Los cambios en la absorcin de calcio y distribucin en los tejidos posteriores inducidos por Productos de la reaccin de Maillard: in vitro y ensayos

in vivo
Resumen: Los efectos de los productos de la reaccin de Maillard (MRP) a partir de glucosa-lisina y glucosa-metionina sobre la biodisponibilidad de calcio fueron estudiados por ensayos in vivo (ratas) e in vitro (clulas Caco-2). Mezclas equimolar de glucosa/lisina y glucosa/metionina (40% de humedad) fueron calentadas (150 C, 30 min) para preparar muestras (GL30 y GM30, respectivamente). Durante 21 das, las ratas fueron alimentadas con una dieta de control (grupo control) o dietas que contengan por separado el 3% de la mezcla caliente (grupos GL30 y GM30, respectivamente). En la ltima semana un balance de calcio se llev a cabo, despus de lo cual los animales fueron sacrificados y algunos rganos y el suero fueron trasladados a analizar los niveles de calcio. Una segunda balanza que se llev a cabo durante todo el periodo de experimentacin para calcular la retencin de calcio global (retencin de calcio durante los 21 das). Sin calefaccin y muestras calentadas se utilizaron para los experimentos de transporte de calcio en clulas Caco2. La ingesta de alimentos y el cuerpo final peso menos en el grupo GM30. La excrecin fecal de calcio disminuyo y la digestibilidad aument en este grupo. En consecuencia, el aumento del transporte de calcio en clulas Caco-2 se encontr en la presencia de la muestra GM30, en comparacin con la muestra sin calentar. Sin embargo, la retencin de calcio global tiende a disminuir en el grupo GM30, principalmente debido a la menor ingesta de alimentos. Concentraciones de calcio del hueso disminuy en los animales alimentados con las dietas de MRP. Los posibles efectos a largo plazo de la ingesta de los PRM en la digestibilidad de calcio y calcio de los huesos se deben tomar en cuenta para evitar las enfermedades relacionadas. 2005 la Sociedad de Industria Qumica INTRODUCCIN Teniendo en cuenta la relacin establecida entre la dieta deficiente de calcio y diversas enfermedades degenerativas, en especial la osteoporosis, la conciencia de la importancia de nutricional de calcio durante el ciclo de vida ha aumentado en los ltimos aos. Este hecho ha llevado a la recomendada la ingesta de calcio de revisin y aumento en muchos pases, incluidos los USA y Espaa las necesidades de calcio son principalmente garantizado por la adecuada ingesta alimenticia, pero, adems, el calcio en la dieta debe estar disponible. As, un estudio del Grupo de Investigacin de Fracturas por Osteoporosis ha demostrado que bajo eficiencia fraccional significativamente la absorcin del calcio aumenta el riesgo de fractura de cadera posterior en las mujeres, especialmente aquellos con niveles bajos de ingesta de calcio. Alrededor del 70% de calcio en la dieta en los pases occidentales es proporcionada por leche y productos lcteos. La leche con frecuencia se consumen en el desayuno con cereales, galletas, tostadas, caf, chocolate, etc., todos ellos rica en productos dorado. Por otra parte, en otras comidas el calcio se consume con alimentos procesados, tales como fritos, asados, tostados o incluso los alimentos almacenados, en que la reaccin de Maillard puede desarrollar. Esta reaccin provoca una prdida del valor nutritivo de alimentos, que afecta principalmente a la calidad nutricional de protenas.

