I.

Introduccin la comprensin de la indepth de la qumica de la reaccin de sustancias hmicas en suelos, sedim entos, aguas naturales y el papel desempeado porestos compuestos en muchos ciclos geoqumic os ha sido el enfoque cientfico o para ms de un siglo y en ese timethere ha sido una acumulacin de una gran cantidadde datos cientficos. En contraste, sin embargo, las interacciones entre estos compuestos ubicuos y poblaciones microbianas slo recientemente han obtenido laatencin cient fica. Se sabe ahora que las comunidades microbianas en ambientes aerobios y anaerobios interact an con sustancias hmicas a travs de una ampliadiversidad de mecanismos, incluyendo procesos catablicas, ciclo redox y biodisponibilidad de nutrientes. HS puede ser utilizada por microorganis mos como aceptoresde electrones efectiva para la degradacin oxidativa de carbono orgnico en a mbientes anaerbicos. Como alternativa, pueden utilizarse HS en forma reducida pormicroorganis mos como donadores de electrones eficaz para la asimilacin del carbono orgnico acoplado a la d esnitrificacin. Estos procesos metablicos, as como lareactividad intrnseca de Geoqumica de HS ahora se sabe que desempean un papel importante en el destino y el transporte de herbicidas, p esticidas, hidrocarburos,cationes y otros contaminantes ambientales importantes. En este captulo se examinar las diversas reactividades geoqumicos y microbianas de sustancias hmicas, elrol q ue juega estos compuestos orgnicos complejos en una diversidad de ambientes y su potencial apl icabilidad a las estrategias de biorremediativas II. origen y qumica de cidos hmicos sustancias A. HS en el entorno de HS son componentes ubicuos en el medio ambiente y pueden aislarse fcilmente de casi todo slos suelos, aguas y sedimentos. Puede representan asmuch como byweight de 10% del t otal contenido muchos suelos y sedimentos. En todos los ambientes, HS estn formados por la descomposicin de plantas, animales y clulas microbianas y tienden a ser ms rec alcitrantes que los materiales deprecursor. Los grupos funcionales de la HS, que determin an las caractersticas fsicas y qumicas, varan y dependen del origen y la edad del materi al. HS se componende tres componentes bsicos, . cidos flvicos, cidos hmicos (HA) y humins de las interacciones microbianas con susta ncias HMICAS (FA). Tradicionalmente, estos componentes se definen segnsu solubilid ad. Humins son la fraccin insolubles en allpHvalues, cidos hmicos son insolubles en lo s valores de pH cido por debajo de pH 2,0 y cidos flvicos sonsolubles en todos los valo res de pH. HS se piensa que consisten en un esqueleto de alquil\/aromtico unidades cros slinkedmainly por grupos de oxgeno y nitrgeno conlos principales grupos funcionales c ido carboxlico, hidrxidos fenlicos y alcohlicas, cetona y grupos quinona (Livens, 1991; Schulten et al. , 1991). Esta estructurapermite HS enlazar material hidrfobo e hidro flico y as juegan un papel importante en el destino y el transporte de metales pesados e hidrocarburos contaminantes en elmedio ambiente (Buffle, 1984; Hesketh et al. , 1996; Moulin andMoulin, 1995; Nelson et al. , 1985; PERDUE,

1989; Rebhun et al. , 1996; Stevenson, 1992b; Zhang et al. , 1996). La estructura general de HS se cree que influyen fuertemente en sus caractersticas fsica s y qumicas (Balnois y Wilkinson, 2002), sin embargo, la naturaleza de estaestructura es todava objeto de debate y el enfoq ue de varios excelentes crticas recientes (Hayes y Clapp, 2001; Piccolo, 2001; Sutton y Sposito, 2005). Tradicionalmente HS fueron considerados para ser ensamblados macromoleculares de rel ativamente highmolecularweight compuestos mientras que, por el contrario,los estudios ms recientes sugieren que HS son realmente las agregaciones de molculas orgnicas d e relativamente bajo peso molecular (Peuravuori, 2005 yreferencias en l). Esta nueva vista sugiere que las molculas individuales de cido s hmicas pueden ser significativamente menores de lo que se pensaba. En general,pare ce probable que molculas hmicas individuales estn en el rango de tamao 1000 2000 Da (Brown y Rice, 2000; Leenheer et al. , 2001; Piccolo y Spiteller, 2003;Stenson et al. , 2002). B. coloidal naturaleza de sustancias HMICAS el intervalo de tamaos moleculares para la mayora de cidos hmicos y flvicos cido a gregados los sita en el rangocoloidal (0. 0011. 0 mm) cuando se encuentra en solucin acuosa (Gaffney et al. , 1996). Reacciones qumi cas y fsicas son generalmente mejoradas en sistemascoloidales debido a las grandes re as de superficies de las partculas coloidales. Se piensa que consisten en molculas coloi dales hmicas son enrollados, longchain,o threedimensional entrecruzado macromolcul as con cargas elctricas distribuidas diversamente en la partcula (Cameron et al. , 1972; Chen y Schnitzer, 1976; Ghosh ySchnitzer, 1980; Orlov et al. , 1975; Stevenson, 1982a; Visser, 1964). La conformacin molecular se caracteriza por la concentracin de la HS, pH, fuerza inica y estado redox del medio ambiente (Chen y Schnitzer, 1976; Coates et al. , 2001;Ghosh y Schnitzer, 1980; Uno de los modelos destacados para la formacin de sustancias hmicas incluye reaccion es entre polifenoles, Quiones y nitrogencontaining INTERACCIONES microbianas con sustancias HMICAS molculas como amino azcares (Flaig, 1966; Flaig et al. , 1975; Discusin, 1966). D. METAL Y RADIONCLIDOS vinculante y transporte hmicos y flvicos materiales son extremadamente importantes en la movilizacin de met ales txicos yradionucleidos en el medio ambiente. Debido a los cambios de tamao induc idos por reordenamiento conformacional y agregacin o disociacin derivadosintermolecul ar hidrgeno, cidos hmicos y flvicos cidos forma soluble complejos que pueden migra r a largas distancias o precipitado, transportar cationes enlazadoscon ellos. Esto depende de los iones metlicos, la carga del catin, el grado de ionizacin de la molcula orgnica,

