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QUMICA Preveno e tratamento de resduos antes da liberao no ambiente devem ser metas da indstria

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O descarte dos corantes txteis

O fascnio do ser humano pelas cores to intenso que parece impossvel imaginar a indstria txtil, alimentcia e de cosmticos sem corantes. Mais de 700 mil toneladas de 10 mil tipos de corantes e pigmentos so produzidos anualmente no mundo, sendo o Brasil responsvel por 2,6% dessa demanda. Pelo menos 20% dos corantes txteis fabricados no pas so descartados em efluentes e, se no forem tratados adequadamente antes de serem lanados em guas naturais, esses compostos podem provocar danos graves ao ecossistema e sade da populao. Por Maria Valnice Boldrin Zanoni e Patricia Alves Carneiro, do Instituto de Qumica da Universidade Estadual Paulista (Araraquara).

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origem dos corantes txteis incerta, mas h indicaes de seu uso pelo homem desde os primrdios das civilizaes sua presena foi detectada em amostras de tecidos de tumbas egpcias e antigos hierglifos datados de 2500 a.C. At a metade do sculo 19, s existiam pigmentos naturais, provenientes de vegetais, insetos, moluscos e minerais, cujas frmulas de extrao e aplicao eram guardadas secretamente. A grande revoluo na histria desses compostos ocorreu quando o qumico ingls William H. Perkin (1860-1929) descobriu, em 1856, o primeiro corante sinttico (malva), derivado do coque. Foi o primeiro passo para a produo de corantes orgnicos sintticos em grande escala. O Colour Index (catlogo da Society of Dyers and Colourists) registra atualmente mais de 8 mil corantes orgnicos sintticos associados indstria txtil. Tal diversidade se justifica pelo sucesso comercial dos produtos txteis que passam por um processo de tintura. Para atender a um mercado cada vez mais exigente, a indstria tem investido no desenvolvimento de corantes econmicos, com propriedades especficas, para obter boa fixao da colorao nos tecidos, oferecendo alta resistncia aos agentes desencadeadores do desbotamento. Os corantes apresentam estruturas moleculares complexas que podem envolver, durante seu processo de sntese, at 500 reaes intermedirias. Ge-

ralmente apresentam um grupo cromforo que d cor ao composto pela absoro de uma parte de energia radiante , tambm conhecido como azo, antraquinona, nitro etc., e grupos auxiliares que propiciam sua afinidade pela fibra txtil natural ou sinttica (figura 1). Normalmente, a fixao do corante fibra feita atravs de reaes qumicas ou pela adsoro (fixao de molculas de uma substncia na superfcie de outra) do corante ou de derivados gerados por reaes qumicas durante o processo de 4
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tintura (figura 2). Os corantes costumam ser classificados de acordo com a maneira como se fixam fibra. Eles podem ser reativos, diretos, azicos, aninicos (cidos e bsicos), a cuba, de enxofre, dispersivos, pr-metalizados e branqueadores. A indstria vem gerando, durante dcadas, milhes de toneladas desses compostos. Mais de 700 mil toneladas de 10 mil tipos de corantes e pigmentos so produzidos anualmente no mundo. Segundo dados da Associao Brasileira de Qumica (Abiquim), de 1997, o Brasil responsvel por 2,6% da demanda mundial de corantes, dada a importante participao do algodo e do couro na economia do pas.

O descarte em efluentes
Estima-se que pelo menos 20% dos corantes txteis sejam descartados em efluentes, devido a perdas ocorridas durante o processo de fixao da tintura s fibras. A remoo desses compostos dos rejeitos industriais um dos grandes problemas ambientais enfrentados pelo setor txtil. Sobretudo considerando que os corantes no pertencem a uma mesma classe de compostos qumicos, mas englobam diversas substncias com grupos funcionais diferenciados, com grande variedade na reatividade, solubilidade, volatilidade, estabilidade etc. que, por sua vez, requerem mtodos especficos para identificao, quantificao e degradao. No possvel, portanto, remover adequadamente qualquer corante adotando apenas um procedimento. Alm disso, o uso rotineiro de vrios outros aditivos qumicos de composio diversificada umectantes, antiespumantes, eletrlitos, dispersantes, ajustadores de pH, normalizadores, seqestrantes etc. durante o banho de tintura, a montagem e a fixao dificulta o processo de remoo. Se no forem tratados adequadamente antes de lanados em guas naturais, os efluentes provenientes da indstria de corantes ou de processos envolvendo tintura txtil podem modificar o ecossistema ou atingir a sade da populao.

Ao diminuir a transparncia da gua e impedir a penetrao da radiao solar, esses rejeitos coloridos diminuem a atividade fotossinttica e provocam distrbios na solubilidade dos gases, causando danos nas guelras e brnquias dos organismos aquticos, alm de perturbar seus locais de desova e refgio. Esses compostos podem permanecer por cerca de 50 anos em ambientes aquticos, pondo em risco a estabilidade desses ecossistemas e a vida em seu entorno. Os produtos da degradao de grande parte dos corantes nesses ambientes e no homem podem ser ainda mais nocivos que os prprios pigmentos. A informao disponvel sobre a toxicidade e o risco dos corantes sintticos e o impacto dos rejeitos na qualidade da gua e em ecossistemas aquticos muito pouco difundida, apesar da grande quantidade de resduos gerada pela indstria em todo o mundo.

