ANEXO II MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS PARA PRUEBAS BIOQUMICAS PRUEBA BIOQUMICA OXIDASA Reactivo: tiras reactivas el reactivo de la oxidasa,

, el cloruro de tetrametil-p-fenilendiamina al 1% en agua destilada recin preparado. KLIGLER Medio: agar Kligler (agar hierro doble azcar glucosa y lactosa). Preparar segn indique la etiqueta del medio deshidratado. REDUCCIN DE NITRATOS Medio: agar nutritivo + 1g/l de nitrato potsico. Reactivos: -naftil amina y cido sulfanlico. Solucin de -naftil amina: 0,5 g de -naftil amina en 100 ml de cido actico 0,5 M. Solucin de cido sulfanlico: 0,8g,de cido sulfanlico en 100 ml de de cido actico 0,5 M. CATALASA Reactivo: perxido de hidrgeno ( agua oxgenada) al 3%. UREASA Medio: Bacto agar base + urea al 20% esterilizada por filtracin esterilizar 100 ml de agua destilada por litro de agar. Se preparan 900 ml del medio Bacto agar base se esteriliza y est aproximadamente a 50 C se le aade los 100 ml de urea al 20%. Preparar el medio en tubos inclinados porque la urea no se puede calentar porque se hidroliza. ALMIDN Medio: agar nutritivo + 2g/l de almidn. Esterilizar. Reactivo: lugol. ROJO DE METILO Medio: caldo RM-VP medio deshidratado, (medio para pruebas de rojo de metilo y VogesProskauer). 1

Reactivo: rojo de metilo al 1% en etanol. PRUEBA BIOQUMICA VOGES-PROSKAUER Medio: caldo RM-VP medio deshidratado, (medio para pruebas de rojo de metilo y VogesProskauer). Reactivos: -naftol y KOH Solucin de -naftol: 7,5 g de -naftol + 5 ml de agua destilada + 120 ml de etanol. Solucin de KOH: 40 g de KOH en 100 ml de agua destilada. INDOL Medio: 10 g de triptona + 5 g de NaCL en un litro de agua destilada, (ver si el medio deshidratado viene con el NaCL). Reactivo: REACTIVO DE KOVAC (se puede comprar preparado) Preparacin del reactivo de KOVAC: 5 g de p-dimetilamino-benzaldehido. 75 ml de alcohol amlico. 25 ml de cido clorhdrico concentrado. CITRATOS Medio: agar Simons medio deshidratado. 0/F XIDO-FERMENTATIVA Medio: medio O/F de HUGH Y LEIFSON + un 10% del azcar a ensayar al 10%. Preparacin del medioO/F. Esterilizar el medio O/F preparado a partir del medio deshidratado aadiendo hasta 900 ml/l de agua destilada, debido a que una vez esterilizado que hay que aadir 100 ml/l de glucosa al 10% esterilizada por filtracin, porque los azcares se caramelizan en el autoclave. Proceder igual con otros azcares a ensayar como lactosa, sacarosa etc El medio contiene un 1% del azcar a ensayar. HIDRLISIS DE LA GELATINA Medio: agar gelatina ( Agar nutritivo + 40 g/l de gelatina). Disolver la gelatina en una pequea cantidad de agua hirviendo (tomarla del agua para prepararar el agar nutritivo). Mezclar ambas soluciones y esterilizar. Reactivo: REACTIVO DE FRAZIER. 2

15g de cloruro mercrico, 20 ml de HCL concentrado y 100 ml de agua destilada.