Contabilizacin de Granos de polen en cmara de Neubauer

Ximena Andrea Lucero Jara, Carolina Paz Severino Cabrera

Profesora: Valia Vivar

Valparaso, 03 de septiembre de 2012

Introduccin

La microbiologa es la ciencia que estudia los microrganismos en su naturaleza, vida y accin, deriva de las palabras mikros pequeo, bios vida y logos estudio.En el presente prctico se analizar una solucin que contiene granos de polen los cuales se contabilizaran en la cmara Neubauer, en primer lugar se entiende que, un grano de polen es la parte microscpica que se forma en la antera utilizado como un elemento masculino de fecundacin en las flores, y que la cmara neubauer es una cmara de recuento que se utiliza para determinar el nmero de partculas por unidad de volumen en un lquido con partculas como el polen, el cual se puede visualizar con un microscopio ptico. Esta cmara de conteo celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensin a medir, el cual presenta seales que determinan un volumen conocido, por lo que al contar bajo el microscopio el nmero de partculas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partculas en la suspensin de origen, en este caso la solucin de granos de polen. Los objetivos del laboratorio son conocer la funcin y caractersticas de la cmara Neubauer o tambin conocido como hemocitmetro, reconocer las partculas de la solucin identificando de qu se trata lo que se va a contabilizar, y determinar la densidad celular de la suspensin de granos de polen con una frmula matemtica (regla de tres). Todo esto se llevara a cabo dentro del laboratorio de microscopia de la facultad.

Materiales Microscopio ptico Frasco con solucin de granos de polen Cmara Neubauer o Hemocitmetro Pipeta de 1 ml Suprapipeta Cubreobjetos Croquera y lpiz para anotaciones Calculadora

Procedimientos Se inicia ubicando el cubre objetos sobre la cmara de Neubauer. Para mayor precisin la cmara con el cubreobjetos se ubican en una posicin horizontal, sobre la mesa, en un lugar donde nos sea cmodo pipetear, luego se insertar la punta de la pipeta en la muestra, luego se pulsa el pistn o embolo superior de la pipeta suavemente hasta obtener un 1ml de la muestra La punta de la pipeta se coloca en el borde del cubreobjetos, en el extremo de la cmara de Neubauer. Se trata de dejar que el lquido penetre entre la cmara y el cubreobjetos desde el lateral por capilaridad. A continuacin se suelta el pistn suavemente mientras se supervise que el lquido est entrando correctamente y de forma uniforme a la cmara. Posteriormente colocar la cmara de Neubauer en la bandeja del microscopio, y fijar la cmara con la pinza de sujecin. Lo siguiente es encender la luz del microscopio, y enfocar hasta que puedan verse ntidas las clulas mirando por el binocular. Despus buscar el primer cuadro para realizar el recuento, se consideraran los cuatro cuadros de las esquinas mas el ubicado al centro de una cmara de Neubauer Improved de 0,1mm de profundidad. Por ltimo se contabilizan cuantas estructuras vemos por cuadricula, luego de esto realizamos la ecuacin para calcular la densidad de estructuras en la cmara.

Marco terico

La cmara Neubauer tambin conocida como hemocitmetro consta de un portaobjetos y de un cubreobjetos de un grosor mayor a los de uso comn. En la parte superior del portaobjetos se encuentran cuatro canales longitudinales y uno transversal central. En la parte superior e inferior del canal transversal estn grabadas dos rejillas de 9 mm2 de superficie, las cuales a su vez estn subdivididas en una cuadrcula ms pequea.1

Las subdivisiones de esta rejilla de 9 mm2 son de 1mm2 cada una que en total suman 9 subdivisiones. El rea del cuadro central se encuentra subdividida en 25 cuadrados cada

Castillo Morales, Gabriela (2004), Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de aguas, Editorial centro Internacional de Investigaciones para el desarrollo, Mxico, p.p. 188

uno de estos de unos 0,2 mm de lado por lo que el rea de cada uno ser de 0,44 mm2. Al colocar el cubreobjetos sobre el portaobjetos se tiene una profundidad de 0,1 mm.2 Esta tcnica de determinacin por conteo se utiliza para determinar la densidad celular que se aplica solo a microorganismos unicelulares pues se debe hacer un conteo, sin embargo tiene la ventaja de que una vez confeccionada la curva de calibracin que se utiliza para averiguar el nmero de microorganismos por volumen de una muestra no se realizan ms conteos3

Castillo Morales, Gabriela (2004) Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de aguas, Editorial centro Internacional de Investigaciones para el desarrollo, Mxico, p.p. 188 3 Hernndez Alicia, Microbiologa industrial (2003), Editorial EUNED, Primera edicin, Costa Rica, p.p 296

Resultados Al observar en el aumento de 40x se pudieron observar unas estructuras ovoides de color verde oscuro con amarillo. Estas se contabilizaron obteniendo los siguientes resultados por cuadrcula:

Cuadrcula N1

Cuadrcula N13

Cuadrcula N5

Cuadrcula N21

Cuadrcula N25

Esquema N1 Con las cuadriculas seleccionadas para el conteo

Tabla N1 Con la cuadrcula y la cantidad de estructuras en contabilizadas en la Cmara de Neubauer Cuadrcula 1 5 12 21 25 Total Cantidad de Estructuras 13 14 8 3 6 44