Riscos para a sade

Apenas um pequeno nmero de corantes pode apresentar toxicidade aguda, levando morte imediata. Os riscos para a sade humana variam de acordo com a forma e o tempo de exposio ao corante, se ele foi ingerido ou se houve sensibilizao da pele e das vias respiratrias. Alguns compostos no incorporados totalmente ao tecido podem causar dermatites, sobretudo em reas do corpo sujeitas transpirao. Os problemas respiratrios mais relatados so asma e rinite alrgica. Esses riscos, entretanto, so pequenos se comparados aos danos provocados pela ingesto dos mesmos. importante ressaltar que os riscos crnicos desse tipo de corantes esto relacionados s etapas de biotransformao (rotas do metabolismo desses corantes nos organismos). Catalisados por enzimas especficas, podem gerar substncias com propriedades carcinognicas e mutagnicas, como aminas aromticas, toluidinas, benzidinas, radicais ativos, entre outras. Estudos recentes tm associado alguns corantes ao cncer de bexiga e do fgado em humanos e a anomalias nucleares e aberraes cromossmicas em animais. A literatura especializada aponta pelo menos 3 mil corantes comerciais atualmente no mais fabricados com atividade cancergena.

Figura 2. Exemplo de tintura de algodo por um corante reativo

Banho de tintura R-CH2-CH2OSO3Na Corante R-CH CH2 +H2O+Na2SO1 Corante

OH

R-CH CH2 + Corante

-O

Celulose

Fibra-corante Resduo colorido

Fibra

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Figura 1. Estrutura molecular de um corante reativo, Remazol Brilliant Orange 3R (R3R), onde A o grupo cromforo da famlia azo, e B, o grupo reativo sulfatoetilsulfona. Metade dos corantes usados atualmente so do tipo azo e cerca de 15% de seus rejeitos industriais so descartados no ambiente sem prvio tratamento

B O NaO3SOCH2CH2-S A N N HO O H3C-C-N H SO3Na

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Alguns corantes de alto poder de fixao, usados para tingir peas de algodo ou seda, tambm podem ser nocivos aos seres vivos. Durante a etapa de tintura da fibra, alguns corantes, como os pr-metalizados, chegam a liberar substncias txicas altas concentraes de metais pesados. Outros podem ser acumulados por plantas expostas a efluentes da indstria txtil e conseqentemente passar para a cadeia alimentar, contaminando outros organismos.
0.1 0 0.09 0.08 0.07 Absorbncia 0.06 0.05 0.04 0.03 0.02 0.01 400 450 500 550 (nm) 600 650

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Amostra do afluente

Padro permitido

Figura 3. Comparao entre a quantidade de efluente liberado pela indstria txtil e o padro a ser seguido

Fiscalizao falha
O Ecological and Toxicological Association of the Dyestuff Manufacturing Industry (ETAD), rgo internacional criado em 1974 com o intuito de minimizar os possveis danos ao homem e ao meio ambiente, vem tentando fiscalizar a fabricao e o uso de corantes sintticos. A proposta da entidade divulgar artigos peridicos apontando os riscos potenciais causados por corantes ou pelas substncias envolvidas na sua produo e degradao. Porm, em pases em desenvolvimento, esse controle ainda falho. Os governos costumam estipular padres para poluentes limite mximo permitido de corantes lanados em efluentes. A figura 3 mostra um exemplo comparativo entre o padro a ser seguido e uma amostra coletada de um efluente tpico de uma indstria txtil aprovado para descarte. A eficcia da remoo da cor julgada pela comparao entre a medida de absorbncia da amostra do efluente em determinados comprimentos de onda, em relao a um padro de qualidade que define o grau mximo de colorao permitido em um efluente. O grfico mostra que mesmo aps tratamento o nvel do contaminante no efluente ainda ligeiramente superior ao permitido. No entanto, importante observar que mesmo no padro permitido ainda existem baixas concentraes de corantes detectveis no efluente. Alm disso, a tcnica espectrofotomtrica tem escala de sensibilidade analtica limitada, e pode no ser a forma mais indicada para identificar traos de corantes remanescentes em guas de rejeito. A indstria tem procurado tratar seus rejeitos no fim do processo de tintura, para atender aos padres estabelecidos. Mas a contnua degradao do ambiente prova de que essa abordagem contm erros graves, sobretudo ao supor que o ambiente pode tolerar certa quantidade de poluio. Infelizmente, esse tipo de atitude no reconhece que muitas vezes a poluio no pode ser controlada e que a nfase deve ser dada preveno.