Influencias negativas de la reaccin de productos Maillard (MRP) en el metabolismo de minerales tambin se han descrito, ya que algunos pigmentos polimricos marrn (Melanoidinas) se comportan como agentes quemantes para metales, formando complejos solubles e insolubles. Algunos autores han sugerido que el calcio es slo obligado por los compuestos de mayor peso molecular formado por la reaccin y han informado poca capacidad de unin del calcio por fructuosillo lisina, uno de los primeros productos que forma. Sin embargo, Rendleman inform de la formacin de complejos con el calcio diferentes Melanoidinas solubles e insolubles. Nuestro grupo de investigacin observ la aparicin de solubles las formas no-inicas de calcio y formas insolubles en presencia de una mezcla calentada de casena-glucosa-fructosa antes y despus de la digestin in vitro. En consecuencia, la capacidad quemante del calcio de planificacin de necesidades y la presencia conjunta de ambos en la luz intestinal sugieren la posibilidad de que la disponibilidad de minerales puede ser alterado. La digestibilidad in vitro de calcio de los lquidos para lactantes frmula con el desarrollo de la reaccin de Maillard no se produce cambios en el calcio dializado. Uso de la adenocarcinoma humano Caco-2 lneas celulares, calcio de menor disponibilidad de la presencia de mezclas calentadas de glucosa-fructosa casenacomo resultado del aumento de las precipitaciones durante la digestin in vitro. Sin embargo, la cantidad restante de calcio soluble se transporta a travs de la mono capa de clulas ms eficientemente que en la muestra sin calentar. Los resultados de estudios con animales que describe en la relacin entre la planificacin de necesidades y la absorcin de calcio y el metabolismo son dispares. Algunos estudios han mostrado un incremento en la absorcin de calcio despus del consumo de frmulas infantiles que contienen lquidos Maillard derivados o no cambia en el calcio la digestin en las ratas alimentadas con dietas que contenan mezcla calentada de la casena-glucosa-fructosa. Estudios previos realizados en nuestro laboratorio utilizando la glucosa-lisina o mezclas de glucosa-metionina se calienta a 150 C durante 90 minutos y contiene solubles y derivados insolubles, no mostraron modificaciones en la absorcin de calcio total en ratas. Sin embargo, algunos cambios a nivel metablico deben haber tenido lugar, afectando la concentracin de calcio en los tejidos. Por lo tanto, los compuestos insolubles formados en estas experimentales condiciones no parecen influir en la absorcin de calcio, sino que algunos derivados solubles pueden transporte a favor del calcio y afectan el metabolismo. Esto podra ser interesante para probar esta accin mediante la utilizacin de glucosa-lisina o mezclas de glucosa-metionina calentada por un tiempo ms corto, en los que los productos de pardeamiento se forman completamente solubles en condiciones intestinales. La eleccin de la glucosa-lisina y glucosa-metionina sistemas de modelo para el estudio fue justificada. Lisina, probablemente el ms sensible amino cido para el tratamiento trmico, y la glucosa, un muy reactivo azcar, estn presentes en muchos alimentos, es decir, productos lcteos, que son, adems, la mejor fuente de calcio. Metionina tambin participa en las reacciones de Maillard y su participacin es interesante debido a su bajo contenido en los alimentos y la posible toxicidad de MRP formado con estos. A la luz de la interaccin entre la planificacin de necesidades y calcio, y teniendo en cuenta que el contenido de MRP se ha incrementado sustancialmente en la dieta humana en los ltimos aos,