la fuerza inica del medio y la cantidad de metalenlazado (Choppin y Allard, 1985; Gaffney et al. , 1996). Por esta razn, el transporte de estas especies en forma de cidos hmicos o flvicos coloides ha hecho hincapien reas como la biodisponibilidad de metal (Buffle, 1984) y las evaluaciones de seguridad nuclear residuos de instalaciones de eliminacin ( Moulin y Ouzounian, 1992).Metales traza en sedimentos humato demostraron ser enriquecido por tanto como 1 0, 000fold sobre las concentraciones en las aguas superficiales (Choppin, 1992).Adems, la concentracin de especies disueltas heavy metal en las aguas superfici ales ha demostrado correlacionar directamente con coloides hmicos (Nelson et al. ,1985) . Debido a la compleja naturaleza polielectrolticas de las HS, modelado de complejacin d e metal ligand tradicional no puede utilizarse para describir la naturalezadel enlace metlico (Rao et al. , 1994). En consecuencia, complejacin metal humate generalmente se examina en el contexto de los modelos multiligand inespecficos, discretos o continuos (Perdue y Lytle, 1983). Aunque una variedad de los grupos funcionales de HS (p. ej. , fenlicos, sulfurcont aining y nitrogencontaining grupos carboxlicos) estn involucrados en elproceso de metal binding, los grupos carboxilato se consideran principalmente responsable de enlace de m etales y radionucleidos (Buffle, 1984; Choppin y Allard, 1985; y las referencias en l). Cambios conformacionales en la estructura de cidos hmic o se piensa que tienen un efecto directo sobre la capacidad demetalbinding de la HS y en la estabilidad del complejo humato esprragos (Coates et al. , 2001; Rao et al. , 1994; Ta sa et al. , 1993; y las referencias en l). Esto es porque el enlace metlico a HS aumenta con un mayor gr ado de ionizacin del material hmico (Coates et al. , 2001; Gaffney et al. , 1996).El aume nto de la ionizacin de la poliestirensulfonato orgnica provoca una mayor repulsin inter molecular, que resulta en cambios conformacionales y la desagregacino el desenrollamie nto de las cadenas de polmeros. El enlace de los cationes metlicos neutraliza estas fuer zas repulsivas y promueve la contraccin del polmero(Gaffney et al. , 1996). La presencia de altas concentraciones de metales en relacin con HS da como resultado una compactacin de la molcula de cidos hmico con un interior hidrofbicoresultante ( Gaffney et al. , 1996 y referencias en l). E. orgnica HIDROFBICO vinculante y transporte la asociacin o vinculante de no polar es, compuestos hidrofbicos HS ha observado para aumentar la solubilidad ymovilidad de varios contaminantes (Carter y Suffet, 1982; Landrum et al. , 1984; Wershaw et al. , 1969). El enlace de compuestos hidrfobos por HS provoca una disminuc in en la absorcin de estos compuestos para sedimentos y partculas ensuspensin, una disminucin en su biodisponibilidad para los organismos acuticos, una disminucin en su tasa de volatilidad, una disminucin de la tasa de hidrlisisalcalina de ciertos pesticidas y una influencia en la