As tcnicas de descontaminao
As principais tcnicas para descontaminar as guas de rejeito da indstria txtil envolvem principalmente processos de adsoro com carvo ativo ,

coagulao e precipitao, que usam como tecnologia a transferncia de fase. Mas, no final do tratamento, ainda resta um resduo o lodo , descartado, em muitos casos, em aterros, que pode contaminar lenis freticos, rios e lagos, ao ser carregado pela chuva. Processos de degradao, como a eletroqumica (uso da corrente eltrica), a fotoqumica (uso de irradiao) e a biodegradao (uso de microrganismos), tm sido apontados como tecnologias destrutivas. No entanto, esses procedimentos no so efetivamente aplicados. Nos ltimos anos, tem se investido no desenvolvimento desse tipo de tecnologia, capaz de promover a degradao total do corante at sua completa mineralizao a real destruio do resduo poluente. Alguns estudos apontam at 98% de mineralizao do corante, mas a maioria relata uma degradao de 60% a 92%. So raras as aplicaes em escala industrial; a maior parte dos mtodos ainda est em fase de pesquisa. Diversos mtodos tm sido desenvolvidos para tratar resduos de corantes txteis mas todos tm sua especificidade. Cada corante apresenta estrutura e propriedades fsico-qumicas prprias e envolve diferentes componentes nos processos de tintura, fixao da cor e lavagem final, tornando o efluente uma matriz colorida e altamente complexa. A presena de corantes txteis em efluentes devese, em boa parte, sua baixa fixao s fibras (de 60% a 90%) durante o tingimento do tecido, podem ocorrer reaes qumicas indesejveis, que diminuem a eficincia do processo. O descarte aumenta ainda mais durante a etapa de lavagem. Processos oxidativos que empregam agentes oxidantes para descolorar e mineralizar corantes , assim como o uso da luz solar, vm sendo estudados com o objetivo de acelerar a degradao desses compostos. No Brasil, algumas empresas esto empregando alguns desses mtodos para tratar seus res- 4
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duos. Um exemplo o uso do oznio (ozonizao) para branquear papel. Mas esse procedimento ainda no est sendo adotado para degradar corantes em escala industrial. Tcnicas que utilizam fotocatalisadores, eletrorreduo ou eletroxidao ainda esto em estudo, mostrando bastante xito. Embora a maioria dos corantes no apresente sensibilidade ao ataque de microrganismos (tratamento aerbio e anaerbio), muitos pesquisadores tm apontado a biodegradao enzimas de fungos ou bactrias e a biomassa (material solvente capaz de retirar o corante dissolvido) como tcnicas promissoras para remoo e/ou degradao de efluentes txteis. No existem, entretanto, solues definitivas. Alguns desses processos promovem apenas a degradao parcial do corante, podendo gerar substncias com potencial txico ou carcinognico maior do que o composto original, o que inviabiliza a descontaminao de efluentes. do processo de produo de corantes e do tingimento quanto na educao de seus usurios. Isso inclui melhorias na manuteno de seus equipamentos (evitando vazamentos e derramamentos), reduo do uso de substncias txicas e introduo de sistemas de reciclagem para reutilizao da gua e at do corante no fixado fibra. Caso contrrio, o gasto com o tratamento para remover resduos em baixo nvel de concentrao (aps a diluio no rio) e de inmeros outros compostos acrescentados sistematicamente no percurso ser muito maior e muito menos eficaz. Preveno implica mudar conceitos. Os rejeitos devem ser considerados como recursos que podem se transformar em produtos e subprodutos teis desde que no txicos. Mas, se as medidas preventivas forem inviveis, ainda melhor tratar o resduo txtil na porta de sada da indstria. Os desafios para obter avanos ambientais na indstria txtil incluem reviso da relao custo/benefcio; maior incentivo pesquisa de materiais e processos mais limpos; controle quantitativo e qualitativo da emisso de corantes; elucidao do caminho desses poluentes e sua interao com organismos; monitoramento da transformao dos resduos da indstria txtil e descoberta e esclarecimento de processos de preveno e tratamento. s

Qualidade ambiental
Embora a participao dos produtos txteis na contaminao das guas ainda seja pequena, preciso se prevenir para preservar a qualidade ambiental do planeta. O primeiro passo investir tanto no controle

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BIOQUMICA Marcadores moleculares auxiliam na conservao da espcie

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Protegendo os remanescentes de pau-brasil

A conservao da diversidade gentica de plantas tropicais tarefa urgente, que requer importantes desafios. Estudos especficos sobre o pau-brasil so o primeiro passo na direo da preservao de uma espcie restrita to ameaada mata atlntica. Conhecer a diversidade de suas populaes fundamental no s para assegurar sua sobrevivncia como para dispor de seus recursos genticos em aplicaes futuras. Por Mnica Aires Cardoso, do Instituto de Pesquisas Jardim Botnico do Rio de Janeiro, Srgio Ricardo S. Cardoso e Paulo C. Gomes Ferreira, do Departamento de Bioqumica Mdica da Universidade Federal do Rio de Janeiro.

mata atlntica, bioma que rene vrios ecossistemas nas serras e plancies da costa brasileira, ocorre de forma descontnua do Rio Grande do Norte ao Rio Grande do Sul, estendendo-se inclusive para o interior, em uma rea total de cerca de 1,2 milho de km2 5% a 6% de sua cobertura original. Muitas de suas reas encontram-se bastante fragmentadas e registram grande perda de recursos genticos, o que torna a regio uma das mais ameaadas do planeta. Mais crtico ainda constatar o desconhecimento botnico, ecolgico e gentico dessa floresta tropical mida, de rica diversidade biolgica, onde 50% das espcies arbreas so endmicas (s ocorrem naquela regio). A degradao desse importante bioma, entretanto, parece ser anterior chegada dos portugueses. Parte da devastao pode ser atribuda s freqentes guerras dos ndios tupis que habitaram a regio por cinco sculos e que praticavam uma agricultura itinerante. Tudo indica que a maioria dos fragmentos florestais sofreu algum tipo de perturbao antes ou depois da vinda dos coloniza-

dores , que teria mudado a paisagem original. Atualmente, a maior parte desses fragmentos de vegetao secundria, mas possvel que existam faixas jamais derrubadas ou queimadas pelo homem. A falta de estudos sobre os mecanismos de sobrevivncia das espcies dificulta sua conservao gentica. O conhecimento bsico dos ecossistemas cada vez mais importante na hora de elaborar propostas de manejo que permitam explorar os recursos naturais.

