UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES FACULTAD DE INGENIERIA INGENIERIA PETROLERA TECNOLOGIA DEL GAS 1

TRABAJO PRACTICO CROMATO GRAFIA Docente: Ing. Mario Daza

Alumno: Univ. Oscar Soliz Martinez Fecha: 27/09/2012

CROMATOGRAFIA
1.- OBJETIVOS El objetivo principal del presente trabajo es poder aprender acerca del funcionamiento de un cromatgrafo, viendo as sus partes y sus distintas funcionalidades. 2.- OBJETIVOS ESPECIFICOS Conocer las teorias del proceso cromatografico, asi como las distintas partes que pueda poseer el cromatografo. Aprender mas sobre las columnas de fase estacionarias y las columnas de fase medidoras de la temperatura. Conocer mas los distintos tipos de columnas y fases estacionarias 3.- FUNDAMENTO TEORICO En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los rectores del proceso de separacin: la adsorcin y la absorcin. La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de un slido, quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial. Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza de la substancia adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisin del adsorbente, y de la concentracin. La absorcin es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma. Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos. Segn, Giddings, se puede clasificar la Cromatografa por sus variantes: Fase Mvil (puede ser gaseosa, lquida fluido supercrtico) Fase Estacionaria Mecanismo de Retencin (tipos de equilibrios implicados en la transferencia de los solutos entre las fases). Forma de Contacto entre las fases (columna superficie plana) Dimensionalidad Escala Fsica Gradientes

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3.1.- Teoras del proceso Cromatogrfico El proceso cromatogrfico, aparentemente simple en prctica, es en realidad una compleja unin de fenmenos tales como hidrodinmica, cintica, termodinmica, qumica de superficie y difusin. Hasta la fecha se han propuesto muchas teoras, que incluyen complejos modelos matemticos para poder explicar el comportamiento de los solutos en las columnas cromatogrficas. Las ms estudiadas son: La Teora de los Platos Tericos (Martin y Synge), la Teora Cintica (Van Deemter, Zuiderweg, Klinkenberg y Sjenitzer) y la Teora Desarrollada (Golay) para Columnas Capilares. Segn la Teora de los Platos, una columna cromatogrfica est constituda por una serie de platos que contiene una fase estacionaria. Supone que el volmen de fase estacionaria en cada plato es constante; que el volmen de fase mvil es constante de plato a plato; que en cada plato las dos fases estn en equilibrio, y que el valor del Coeficiente de Distribucin es constante e independiente de la concentracin del soluto. La principal desventaja de la Teora de los Platos Tericos es la falta de conexin entre la eficiencia de la columna cromatogrfica, el tamao de la partcula, la difusin, la velocidad de flujo y la temperatura. La otra desventaja es que utiliza un modelo basado en muchas suposiciones. La Ecuacin que rige esta teora es: N = 16(tr/w)2 La Teora Cintica considera el proceso cromatogrfico en funcin de los factores cinticos que intevienen en l. Siendo estos factores: Las mltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su movimiento (migracin) a travs del empaque de la columna, provocando variaciones en la velocidad del flujo. La Difusin Axial o Longitudinal del soluto en la fase mvil. La cintica de la resistencia a la transferencia de masa entre las fases mvil y estacionaria. La Ecuacin de Van Deemter, HETP H = A + B/u + Cu Donde u= L(cm)/ traire(seg)

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3.2.- Cromatografa de gases

Figura 1: Un equipo de cromatografa gaseosa La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms ampliamente, y que se puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte. La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos componentes como el gas

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portador, el sistema de inyeccin de muestra, la columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.

3.3.- Clasificacin Las distintas tcnicas cromatogrficas se pueden dividir segn cmo est dispuesta la fase estacionaria: Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales tcnicas son:
o o

Cromatografa en papel Cromatografa en capa fina

Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
o o o

Cromatografa de lquidos Cromatografa de gases Cromatografa de fluidos supercrticos

La cromatografa de gases es til para gases o para compuestos relativamente voltiles, lo que incluye a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de compuestos no voltiles se recurre a procesos denominados de "derivatizacin", a fin de convertirlos en otros compuestos que se volatilizen en las condiciones de anlisis. Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene caracter

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no polar, y la fase mvil carcter polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporcin de la misma, o de otros disolvente polares, como por ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y por tanto la fase mvil eran disolvente orgnicos poco polares. Una serie eluotrpica, es un rango de sustancias de diferentes polaridades que actan como fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria.

