10.

TRAFICO INTRACELULAR DE PROTEINAS

Vernica Gonzlez Nez Universidad de Salamanca

ESQUEMA. Trfico intracelular de protenas

1. Introduccin al trfico intracelular de protenas 2. Traslocacin al ER 3. Trfico vesicular de protenas - Transporte de protenas al aparato de Golgi - Reciclaje de protenas al ER - Destino de las protenas lisosmicas 4. Transporte a travs de membranas - Transporte de protenas al interior mitocondrial - Transporte de protenas al interior del cloroplasto - Transporte de protenas a los peroxisomas 5. Transporte de protenas al ncleo celular

POSIBLES DESTINOS INTRACELULARES DE UNA PROTEINA Transporte a travs deporos

Ncleo celular

Transporte a travs demembranas PROTEINA

Peroxisomas

Permanencia en el citosol

ER

Cloroplastos

Golgi Lisosomas Vesculasdesecrecin

Mitocondrias

Rutasecretora Transportevesicular

Secrecin regulada

Secrecinconstitutiva Fusinconlam.p.

Propiedades de las secuencias seal que indican el destino intracelular de una protena (I)
Seales conservadas entre los distintos organismos

Retculo endoplasmtico
Localizacin delaseal enlaprotena:Nterminal Eliminacin delaseal tras entrar enelorgnulo:s Naturaleza delaseal:Ncleo de6 12 hidrofbicos,generalmente precedido de1oms bsicos

Ncleo
Localizacin delaseal enlaprotena:interna Eliminacin delaseal tras entrar enelorgnulo:no Naturaleza delaseal:1grupo de5 bsicos,odosgrupos ms pequeos de bsicos,separados por 10residuos

Propiedades de las secuencias seal que indican el destino intracelular de una protena (II)

Peroxisoma
Localizacin delaseal enlaprotena:Cterminal Eliminacin delaseal tras entrar enelorgnulo:no Naturaleza delaseal:generalmente SerLysLeu enelextremo Cterminal)

Mitocondria
Localizacin delaseal enlaprotena:Nterminal Eliminacin delaseal tras entrar enelorgnulo:s Naturaleza delaseal:3 5residuos deArg oLysnoconsecutivos, generalmente encombinacin conSeryThr;sinresiduos cidos (Asp,Glu)

Propiedades de las secuencias seal que indican el destino intracelular de una protena (III)

Cloroplasto
Localizacin delaseal enlaprotena:Nterminal Eliminacin delaseal tras entrar enelorgnulo:s Naturaleza delaseal:Nohaymotivos comunes enlas secuencia seal Generalmente,seales ricas enSer,Thr y hidrofbicos pequeos;pobre en cidos (Asp&Glu)

En el caso de las mitocondrias y los plastos, las secuencias seal anteriormente mencionadas dirigen hacia la matriz mitocondrial hacia el estroma del plasto. Otra serie de seales dirigen las protenas hacia otros compartimentos de dichos orgnulos

TRASLOCACION AL ER (I)
ER rugoso (RER): ribosomas unidos a la membrana del ER La traslocacin al ER es un proceso co-traduccional

3 tipos de protenas Protenas de secrecin fosfatasa alcalina, insulina Proteinas lisosmicas hidrolasas cidas Protenas integrales de membrana lipoprotenas, receptores de membrana Protenas del retculo endoplsmico, Golgi etc

Traslocacion al ER (II)
Pptido seal N-terminal Secuencia consenso Prediccin Bioinformtica

Caractersticas del pptido seal - 20 de longitud - residuo bsico cerca del N-terminal - ncleo hidrofbico de 10-15 : Ala, Leu, Val, Ile, Phe - punto de corte N-terminal con un pequeo y neutro (Ala) - se elimina por las peptidasas de la seal Secuencia seal interna (ej. ovoalbmina)

Proinsulina humana MetAlaLeuTrpMetArgLeuLeuProLeuLeuAlaLeuLeuAlaLeuTrp GlyProAspProAlaAlaAla [ROTURADELPEPTIDOSEAL] PheVal

Mecanismo de traslocacin al ER (I)

1. Unin SRP # pptido seal SRP = Partcula de reconocimiento de la seal (signal recognition particle) Ribonucleoprotena: 7SL RNA (300nt) genes Alu + 6 polipptidos distintos Se une a la secuencia seal de una protena que sobresale de un ribosoma (durante la traduccin del mRNA) El proceso de elongacin de la traduccin se hace ms lento se evita un plegamiento prematuro de la protena 2. El complejo ribosoma # SRP difunde hacia la membrana del ER 3. SRP se une al receptor de SRP Receptor de la SRP Protena de anclaje situada en la membrana del ER Heterodmero ( - 68 KDa y - 30 KDa) que une GTP-GDP (subunidad )

Mecanismo de traslocacin al ER (II)