O pau-brasil (Caesalpinia echinata) quase foi extinto por causa da explorao predatria durante mais de trs sculos

FOTOS EXTRADAS DE RVORES BRASILEIRAS (1992)

Explorao predatria
A histria da fragmentao da vegetao litornea confunde-se com a da explorao predatria do pau-brasil (Caesalpinia echinata, da famlia das leguminosas). Imensos trechos de florestas foram derrubados e muitos ndios expulsos das suas terras por causa da coleta da espcie. Antes de 1500, os indgenas j extraam pau-brasil para obter lenha e fabricar armas. Mas aps o descobrimento 4
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Clandestina ou no, a sada de pau-brasil do pas fato. A classificao, segundo portaria do Ibama (Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis) como espcie em perigo, no garante necessariamente sua proteo. Alm disso, no est includa em nenhum rgo de defesa, como o Cites (Conveno de Comrcio Internacional de Espcies Ameaadas da Fauna e Flora). Embora seu valor econmico no seja o mesmo do passado, o pau-brasil continua sob ameaa pela sua localizao geogrfica exclusiva da costa brasileira, a espcie vem sofrendo presses devido ao crescimento urbano intenso e desordenado.

Estudar para conservar

Apesar da importncia histrica, econmica e ecolgica do pau-brasil, seus mecanismos bsicos de sobrevivncia que permitiriam a conservao dos recursos genticos em seu ambiente de origem ainda no foram totalmente elucidados. Sua preservao tambm requer o tombamento de reas onde ainda h remanescentes da espcie. Segundo especialistas, para conservar espcies arbreas tropicais prioridade estudar os sistemas de cruzamento e a estrutura gentica e a dinmica das populaes. Nos anos 80, uma das estratgias de preservao mais importantes era o conhecimento da variabilidade gentica. Mais recentemente, estudos sobre ecologia de populaes, envolvendo parmetros demogrficos e fatores ambientais, passaram a ter maior nfase na adoo de prticas conservacionistas, relegando a pesquisa gentica a um papel menor. Observa-se, com freqncia, na literatura botnica dedicada a plantas no domesticadas, uma certa negligncia para o estudo dos fatores genticos, se comparada aos trabalhos sobre conservao de espcies animais. Estudos, em nvel internacional, de meados dos anos 90 buscaram demonstrar teoricamente que eventos estocsticos relacionados a demografia, fatores ambientais e catstrofes seriam as causas mais importantes no processo de extino. No entanto, outra linha de pesquisadores provou que esses aspectos, principalmente o demogrfico, esto muitas vezes associados a eventos genticos. A resposta das populaes s catstrofes, mudanas ambientais e flutuaes ocasionais de taxas de reproduo, natalidade e mortalidade pode ser largamente influenciada pelo nvel de endocruzamento (cruzamento entre indivduos aparentados) e pela perda da variao gentica. As taxas de nascimento e morte esto estreitamente relacionadas com o cruzamento entre parentes prximos. Alm disso, a perda da diversidade diminui a habilidade das populaes de sobreviverem a climas extre-

Estudos sobre a reproduo do pau-brasil e a proteo das reas onde a rvore ainda existe podem ajudar a evitar sua extino

que comea a derrubada sistemtica da espcie que, por longo tempo, constituiu a principal e nica riqueza da colnia. Os comerciantes de madeira tinham que despachar cerca de 1.200 toneladas ou seis navios de pau-brasil por ano para atender aos pedidos da coroa portuguesa. A primeira sada do produto ocorreu j em 1501. A partir de ento, o ritmo de explorao foi se acelerando at atingir no primeiro sculo de colonizao cerca de 2 milhes de rvores derrubadas. No incio do sculo 17, metade dos rendimentos obtidos anualmente no Brasil por Portugal provinha da venda de pau-brasil. Apesar da inegvel importncia da espcie na histria econmica do pas, existem poucos registros do comrcio da planta durante essa poca. Acredita-se, no entanto, que os ndios desempenharam um papel bastante ativo na extrao, j que os portugueses teriam dificuldade em identificar as rvores e transportar a madeira. Pela quantidade de madeira retirada no perodo ps-descobrimento, estima-se que, na sua rea de ocorrncia, a densidade das rvores deve ter sido relativamente alta. O mercado do pau-brasil comeou a desmoronar em meados do sculo 19, com o advento dos corantes sintticos. Nessa mesma poca, descobriuse que sua madeira era excelente para fabricar arcos de violino, violoncelo, viola e contrabaixo ela vem sendo usada desde ento para a confeco de arcos profissionais de alta qualidade. No entanto, como a extrao de pau-brasil ilegal as rvores s podem ser derrubadas com licena oficial , sabe-se muito pouco sobre o volume de madeira exportado com esse fim. Estima-se que a demanda mundial seja de cerca de 200 m3 por ano mas, como muita madeira ainda desperdiada no processo de confeco dos arcos, provvel que esse nmero esteja subestimado.

