Centro de Formao Profissional Amrico Ren Giannetti CURSO TCNICO DE BIOTECNOLOGIA

MICROBIOLOGIA MDICA BACTERIOLOGIA INFECES INTESTINAIS

Instrutor: Carlos A.V da Cunha Elaborao:

17 de Agosto de 2012 Belo Horizonte

INTRODUO Doenas diarricas continuam a figurar como o maior problema da sade humana. Foi estimada uma ocorrncia de um bilho de episdios. A Diarria particularmente devastadora em crianas que sofrem concomitamente de doenas infecciosas como sarampo, imunodeficincia e subnutrio protica, fatores muito freqentes nos paises em desenvolvimento, onde o saneamento bsico e muito precrio. Afeta principalmente crianas, mas tem impacto tambm em adultos que sofrem de um a dois episdios de diarria anualmente. As causas das sndromes gastrointestinais so acompanhadas de dor, diarria ou desinteria podem ser infecciosas, causadas por bactrias, fungos, vrus, parasitas e protozorios e no infecciosas, alrgicas, causadas por alimentos e envenenamento. So feitos exames para confirmao e os resultados positivos necessitam de terapia pois e importante identificar o agente etiolgico para prevenir transmisses posteriores. As diarrias inflamatrias so causadas por bactrias, como Shigella spp., Salmonella spp., Escherichia coli enteroinvasora e enteremorrgica, Campylobacter jejunai e Yersinia enterocoltica, que invadem a mucosa ou produzem citotoxinas. Caracterizam-se por fezes disentricas com sangue e numerosas clulas inflamatrias. Nas intoxicaes alimentares, ocorrem aps a ingesto de alimento contaminado com toxinas pr-formadas, com sintomas como nuseas, vmitos e dores abdominais. Seus principais agentes so Staphylococcus aureus, Bacillus cereus e Clostridium botulinum. O diagnstico das infeces intestinais feito atravs da coprocultura, e na rotina pesquisam-se os seguintes microrganismos Escherichia coli enteropatognica clssica (em crianas at quatro anos), Salmonella spp, Shigella spp, Yersinia enterocoltica, Aeromonas spp, Plesiomonas spp.

OBJETIVO Identificar microrganismos presentes no trato intestinal do animal (rato).

MATERIAIS E REAGENTES Bico de Bunsen; Placas de petri; Tubos com tampa Incubadora B.O.D Cientec; Meio de cultura; Microscpio; Ala de platina Sistema Bactray 1 e 2 Reativo de Kovacs (Marca LB Laborclin; Val 14/12/2012) Cloreto Frrico 10% para reao fenilalanina (Marca LB Laborclin; Val 15/03/2013) Alfa Naftol para reao de Voges Proskauer (Marca LB Laborclin; Val 06/02/2013) Hidrxido de Potssio 40% para reao de Voges Proskauer (Marca LB Laborclin; Val 06/02/2013)

REAGENTES (Meios de cultura) Eosina Azul de Metileno (EMB); Agar Sangue (ASA)

AMOSTRA Intestino de animal

DESENVOLVIMENTO Inicio-se o processo com abertura do animal j morto, em busca do intestino, quando retirado por completo colheu-se a substncia que o preenchia para analise, inoculose uma quantidade no meio Agar Sangue e uma no meio Agar EMB, incubou-se as placas por 72 horas a 36C. Passado s 72 horas fez teste para identificar as colnias hemolticas, morfologia e caractersticas. As bactrias que cresceram no meio seletivo EMB foram inoculadas no meio Agar TSI (tubos inclinados) para verificar a fermentao de aucares e formao de gs incubou-se por 24 horas a 37C. Passado s 24 horas inoculou-se as bactrias em salina em comparao com a escala de Mac Farland para testes em Bactray 1 e 2, aps a mistura de microrganismo com a Salina serem introduzidas no bactray incubou-se por 24 horas a 37C.

Procedimento com Bactray contagem indireta Pingar duas gotas de Alfa Naftol e duas gotas de KOH no orifcio VP aguardar 15 a 20 min. Pingar duas gotas de Cloreto Frrico no PD aguardar 2 a 3 min. Pingar duas gotas de reativo de Kovacs no IND para formao de anel dentro, aguardar 2 minutos. RESULTADOS E DISCURSSES Resultados das placas para Colnias Hemolticas e Morfologia MOS placa Agar Sangue

Tcnicos

Placas EMB

Cida

Daniela

Teste de Colorao de Gram (ASA) Crescimento Pequeno Coccus gram de colnias crescimento positivo e negras. de MOS, catalase ausncia de positiva. hemlise. Ausncia de Colnias Coccus gram crescimento Gamas negativos Hemolticas Ausncia de Colnias Coccus gram crescimento Gama e Alfa negativos e hemoltica. bastonetes gram positivos Pequeno Colnias Alfa Bastonetes crescimento hemoltica, gram de MOS, halos positivos. ausncia de amarelos hemlise.

Placas ASA

Ana

Neyline

Tubos de TSI Em todos os tubos de Agar TSI houve crescimento de microrganismos que fermentaram os aucares, mas no houve formao de gs.

Resultado Bactray contagem indireta No sistema bactray 1 obteve-se o resultado Hafinia alvei 64,51% Klebsiella ozaenal 35,11% Escherichia coli 0,38% Considerado sem codificao para o sistema. No sistema bactray 2 no se obteve resultado, considerado inconclusivo.

CONCLUSO Conclui-se com o exame que vrios microrganismos encontram se na flora normal intestinal, mas alguns podem ser inseridos no intestino atravs de contaminao e causar graves doenas.

REFERNCIAS Sites: http://www.conhecersaude.com/exames-medicos/c/3224-coprocultura.html http://www.sergiofranco.com.br/bioinforme/index.asp? cs=Microbiologia&ps=infecoesIntestinais acessados em 16 de agosto de 2012 as 15:35