1.

INTRODUCCIN
Es importante recalcar, que desde que apareci la sigatoka negra en las plantaciones bananeras de la provincia de El Oro, afecta el crecimiento y productividad de las plantas al disminuir la capacidad fotosinttica, tambin provoca la maduracin prematura de los racimos, por lo cual es uno de los rubros ms altos que tiene que afrontar el productor bananero en general, durante todo el ciclo de cultivo. Este solo hecho justifica la necesidad de dedicar recursos para la investigacin del comportamiento de Trichoderma harzianum ms el manejo integrado de todos los factores que intervienen en el ptimo desarrollo de una plantacin bananera orgnica, adems si se crean las condiciones adecuadas para el desarrollo de este hongo Trichoderma harzianum puede ser persistente en el campo, contribuyendo a la mineralizacin de la materia orgnica en el suelo, convirtindose en una alternativa econmica para los sistemas de produccin orgnica de este cultivo.

La produccin orgnica de banano que cada vez gana espacio en la explotacin agrcola de la provincia, representa el desafo de cosechar fruta de calidad, libre de qumicos preservando de esta forma nuestros recursos naturales y el medioambiente; generando nuevas alternativas de manejo sustentable en las plantaciones. El control biolgico o reduccin de la cantidad de inculo con el hongo antagnico Trichoderma harzianum que segn pruebas de laboratorio control al Mycosphaerella fijiensis, oferta un paquete tecnolgico prometedor y accesible para el productor, respecto al manejo del inculo de la sigatoka negra, smase a ello prcticas de manejo durante todo el ciclo de cultivo, permite racionalizar el combate de esta enfermedad con productos fungicidas y procura un mejor conocimiento de las relaciones entre los factores de manejo en las plantaciones bananeras orgnicas de la provincia El Oro.

Trichoderma harzianum es un hongo filamentoso, perteneciente al orden Ascomiceto est presente en forma natural en casi todas las tierras agrcolas y en otros ambientes como: 1

madera decadente, etc., stos crecen tropicalmente hacia el hyphae de otros hongos, este hongo acta enrollndose sobre ellos en una reaccin lectin-mediada, degradando las paredes celulares de los hongos hospederos, este proceso (mycoparasitismo) limita el crecimiento de los hongos patgenos de las plantas.

De aqu, la importancia de realizacin del presente trabajo de investigacin de campo donde se puso a prueba la eficacia de Trichoderma harzianum en diferentes dosis, como antagonista de Mycosphaerella fijiensis en un plan de manejo integrado frente a un tratamiento qumico, un tratamiento Trichoderma ms Foliares orgnicos, un testigo absoluto y un tratamiento orgnico utilizado en la bananera El Po perteneciente al Grupo Agrcola Prieto.

Objetivo general: Evaluar los mtodos de control para el combate de la sigatoka negra en la produccin de banano orgnico.

Objetivos especficos: 1. Determinar el tratamiento ms eficaz para el control de la Sigatoka Negra en banano orgnico, utilizando Trichoderma harzianum sumado al manejo integrado de la plantacin. 2. Realizar el anlisis econmico de los tratamientos en estudio.

2. REVISIN DE LITERATURA
2.1 GENERALIDADES SOBRE EL CULTIVO BANANO
Soto (1985) manifest que los bananos (Musa sp.) son esencialmente plantas que se desarrollan en zonas tropicales hmedas y clidas, no se desarrollan en reas donde la temperatura es inferior a los 15C y la precipitacin anual no sea inferior a los 200 mm, requiere ms horas sol; las reas donde se cultiven sean protegidas de los vientos y que los suelos sean profundos, de alta fertilidad y con buen drenaje. La altitud lmite para su cultivo es de 300 msnm. La ubicacin geogrfica natural de esta planta est entre los 30 de latitud norte y los 30 de latitud sur, las mejores condiciones se dan entre los cero y quince grados latitud norte o sur. Los banano comerciales no tienen reproduccin sexual por ser estriles y su propagacin se lleva a cabo por va asexual; cormos originales de los brotes o retoos en la planta madre, y en laboratorio con tcnicas in vitro.

2.2 SIGATOKA NEGRA

Stover (1974) manifiesta que la sigatoka negra fue observada por primera vez en 1972 coexistiendo con sigatoka amarilla, esta ntimamente relacionada a la Raya negra y ataca los mismos cultivares del banano, pltano y otras musceas susceptibles al hongo. En la actualidad es la enfermedad que causa la ms severa necrosis en el follaje del banano y el pltano de Ecuador, Costa Rica, Honduras, Guatemala, Nicaragua, Panam, etc. El banano no puede ser producida comercialmente sin el combate de la sigatoka negra, el efecto en la fruta es indirecto y resulta de la reduccin del rea foliar funcional en la planta, causando la muerte prematura de grandes reas de la superficie de la hoja, si no de toda la