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mos, poluentes, doenas, parasitas etc. A reduo da variabilidade gentica pode implicar uma menor flexibilidade evolutiva a longo prazo. Embora existam indicaes de que, a curto prazo, as espcies esto mais ameaadas por fatores ambientais, um planejamento conservacionista de longo prazo no deve deixar de considerar aspectos genticos. Independentemente da resoluo desse debate, conhecer a diversidade das populaes naturais fundamental no s para assegurar a sobrevivncia das espcies, como para preservar seus recursos genticos para aplicaes futuras. importante, portanto, estudar os fatores genticos envolvidos por dois motivos. Primeiro, porque a variao gentica pode ajudar a entender os processos evolutivos geradores de biodiversidade, que devem ser preservados. Segundo, porque a futura sobrevivncia das populaes pode depender da preservao de componentes especficos da diversidade gentica.

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A importncia dos fatores genticos

Existem, basicamente, trs mtodos para estudar a variao gentica entre e dentro de populaes: anlise de caractersticas morfolgicas, anlise enzimtica e anlise de seqncias de DNA. Os indivduos de um determinado grupo costumam ser caracterizados por seus aspectos morfolgicos. No entanto, essas caractersticas podem ter sido modificadas por fatores ambientais e no refletir sua real composio gentica. Alm disso, s vezes torna-se difcil obter dados sobre parmetros genticos importantes dada a pequena variabilidade observada com algumas dessas tcnicas. A anlise das seqncias de DNA permite detectar tal variao e avaliar, teoricamente, qualquer segmento do cdigo gentico. Esse tipo de tcnica embora de custo elevado aumenta consideravelmente a resoluo dessa diferenciao entre e dentro das espcies. A identificao da variao gentica, ou polimorfismo gentico, obtida atravs de marcadores pontos de referncia nos cromossomos utilizados para comparar o nvel de proximidade gentica entre os diferentes representantes de um mesmo grupo. Marcadores podem ser qualquer fragmento de DNA que varia de seqncia de acordo com os indivduos comparados. Eles funcionam como impresses digitais moleculares de cada representante, permitindo sua comparao. A partir das diferenas observadas, possvel estabelecer as distncias genticas entre esses indivduos. Existem duas abordagens para analisar e comparar seqncias de DNA. A primeira e mais direta o seqenciamento dos alelos e a comparao direta entre os pares de bases nitrogenadas;

mas trata-se de um processo trabalhoso, que torna muito difcil o estudo de grande nmero de indivduos. A outra, mais comum, avalia apenas parte da variao existente nas seqncias de todo o DNA do indivduo. O procedimento consiste na anlise e comparao de parte do DNA cortado com o uso de enzimas de cada representante. Fragmentos de DNA previamente isolados servem de sonda para pescar os pedaos do genoma as amostras dos indivduos. Como os componentes de uma populao podem ter algumas seqncias diferentes, o DNA de cada um pode ser cortado em locais distintos. Assim, os fragmentos pescados tero comportamentos diferenciados, que podem ser visualizados usando gel de eletroforese. A diversidade observada chamada polimorfismo ou variao gentica. Outro mtodo, em vez de fazer um corte na fita dupla do DNA, usa pequenos fragmentos de fita simples, que servem para amplificar determinadas regies do material gentico atravs da tcnica de PCR (sigla em ingls para a reao em cadeia da polimerase). Esses fragmentos podem se ligar a diferentes regies do genoma. Ao visualizar o DNA das amostras estudadas, cada indivduo apresentar provavelmente um conjunto distinto de fragmentos amplificados, detectando assim o polimorfismo gentico. Ainda com esse objetivo, h outras tecnologias disponveis, entre elas a RFLP (sigla em ingls para polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrio); RAPD (sigla em ingls para A espcie Caesalpinia DNA polimrfico amplificado ao acaso); AFLP (sipeltophoroides gla em ingls para polimorfismo de comprimentambm to de fragmentos amplificados); e marcadores miconhecida pela crossatlites ou SSR (sigla em ingls para seqndenominao 4 pau-brasil cias simples repetidas).