Tipos Cromatografa en papel

Fase mvil Lquido

Fase estacionaria Slido Slido Slido o lquido

Cromatografa en capa fina Lquido Cromatografa de gases Cromatografa lquida en fase inversa Cromatografa lquida en fase normal Cromatografa lquida de intercambio inico Cromatografa lquida de exclusin Cromatografa lquida de adsorcin Cromatografa de fluidos supercrticos Gas

Lquido (polar) Slido o lquido (menos polar) Lquido (menos polar) Slido o lquido (polar)

Lquido (polar) Slido Lquido Lquido Lquido Slido Slido Slido

Tabla 1 : Clasificacion de los cromatografos 3.4.- Esquema de un cromatgrafo de gases Las partes esenciales de un equipo cromatogrfico son, figura 5.1, Fuente de gas portador (botella a presin) Sistema de regulacin de caudales (vlvula reguladora y manmetro) Bloque termostatado de inyeccin de las muestras. Columna termostatada, conteniendo la fase estacionaria. Detector termostatado, con amplificador de seal y registro grfico.

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Caudalmetro de precisin. 3.5.- Gas portador El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones: -Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria) -Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa -Fcilmente disponible y puro -Econmico -Adecuado al detector a utilizar El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reaccin con el analito o la columna. Generalmente se emplean gases como el helio, argn, nitrgeno, hidrgeno o dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones depende del tipo de detector empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o empleando un generador, especialmente en el caso del nitrgeno y del hidrgeno. Luego tenemos un sistema de manmetros y reguladores de flujo para garantizar un flujo estable y un sistema de deshidratacin del gas, como puede ser un tamiz molecular. Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos niveles: un primer manmetro se sita a la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada del cromatgrafo, donde se regula el flujo. Las presiones de entrada varan entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y de 1 a 25 mL/min en columnas capilares. Para comprobar el caudal se puede utilizar un rotmetro o un simple medidor de pompas de jabn, el cual da una medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a la columna. 3.6.- Sistema de inyeccin de muestra La inyeccin de muestra es un apartado crtico, ya que se debe inyectar una cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tapn de vapor") que sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da con cantidades elevadas de analito. El mtodo ms utilizado emplea una microjeringa (de capacidades de varios microlitros) para introducir el analito en una cmara de vaporizacin instantnea. Esta cmara est a 50C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil, y est sellada por una junta de goma de silicona septa o septum. Si es necesaria una reproducibilidad del tamao de muestra inyectado se puede usar una vlvula de seis vas o vlvula de inyeccin, donde la cantidad a inyectar es constante y determinada por el tamao del bucle de dicha vlvula.

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Figura 5 : Un muestreador automtico Head spacer para GC (accesorio)

Si la columna empleada es ordinaria, el volumen a inyectar ser de unos 20 L, y en el caso de las columnas capilares dicha cantidad es menor, de 10-3 L. Para obtener estas cantidades, se utiliza un divisor de flujo a la entrada de la columna que desecha parte del analito introducido. En caso de muestras slidas, simplemente se introducen en forma de disolucin, ya que en la cmara de vaporizacin instantnea el disolvente se pierde en la corriente de purga y no interfiere en la elucin. Segn las curvas de Van Demter (HEPT vs. Velocidad Lineal), el mejor gas a usar en la columna cromatogrfica como portador de los analitos es el hidrgeno, sin embargo dada su peligrosidad, es ms usado como gas de encendido en el detector FID, junto con el aire. Columnas y sistemas de control de temperatura En GC se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o capilares. Estas ltimas son ms comunes en la actualidad (2005) debido a su mayor rapidez y eficiencia. La longitud de estas columnas es variable, de 2 a 50 metros, y estn construidas en acero inoxidable, vidrio, slice fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicolidal con dimetros de 10 a 30 cm, dependiendo del tamao del horno. La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de separacin de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una precisin de dcimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullicin del analito o analitos, y por lo general se ajusta a un