fotoqumica de diversas sustancias qumicas peligrosas en aguas naturales (Coates et al. 2001; Gaffney et al. , 1996;MacCarthy y Suffet, 1989; y las referencias en l). El mecanismo por cual HS compuestos hidrofbicos bind no es completamente entendida (Gaffney et al. , 1996). Se hahipotetizado que los grupos no polares en la molcula de cidos hmico forman una estructura micelar o doublelayer que atrapa la apolar orgnica en un ambientehidrofbico microscpico similar al comportamie nto de micelas de surfaceactive (Wershaw, 1986). En contraste, existen evidencias para enlaces de hidrgeno entre el SAy compuest os hidrofbicos (Senesi et al. , 1987). Es probable que ambos tipos de enlace son importa ntes segn los hidrofbicos materiales orgnicos y cidos hmicosinvolucrados (Gaffney e t al. , 1996). . El alcance de este enlace depende de la ionizacin de los materiales hmicos, la fuerza i nica y la concentracin de counterion y es ms pronunciado para los menoscompuestos o rgnicos aqueoussoluble (Carter y Suffet,1982). Por estas razones, el enlace de compues tos no polares, hidrofbicos por materiales hmicos tambin seconsidera sensible a cambi os conformacionales dentro de la molcula de cidos hmico (Coates et al. , 2001; Gaffne y et al. , 1996). F el. las reacciones REDOX de de HS hmicos materiales tienen un nmero relativamente elevado de radicales libres (Gaffney e t al. , 1996). Estos radicales songenerados por cambios de pH, reduccin qumica o irradi acin solar (Senesi y Schnitzer, 1978). Estos radicales libres juegan un papel importante en la polimerizacin y reacciones redox de materiales hmicos (Gaffney et al. , 1996). HS puede reducir metales conpotenciales d e reduccin estimada de 0. 50. 7 eV (Skogerboey Wilson, 1981) y se han demostrado transferir electrones desde reducido (sulfuro) de productos ino rgnicos y orgnicos (cido ascrbico) y diversos metales pesados,hexamolybdate y disol ventes clorados (Curtis y Reinhard, 1994; Dunnivant et al. , 1992; Kahn et al. , 1984; PERDUE, 1989; Schindler et al. , 1976; Schwarzenbach et al. , 1990; Skogerboe y Wilson, 1981; Szilagyi, 1971). Esto puede tener un efecto importante sobre la migracin y la toxicidad demuchos de estos compuestos. Se piensa que los componentes reactivos de redox de HS que int ervienen en estas reacciones son los grupos funcionales de quinona(Curtis y Reinhard, 1994; Dunnivant et al. , 1992). Como la complejidad de la HS estructura ha hecho estudio s definitivos redox de difciles, la participacin potencial de laquinona \/ par redox de hidro quinona en transferencia de electrones se ha investigado con compuestos de modelo, co mo 2, 6 antraquinona disulfonate (AQDS) (Coates etal. , 1998, 2001, 2002; Curtis y Reinhard, 1994; Lovley et al. , 1996; Tratnyek y Macalady, 1989), que tienen propiedades redox similar al contenido de quinona de HS. Sinembargo, los efectos de otras caractersticas capitalizacin de HS, tales como interacciones hidrof bicas o quelacin cacin, no ser aparentes con estos compuestos.

III. interacciones entre sustancias hmicas y microorganismos microbiana interacciones con otros materiales hmicos dependen de la edad y la fuente d e carbonoorgnico complejo y las condiciones del medio ambiente. Aunque HS se consid eran recalcitrantes en ausencia de oxgeno disuelto (Stevenson, 1994), varios estudiosrecientes han demostrado que estos compuestos desempean un p apel importante en la ecologa microbiana del ambiente natural. A. DEGRADACIN DE SUSTANCIAS HMICAS POR AGENTES MICROBIANOS. Materiales hmicos son degradados lentamente por poblaciones microbianas en ambientes aerobi os (Wetzel,1992; Wetzel et al. , 1995;y las referencias en l). Hongos WhiteRot, reconocidos por su capacidad degradar la lignina (Hatakka, 2001), han sidoimplicados en la transformacin de cidos hmicos naturales y sintticos p ara bajar de peso molecular compuestos y CO2. Produccin de enzimas extracelularespro bablemente est implicada en este proceso (Blondeau, 1989; Dehorter y Blondeau, 1992; Dehorter et al. , 1992; Hofrichter y Fritsche, 1997; Hurst et al. , 1963; Willmanny Fakoussa,1997). En un estudio reciente, los basidiomi cetos Collybia dryophila si fue mostrado capaces de degradar cidos hmicos naturales p ara bajar componentesde cidos flvicos de peso molecular. Este organismo tambin,pro ducido 14CO2 cuando se incuban con sinttico 14Clabeled HA en medios de cultivo lqui do, resultando en casi 50% de mineralizacin de la HA en 42 das, cuando losmedios de c omunicacin fue complementado con 200 mM MnCl2 (Steffen et al. , 2002). Asimismo, las poblaciones microbianas procariotas han demostrado capaces dedegradar la materia h mico, especialmente bajo condiciones aerbicas (deHaan, 1974; Sederholm et al. , 1973; Wetzel, 1992), y se han observado tasas dedescomposicin de 1 a 5% por da para complejo disu elto materia orgnica (Wetzel,1984). En caldo nutritivo lquido aerbico, cultivos puros de Pseudomonasfluorescens, as como muestras de fromenvironmental de consorcios micro bianos, fueron capaces de degradar \/ transformando una mezcla de alta disponibilidad y FA(Hertkorn et al. , 2002).

Exposicin de alta disponibilidad y de FA a la radiacin UV de la luz solar normal haba m ejorado significativamente este proceso catablico. Esto es debido a la absorcinde rayos UV rayos por macromolculas orgnicas, tales como cidos hmicos y flvicos, puede res ultar en la produccin de compuestos orgnicos biolgicamentelbiles mediante descomp osicin fotoltica (Wetzel, 1992,1993; Wetzel, et al. , 1995). La capacidad de HS para ser degradado bajo diferentes condiciones indica quepueden ser fuentes de carbono, nitrgeno o azufre para microorgan ismos en muchos entornos B. REACCIONES OXIDO REDUCCIN ENTRE BACTERIAS Y ACIDOS HUMICOS HS contienen una variedad de potencialmente redoxactive entidades incluyendoquinona (hidromasaje), sulfhidrilo, carboxlico y grupos fenlicos funcionales. Asimismo, HS a menudo contienen metales estrechamente vinculados, como el hierro o m