hoja, lo que resulta en una marcada reduccin del rea fotosinttica de la planta, lo que no le permite al fruto alcanzar su desarrollo y cuando lo hace se presenta madurez prematura por efecto de los metabolitos del hongo que son precursores de etanol. 2. 2. 1 SINTOMATOLOGA Stover (1974) dice que los primeros sntomas de la sigatoka negra es presencia de puntos oscuros, cafs rojizos menores de 0.25 mm de dimetro, visibles a simple vista en el envs de las hojas. Generalmente ms abundantes cerca del margen derecho de la hoja y hacia el pice. Puede aparecer en la segunda hoja en plantas sin fructificar. Los puntos se alargan a estras caf rojizas hasta de 20 mm de ancho, paralelas a la venacin lateral de las hojas; esto constituye el primer estado de estras, las cuales son visibles en el envs de la hoja y no por el haz, estas pueden aparecer a los 10-14 das despus de la infeccin en condiciones de clima hmedo y caluroso, su distribucin puede ser variable, pero con frecuencia estn agrupadas en forma densa a uno o ambos lados a lo largo de la vena central de la hoja. En estos estados tan tempranos de estra son producidos los conidios en 1 a 4 conidiforos que emergen del estoma. En estado de mancha la produccin de conidios es continua. Las estras se alargan, cambian de color caf rojizo a caf oscuro o casi negro, hacindose visibles en el haz de la hoja. Esto constituye el segundo estado de estra. Las estras se agrandan, se hacen ms anchas, de forma elptica, se rodean de un borde pardo claro, acuoso alrededor de la mancha, visible temprano en la maana con el roci presente en la hoja o despus de llover. Esto se conoce como el primer estado de mancha. En el segundo estado de mancha, el centro negro de la lesin se hunde en forma ligera y el borde se hace ms pronunciado. Puede presentarse un ligero amarillamiento del tejido alrededor de la lesin. En el tercer estado, el centro de la lesin se seca, se torna de color gris y aumenta la depresin. La lesin es rodeada por un angosto borde negro bien definido. Al haber gran densidad de lesiones la hoja se ennegrece y muere en pocas semanas despus de aparecer los primeros sntomas. En condiciones severas de infeccin se puede observar estras y manchas desde la segunda hoja en plantas no paridas y a partir de la primera incluyendo la hoja capote en plantas paridas. 4

El color pardo rojizo de los puntos y las estras, se distinguen de la sigatoka comn. La defoliacin total puede producirse en plantas de banano con 7-8 semanas de edad del racimo, en este estado se presenta una madurez prematura del racimo. 2.2.2 ETIOLOGA Stover (1974) expresa que el estado sexual o peritecial es conocido como Mycosphaerella fijiensis Morelet var. difformis. El estado asexual o conidial se conoce como Cercospora fijiensis var. difformis produce conidiforos septados, geniculados, sencillos, individuales o en grupos de 3-4 y hasta 4-20 en el tejido espermogonial inmaduro. C. fijiensis var. difformis forma esporodoquios en las manchas jvenes. Tanto el conidiforo como los conidios presentan una conspicua cicatriz, adems de conidios con un hilum basal, gruesos y ovolavados. En las lesiones maduras, donde el tejido seco aparece casi blanco, empiezan a desarrollarse los peritecios y los espermagonios; ambas son estructuras de forma globosa, inmersas en el tejido seco. Los espermagonios producen espermacios, pequeas esporas no infecciosas, que funcionan como gametos masculinos. Cuando llueve, el agua arrastra los espermacios y muchos van a dar a los protoperitecios, donde ocurre la fertilizacin, formndose ncleos diploides en las clulas madres ascales. 2.2.3 EPIDEMIOLOGA Stover (1974) dice que tres componentes bsicos del clima influencian la propagacin y movimiento del inculo de la sigatoka: lluvia, roci y temperatura. De modo que una rpida propagacin y alta infeccin son favorecidas por el tiempo caluroso, con lluvia y humedad relativa alta. Las temperaturas favorables fluctan entre los 23 y 28C. Ms debajo de 21C hay una marcada declinacin de la infeccin, aunque las condiciones de lluvia y humedad sean favorables. Estaciones secas sin apreciable formacin de roco por las noches, son tambin desfavorables para el desarrollo de la enfermedad, no importa que la temperatura sea favorable. La continua exposicin de las plantaciones a vientos secos tambin limita el desarrollo de la enfermedad.