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valor igual o ligeramente superior a l. Para estos valores, el tiempo de elucin va a oscilar entre 2 y 3040 minutos. Si tenemos varios componentes con diferentes puntos de ebullicin, se ajusta la llamada rampa de temperatura con lo cual sta va aumentando ya sea de forma continua o por etapas. En muchas ocasiones, el ajustar correctamente la rampa puede significar separar bien o no los diferentes analitos. Es recomendable utilizar temperaturas bajas para la elucin ya que aunque a mayor temperatura la elucin es ms rpida, se corre el riesgo de descomponer el analito. Detectores El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de determinar cundo ha salido el analito por el final de la columna. Las caractersticas de un detector ideal son: Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin cundo sale analito y cuando sale slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de analito. Respuesta lineal al analito con un rango de varios rdenes de magnitud. Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida. Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde temperatura ambiente hasta unos 350-400C, temperaturas tpicas trabajo. No debe destruir la muestra. Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito debe dar salidas de seal iguales. Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos. Respuesta semejante para todos los analitos, o Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido nmero de analitos.

Figura 7:Cromatgrafo inico Algunos tipos de detectores: Detector de ionizacin de llama (FID, Flame Ionization Detector). Detector de conductividad trmica (TCD, Thermical Conductivity Detector).

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Detector termoinico (TID, ThermoIonic Detector). Detector de captura de electrones (ECD, Electron-Capture Detector). Detector de emisin atmica (AED, Atomic Emission Detector).

Otros detectores minoritarios son el detector fotomtrico de llama (PFD), empleado en compuestos como pesticidas e hidrocarburos que contengan fsforo o azufre. En este detector se hace pasar el gas eluido por una llama hidrgeno/oxgeno donde parte del fsforo se convierte en una especie HPO, la cual emite a = 510 y 526 nm, y simultneamente el azufre se convierte en S2, con emisin a = 394 nm. Dicha radiacin emitida se detecta con un fotmetro adecuado. Se han podido detectar otros elementos, como algunos halgenos, nitrgeno, estao, germanio y otros.

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En el detector de fotoionizacin (PID), el gas eluido al final de la columna se somete a una radiacin ultravioleta con energas entre 8,3 y 11,7 eV, correspondiente a una = 106-149 nm. Mediante la aplicacin de un potencial a la celda de ionizacin se genera una corriente de iones, la cual es amplificada y registrada. La clula de conductividad consta de un nodo, un ctodo y una fuente radiactiva de Ni63 que produce partculas . Entre el nodo y el ctodo se establece una diferencia de potencial suficiente para recoger todos los electrones pero no los iones.

Se utiliza Argn-metano 95-5 como gas portador para evitar la formacin de iones metaestables. Cuando el Ar-CH4 se introduce en la clula, sus molculas se bombardean por las partculas y la ionizacin del gas da origen a electrones libres. La atraccin de estos electrones al nodo crea una corriente base.

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Si una muestra susceptible de capturar electrones (hidrocarburos clorados) se encuentra en la corriente de gas portador y entra en la clula de captura electrnica reduce la corriente, producindose una disminucin en la seal de salida del detector. Su aplicacin principal es para compuestos rganoclorados (pesticidas, herbicidas) aunque tambin es vlido para aromticos polinucleares, nitrocompuestos, anhdridos y compuestos de azufre, as como el NO2 y SO2 procedente de chimeneas. Detectores ms usados en Cromatografa de Gases Detector de Conductividad Trmica. Mide la conductividad trmica del gas portador, ocasionada por la presencia de substancias eludas. Detector de Ionizacin a la Llama. Basado en la medida de las variaciones de la corriente de ionizacin en una llama oxgeno-hidrgeno debido a la presencia de substancias eludas. Detector de Captura Electrnica. Basado en la electronegatividad de las substancias eludas, y su habilidad para formar iones negativos por captura de electrones. Detector de Fotometra a la Llama. Basada en la medida de la intensidad de la emisin molecular de la fluorescencia de heterotomos en las molculas orgnicas. Detector de Ionizacin de Llama Alcalina Detector de Espectrometra de Masas