parece interesante estudiar los efectos de algunos de estos productos en la absorcin de calcio del hueso y, por tanto, la posibles repercusiones en la salud. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue analizar los efectos de mezclas calentadas de glucosa-lisina y glucosa-metionina, calentado por 30 min a 150 C, sobre la digestibilidad del calcio y el metabolismo del calcio, por in vitro (clulas Caco-2) e in vivo (ratas) los estudios. EXPERIMENTAL Preparacin de muestras de glucosa (Merck, Darmstadt, Alemania), la lisina y la metionina (Sigma Chemical Co., St Louis, MO, EE.UU.) se utilizaron para preparar las muestras. Mezclas equimolares de glucosa-lisina-HCl (GL) o de glucosa-DL-metionina (GM) (ambos 40% de humedad) fueron calentadas en recipientes abiertos en un horno de 150 C (Selecta 2000210, Barcelona, Espaa) por 30 minutos para obtener las muestras GL30 y GM30, respectivamente. Despus de calentar, la reaccin se detuvo por enfriamiento en un bao de hielo y los productos fueron retirados, congelados, liofilizados y almacenados a 4 C, segn lo descrito por Delgado-Andrade. hasta que se utilizaron para preparar las dietas o llevar a cabo el Caco-2 ensayos de las clulas. Las muestras se caracterizaron por el desarrollo del color marrn a 420 nm, los valores de pH y los efectos sobre la solubilidad de minerales. Los minerales sin contenido de aminocidos en las muestras se midi por los altos de cromatografa lquida (HPLC), utilizando el mtodo del agua despus de Pico-Tag derivatizacin con isocianato de fenilo, sin el paso de la hidrlisis. La proporcin de lisina y metionina libre residual en las muestras GL30 y GM30 fueron 37,2% y 47,0% de los aminocidos presentes en la mezcla inicial, respectivamente. Preparacin de las dietas La dieta purificada AIN-93G (Dyets Inc., Bethlehem, PA) para los roedores de laboratorio se utiliz como la dieta de control. Las muestras GL30 y GM30 se aadieron individualmente a la AIN-93G dieta para alcanzar una concentracin final de 3%. Las dietas fueron nombrados GL30 y GM30, respectivamente. La inclusin de las muestras a la base de la dieta no supone cambios significativos en el contenido de protenas, como fue revelado por el anlisis individual de las diferentes dietas. La media SD contenido de nutrientes de las dietas fue: humedad (%) 8.0 0.4, protenas (GKG-1) 179,6 1,1, la grasa (g kg-1) 69,4 0,5 y de calcio (GKG-1) 4.8 0.3. Ensayos biolgicos Cuarenta y tres ratas destetadas Wistar con un peso de 41,7 0,4 g (media DE) participaron en el estudio. Treinta y tres animales se distribuyeron aleatoriamente en tres grupos de ratas once y cada grupo fue asignado a uno de los tratamientos dietticos, denominado el control, los grupos GL30 y GM30. Estos animales fueron alojados individualmente en jaulas metablicas en una sala de ambiente controlado que se mantuvo a 20-22 C con un ciclo de 12 h luz y oscuridad y 55 a 70% de humedad, y tuvieron acceso ad libitum a sus dietas y agua desmineralizada (Milli -Sistema de agua ultrapura Q, Millipore Corp. Bedford, MA, EE.UU.). Los diez animales restantes fueron sacrificadas por sobredosis de anestesia en el da 0 para analizar su contenido inicial de calcio del cuerpo. Dos diferentes equilibrios se llevaron a cabo. El balance de calcio de todo el perodo experimental (21 das), denominado en adelante el "equilibrio global", se calcula a partir de la diferencia entre el contenido de calcio corporal final de cada animal y el contenido del calcio corporal inicial [22.04 g 1.5mgCa-1 de peso corporal inicial metablicas (cuerpo weight0.75 ) promedio de 10] animales. Cinco animales de cada grupo fueron sacrificados por sobredosis de