anganeso, que puede participar en reacciones de oxidation reduction (Lovley yBluntHarris, 1999). Las bacterias son conocidas para explotar la naturaleza redoxactive de sustancias hmicas de respiracin microbiana. En este sentido, HS han demostrado funcionar como sumideros de electrones para anaer obios respiratorios y fermentativo bacteriastimulating mineralizacin decompuestos orgn icos complejos en ausencia de O2 (Benz et al. , 1998; Bradley et al. , 1998; Coates et al. , 1998). Estudios de resonancia de spin electrn han confirmado que la estructura quinona es los c omponentes redoxactive de la HS para estas reacciones microbianasreductivas (Scott et al. , 1998), y las HS han demostrado actuar como portadores de electrones soluble entre microorganismos y aceptores de electrones insolubles comoxidos de fe (III) (Bradley et al. , 1998; Lovley et al. , 1996). Cuando las reduccin HS interactan con los xidos de fe (III), son re oxidized y por lo tanto pueden ser reciclados (Lovley et al. ,) 1996. En contraste,tambin h an demostrado reduccin de sustancias hmicas.para funcionar como donadores de elect rones para la respiracin microbiana de aceptores de electronesanaerobios como NO3 (C oates et al. , 2002). Una encuesta bsica de las reacciones de oxidation reduction entre el SA y microorganismos se da en la siguiente seccin.Una seccin poster ior de este captulo explica cmo estas propiedades pueden ser explotadas para fines de biorremediacin y modelado ambiental. C. HS COMO ELECTRONES ACEPTORES Y ELECTRONES LANZADERAS HS primero fueron demostradas para funcionar como aceptores de electrones de la respir acin microbianadurante las investigaciones de themechanisms de reduccin de hierro po r el modelo organismos Geobacter metallireducens y Shewanella alga (Lovley et al. , 1996 ). Eneste estudio, HA, as como el compuesto de quinonecontaining, AQDS, mostraron p ara estimular la reduccin de fe (III) sinttico pobremente cristalinos. Posteriormente,g. me tallireducens demostr para oxidar 14Cacetate a 14CO2 cuando sustancias hmicas estu vieron presentes como el nico electrn aceptor anaerbicas, medios decomunicacin de bicarbonatebuffered. Despus de 2 horas de incubacin, los HS se quitan estas botellas anaerbicas y filtradas para eliminar las clulas. Adicin dethemicrobially tratados HS a cit rato de fe (III) conducido a la produccin de fe, mientras que fue incapaz de producir fe sig nificativa HS renunciando a la incubacin con g.metallireducens. Estas observaciones sug ieren un modelo twostep para la respiracin microbiana de sustancias hmicas. En este modelo, las bacterias primeroreducen el HS como un aceptor de electrones. Los HS reduc idos entonces son capaces de difundir a travs de los medios de comunicacin y as redu cir abiticamenteinsolubles fe (III), reciclaje de los materiales hmicos al estado oxidado. El quinonecontaining AQDS compuesto se encontr para imitar los efectos de sustancias hmicas durante la reduccin microbiana de hierro. En este caso, g. metallireducens y S. alga reducen AQDS a su homlogo de hidroquinona 2, 6anthrahydroquinonedisulfonate ( ADHS) durante el perodo experimental (Lovley et al. , 1996).Estas observaciones dieron el primer indicio de que la estructura quinona dentro de HS puede realizar como los comp onentes de redoxactive durante las interaccionescon los microorganismos. En posteriores

investigaciones, otros Quiones modelo incluyendo lawsone, menadiona y anthraquinone 2sulfonate mostraron asimismomejorar la reduccin de fe (III) amorfa poco cristalina por g. metallireducens (Lovley et al. , 1998). En diversos grados, AQDS y cidos hmicos hab an mejorado asimismoel ritmo y la medida de reduccin de varias fases de hierro cristalin o como goetita, hematita y esmectita ferruginosa por g. metallireducens (Lovley et al. , 199 8). D. QUINONA ENTIDADES LEY COMO ELECTRN ACEPTORES EN HS REDUCCIN debido a su naturaleza compleja, HS contienen muchos grupos funcionales que potencial mentepodra funcionar en reacciones redox. Estudios con anlogos de quinona sugieren q ue la reduccin microbiana de HS fue principalmente mediada por la estructuraquinona. D e hecho, trabajos anteriores sobre la interaccin de redox abiticos de HS con contaminan tes orgnicos tambin haban destacado la importancia de losgrupos funcionales de Qui ones (hidromasaje)(Curtis y Reinhard,1994; Dunnivant et al. , 1992). Sin embargo, la parti cipacin de los grupos funcionales de quinona enreductivas interacciones entre microorga nismos y HS an deba determinarse experimentalmente. Durante la reduccin, Quiones se someten a una transferencia de twoelectron a la forma hidroquinona, generalmente pr oceder a travs de un intermediario desemiquinona (cmaras, 1988; Clark,1960; Meisel y Fessenden,1976). Esta propiedad qumica fue explotada por S cott y sus compaeros de trabajo para demostrar quelos grupos funcionales de quinona d e HS se comportaron como microorganismos aceptores de electrones disponibles. En est e estudio, las mediciones de resonanciade spin electrn indicaron que reduccin microbia na de HS condujo a un aumento de los radicales de semiquinona dentro del HS s y tambi n que exista una correlacinpositiva entre la capacidad de funcionar como un aceptor de electrones de un HS y su contenido general de semiquinona (Scott et al. , 1998), apoyo la sugerencia de que los grupos de quinona eran la estructura primaria electronacc epting para HSreducing de bacterias. Adems de grupos funcionales de quinona, HS se s abe que contienen hierro complejado especies, lo que podran explicar tambin potencial mente la capacidad de lasbacterias reducing de Fe (III) utilizar HS como un aceptor de electrones. Estudios previos demostraron humicbound qu e fe (III) se redujo como un aceptor de electronespreferentemente por g. metallireducens c on acetato como donante de electrones; Sin embargo, la capacidad de electronaccepting de la HS haba superado mucho lasconcentraciones de fe (III) y Fe generados de fe (III) e nlazado no funcion como un agente electronshuttling agregadas xidos de hierro insolub les (Lovley y BluntHarris, 1999). Asimismo, HS natural con concentraciones indetectables de fe (III) tambin sirvi c omo aceptores de electrones funcional de g. metallireducens ms indicando queenlaza ob ras de fe (III) un papel mnimo en la capacidad de electronaccepting de microorganismos reducibles HS (Lovley y BluntHarris, 1999). Lo importante, las reacciones qumicas entre el SA y oxidantes fuertes, como I2, indican q ue Quiones (hydro) no son la nica significativa redoxactive compuesto en HS,aunque e stos datos no pueden tener cierto para las reacciones redox mediada por microorganismo s (Struyk y Sposito, 2001).