Columnas y tipos de fases estacionarias Columnas de relleno Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos tubos de vidrio, metal (inerte a ser posible como el acero inoxidable, Niquel, Cobre o Aluminio) o tefln, de longitud de 2 a 3 metros y un dimetro interno de unos pocos milmetros, tpicamente de 2 a 4. El interior se rellena con un material slido, finamente dividido para tener una mxima superficie de interaccin y recubierto con una capa de espesores entre 50 nm y 1 m. Para que puedan introducirse en el horno, se enrollan convenientemente. El material de relleno ideal consiste en pequeas partculas, esfricas y uniformes, con una buena resistencia mecnica, para tener una mxima superficie donde interaccionar la fase estacionaria y el analito. La superficie especfica mnima ha de ser de 1 m/g. Como todos los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas temperaturas (~400C) y humectarse uniformemente con la fase lquida estacionaria durante el proceso de fabricacin. El material preferido actualmente (2005) es la tierra de

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diatomeas natural, debido a su tamao de poro natural. Estas especies, ya extinguidas, utilizaban un sistema de difusin molecular para tomar nutrientes del medio y expulsar sus residuos. Por tanto, debido a que el sistema de adsorcin superficial del analito y la fase estacionaria es parecido, son materiales especialmente tiles. El tamao es crtico a la hora de darse el proceso de interaccin del analito, y a menores tamaos la eficacia de la columna es mejor. Pero existe el problema de la presin necesaria para hacer circular un caudal estable de gas portador por la columna, ya que dicha presin es inversamente proporcional al cuadrado del dimetro de dichas partculas. As, el tamao mnimo para usar presiones mximas de 50 psi es de 250 a 149 m. Columnas capilares Las columnas capilares son de dos tipos bsicos: las de pared recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto (SCOT). Las WCOT son simplemente tubos capilares donde la pared interna se ha recubierto con una finsima capa de fase estacionaria. Las columnas SCOT tienen en su parte interna una fina capa de material adsorbente como el empleado en las columnas de relleno (tierra de diatomeas) donde se ha adherido la fase estacionaria. Las ventajas de las SCOT frente a las WCOT es la mayor capacidad de carga de esta ltima, ya que en su fabricacin se emplean mayores cantidades de fase estacionaria, al ser la superficie de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en primer lugar estn las WCOT, luego las SCOT y por ltimo las columnas de relleno. Las columnas WCOT se fabrican a partir de slice fundida, conocidas como columnas tubulares abiertas de slice fundida o FSOT. Estas columnas se fabrican a partir de slice especialmente pura, sin apenas contenido de xidos metlicos. Debido a la fragilidad inherente a este material, en el mismo proceso de obtencin del tubo se recubre con una capa de poliimida, de esta forma la columna puede enrollarse con un dimetro de unos pocos centmetros. Estas columnas, con propiedades como baja reactividad, resistencia fsica y flexibilidad, han sustituido a las WCOT clsicas. Las columnas FSOT tienen dimetros internos variables, entre 250 y 320 m (para columnas normales) y 150-200 m para columnas de alta resolucin. Estas ltimas requieren menor cantidad de analito y un detector ms sensible, al eluir menor cantidad de gas. Existen asimismo columnas macrocapilares con dimetros de hasta 530 m, que admiten cantidades de analito comparables a las de relleno pero con mejores prestaciones. En estas columnas existe un problema debido a la adsorcin del analito sobre la superficie de la slice fundida, adsorcin debida a la presencia de grupos silanol (Si-OH), los cuales interaccionan fuertemente con molculas polares orgnicas. Este inconveniente se suele solventar inactivando la superficie por sililacin con dimetilclorosilano (DMCS). La adsorcin debida a los xidos metlicos se ve paliada en gran parte por la elevada pureza de la slice empleada. La fase estacionaria Las propiedades necesarias para una fase estacionaria lquida inmovilizada son: 1. Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y factor de selectividad ) adecuados al analito. 2. Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al menos 100C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno.