anestesia en el da 21 para calcular su contenido final de calcio del cuerpo. Ninguno de sus rganos fueron extrados. La ingesta de calcio fue monitoreado durante este perodo. En la ltima semana del perodo experimental (da 14-21) a otro el equilibrio del calcio se realiz en todos los animales de cada grupo. Esta prueba implic un perodo previo de 14 das durante los cuales se monitorearon la ingestin de alimentos slidos y cambios de peso corporal, seguido de un perodo de 7 das en los que, por otra parte, las heces y la orina de cada animal se recolectaron diariamente y se almacena por separado, como una piscina de 1 semana. Las heces se pesaron, liofilizada y homogeneizada. La orina se recolect en HCl 0,5% (vol / vol), se filtr (Whatman filtro de papel N 40, sin cenizas, Whatman, Maidstone, Reino Unido) y diluido a un volumen apropiado. Para el control de la contaminacin ambiental posible durante la recoleccin de la orina y las heces, las jaulas en blanco fueron manipuladas de la misma forma que los utilizados para los animales. El da 21, despus de una noche de ayuno, seis animales de cada grupo fueron anestesiados con pentobarbital sdico (5 mg por 100 g de peso corporal) (Abbott Laboratories, Granada, Espaa) y desangrado terminal se realiz mediante la canalizacin de la arteria cartida. Se extrajo sangre para obtener el suero y el hgado, el rin derecho, fmur derecho y el contenido cecal fueron retirados, pesados y congelados a -20 C hasta el anlisis de calcio. Como se mencion anteriormente, el resto de los animales de cada grupo (cinco en cada uno) fueron sacrificados para realizar el balance global. Los resultados de la balanza mundial proporcion informacin sobre la retencin de calcio durante el ensayo. El balance de calcio realizado entre los das 14 y 21 los datos suministrados especficamente relacionados con el proceso digestivo, y permiti un anlisis del contenido en calcio y la concentracin de rganos extrados despus del sacrificio se llev a cabo. Toda la administracin y los procedimientos experimentales llevadas a cabo en este estudio se realizaron en estricto acuerdo con la normativa vigente Europea (86/609 CEE) respecto a los animales de laboratorio. El Comit de Biotica de la experimentacin con animales en nuestra institucin (Universidad de Granada-CSIC) aprob el protocolo del estudio.

Las clulas Cultivo de clulas Clulas Caco-2 fueron adquiridos de la coleccin europea de Cultivos Celulares (ECACC). Todos los medios de cultivo de clulas y qumicos de cultivo celular de grado se obtuvieron de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). frascos de cultivo fueron adquiridos de Corning Costar (Cambridge, MA, EE.UU.). Las clulas fueron cultivadas en frascos de 75 cm2 de plstico que contienen altos de glucosa en Dulbecco modificado medio mnimo esencial (DMEM), con inactivado por calor suero fetal bovino (15%), NaHCO3 (3.7gL-1), aminocidos no esenciales (1 %), N-2-hidroxietilpiperazinaN -2 -? cido etano (HEPES) (mmol / L 15-1), la insulina bovina (IUML 0,1-1), y el 1% de antibitico antimictico solucin. Las clulas se mantuvieron a 37 C en una incubadora en una atmsfera de aire/CO2 (95:5) a 90% de humedad, y se cambi el medio cada 2 das. El contenido de calcio del medio completo fue 1.54mmolL-1. Tripsinizacin y la siembra de clulas en placas bicamerales (Transwell, 24 mm de dimetro, rea de 4.7cm2, 3 micras de tamao de poro, Costar, Cambridge, MA, EE.UU.) se realiz como se describi elsewhere.11 El desarrollo de uniones estrechas

funcionales durante la diferenciacin celular en placas bicamerales fue supervisado mediante la determinacin de la resistencia elctrica transepitelial (TEER) segn lo descrito por Navarro et al.12 Las monocapas utilizadas en este estudio mostraron valores adecuados TEER desde las 500 a 650 cm-2.