Quiones no representan los grupos funcionales slo en HS que pueden ser capaces de o xidacin o de reduccin microbiana. De hecho, las bacterias. han demostrado reducir otras molculas orgnicas de no quinoid. Microorganismos, tales como la Shewanella oneidensis y Escherichia coli, ha demostrado que usar varios phenazines como aceptores de electrones o lanzaderas(Hernndez et al. , 2004; McKinlay y Zeikus, 2004). Estos grupos funcionales tericamente podra existir como un componente o una e ntidad dependiente de cualquiermolcula hmico determinado y puede participar en algn grado en sus propiedades redox. Sin embargo, es generalmente aceptado que Quiones y sus homlogos dehidroquinona son los principales contribuyentes a la interaccin de red ox entre el SA y microorganismos. Este concepto es admite circunstancialmente por el xi to decompuestos modelo quinona, como AQDS, previsiblemente imitando el comportamie nto redox de HS y confiable que se utiliza para aislar confirmado HSreducingorganismos de medio ambiente (Coates et al. , 1998). E. UNA ENCUESTA DE MICROORGANISMOS CAPACES DE REDUCIR SUSTANCIAS HMICAS muchos organismos han demostrado capaz de reducir HS o modelo Quiones.Generalme nte, se muestran HS para actuar como aceptores de electrones o lanzaderas de electrone s entre un organismo y un aceptor de electrones insolubles mselectropositivo. En mucho s sentidos, las diferencias entre un aceptor de electrones de HS y un shuttle de electrones HS son nominales y en gran parte se considerarjuntos en este captulo. Sin embargo, H S y quinonas tambin han demostrado para interactuar de manera redox con organismos en lo que, por definicin, debe ser unproceso nonrespiratory de fermentacin. Una breve e ncuesta exhaustiva de bacterias conocidas para reducir HS o Quiones se describe ms a delante. Quiones HS y modelo han demostrado funcionar como aceptores de electrones para los microorganismos bajo condiciones anaerbicas en ausencia de cualquieractividad '' viaje '' . Por ejemplo, Desulfobulbus propionicus podra crecer por oxidacin de piruvato, lactato, propionato e hidrgeno para la reduccin de AQDS (Holmes etal. , 2004). En un estudio, u n nmero de aislamientos de Geobacteraceae fueron enriquecido desde fuentes de sedim entos por oxidacin del acetato de acoplamiento a lareduccin de la AQDS (Coates et al. , 1998). Estos organismos tambin fueron capaces de crecer a travs de la reduccin de lo s cidos hmicos del suelo purificado y fe(III).De hecho, la conexin entre AQDS, HS y fe (III) la reduccin parece ser relativamente ntimo. Un estudio temprano haba proyectado c ultivos puros de diversas bacterias dereducing de Fe (III) y encontr que todos los organi smos capaces de reduccin AQDS reduccin HS (Lovley et al. , 1998). Asimismo, los organismos que podran reducirel hierro (III) podran reducir AQDS, mientra s que organismos incapaces de reduccin de fe (III) no pudieran. Sin embargo, muchos or ganismos no tradicionalmenteasociado conReduccin de fe (III) son capaces de los Quio nes. Por ejemplo, un miembro de las enterobacterias, Pantoea agglomerans SP1, es un a naerobio facultativo puede crecerpor oxidacin de hidrgeno o acetato de acoplamiento a la reduccin de la AQDS (Francis et al. , 2000). Adems, varios organismos halorespiring

