GIEMSA

FINALIDADE Sistema para colorao de clulas em esfregaos de sangue perifrico, medula ssea ou para estudo citolgico de elementos celulares colhidos por puno, raspagem ou concentrados de elementos celulares de derrames cavitrios. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO Os corantes para esfregaos sanguneos, tambm chamados de pancrmicos, so uma mistura de corantes de caractersticas neutras, dependentes do pH da soluo corante, que em condies apropriadas coram os componentes nucleares e citoplasmticos dos leuccitos, com predominncia de tons vermelhos (quando cidos) e azulados diversos(quando bsicos). O corante de May-Grunwald (1902) uma mistura de eosina e azul de metileno (no oxidados), que quimicamente se transforma em eosinato de azul de metileno. Giemsa (Alemanha) desenvolveu, no mesmo perodo, um corante que leva seu nome e que hoje se sabe ser uma mistura de azur II (mistura equimolar de azur 1 e azul de metileno) e eosinato de azur II (corante formado pela combinao equimolar de azur 1, azul de metileno e eosina amarelada). Esses dois corantes so utilizados em um mtodo de colorao mais demorado em que aps fixao e colorao pelo May Grunwald, se processa uma segunda colorao com soluo de Giemsa, obtendo-se um resultado final melhor e mais detalhado. A necessidade de um nico corante que pudesse corar globalmente os elementos celulares com os detalhes do MG-Giemsa levou ao desenvolvimento de novos corantes: Leishman (Inglaterra,1901) e Wright (Inglaterra,1902). So corantes basicamente idnticos, compostos de eosina amarelada e produtos de oxidao do azul de metileno. A diferena entre ambos se restringe ao fato de que o processo de maturao mais longo na feitura do corante Leishman (em p). PARTICULARIDADES DOS CORANTES PANCRMICOS DOLES Na manipulao dos corantes pancrmicos so utilizados corantes especficos, previamente aprovados e de procedncia tradicional. O solvente representado por metanol, grau analtico, tamponado a pH 6,7 - 6,8. REAGENTE Corante Giemsa, em p Glicerol Metanol (tamponado pH 6,8) q.s.p. APRESENTAO Ref. 500 Ref. 1000

CORANTES

8g 500mL 1000mL

1 x 500mL 1 x 1000mL NO

MATERIAIS NECESSRIOS FORNECIDOS Suporte para colorao. Cronmetro. Lminas. gua destilada ou deionizada. Metanol. May Grunwald.

ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DO REAGENTE O corante deve ser mantido no frasco original, bem vedado, armazenado temperatura ambiente (20-30oC) e ao abrigo da luz solar. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Na prtica diria o corante utilizado sob forma de gotas. Sugere-se o uso de pequeno frasco conta-gotas, periodicamente alimentado com o corante do frasco estoque. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DO REAGENTE Por tratar-se de uma soluo alcolica, deve-se tomar os cuidados inerentes ao uso do lcool em laboratrio. Evite pipetar o corante com o uso da boca. A ingesto acidental do metanol, dependendo da quantidade absorvida, pode ser fatal. As solues corantes so para uso exclusivo in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se o contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto:

Inflamvel

Irritante

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

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AMOSTRA Sangue perifrico colhido por puno digital ou de coleta venosa, com o uso de anticoagulantes adequados (heparina ou solues de EDTA). Esfregaos de medula ssea e concentrados celulares de derrames cavitrios. Os esfregaos feitos a partir de sangue colhido com anticoagulantes devem ser confeccionados em at 30 minutos, para se evitar deformaes celulares sob efeito do anticoagulante (ver desenhos: como fazer esfregaos sanguneos). Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes.

1. Dispensar uma gota de sangue sobre a lmina.

dever optar por uma das coloraes de acordo com sua preferncia e/ou finalidade. Opo 1-Colorao May-Grunwald-Giemsa 1.Cobrir cada lmina com 15 a 20 gotas do corante de May Grunwald por 1 a 2 minutos, de acordo com a extenso do esfregao. 2.Acrescentar lmina igual nmero de gotas de gua destilada, homogeneizar e deixar agir durante 2 minutos. 3.Deixar escorrer a gua da lmina e cobrir em seguida com soluo diluda de Giemsa, preparada no momento da colorao. Corar durante 10 minutos. Deixar escorrer e lavar a lmina em gua corrente. 4.Secar a lmina, mantendo-a em posio vertical. Opo 2-Colorao Giemsa 1.Fixar o esfregao, cobrindo-o com 15 a 20 gotas de metanol por 2 minutos. 2.Escorrer o lcool metlico e, sem lavar ou deixar secar, cobrir a lmina com soluo de uso de Giemsa (aproximadamente 5mL). 3.Proceder colorao por 10 minutos. 4.Lavar a lmina em gua corrente e deix-la secar em posio vertical. RESULTADOS ESPERADOS Hemcias: rseo Plaquetas: azul Leuccitos: Linfcitos ncleo: azul violeta - citoplasma: azul Moncitos ncleo (lobulado): azul violeta - citoplasma: azul claro Granulcitos Neutrfilos polimorfonucleares ncleo: azul escuro - citoplasma: rosa plido granulaes: de tons rseos a azul claro Basfilos ncleo: prpura a azul escuro granulaes volumosas, cobrindo todo o citoplasma : azul escuro Eosinfilos ncleo: azul - citoplasma: rosa plido grnulos volumosos: vermelho a vermelho laranja. LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. Os esfregaos de cor vermelho intenso esto excessivamente cidos, ou o corante atuou por pouco tempo. Os esfregaos de cor cinza, cinza azulado