Transporte de calcio Veintin das despus de la siembra inicial, los experimentos de transporte de calcio se llevaron a cabo. medio gastado la cultura fue aspirado de las superficies de las clulas apical y basolateral cmaras y apical y basolateral de la monocapa se lavaron tres veces con HBSS Ca2 + y Mg2 + libre a 37 C. Entonces la solucin de transporte (2,5 ml) se aadi a la cmara basolateral, y la prueba de soluciones de transporte se agreg a la cmara apical (1,5 ml). La solucin de transporte que figuran 130 mmol / L-1 de NaCl, KCl 10mmolL-1 mmol / L 1-1 MgSO4, 5 mmol / L-1 de glucosa y 50 mmol / L-1 HEPES, pH 7. Cinco diferentes soluciones de ensayo de transporte que contengan la concentracin de calcio misma (mmol / L 3-1) se han aadido a la cmara apical. El calcio se ha aadido a DMEM de una solucin madre 0.1molL-1, preparado con CaCO3 (Sigma Chemical Co.) para lograr una concentracin final de calcio de 3mmolL-1 (DMEM-Ca). El resto de las soluciones de ensayo de transporte se hicieron mediante la adicin de las muestras de GL, GL30, GM o GM30 a la DMEM-Ca en una concentracin de 0,8 mg ml de la muestra-1, las soluciones de ensayo resultante de transporte que se denomina DMEM-GL; DMEM-GL30; DMEM GM y DMEM-GM30, respectivamente . El transporte de prueba las soluciones se incubaron a 37 C hasta que el experimento se inici. Despus de aadir las soluciones de transporte de prueba a la cmara apical, los cultivos celulares se incubaron a 37 C en un aire humedecido: atmsfera de CO2 durante 4 h. Para calcular el calcio transportado a travs de la monocapa celular, el buffer de la cmara basolateral se ha retirado y, para garantizar la recogida completa, los pozos se lavaron dos veces con agua desionizada. La viabilidad celular despus de 4 horas de exposicin a las soluciones de ensayo se evalu mediante el transporte de exclusin con azul tripano y nunca fue inferior al 85%. Tcnicas analticas El hgado, el rin derecho, fmur derecho y el contenido cecal se incinera en seco en un horno de mufla (Selecta, Mod.366, Barcelona, Espaa) a 450 C y las cenizas blancas obtenidos se disolvieron en HCl/HNO3/H2O (01:01:02) (Suprapur, Merck, Darmstadt, Alemania). Alcuotas de las muestras restantes fueron digeridos completamente por la adicin de HNO3 concentrado, HClO4 y por calentamiento a altas temperaturas (210-220 C) en un vaso de arena. Anteriormente, los cadveres fueron sometidos a todo tratamiento de hidrlisis cida (6 Moll-HCl 1), calefaccin a 80 C durante varios das hasta que la desintegracin completa. Todas las muestras se diluyeron con agua Milli-Q a una volumen adecuado para la medicin. Los anlisis de calcio en todas las muestras se realizaron con espectroscopa de absorcin atmica (AAS) en un Perkin-Elmer Analyst 700 espectrofotmetro (Norwalk, CT, EE.UU.). Las soluciones estndar se preparado a partir de una solucin madre Tritisol de calcio (CaCl2 en gL 65-1 HCl, 1000 mg de Ca, Merck). cloruro de lantano (Merck) se aadi a las muestras y estndares para una concentracin final de gL 3-1. Piscinas de las heces, la orina y la dieta se utilizaron como residencia de control para evaluar la precisin. La inter-ensayo coeficiente de variacin fue de 0,85% en las heces, un 0,95% en la orina y el 2,07% en la dieta. Leche en polvo (de referencia certificados material de CRM 063, la Oficina Comunitaria de Referencia, Bruselas, Blgica) fue utilizada para cuantificar la precisin, dando un valor de 0.04mgg 13.48-1 (media desviacin estndar, valor certificado: 13,49 0.10mgg-1). Todas las botellas de muestra de material de vidrio y polietileno

se lava con moll 10-1 cido ntrico y agua mili-Q se utiliz durante todo el estudio. Los siguientes ndices se calcularon utilizando los datos de ingesta de calcio y la excrecin fecal y urinaria obtenidos en la ltima semana del ensayo: la absorcin aparente (ingerido Ca-Ca fecal), la retencin aparente o equilibrio (aparente absorcin de Ca-urinario), la eficiencia de absorcin o digestibilidad (% A / I) = absorcin aparente / Ca ingerido 100, la eficiencia de retencin (% R / A) = retencin aparente / absorcin aparente 100, la eficiencia de utilizacin y nutritivo (% R / I) = retencin aparente / Ca ingerido 100. Los parmetros calculados para el equilibrio global fueron retencin mundial (final del cuerpo el contenido de Ca Ca contenido inicial del cuerpo) y global% R / I (retencin a nivel mundial y la ingesta de Ca total 100). Anlisis estadstico Todos los datos fueron evaluados estadsticamente mediante el anlisis de una va de la varianza (ANOVA), seguida de la prueba de Duncan para comparar las medias que mostraron una variacin significativa (P <0,05). Los anlisis se realizaron utilizando Statgraphics Plus, versin 5.1, 2001. RESULTADOS El equilibrio de calcio Con el fin de obtener una mejor interpretacin de los resultados, los datos fueron expresados como valor absoluto y relativo, se refiere al peso corporal metablico (MBW) de los animales. La ingesta de alimentos (media DE) durante el periodo experimental fue de 0,27 0,01, 0,27 0,01 y 0,22 0,01 gg-1 da MBWper entre el control, la GL30 y GM30 los grupos, respectivamente. la evolucin del peso corporal se muestra en la figura. 1. El peso final de los animales del grupo GM30 se redujo significativamente, mientras que las de los animales en el grupo GL30 no vari con respecto a los controles.