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Os resultados
Em nossos estudos sobre a distribuio da variabilidade gentica do pau-brasil, utilizamos marcadores RAPD em cinco populaes, que representam duas das trs grandes reas Pernambuco; sul da Bahia e norte do Esprito Santo; e Rio de Janeiro onde podem ser encontrados remanescentes da espcie. Foram coletadas amostras de 82 rvores na Bahia, no Esprito Santo e no Rio de Janeiro (Bzios/Cabo Frio, Saquarema e Guaratiba). A anlise dos resultados revelou que cerca de 50% da variao observada deve ser atribuda s diferenas genticas entre os dois grupos geogrficos (sul da Bahia/Esprito Santo e Rio de Janeiro). O alto nvel de diferenciao populacional encontrado est a princpio em desacordo com o que se esperaria para espcies com as caractersticas do paubrasil. Em espcies arbreas, de ciclo de vida longo e que apresentam sobretudo fecundao cruzada, a maior parte da variao gentica costuma ser creditada s diferenas individuais dentro das populaes. Os resultados podem parecer contraditrios quando comparados com outras espcies com caractersticas biolgicas semelhantes. Mas eles fornecem informaes importantes ao sugerir que a distribuio geogrfica do pau-brasil deve ter sido descontnua desde seu estabelecimento em eras geolgicas passadas. H evidncias histricas de que o pau-brasil teria se espalhado inicialmente durante pocas secas e frias do perodo Quaternrio, quando as mudanas climticas eram cclicas e provavelmente tinham grande influncia sobre a distribuio da fauna e da flora. Com a chegada do clima quente e mido, que predomina ainda hoje no litoral brasileiro, a espcie ficou restrita a reas com condies similares s dos perodos paleoclimticos mais secos, isoladas por fragmentos de florestas midas. Essa constatao derruba a idia de que o pau-brasil crescia de forma contnua do Norte ao Sul do pas. Se as trs grandes regies hoje remanescentes tivessem se separado como conseqncia da explorao predatria ps-descobrimento, o padro de distribuio de variabilidade gentica encontrado seria o mesmo da cobertura original no fragmentada, j que 500 anos no seriam suficientes para que surgisse a diversidade observada. Como uma espcie perene as rvores podem atingir at 300 anos de idade , suas populaes no tiveram tempo para passar por vrias geraes que proporcionassem alteraes profundas em sua estrutura gentica. Os estudos populacionais, portanto, confirmam aparentemente a hiptese de que o pau-brasil ocorria agrupado nessas trs grandes regies mantendo-se isolado geograficamente e seria pouco freqente entre essas reas. Por pertencerem mata atlntica, algumas dessas regies contam com proteo oficial em nvel federal, estadual ou municipal. No entanto, vrias reas no tm uma situao legal definida. Do ponto de vista conservacionista, as informaes obtidas sobre o pau-brasil sugerem que se protejam legalmente as populaes representantes das trs diferentes regies de ocorrncia, para assegurar que a maior parte da diversidade gentica seja mantida. Com base nos subsdios fornecidos por nossos estudos, acreditamos que o plantio de mais indivduos junto s populaes remanescentes com sementes de rvores da mesma regio proporcione o manejo adequado da espcie, garantindo a manuteno de sua variabilidade gentica. A conservao da diversidade gentica em plantas tropicais, raras ou comuns, uma tarefa urgente e desafiadora. Requer conhecimento sobre a distribuio e abundncia das espcies, sobre os ndices demogrficos, as interaes com outros organismos, a quantidade e o padro de disseminao gentica, entre outros parmetros. A reunio desses dados que j comeam a ser acumulados para o pau-brasil e a criao de mecanismos legais de proteo so fatores decisivos para o correto manejo das espcies tropicais e a preservao da biodiversidade. s

Caesalpinia peltophoroides apresenta copa diferente do verdadeiro pau-brasil

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BIOTECNOLOGIA Bactria de canaviais brasileiros tem alta eficincia na produo de polmeros

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Fbrica viva de plstico biodegradvel

Muitas bactrias so capazes de acumular em seu interior como uma reserva de energia grnulos contendo uma classe de polmeros que podem ser usados para fabricar plsticos biodegradveis. Estudos sobre o tema realizados no Brasil levaram descoberta, em canaviais, de uma bactria capaz de sintetizar esses biomateriais com grande eficincia e implantao de uma unidaFOTOMICROGRAFIA DE RITA DE CSSIA P. ALLI (IPT)

de industrial para seu aproveitamento. Por Luiziana Ferreira da Silva, Marilda Keico Taciro, Jos Geraldo da Cruz Pradella e Jos Gregrio Cabrera Gomez, da Diviso de Qumica (Agrupamento de Biotecnologia) do Instituto de Pesquisas Tecnolgicas do Estado de So Paulo.

biodiversidade brasileira tem sido aproveitada em diversas reas para trazer benefcios ao homem. Recentemente, a versatilidade das reservas naturais do pas foi mais uma vez confirmada, com a descoberta em solo brasileiro de uma nova bactria, capaz de produzir um biopolmero usado na produo de plsticos biodegradveis. A identificao do novo organismo (figura 1), que resultou de projeto conjunto do Instituto de Pesquisas Tecnolgicas do estado de So Paulo (IPT), do Centro de Tecnologia da empresa Copersucar (CTC) e da Universidade de So Paulo (USP), oferece uma alternativa aos plsticos obtidos do petrleo e atende crescente preocupao com os problemas ambientais gerados pelo uso quase onipresente dessa matria-prima nos dias atuais e seu descarte em grande volume na natureza. Tais plsticos so tambm biocompatveis, o que possibilita inmeras aplicaes na rea mdico-farmacutica. A produo de plsticos biodegradveis (passveis de rpida decomposio por microrganismos) uma importante alternativa para a reduo dos danos ambientais causados por esses materiais as outras so reciclagem, incinerao, incorporao de aditivos a plsticos tradicionais e obteno de termoplsticos que se degradam mais facilmente.