4. Ciclo de la SRP: ciclo GTP-GDP I. Receptor SRP # GDP II. Unin pptido seal-SRP # receptor de SRP Intercambio GDP por GTP III. Receptor-GTP se une fuertemente a SRP y se libera la secuencia seal IV. La secuencia seal interacciona con la maquinaria de traslocacin V. Paso de la protenas al interior del ER VI. La subunidad hidroliza GTP GDP; SRP se separa del receptor

4. El ribosoma se une a la maquinaria de traslocacin = Traslocn 5. La SRP se separa del ribosoma y la elongacin se reanuda Al reanudarse la elongacin, el polipptido recin sintetizado se trasloca al interior del ER 6. La peptidasa de la seal corta el pptido seal en el lumen del ER

Mecanismo de traslocacin al ER (III)

Traslocn Maquinaria de traslocacin formada por varias protenas de membrana, integrales y perifricas Facilita la traslocacin de cadenas nacientes y desnaturalizadas, ya que los diferentes dominios de una protena plegada interaccionan entre s e impediran la traslocacin

Traslocacin de protenas integrales de membrana Protenas integrales de membrana: al menos, un dominio TM, bien con el extremo N- C-terminal en la cara extracelular de la membrana El proceso de traslocacin es ms complejo - protenas con secuencias de anclaje a la membrana que paran el proceso de traslocacin - si hay varios dominios TM: segunda secuencia seal para iniciar de nuevo la traslocacin

TRANSPORTE DE PROTEINAS AL APARATO DE GOLGI (I)

Recibe los productos del ER en vesculas de transporte transferencia (50-100 nm de dimetro)

2 funciones principales del aparato de Golgi Modificacin y glicosilacin de protenas - modificacin de N-glicosilaciones - O-glicosilacin = Glicosilacin terminal (vs. glicosilacin interna en el ER) Clasificacin y distribucin de protenas: lisosomas vesculas de secrecin constitutiva vesculas de secrecin regulada grnulos de secrecin membrana plasmtica

Transporte de protenas en el aparato de Golgi (II)

Distintas enzimas en los compartimentos Golgi cis: eliminacin de 3 Man adicin del resto de Manosa-6P a las enzimas lisosomales Golgi intermedio: ruta secretora eliminacin de restos de Man adicin de NAcGlc, fucosa, Gal, Ac. silico Golgi trans Puntos de destino por defecto = en ausencia de otras seales membrana plasmtica secrecin constitutiva Mantenimiento de la asimetra en las membranas de la ruta secretora La cara luminal del ER, Golgi y vesculas constituir la cara extracelular de la membrana plasmtica al fusionarse la vescula de secrecin

Mecanismo de transporte vesicular en el aparato de Golgi

1. Formacin de un revestimiento sobre la membrana donadora coatmeros: protenas de revestimiento 2. Unin de ARF-GTP ARF = ADP ribosylation factor 3. Aumento de la curvatura de la membrana y formacin de una vescula 4. Llegada a la membrana de destino ARF hidroliza GTP GDP y los coatmeros se desprenden

5. Fusin de las dos membranas Especificidad en la fusin Interaccin entre SNAPs y SNAREs (receptores de SNAPs) Interaccin entre v-SNARE (vescula) y t-SNARE (membrana diana) Formacin de una partcula de fusin por reconocimiento de receptores

RECICLAJE DE PROTEINAS AL ER
Protenas residentes en el ER Secuencia KDEL en el extremo C-terminal

Seal de recuperacin 1. Cuando las protenas del ER llegan al Golgi (pH = 5), la secuencia KDEL es reconocida por unos receptores de membrana 2. Los complejos protena # receptor se incorporan a las vesculas de reciclaje 3. Las vesculas de reciclaje realizan el transporte inverso: Golgi Las protenas con secuencia KDEL son devueltas al ER 4. En el ER (pH = 7), las protenas se separan del receptor, quedando libres en el lumen del ER ER

DESTINO DE LAS PROTEINAS LISOSOMICAS (I)

Las protenas lisosmicas presentan un residuo de Manosa-6P 1. Golgi cis Fosfotransferasa muy especfica reconoce la estructura 3D de las protenas lisosomales resto de manosa + UDP-GlcNAc Fosfodiesterasa GlcNAc-P-Manosa-protena + H2O GlcNAc + Manosa-6P-protena UMP + GlcNAc-P-Manosa-protena

2. Receptor que reconoce el resto de manosa-6P en la membrana del aparato de Golgi 3. Gemacin de vesculas en el Golgi trans y fusin con las vesculas prelisosmicas (menor pH)

Destino de las protenas lisosmicas (II)

4. Disociacin protena lisosomal - receptor de manosa-6P (cambio de pH) 5. Reciclaje del receptor al Golgi trans por medio de vesculas 6. Maduracin de los prelisosomas por fusin con lisosomas

Enfermedad celular I mucopolisacaridosis II Anomala en el almacenamiento en los lisosomas 8 hidrolasas cidas estn ausentes en los lisosomas, pero existen altos niveles de las mismas en sangre Causa: las enzimas se sintetizan, pero presentan una localizacin errnea, ya que la manosa no est fosforilada