La utilizacin del calcio en el grupo GL30 se mantuvo sin cambios en comparacin con el grupo control (Tabla 1). La ingesta diaria de calcio disminuy en los animales GM30, aunque, cuando se refiri a la MBW, sin diferencias entre grupos (Tabla 1). La excrecin de calcio fecales y excrecin urinaria de calcio aument en el GM30group. Por lo tanto, la absorcin de calcio aparente, expresado como g-1 mgCa MBW da-1, fue mayor y la retencin aparente de calcio no se vio afectada durante el balance de la semana pasada en estos animales. El grupo GM30 muestren un aumento en la digestibilidad del calcio (% A / I) y% R / I, y una disminucin en el% R / A (Fig. 2). En el balance global, el consumo de calcio (Ca g g-1 MBW) fue menor en los animales del grupo GM30, aunque no significativa, una disminucin en el contenido de calcio del cuerpo y en la conservacin global se observ (fig. 3).

Contenido de calcio y la concentracin en los rganos Los datos se muestran en la Tabla 2. Los valores de calcio en el hgado no mostr diferencias significativas entre los grupos. Una reduccin de calcio renal se observ slo en el grupo GM30. Todos los animales alimentados con dietas theMRP mostraron reducciones significativas en el contenido de calcio y la concentracin en el fmur con respecto al grupo control, ms notablemente en el grupo GM30. Concentracin de calcio en el contenido de suero y ciego se mantuvo sin cambios en todos los animales. Clulas Caco-2 ensayo El transporte de calcio (Cuadro 3) se expresa en microgramos de calcio transportado a la cmara basolateral por pozo y como porcentaje de calcio transportados por la cantidad de transporte

solucion. El experimento y el porcentaje de calcio transferido de la parte apical al compartimiento basolateral no aument.

Con la adicin de las mezclas de glucosa-cido amino calentada al medio de cultivo, en comparacin con el DMEM sin MRP. Sin embargo, la adicin de la muestra GM30 al medio de cultivo aumentado de manera importante el transporte de calcio (en valor absoluto y relativo) con respecto a la muestra sin calentar (GM). DISCUSIN Los primeros MRP se han considerado los promotores de la palatabilidad y el apetito, con efectos polmica sobre el peso corporal. Sin embargo, la influencia puede variar segn el tipo de planificacin de necesidades a prueba, ya que sus caractersticas dependen de los reactivos, las condiciones de reaccin, etc. Por lo tanto, Furniss tom nota de la estabilidad de consumo de alimentos con dietas a base de lisina fructosilo casena o lactosa-, de acuerdo con los resultados encontrados en el grupo GL30. Sin embargo, una disminucin en la ingesta de alimentos durante todo el perodo experimental y un menor peso corporal final se encuentran entre los animales GM30. Sin descartar el posible efecto de la planificacin de necesidades de la muestra GM30, el hecho de que la metionina libre ha sido descrito como un potente inhibidor del apetito se debe

tomar en cuenta, y el exceso de este aminocido en la dieta baja en protenas produce una disminucin en la ingesta de alimentos y en el aumento de peso corporal. En el presente ensayo el nivel de protena de AIN-93G es adecuado, pero la dieta GM30 contena una cierta cantidad de metionina libre residual debido a la adicin de la muestra GM30, que podran contribuir a la disminucin de peso mostraron entre los animales alimentados con esta dieta. Debido a la ingesta de alimentos bajos en el grupo GM30, la ingesta de calcio disminuy en todo el perodo experimental (Fig. 3), aunque en la ltima semana no se encontraron diferencias cuando los datos fueron remitidos a el MBW (Tabla 1). Una adaptacin a la dieta parece ocurrir en el perodo experimental, ya que los efectos observados