J foram desenvolvidos vrios polmeros com propriedades similares s dos plsticos de origem petroqumica e mais suscetveis de degradao biolgica, como poli-e-caprolactona (PCL), lcool polivinlico (PVOH), polilactato, poliglicolato e diversas misturas desses materiais com amido, alm dos polihidroxialcanoatos (PHAs). Os PHAs so termoplsticos biodegradveis que podem ser produzidos a partir de matrias-primas renovveis, como o acar de cana, materiais amilceos e leos vegetais. Vrias bactrias podem acumular esses polmeros (do grupo dos polisteres) na forma de grnulos intracelulares que, em certos casos, representam em torno de 80% da massa seca celular. A funo atribuda com maior freqncia a tais grnulos a de reserva de carbono e energia para os microrganismos semelhante ao papel das clulas de gordura nos mamferos. A sntese de PHAs (figura 2) ocorre, portanto, quando h excesso de carbono e limitao de pelo menos um nutriente essencial multiplicao das clulas bacterianas. Polmeros so formados por longas cadeias de unidades moleculares chamadas monmeros. Atualmente, mais de 120 monmeros diferentes j foram identificados como constituintes de PHAs produ-

Figura 1. Duas clulas de Burkholderia sacchari, a bactria que produz plstico biodegradvel descoberta no Brasil

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R CH O (CH2)n O C O PHA
zidos por bactrias a partir de diversas fontes de carbono. Em funo dos monmeros que os compem, esses polmeros podem ser classificados como polihidroxialcanoatos de cadeia curta (PHAs-SCL), se contm monmeros com trs a cinco tomos de carbono, ou polihidroxialcanoatos de cadeia mdia (PHAsMCL), formados por monmeros com seis a 16 tomos de carbono. Enquanto os PHAs de cadeia curta so encontrados em bactrias dos mais diversos gneros, os de cadeia mdia s foram detectados nas do gnero Pseudomonas. Apenas recentemente demonstrou-se que podem ser sintetizados PHAs contendo as duas categorias de monmeros na mesma cadeia polimrica. As propriedades fsicas e mecnicas desses materiais dependem da composio monomrica, da distribuio dos diferentes monmeros e do peso molecular do polmero. Isso permite prever que, no futuro, eles podero ser produzidos sob medida para diferentes aplicaes. A famlia dos PHAs, dependendo da composio de suas cadeias, inclui desde materiais rgidos (como o P3HB) at materiais flexveis (como os PHAsMCL), e pode ainda apresentar materiais viscosos (como alguns dos PHAsMCL, cujas cadeias contm grande frao de monmeros insaturados.

Figura 2. Frmula geral dos polihidroxialcanoatos, em que os monmeros (separados por linhas tracejadas) repetem-se indefinidamente na cadeia do polmero (as letras C, H e O indicam carbono, hidrognio e oxignio e a letra R representa vrios tipos de radicais orgnicos que podem estar ligados ao polmero)

R CH (CH2)n

O C

Figura 3. Esquema de produo de P3HB integrado a uma usina de acar e lcool

A histria dos polmeros bacterianos

Esse grupo de polmeros foi descoberto em 1923, quando o microbilogo francs Maurice Lemoigne,

do Instituto Pasteur, observou a presena de poli-3hidroxibutirato (P3HB) em bactrias do gnero Bacillus. O P3HB, porm, foi apenas uma curiosidade acadmica durante dcadas: s em 1962 foram obtidas as primeiras patentes para sua produo (empregando bactrias). Tambm dessa poca a primeira tentativa nesse sentido, da empresa norte-americana W. R. Grace, inviabilizada pela baixa eficincia dos processos de produo e extrao, que elevavam o custo do produto. Por muitos anos, o cido-3-hidroxibutrico (3HB) foi o nico constituinte de PHAs conhecido, at que, em 1964, quando se identificou o cido-3-hidroxi2-butenico como constituinte de PHAs produzido por bactria do gnero Nocardia. Em 1972, a partir de estudos com lodo de esgoto, foi verificada a presena de novos constituintes, como os cidos 3hidroxivalrico, 3-hidroxihexanico e 3-hidroxiheptanico. Em 1976, a empresa inglesa Imperial Chemical Industries (ICI) voltou a avaliar a produo de poli3-hidroxibutirato como alternativa aos plsticos obtidos do petrleo, e constatou que a incorporao de unidades 3-hidroxivalerato cadeia polimrica permitia modular propriedades fsicas e mecnicas do polmero produzido, ampliando muito as possveis aplicaes. Registrada a patente, em 1981, a ICI iniciou a segunda tentativa de produo industrial de PHAs, empregando a bactria Ralstonia eutropha para fabricar o P3HB (com apenas um tipo de monmero, o 3-hidroxibutirato) e o P3HB-co-3HV (que inclui 3-hidroxibutirato e 3-hidroxivalerato), que receberam o nome comercial Biopol. No final dos anos 80, foi demonstrado que PHAs produzidos por Pseudomonas oleovorans a partir de alcanos, cidos carboxlicos ou lcoois tm em sua composio mais de um tipo de monmero, e que sua composio depende da fonte de carbono utilizada. Quando supridas com cido octanico, por exemplo, as bactrias produzem um PHA no qual o cido 3-hidroxioctanico o principal constituinte, embora tambm apresente monmeros com dois tomos de carbono a menos ou a mais. Em 1988, os genes que codificam as enzimas responsveis pela sntese de PHB em Ralstonia eutropha foram clonados em outra bactria, Escherichia coli, e at 1992 o mesmo foi feito com pelo menos 18 espcies de bactrias. A partir de 1990, estudos confirmaram a sntese de PHAs com monmeros diferentes de 3HB, sem que qualquer precursor fosse fornecido. Diversas Pseudomonas fluorescentes podem sintetizar PHAs que tm o cido 3-hidroxidecanico (3HD) como componente principal a partir de glicose, frutose, cido glicnico e outras fontes de carbono. Em 1992, surgiram os primeiros trabalhos descrevendo a produo de PHAs em plantas.