y bacterias Biblia desulfato as como archaea metanognicas, han demostrado capaz de r educcin HS (Cervantes et al. , 2002). Reduccin de hierro comnmente es considerada u n metabolismo microbiano geoqumicamente importante, y la conexin entre la reduccin de fe (III) y lanzaderas deelectrones de quinonebased est bien documentado (Newman y Hernndez, 2001; Luu et al. , 2003). Cultivos puros de varias especies bacterianas son capaces deutili zar HS o Quiones como ONU transporte de electrones para aumentar la velocidad o la m edida de respiracin insoluble de mineral de hierro (III). For example, Shewanella putrifaci ens CN32 podran mejorar la velocidad y la medida de reduccin de fe (III) con AQDS y m uchas otras terrestres y acuticos sustanciasorgnicas (Dong et al. , 2003; Kukkadapu et al. , 2001). Asimismo, la radiationresistant Deinococcus radiodurans y el chlororespiring Anaeromyxo bacter dehalogenans podran reducir ms eficientemente xidos de fe (III) enpresencia de AQDS (Fredrickson et al. , 2000; l y Sanford, 2003). Una aislada de Thermus, cuya temperatura ptima de crecimiento es de aproximad amente 65 \u0002C,mejor enormemente en el crecimiento y la capacidad de reducing de Fe (III) en presencia de AQDS (Kieft, 1999). La capacidad de AQDS y HS para actuar como lanzaderas de electrones entre microorga nismos y minerales de hierro (III) no se limita a Gramnegative eubacterias. Eldehalogena ns de Desulfitobacterium de Grampositive del mismo modo podra reducir AQDS y HS en suspensiones de clulas lavadas, que luego podran tericamentela lanzadera electrones a especies de fe (III) (Lovley et al. , 1998). Adems, varios miembros del dominio Archaea son capaces de dest ruan similares. Methanosarcinabarkeri MS y Methanococcus voltaie A3 fueron capaces d e aumentar su reduccin de fe (III) con pequeas adiciones de AQDS (Bond y Lovley, 2002). En el mismo estudio, metangenos adicionales probados mostraron capaces de re duccin de AQDS. Nonmethanogenic gnero archaea, Pyrodictium islandicum,tambin ap arece AQDSstimulated reduccin de xido de hierro (III) mal cristalina, goethita y hematit a; Mientras varios otro gnero y termfilos archaea podra reducirAQDS con hidrgeno o l actato como donadores de electrones adecuado (Lovley et al. , 2000). Tambin parece que la capacidad para reducir la AQDS y potencialmente HS, no se limita a microorganismos respiratorios. Propionibacterium freudenreichii yLactococcus lactis ca mbi sus fermentaciones a ms oxidan productos finales en presencia de HS (Benz et al. , 1998). Cuando p. freudenreichii fermenta lactato, forma propionato y acetato en una proporcin 2 :1. En presencia de fe (III) por s sola, no cambiar este patrn de fermentacin, yno se pro duce fe. Sin embargo, en presencia de HS y fe (III),una fermentacin de lactato por p. freu denreichii produce dos veces tanta acetato como propionato. Adems,fe es producido en el transcurso de la fermentacin. Esto ilustra que al menos algunas bacterias fermentativa s pueden explotar extracelulares Quiones para arrojarreducir equivalentes y trasladar sal dos de fermentacin. F. HMICOS SUSTANCIAS COMO DONADORES

han demostrado reducir qumicamente distintas especies qumicas ambientalmente releva ntes, indicandoque HS en un estado de Valencia reducida puede actuar como reductores. Por ejemplo, cidos flvicos de suelo reducida se mostraron capaces de reducir la Hg(II) a Hg(0), fe (III) a fe y que a la incorporacin (Skogerboe y Wilson, 1981; Wilson y Weber, 1979). De manera similar, HS tambin son capaces de transferir electrones deespecies or gnicas o inorgnicas reducidas a metales pesados, hexamolybdate y disolventes clorado s (Alberts et al. , 1974; Curtis y Reinhard,1994; Dunnivant et al. ,1992; Kahn et al. , 1984; PERDUE, 1989; Schindler et al. , 1976; Schwarzenbach et al. , 1990; Skogerboe y Wilson, 1981; Szilagyi,1971). La capacidad de actuar comoagentes reductores de sustancias hmi cas no se limita a reacciones qumicas abiticas. Microorganismos tambin son capaces d e utilizar HS reducida como donadoresde electrones para la asimilacin de carbono y resp iracin anaerbica. Esta capacidad tambin ha sido ilustrada con anlogos de HS, como ADHS, la contraparte dereduccin de la quinona AQDS. Un estudio inicial investigando A DHS como un donador de electrones funcional encontr varios organismos, incluyendo g. metallireducens, Geobacter sulfurreducens, S. alga Geothrix fermentans y Wolinella succi nogenes, podra oxidarse ADHS acoplada a la reduccin de nitrato o fumarato ensuspensi ones celulares (Lovley et al. , 1999).Mientras que los organismos antes mencionados tam bin eran conocidos para reducir AQDS o HS; Paracoccus denitrificans, incapaz de reduci r de Fe (III), AQDS o HS,tambin podran oxidarse ADHS o reducido HS junto a la reducci n de la nirate en suspensiones celulares. Alga S. se encontr igualmente capaz de oxidante reduce loscidos hmicos de Suwanne e river acoplados a la reduccin del fumarato. Resonancia de spin del electrn se utiliz e n este estudio nuevo implicar la estructura quinona(hidromasaje) de HS como agentes im plicados en las reacciones redox de humicmicrobe. Aunque un nmero de los organismos evaluados en este estudio no parececrece r por destruan depender de ADHS como donador de electrones, ambosG. sulfurreducens y w el. succinogenes podan transferirse repetidamente en medios que contienen ADHS y electrn aceptor, con aminocidos y acetato (respectivamente)presumiblemente cumplien do con la necesidad de carbono celular. Nmero de clulas de alga S. aproximadamente quintuplicado en presencia de ADHS y fu marato, pero fueron incapaces de crecer en controles carecen de donador oaceptor (Lovle y et al. , 1999). Microorganismos de perchlorateReducing del gnero Dechloromonas tam bin han demostrado capaz de oxidantes ADHS junto a la reduccin de nitrato o perclorat o(Bruce et al. , 1999; Coates et al. , 1999, 2001,2002). Por ejemplo, D. agitata es capaz de crecer por este metabolismo siempre ace tato de 0,1 mM como fuente de carbono.Este organismo no es capaz de cualquier reducci n de fe (III) dissimilatory, o de reduccin de HS oxidado. Posteriores estudios de enumer acin ms probables nmero(MPN) encontraron que la capacidad de crecer por oxidantes ADHS acoplada a la reduccin de nitrato ambientalmente prevalente (Coates et al. ,) 200 2. Las mediciones dela MPN indican que existan bacterias capaces de ADHS oxidacin a coplada a la reduccin de nitrato en Prstina y sitios hydrocarboncontaminated de sistema s de aguadulce y marinos. Concentraciones de AHDSoxidizing organismo oscilado entre 1. 33\u0003101 clulas\/g de sedimento de un acufero hy drocarboncontaminated 4.17\u0003106 clulas\/g de sedimento del lago '' Virgen ''.

