PREPARACION DE MEDIO AGAR VP-RM

El Medio MR-VP es utilizado para la diferenciacin de organismos coliformes en base a las pruebas de Rojo de metilo y Voges-.Proskauer. Este medio tambin es conocido como Rojo de Metilo Voges- Proskauer

Preparacin

Pesar 1,7 g de la mezcla y se deja en un vaso de precipitado donde se aade 100 ml de agua destilada, luego se homogeniza con ayuda de un vagueta. Se esteriliza hirviendo en un jarra elctrica por 30 minutos y donde cada 5 minutos se saca dela jarra y se mueve en forma circular con fuerza por un tiempo de 1 minuto para que se disuelva homogneamente Repetir el proceso y luego echarlo en los tubos correspondiente

Resultados:

Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le aade unas gotas (4-5) de solucin indicadora de Rojo de Metilo. Se agita para homogeneizar y se observa la coloracin. Se considera positiva si vira al rojo y negativa si permanece amarillo. Foto de los resultados de esta prueba Voges-Proskauer: A la otra porcin de cultivo se le aade:
0,6ml del Reactivo A de Voges-Proskauer (alfa-naftol 5% en etlico absoluto). El medio adquiere un aspecto lechoso. 0,2ml del Reactivo B de Voges-Proskauer (KOH 40%). Desaparece el aspecto lechoso y se agita fuertemente.

Si la prueba es positiva, antes de cinco minutos aparece un color rosado-violceo, ms o menos intenso, que se inicia en la parte superior del tubo. Si la prueba es negativa no aparece coloracin alguna.
Tincin Gram Es la coloracin diferencial mas utilizada en microbiologa, ya que diferencia a las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivos y Gram negativas Su importancia reside en que una incorrecta interpretacin puede hacer variar el nmero de pruebas subsiguientes destinadas a efectuar la identificacin, alejndonos considerablemente dl genero y especies verdaderos.

El fundamento de esta tincin se basa en la incapacidad de las bacterias Gram negativas para retener el complejo cristal violeta - lugol cuando son decoloradas por una mezcla de alcohol i acetona. Las bacterias Gram positivas, que no son decoloradas por el alcohol acetona, retienen el colorante inicial (cristal violeta) y mostraran esa coloracin al final de la tcnica Las bacterias gran negativas cogern el segundo colorante 8safranina) y se mostraran como bacterias de color rojo Pasos Se necesitara un mechero, agua destilada, pizeta, asa de siembra, un portaobjetos, cristal violeta, lugol, acetona, alcohol y fucsina o safranina. 1. Preparacin del frotis: sacar una pelcula de la muestra con una asa de siembre y frotar sobre el portaobjetos 2. Secar la muestra al aire, se notara que la superficie del frotis pasa a ser de brillante a mate 3. Luego secar por breve segundas acercando el portaobjetos cerca al mechero movindolo ligeramente

Fijado: 4. Con la fijacin se consigue que la muestra adherida al portaobjetos no se sea eliminado 5. Enjuagar con agua destilada previniendo que el chorro no caiga directamente a la muestra sino a los costados

Coloracin o tincin: 6. Echar una gota de fucsina o safranina, en nuestro caso utilizamos dos portaobjetos , por lo tanto utilizamos una gota de safranina para uno y una gota de fucsina para el otro portaobjetos

7. Enjuagar con agua destilada y esperar a que se seque 8. Se puede secar tambin utilizando papel limpio.

9. Una ves terminado se lleva al microscopio para ver los resultados de la formacin de colonias y que tipos se observan

klebsiella

PREPARACION DEL FROTIS

SECADO

FIJACION (CISTAL VIOLETA)

LUGOL

ACETONA

SAFRANINA O FUCSINA

MICROSCOPIO