FONTE: C. ROSSELL/COPERSUCAR (2000)

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PRIMEIRA

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A descoberta da nova bactria

Ainda no incio dos anos 90, o IPT, a Copersucar e a USP iniciaram um projeto de pesquisa visando desenvolver tecnologia para produo de polihidroxialcanoatos no pas, usando bactrias e tendo como fonte principal de carbono o acar da cana (Sacharum officinalis). Os estudos, que contaram com o apoio do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico e da Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo, levaram a um processo de produo de poli-3-hidroxibutirato (PHB) e poli-3hidrobutirato-co-3-hidroxivalerato (PHB-co-HV). O baixo custo de produo do acar e o excedente energtico das usinas de acar e lcool viabilizam economicamente a produo desses polmeros no Brasil. Com base na tecnologia gerada no pas, foi instalada em 1996 uma unidade-piloto de produo na Usina da Pedra, no municpio de Serrana (SP). As bactrias so mantidas em tanques agitados e aerados, em condies controladas de pH, temperatura, oxignio dissolvido e fornecimento de matrias-primas. O PHB-co-3HV produzido pela adio conjunta de cido propinico e acar. O processo de extrao e purificao do polmero garante alta pureza e peso molecular adequados ao seu processamento. Em setembro do ano passado foi inaugurada a PHB Industrial, criada para produzir e comercializar o plstico biodegradvel brasileiro. A capacidade inicial de produo alcana 50 toneladas anuais (figura 3), mas a expectativa o aumento dessa produo para 5 mil toneladas/ano j em 2003. Uma das etapas iniciais da pesquisa que reuniu IPT, Copersucar e USP foi a busca de bactrias capazes de produzir PHA a partir de sacarose da canade-acar, baseada em duas estratgias. Em uma delas, o Instituto de Cincias Biomdicas da USP conseguiu, atravs de melhoramento gentico, que uma linhagem (da coleo de cultura) da bactria Ralstonia eutropha incapaz de produzir P3HB a partir de sacarose se tornasse capaz de fazer isso. Simultaneamente, o Laboratrio de Microbiologia Industrial (do Agrupamento de Microbiologia Industrial do IPT) foi procura de bactrias de solo capazes de produzir PHA a partir de sacarose da canade-acar. Foram coletadas amostras de solo de canavial e formulou-se um meio de cultura que selecionasse bactrias capazes de crescer em presena de acar de cana. As culturas continham ainda inibidores de fungos, para evitar que interferissem no crescimento bacteriano. A primeira seleo obteve cerca de 300 bactrias capazes de crescer usando a sacarose, e uma avaliao quanto capacidade de acumular o biopolmero reduziu o nmero inicial para 75. Comparando a eficincia de acmulo, o laboratrio chegou s duas melhores linhagens, denominadas IPT 044 e IPT 101

e identificadas de modo preliminar como espcies do gnero Burkholderia. As duas linhagens foram avaliadas em ensaios em biorreator, para comparar velocidade de crescimento, capacidade de acmulo de polmero (figura 4) e eficincia em converter sacarose em polmero, e IPT 101 foi selecionada, por seu melhor desempenho e por no ser patognica. Para obter a identificao completa, a bactria IPT 101 foi enviada a centros especializados no Brasil e na Alemanha, constatando-se que suas caractersticas no coincidiam com as de qualquer bactria desse gnero conhecida. S em 1999, aps testes bioqumicos e genticos, em cooperao com o Laboratrio de Microbiologia da Universidade Gent (Blgica) e com o Instituto de Microbiologia de Mnster (Alemanha), verificou-se ser, de fato, uma nova espcie, batizada de Burkholderia sacchari por ter sido isolada a partir de solo de canavial. A descoberta ser publicada no International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology em setembro (volume 51). O projeto, em sua continuao, j realizou o melhoramento gentico da bactria B. sacchari, obtendo um mutante (IPT 189) com maior capacidade de acmulo de P3HB-co-3HV, quando alimentado com sacarose e cido propinico. Esse polmero misto mais malevel e tem aplicaes mais amplas que o P3HB. O Centro de Tecnologia da Copersucar e o IPT solicitaram patente para a linhagem, seu mutante e o processo de produo. Os estudos do IPT nessa rea continuam, objetivando obter novas linhagens de bactrias por tcnicas de engenharia gentica, pesquisar a biodegradabilidade de polihidroxialcanoatos e de outros plsticos ditos biodegradveis, estudar o processo de produo de P3HB e seu copolmero a partir de bagao de cana-de-acar, estudar o processo de produo de polihidroxialcanoatos de cadeia mdia (PHAMCL) a partir de acar e leos vegetais, otimizar (por meios computacionais) o processo de produo de PHA e buscar a ampliao de escala e novas concepes de fermentadores. s

Figura 4. Clulas bacterianas contendo grnulos de PHB (polihidroxibutirato) em seu interior

agosto de 2001 CINCIA HOJE 71