2. Com o uso de uma lmina extensora, realizar o esfregao.

3. O esfregao deve ser uniforme em toda a lmina.

linfcitos neutrfilos e moncitos

incio do esfregao zona preferencial

final do esfregao

4. Desenho esquemtico de esfregao. Resultados homogneos na contagem diferencial so obtidos examinando-se a poro mediana do esfregao. PROCEDIMENTO TCNICO Preparo da soluo corante seg. Giemsa Em tubo de ensaio, misturar 3 gotas do corante Giemsa para cada 2mL de gua destilada. A seguir so recomendadas duas opes para colorao com o corante Giemsa. O laboratrio

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ou esverdeado esto muito alcalinos, ou o corante agiu durante muito tempo. Os esfregaos muito espessos s so aproveitveis em certas partes das bordas. Os excessivamente delgados tornam-se plidos. A acidez ou a basicidade do esfregao esto relacionadas, frequentemente, qualidade da gua.

Reprodutibilidade: durante 12 meses consecutivos, foram realizados testes em esfregaos sangneos confeccionados e corados em condies ideais, utilizando-se o mesmo lote de corante. Houve concordncia das caractersticas tintoriais dos elementos sanguneos durante todo o perodo de teste. Observamos que a reprodutividade do corante est relacionada com a qualidade da gua, CONTROLE DE QUALIDADE DO SISTEMA qualidade do metanol e limpeza da lmina 1.O controle de qualidade em microscopia de onde foi confeccionado o esfregao e tempo esfregaos sanguneos depende diretamente de colorao. da formao e da experincia do profissional que avaliar a qualidade dos esfregaos, BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Wa l f : P r a c t i c a l c l i n i c a l h e m a t o l o g y colorao, etc.. 2.A limpeza e a secagem adequada do material a interpretation and techniques, 375-376; ser utilizado so de fundamental importncia 1973. para a estabilidade dos reagentes e obteno Waessner S.: Tcnicas em citologia de resultados corretos. No usar detergente hematolgica, 16-32; 1990. Lima, O.A.; Soares JB; Greco J.B. Galizzi, base de fosfato. 3.A gua utilizada na limpeza do material e Canado J.R.: Mtodos de laboratrio aplicados no preparo dos reagentes deve ser de boa clnica, 21-9 a 21-12; 1992. Bick Rodger L.: Hematology clinical and qualidade. 4.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons laboratory practice, vol.01, 39 a 49; 1993. diversos, aminas e agentes oxidantes, que Doles: dados de arquivo. deterioram os reagentes. 5.As lminas para confeco do esfregao TERMOS E CONDIES DE GARANTIA devem estar perfeitamente limpas, isentas DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor de gordura e polidas. o 6. A gota de sangue no deve ser muito seguem estritamente as relacionadas na Lei n grande. Quanto maior a gota, mais espesso 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. o esfregao. 7.O esfregao satisfatrio deve ser fino e Os reagentes que compem este sistema para homogneo, de margens livres, pois s os diagnstico so garantidos na sua performance, que renem estas condies apresentam os reprodutibilidade e qualidade at a data de leuccitos e eritrcitos sem deformaes e vencimento. Os produtos que apresentarem problemas convenientemente distribudos. tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Repetitividade: foram realizados testes com corante hematolgico Giemsa, em 10 indivduos escolhidos aleatoriamente, sendo confeccionados dois esfregaos para cada indivduo, totalizando 20 lminas estudadas. As amostras foram coletadas sem anticoagulantes e os esfregaos, confeccionados em lminas novas, desengorduradas. Utilizou-se gua recm-deionizada para diluio do corante e metanol p.a. para fixao do esfregao. O procedimento tcnico seguiu rigorosamente as instrues de uso, havendo assim total concordncia das caractersticas tintoriais de eritrcitos, neutrfilos, linfcitos, moncitos e plaquetas, entre as lminas estudadas. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: Reviso: n 0 10231810018 11 (04/2010)

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