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3. Baja reactividad. 4. Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin. Existen como mucho una docena de disolventes con estas caractersticas. Para elegir uno, debe tenerse en cuenta la polaridad del analito, ya que a mayor polaridad del analito, mayor polaridad deber tener la fase estacionaria. Algunas fases estacionarias utilizadas actualmente (2005) son: Polidimetilsiloxano, fase no polar de uso general para hidrocarburos, aromticos, polinucleares, drogas, esteroides y PCBs. Poli(fenilmetildifenil)siloxano (10% fenilo), para steres metlicos de cidos grasos, alcaloides, drogas y compuestos halogenados. Poli(fenilmetil)siloxano (50% fenilo), para drogas, esteroides, pesticidas y glicoles. Poli(trifluoropropildimetil)siloxano, para aromticos clorados, nitroaromticos, bencenos alquilsustituidos. Polietilenglicol,sirve para compuestos polares, tambin para compuestos como glicoles, alcoholes, teres, aceites esenciales. Poli(dicianoalildimetil)siloxano, para cidos grasos poliinsaturados, cidos libres y alcoholes. Generalmente, en columnas comerciales, la fase estacionaria se presenta enlazada y entrecruzada para impedir su prdida durante las operaciones de elucin o lavado. De esta forma se obtiene una monocapa adherida qumicamente a la superficie de la columna. La reaccin implicada suele ser la adicin de un perxido al lquido a fijar, inicindose una reaccin por radicales libres que tiene como resultado la formacin de un enlace carbono-carbono que adems incrementa su estabilidad trmica. Otra forma es la irradiacin con rayos gamma. Otro tipo de fase estacionaria son las quirales, lo cual permite resolver mezclas enantiomricas. Este tipo de fases suelen ser aminocidos quirales o algn derivado adaptado al trabajo en columna. El grosor de la pelcula vara entre 0,1 y 5 m; el grosor depende de la volatilidad del analito. As, un analito muy voltil requerir una capa gruesa para aumentar el tiempo de interaccin y separar ms efectivamente los diferentes componentes de la mezcla. Para columnas tpicas (dimetros internos de 0,25 o 0,32 mm) se emplean grosores de 0,25 m, y en las columnas macrocapilares el grosor sube hasta 1 m. El grosor mximo suele ser de 8 m Cromatograma y su Interpretacin Los siguientes trminos son los utilizados en un cromatograma tpico y recomendados por la IUPAC: Line Base Pico Cromatogrfico Base del Pico rea del Pico

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Altura del Pico Ancho del Pico Ancho del Pico a la mitad de la Altura Medida de la Altura rea de Pico Altura del Pico: Medida que se efectua, para cada pico de inters, desde la lnea base hasta el mximo del pico. Los errores de malas mediciones se pueden atribuir a:
o o o

Insuficiente Resolucin Variaciones en la lnea base Picos extremadamente pequeos

Las desviaciones en la lnea base se pueden compensar por interpolacin de sta entre el prinpio y el final del pico. rea del Pico. Existen varias tcnicas para la determinacin del rea de un Pico Cromatogrfico:
o

Integracin Manual

Mtodos Geomtricos

Triangulacin: En esta tcnica se trazan lneas tangentes a cada lado del pico. La altura se mide desde la lnea base hasta la interseccin de las dos tangentes. El ancho se mide tomando la interseccin de las dos lneas tangentes con la lnea base. Luego se utiliza la frmula A=1/2*Altura del Pico* Base del Pico. Las limitaciones de esta tcnica estan en el trazado de las lneas tangentes, un pequeo error al trazar las tangentes puede afectar la medida de la altura. Altura por ancho a la mitad de la Altura:

Mtodos Mecnicos

Planimtricos Corte y Pesada: Esta tcnica requiere recortar el pico del cromatograma, luego pesarlo en una balanza analtica. El recorte y pesada depende mucho de la habilidad del operdor. Pueden introducirse errores por cambios en la humedad del papel, la grasa de las manos del operador, homogeneidad del papel. Generalmente

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se recomienda utilizar una fotocopia del cromatograma para no destruir el original.

o

Integracin Automtica

Electromecnica Electrnica

Anlisis Cualitativo Los procedimientos para identificacin de los picos cromatogrficos podemos dividirlos en dos categoras: Identificacin Cromatogrfica
o o

Por Datos de Retencin Por Serie Homlogas (Indices de Retencin de Kovacs)

Identificacin No Cromatogrfica
o o

Anlisis Clsicos Identificacin por:

Adicin de Estndar Formacin de Derivados Sustraccin de un Componente

Identificacin con Tcnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN

Anlisis Cuantitativo Existen varios mtodos para cuantificar un pico cromatogrfico: Normalizacin de rea Normalizacin de rea con Factores de Respuesta Estandarizacin Externa Estandarizacin Interna