Enriquecimientos que contiene acetato de ADHS, nitrato y 0,1 mM realizaron en este estu dio y condujo al aislamiento de bacterias varios, incluidos los representantes dela alfa, beta, gamma y subgrupos de delta de proteobacteria. Todos estos aislamientos fueron ca paces de oxidar reducida HS natural junto a la reduccin de nitrato. Lo importante, estos a islamientos fueron probados por sucapacidad para degradar la antraquinona modelo usad o para aislarlos y se encontraron incapaces de este metabolismo. En general, este estudio pone de relieve la prevalencia, as como la diversidad filogentic a, de bacterias capaces de oxidantes anaerbicamente hidroquinonas dentro de modelo quinoid compuestos o sustancias hmicas.

Un estudio reciente en el catlogo de bacterias conocidas para oxidar hidroquinonas a tra vs de la respiracin anaerbica. En esta investigacin, varias especies de lachlororespiri ng Desulfitobacterium y Sulfurospirillum gneros se mostraron capaces de oxidantes ADH S con nitrato, tetracloroetileno (PCE) y 3chloro4hydroxyphenylacetate como aceptores d e electrones (Luijten et al. , 2004). Aunque muchos de estos organismos no crecieron por estas destruan, Desulfitobacteriumhafniense DP7, Sulfurospirillum deleyianum Sulfurospri llum barnesii SES3 y Sulfurosprillum arsenophilum podran mantenerse por al menos dos t ransferencias enmedios que contienen ADHS y el aceptor de electrones pertinentes. El fenmeno de la oxidacin microbiana de hidroquinonas extracelulares es tentadora y li mitada. En una estrategia de vida, los organismos obtener carbono de fuenteslimitadas f cilmente degradables, como acetato y simplemente usan el HS reducidos como fuente de energa. Tal un metabolismo da a estos organismos una potencialventaja competitiva sobr e otros hetertrofos en el entorno que puede requerir un compuesto orgnico limitado com o acetato como fuente de energa y un carbono,requiriendo concentraciones significativam ente mayores para el crecimiento (Coates et al. , 2001). Parece que la capacidad de realiz ar este metabolismo esambientalmente prevalente y que una gran diversidad filogentica de las bacterias puede llevar a cabo el metabolismo bajo condiciones experimentales. Est emetabolismo puede ser considerado incluso ms ambientalmente relevante, teniendo en cuenta los informes recientes que encuentran HS en profundidades desedimento conserv an cierta capacidad reductora, incluso en zonas xica. Esta observacin sugiere que en m uchos entornos, reducida HS presentes pueden constituiruna capacidad de donating de e lectrones previamente no reconocidos apoyando una ecologa microbiana y as probablem ente influyen en disponibilidad de nutrientes yciclismo geoqumicos de cualquier sistema e n particular.

G. ADSORCIN DE BACTERIAS A HS anteriores estudios han indicado que las clulas microbianas, como Bacillus subtilis, pued en ser adsorbidas por HS (Maurice et al. ,2004). El comportamiento de la adsorcin de B. subtilis a HS demostr ser pH dependiente con la mayor interaccin que ocurren en un pH donde se esperaban lasclulas bacterianas y HS a exhibir una carga neta negativa (Fein et al. , 1999).

Esto implica que el comportamiento de adsorcin es debido a interacciones hidrofbicas e n lugar de electrostticas. La naturaleza hidrofbica de enlace bacterianahumic es compatible con otro estudio que indica que los iones metlicos de Cd, sospechados qu e en gran medida interactan electrostticamente carboxilo o gruposfenlicos de HS, no i mpacto adsorcin de cido hmico a B. subtilis (Wightman y Fein, 2001). En contraste, este ltimo estudio observar una inhibicin de Cd adsorcin enla sup erficie de B. subtilis en presencia de cido hmico. Este ltimo punto es de especial inter s, como material hmico en diversos Estados redox es conocido poralterar la toxicidad de los metales, incluyendo Cd y Cr a bacterias como e. coli (Coates et al. , 2001). En trmino s ms generales, la capacidad de un microorganismo paraabsorber a HS tiene implicacion es para cmo proceder procesos, tales como la degradacin de HS o respiracin HSbase d, con organismos que presentan estascaractersticas. Asimismo, estos datos sugieren qu e HS puede afectar la biodisponibilidad de los contaminantes orgnicos e inorgnicos que microorganismosenlazando las bacterias as como determinado contaminante. Naturales orgnicosmateria, como HS, tambin puede ayudar a dictar el transporte de las bacterias a travs de los sistemas acuferos, probablemente debido a la adsorcin reacciones entre materia orgnica, minerales y bacterias (Scholl y Harvey, 1992).