en el aumento de peso y la ingesta de alimentos eran ms notables en la primera semana del ensayo, y se debilit ms tarde (Fig. 1). De acuerdo con esto, la adaptacin a un exceso moderado de la metionina se ha descrito en animales, lo que sugiere que la capacidad de metabolizar el aumento de la metionina durante el crecimiento. Eliminacin fecal de calcio en el grupo GL30 era el mismo que en el grupo control. En este sentido, ningn efecto se haba observado en trabajos anteriores con ratas alimentadas con una dieta suplementada con una mezcla de glucosa-lisina calentada durante 90 minutos, cuya planificacin de necesidades se parte insoluble en agua, a diferencia de la solubilidad completo que se encuentra en la muestra GL30. De acuerdo con los resultados de este ensayo, la presencia de lisina fructosilo, un derivado de principios de la reaccin de la glucosa-lisina, no insolubiliza calcio y tampoco disminuye el transporte de calcio en clulas Caco-2. Por otra parte, avanz presente MRP en mezclas calentadas de glucosa-fructosa casena-de no modificar la absorcin de calcio en vivo. En el balance de la semana pasada, los animales alimentados con la dieta GM30 excretan menos calcio fecal (Tabla 1). Los resultados preliminares de ensayos posteriores realizados en nuestro laboratorio muestran que la adicin de metionina libre de la dieta, en una proporcin similar a la dieta GM30, no modifica de calcio fecal de ratas, pero no aumentan la excrecin urinaria (datos no publicados). Por lo tanto, el presente MRP en la dieta GM30 pareca ser responsable de la disminucin de calcio fecal que se encuentran en el grupo GM30. Diversos estudios han demostrado que melanoidinas puede actuar como un agente quelante de Ca-, y se puede sugerir que algunos MRP soluble de calcio de glucosa-methioninemixture complejos y favorece su absorcin intestinal. Este hecho explicara la absorcin de calcio ms alto otorgado por una ingesta similar y aument la digestibilidad del calcio (% A / I) que se encuentran en el grupo GM30 (Fig. 2). El estudio in vitro confirman esta hiptesis, ya que una mayor transporte de calcio fue observado en clulas Caco-2 en presencia de la solucin de transporte DMEM-GM30 prueba con respecto a la solucin que contiene la muestra sin calentar, DMEMGM (Tabla 3). Esto no se observ en DMEMGL30, de conformidad con la ausencia de cambios en la digestibilidad del calcio en los animales alimentados con la dieta GL30. El efecto positivo de la dieta sobre la absorcin de calcio GM30 atribuye a la formacin de bajo peso molecular solubles y absorbibles complejos Ca-MRP, de acuerdo con una accin premelanoidins favorable sobre la absorcin de calcio observada por la Alta et al. En general, los datos de la bibliografa sobre planificacin de necesidades y la digestibilidad del calcio sugieren o ningn efecto o un aumento en la absorcin de calcio. La eliminacin urinaria y el balance de calcio se mantuvo sin modificaciones entre los animales que consumieron la dieta GL30 tanto durante la ltima semana y en todo el perodo experimental (Cuadro 1, Fig. 3.), Pero el calcio urinario aument en el grupo GM30. Sin descartar una posible influencia de la planificacin de necesidades solubles de la muestra GM30, se ha informado de que el consumo de dietas suplementadas con metionina aumenta la excrecin urinaria de calcio debido al aumento en la filtracin de SO4, que se unen al calcio puede filtrar y los prejuicios Ca reabsorcin. A pesar de la reduccin de la ingesta observada en el grupo GM30 durante todo el

