOS NaOH en lentejas Aminocidos

Soluciones Solucin de un aminocido 0.06M (en HCl 0.05M, pH de 1.0) Solucin de NaOH 0.3N (preparada en la sesin anterior) Soluciones amortiguadoras para calibrar el potencimetro. METODO Titulacin Potenciomtrica del aminocido 1. En un vaso de precipitados de 100 mL, colocar una alcuota de 30 mL de solucin de aminocido 2. Colocar esta solucin sobre una parilla e introducir un agitador magntico agitando ligeramente 3. Llenar la bureta con solucin 0.3N de NaOH 4. Calibrar el potencimetro con las soluciones amortiguadoras: calibrar con amortiguador de referencia pH 7 y como amortiguador de ajuste pH4. 5. Introducir el electrodo limpio en la solucin de aminocido y anotar la lectura de pH. Se debe evitar golpear el electrodo con el agitador magntico, y evitando que toque las paredes del vaso. 6. Iniciar la titulacin adicionando volmenes de 0.2 mL y tomando la lectura de pH en cada adicin. 7. En la bitcora tabular los valores de pH para cada 0.2 mL adicionados, hasta alcanzar el pH de la solucin de NaOH. Las soluciones utilizadas en esta prctica pueden eliminarse en la tarja, manteniendo la llave del agua abierta para diluir y al terminar lavar la tarja. RESULTADOS 1. Elaborar un cuadro de dos columnas donde la primera especifique el volumen de NaOH aadido y la segunda, el valor de H para cada volumen adicionado de NaOH. En la primera fila en cada caso anotar el pH del aminocido solo. 2. Elaborar una grfica, a partir del cuadro, colocando en el eje de las x el volumen de NaOH aadido y en el de las y el valor de pH. 3. Obtener los valores de pK para el aminocido y comparar con la bibliografa

PRACTICA 3 PROPIEDADES IICAS DE LOS AMINOACIDOS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA I

4. Escribir las formas inicas que debe existir del aminocido antes y despus de cada pK y en el pI Nota: recuerde poner titulo a la grfica y todos los datos necesarios.
14 12 10 8 pH 6 4 2 0 Equivalentes Aadidos de Base

pK2 pI

ANALISIS DE RESULTADOS Entregar al profesor los resultados obtenidos para su recopilacin grupal. El anlisis de los resultados aplicara para todos los equipos. Despus de alcanzar los resultados individuales; compare el CV obtenido entre los equipos. Despus de elaborar la grfica son los datos obtenidos en la titulacin, observe si se presentan zonas claras de amortiguamiento, esto es, cuando no hay cambios bruscos en el pH a pesar de la adicin de base. Compare el pH de las zonas de amortiguamiento con los valores de pK de los aminocidos en la bibliografa y diga de que aminocido de trata. Escriba las formas inicas que deben existir antes y despus de cada pK y en el punto isoelctrico. CUESTIONARIO 1. Cuales son los grupos funcionales del aminocido que se neutralizan en la titulacin de un aminocido? 2. Qu representa el pK de un grupo carboxilo o de un grupo amino?

PRACTICA 3 PROPIEDADES IICAS DE LOS AMINOACIDOS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA I

3. Partiendo de la especie totalmente protonada, escriba las reacciones de disociacin que se presentan durante la titulacin con una base fuerte, de los aminocidos tirosina y cido glutmico. 4. Indique si los aminocidos pueden usarse como amortiguadores y explique en que casos. 5. Cul es el fundamento del potencimetro?. BIBLIOGRAFIA 1. Day, R. A. y Underwood, A. L. 1989. Qumica Analtica Cuantitativa, 5 Edicin. Editorial Precentice-Hall Hispanoamericana, Mxico. 2. Day, R. A. Jr., Underwood, A. L. 1989. Qumica Analtica Cuantitativa 5 Ed., Prentice-Hall Hispanoamericana, Mxico. 3. Harris, D. C. 1992 Anlisis Qumico Cuantitativo. Grupo Editorial Iberoamericana, Mxico 4. Segel, I H. 1982. Calculos fe Bioqumica. Cmo resolver problemas matemticos de bioqumica general. 2 Edicin, Editorial Acribia, Zaragoza, Espaa. 5. Mathews C. K., Van Holde K. E., Ahern K. G. 2003. Bioqumica. Addison-Wesley, Espaa. 6. http://web.indtate.edu/thcme/mwking/amino-acids.html (Caractersticas qumicas de los aminocidos) 7. http://www.bi.umist.ac.uk/user/mjfrbn/Buffers/Makebuf.asp (pagina de ayuda para hacer amortiguadores).

PRACTICA 3 PROPIEDADES IICAS DE LOS AMINOACIDOS