TRANSPORTE DE PROTEINAS AL INTERIOR MITOCONDRIAL (I)

La mayora de las protenas mitocondriales - estn codificadas por el DNA nuclear - se sintetizan en el citosol - han de ser transportadas al interior mitocondrial

4 destinos mitocondriales - membrana mitocondrial externa (m.m.e) - espacio intermembrana - membrana mitocondrial interna (m.m.i.) - matriz mitocondrial

Transporte de protenas al interior mitocondrial (II)

Secuencias seal presecuencias - envo de una protena a la matriz mitocondrial - 35 en el extremo N-terminal - rica en Q+, Ser y Thr - estructura en -hlice anfiptica -lmina residuos bsicos y los hidroxilados en una cara, y los hidrofbicos en la otra - similares a las secuencias de localizacin en bacterias

Mecanismo de transporte de protenas al interior mitocondrial (I)

Transporte postraduccional que no necesita ningn factor citoslico 1. La protena es sintetizada en el citosol y se une a una chaperona HSP70 mantenimiento de la protena en estado desplegado 2. La protena HSP70 transfiere la cadena polipeptdica a un receptor para la importacin en la m.m.e. 3. El receptor + precursor se traslada a un punto de contacto entre las dos membranas (m.m.e y m.m.i) 4. Conducto multiproteico que permite la traslocacin de la protena a la matriz TOM en la m.m.e y TIM en la m.m.i. Necesidad de aporte para este proceso - hidrlisis de ATP - potencial de membrana = gradiente electroqumico ()

Mecanismo de transporte de protenas al interior mitocondrial (II)

5. Transferencia del polipptido al mtHSP70 6. Eliminacin de la secuencia seal por una metaloproteasa soluble y obtencin de la protena madura Protenas de la m.m.e. 2 posibilidades - seal de STOP de la traslocacin - primero pasan a la matriz y luego son reexportadas a la m.m.e en este ltimo caso, es necesaria una segunda secuencia seal Protenas de la m.m.i. y del espacio intermembrana Seales bipartirtas 1. Las protenas pasan primero a la matriz mitocondrial 2. La seal de paso al interior mitocondrial es eliminada 3. La segunda secuencia seal (muy hidrofbica) queda al descubierto 4. Las protenas son enviadas a la m.m.i. o bien al espacio intermembrana

TRANSPORTE DE PROTEINAS AL INTERIOR DEL CLOROPLASTO

6 posibles destinos - membrana plastidial externa (m.p.e.) - espacio intermembrana - membrana plastidial interna (m.p.i.) - estroma - membrana tilacoidal - lumen tilacoidal

Secuencias seal, presecuencias secuencias de trnsito - dirigen las protenas al estroma - localizacin N-terminal - ricas en Q+, Ser y Thr - parecidas a las secuencias seal de las mitocondrias

Mecanismo de transporte de las proteinas al interior de plastos

1. Secuencia seal que dirige al estroma 2. Paso de las membranas plastidiales con gasto de ATP 3. Eliminacin de la secuencia de envo al estroma la secuencia de envo al lumen tilacoidal queda expuesta 4. Paso a travs de la membrana tilacoidal por gradiente de pH 5. Eliminacin de la secuencia de envo al lumen tilacoidal

TRANSPORTE DE PROTEINAS A LOS PEROXISOMAS

Funciones de los peroxisomas - detoxificacin - orgnulo donde tienen lugar las dos primeras etapas de la sntesis de plasmalgenos - -oxidacin de los cidos grasos > C18 - sntesis de sales biliares

Los peroxisomas carecen de DNA protenas a su interior

necesitan importar todas las

Secuencia seal SKF o SKL - C-terminal - no se elimina cuando la protena llega al peroxisoma

TRANSPORTE DE PROTEINAS AL NUCLEO CELULAR

Todas las protenas nucleares son sintetizadas en el citosol por los ribosomas Paso al ncleo a travs del Complejo de Poro Nuclear - 9 nm de dimetro - estructura muy compleja - formada por nucleoporinas El complejo de poro nuclear es una barrera selectiva - permite el paso de protenas pequeas (< 15 Kda, p.ej. histonas) por difusin pasiva - bloquea al paso de protenas grandes transporte activo y selectivo

- se permite el paso de protenas completamente plegadas

Transporte de protenas a travs del complejo de poro nuclear (I)

Secuencia seal NLS (nuclear localization signal) - secuencia de localizacin interna - permite el paso de protenas grandes y acelera el de las pequeas - rica en bsicos - no se elimina tras pasar la protena al ncleo Mecanismo de transporte 1. La secuencia NLS es reconocida por receptores de exporte y de importe Receptores de importe: - y -importinas Receptores de exporte: exportinas 2. Unin a las nucleoporinas del poro y paso a travs del poro nuclear Transporte dependiente de GTP Ran = GTPasa que dirige el transporte nuclear

Transporte de protenas a traves del complejo de poro nuclear (II)

3. Separacin de las importinas NES: nuclear export signal paso del ncleo al citosol (RNAs, protenas). Mediado por exportinas

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