juicio y el incremento en la eliminacin urinaria de calcio, la retencin de calcio no cay de forma significativa (Tabla 1, fig. 3). Parece que la absorcin de calcio superior se muestra en este grupo podra compensar la excrecin urinaria debido al consumo de la dieta GM30. Las ratas alimentadas con dietas que contienen casena-glucosa-fructosa mezclas calentadas no muestran variaciones en el equilibrio del calcio o la eficiencia de utilizacin del calcio, que est de acuerdo con la ausencia de efectos que se encuentran en el grupo GL30. Planificacin de necesidades de la muestra GL30 siquiera se parecen ms a los productos derivados de la casena calentada. No hay acumulacin anormal de calcio en los riones de los animales alimentados con MRP que podra dar lugar a nefrocalcinosis se observ este efecto se ha descrito como consecuencia del consumo de alimentos dorado. Por el contrario, el contenido de calcio y la concentracin fue menor en el grupo GM30 y no vari en el grupo GL30, en comparacin con los controles. Los efectos ms interesantes provocado por ingesta de los PRM son los calcio de los huesos relativa. El fmur de las ratas que consumieron las dietas GL30 y GM30 muestra reducciones del 10% y 25% en la concentracin de calcio, respectivamente, lo que llev a una baja relacin Ca / P (Tabla 2). Efectos similares se observaron en estudios anteriores cuando las ratas se alimentaron de los sistemas MRP mismo aminocido de glucosa, pero calentado por ms tiempo, lo que sugiere que los ms avanzados de MRP no provocan efectos de mayor alcance y que slo los productos tempranas e intermedias, y por lo tanto absorbible productos de caf, sera capaz de afectar directamente el metabolismo del calcio. La bibliografa incluye las descripciones de la resistencia sea reducida en los animales que consumen los productos de bronceado, as como la reduccin del peso, cenizas y calcio en los huesos de ratas alimentadas con una dieta en la que la protena, la casena, ha sido daada por el calor, esta circunstancia tambin afecta, aunque en un grado mucho menor, la concentracin de calcio en el hueso. Analizando los resultados para el fmur, hay que sealar que una de las protenas de los huesos ms importantes, el colgeno, es especialmente implicados en la glicacin in vivo, debido a su larga vida y baja rotacin. La mayor concentracin de productos de glicacin avanzada (AGE), altera significativamente la estructura de colgeno y functionality36 y perjudica la actividad osteoblstica, lo que reduce el calcio intracelular. Se ha sugerido que hay una sinergia posible efecto in vivo de la dieta MRP a su forma endgena anlogos de formado, denominado EDAD. Esta hiptesis podra estar relacionado con la reduccin del calcio de los huesos en los animales en los grupos de GL30 y GM30. CONCLUSIONES El consumo de derivados solubles de la reaccin de Maillard a partir de una mezcla caliente de glucosa-lisina no modifica la digestibilidad del calcio, pero solubles derivados de una mezcla caliente de glucosa-metionina son capaces de aumentar la absorcin y la digestibilidad, aunque sin mejorar el equilibrio del calcio. El efecto ms importante es que ambos productos perjudicar el metabolismo mineral, en cierta medida, lo que afecta negativamente a la deposicin de calcio en los huesos. A largo plazo, esto podra tener repercusiones sobre las enfermedades degenerativas como la osteoporosis. Estos resultados interesantes, junto con la hiptesis de que la glicosilacin no enzimtica puede ser un factor importante que contribuye a causar cambios en el colgeno y la que conduce a la agerelated deterioro de la calidad sea, sugieren que otros estudios realizados con dietas que contenan MRP de los alimentos procesados son necesarios para confirmar los efectos observados en el hueso. Esto parece especialmente relevante dada la creciente contribucin de los productos de tostado en la dieta occidental.