H. COMPLEJACIN DE ENZIMAS POR HS hmicos sustancias han demostrado formar complejos con varios extracelulares y enzima s membranebound, con una variedadde consecuencias para la actividad enzimtica y la estabilidad (Boyd y Mortland, 1982; Ladd y Butler, 1975; Ruggiero y Radogna, 1988; Skujins, 1976). HS puede causar la inactivacin de la actividad enzimtica extracelular microbiana por enlace de protenas, cidos orgnicos, que puede resultar en la agregacin,complejaci n y precipitacin de los complejos humicprotein (Wetzel, 1993 y referencias en l). Inactivacin enzimtica es anticompetitivas y puede ser parcial o completa,por ejemplo HS liberado de descomposicin Juncus effuses se observaron par a reducir la actividad de surfacebound bglucoside, aglucosidase y fosfatasa alcalina enc ultivos bacterianos suspendidos por una biopelcula de mixedspecies (Espeland y Wetzel, 2001). En general, el complejo humic enzyme es moderadamente estable ypuede mantenerse en un estado inactivado por pero dos prolongados y posteriormente reactivado por la exposicin a suave fotlisis de UV (W etzel, 1993). En contraste, HS puede ofrecer proteccin fotoltica a algunas enzimas. Por ejemplo, la ac tividad de aglucosidase comercialmente purificada fue probada como unafuncin del tiem po en presencia de agentes fotolticas UVA, UVB y radiacin fotosintticamente activa (P AR) (Espeland y Wetzel, 2001). En este caso, aglucosidaseactividad fue retenido en presencia de material hmico, pero rpidamente dejado cuando HS estaban ausentes, sugiriendo que HS protegido la e nzima de fotlisis.Incluso en la oscuridad, aglucosidase actividad se mantuvo mejor en ap roximadamente 100 min en presencia de HS que en ausencia de HS, sugiriendo que HS p

uedeestabilizar la actividad enzimtica o impedir que interactuar con otros materiales de e nsayo que les podran inactivar enzimas. Otro reciente estudio investig la actividad del phosphotase alcalina purificada cuando co mplejado e inmovilizados con suelo humates. En este estudio, el complejo humate enzyme retuvo el 5788% de la actividad de la enzima independiente propio y los valores d e Km gratis y enlazado enzimas fueronnotablemente similar (Pilar)2003. Sin embargo, la a ctividad de la fosfatasa alcalina fue alterado un poco y los efectos de la temperatura y pH f ueron diferentes entrehumatebound y enzimas independientes. La capacidad de materia hmico para afectar la estabilidad y la actividad de ambos de ext racelular y enzimas membranebound tiene profundas implicaciones para cmomicroorga nismos y HS interactan en situaciones ambientales. Por ejemplo, aglucosidase y bglucosidase estn involucrados en los procesos ecolgica mente importantes de filamentosos los lmites glucosdico de almidn ycelulosa, mientras que las fosfatasas alcalinas son responsables de filamentosos compuestos orgnicos de f sforo. Si la actividad de enzimas con esas importantesfunciones ecolgicas se ve consid erablemente afectada por HS, HS nuevamente juegan un papel significativo de facto en la regulacin de la actividad microbiana en lossistemas naturales. Como tal, las interaccione s entre enzimas y HS son tambin factores importantes a considerar en cualquier aplicaci n potencialmente relacionadoscon microorganismos y material hmico. I. un reciente informe de AQDS Y TAXIS microbiana indic S. oneidensis MR1 fue capaz de reconocer los gradientes de AQDS y gravados hacia el potencial aceptor deelectrones (Bencharit y Ward, 2005). Este fenmeno se observ en ambos ensayos de '' pluginpond'', as como en los ensayos de placa de enjambre. Desgraciadamente, el comportamiento de los taxis no fue mostrado por sustancias hmic as, y no fue ilustrado si S. oneidensis mueve hacia AQDS, o tal vez lejos de laforma reduc ida de la quinona, ADHS. Adems, no se observ si la conducta de tctica fue verdadera quimiotaxis o el fenmeno conocido como '' taxis de energa ''. A pesarde todo, estos resul tados son interesantes y sugieren que los microorganismos pueden ser bien adaptados pa ra responder a traslados de electrones extracelular en suentorno. I. AQDS Y MICROBIANOS TAXIS un informe reciente indic que S. oneidensis MR1 fue capaz de reconocer los gradientes de AQDS y gravados hacia el potencial aceptorde electrones (Bencharit y Ward, 2005). Este fenmeno se observ en ambos ensayos de '' pluginpond'', as como en los ensayos de placa de enjambre. Desgraciadamente, el comportamiento de los taxis no fue mostrado por sustancias hmic as, y no fue ilustrado si S. oneidensis mueve hacia AQDS, o tal vez lejos de laforma reduc ida de la quinona, ADHS. Adems, no se observ si la conducta de tctica fue verdadera quimiotaxis o el fenmeno conocido como '' taxis de energa ''. A pesarde todo, estos resul tados son interesantes y sugieren que los microorganismos pueden ser bien adaptados pa ra responder a traslados de electrones extracelular en suentorno.