Los conidios y las ascosporas juegan distintos papeles en la epidemiologa de la sigatoka, debido a diferencias en los mtodos de produccin, diseminacin, disposicin y longevidad. Seguidamente se citarn aspectos contrastantes de las esporas de sigatoka. 2.2.4 BIOLOGA DEL HONGO Mycosphaerella fijiensis Stover (1980) manifiesta que las conidias son trasportadas de una hoja a otra por medio del agua del roco o la lluvia, siempre de arriba hacia abajo en sigatoka amarilla; en el caso de sigatoka negra no requiere de la lluvia.Las ascosporas son transportadas por el viento a grandes distancias. Las ascosporas por s mismas estn recubiertas por un musclago (sustancia viscosa que tiene la particularidad de hincharse en contacto con el agua), de manera que si golpea una hoja u objeto ste se rompe en presencia de agua. La alta humedad de la superficie, hace que la ascosporas comience a germinar. Su mejor germinacin es entre 26C. Y 28C., sobre los 28C: sta se puede germinar, pero el tubo germinal se desarrolla lentamente y generalmente muere. El tubo germinativo tarda de 48 a 72 horas para penetrar en el estoma de la hoja si las condiciones de humedad son ptimas con una saturacin total o cercana a la misma. Las ascosporas una vez que han germinado penetran al interior de la hoja por los estomas, los mismos que sirven como ventanas. La cantidad de estomas en la cara inferior es mayor que las que se encuentran en la cara superior (una hoja de banano del clon Valery puede tener 150 a 300 millones de estomas, siendo el nmero variable como en la mayora de las hojas puede haber un promedio de 300 estomas por mm). Una vez que el hongo ha penetrado por el estoma, circula en el interior de la hoja, para luego salir de nuevo a la superficie. En este momento aparece el primer sntoma o primer estadio de la enfermedad. El tiempo que transcurre entre la deposicin de la espora sobre la hoja y la aparicin del primer punto claro, se lo que se conoce como perodo de incubacin de la enfermedad. Este perodo puede durar entre 16 a 30 das, de acuerdo a la variedad y las condiciones de clima.

Posteriormente a este perodo de incubacin, comienza el desarrollo y evolucin de la mancha inicial que se ha formado hasta llegar a formarse la necrosis final. La rapidez con que logra o con que se produce este cambio depende igualmente de la variedad y condiciones climticas. En el transcurso de la evolucin de la mancha desde el primer sntoma hasta la necrosis, el hongo produce CONIDIAS.( 2do. estado de la enfermedad) Cuando el desarrollo del hongo llega a la parte final o necrosis, comienza a producir los peritecios que a la vez dan origen a las ascosporas.(6to. estado de la enfermedad) Mientras El hongo est penetrando al interior de la hoja, la planta de banano sigue emitiendo hojas nuevas cada 8 a 10 das aproximadamente. El ciclo biolgico de la sigatoka negra es ms corto (Infeccin esporulacin) de 15 das bajo presin, mientras que en sigatoka amarilla el ciclo biolgico es ms largo (infeccin esporulacin) de 40 a 50 das.

2.2.4.1 Ciclo de infeccin Stover (1980) dice tambin que el ciclo de la infeccin de la sigatoka negra consta de: Germinacin: sobre la superficie de la hoja Penetracin: por los estomas de la hoja Incubacin: en el interior de la hoja Esporulacin: diseminacin del patgeno

El mismo autor reporta que una lesin madura puede producir 1.200 conidios en sigatoka amarilla, mientras que en sigatoka negra puede producir ms de 30.000 conidios en iguales condiciones. En igual forma la produccin de ascosporas es mucho ms elevada en Mycosphaerella fijiensis que en Mycosphaerella muscola.

Utilizando las trampas de Hirst para ascosporas en reas altamente infectadas, en Hawai se obtuvieron de 8.000 a 33.000 ascosporas de Mycosphaerella fijiensis por m de aire durante 24 horas. En Honduras y Panam, utilizando igual mtodo y similares condiciones el mximo de ascosporas capturadas de sigatoka amarilla, fue de 4.000 por m.

2.4 MANEJO INTEGRADO DE SIGATOKA NEGRA EN UN SISTEMA DE PRODUCCIN ORGNICO

Arichbala (2006) manifiesta que para el control integrado de la sigatoka negra en el cultivo de banano orgnico en sus primeros estadios se deben realizar puntualmente todas las prcticas agronmicas recomendadas sumase a esto la utilizacin de Biofum, LonLife, Kriptn, Mil-Agro, etc, compuestos nutritivos naturales que sirve para corregir deficiencias nutricionales, actan como bioestimulante, activador de fitoalexinas, mejorando en la planta la tolerancia y control de enfermedades fungosas.

Suquilanda (1996) manifiesta que en la agricultura orgnica se excluye el uso de productos sintticos y se plantea el uso de los recursos de forma armnica respetando lo ciclos naturales promoviendo la biodiversidad y no el monocultivo, considera al suelo como un organismo vivo y trabaja el control de plagas y enfermedades con umbrales econmicos. El mismo autor manifiesta que la agricultura orgnica al ser una disciplina holstica tiende a recoger prcticas apropiadas de diferentes escuelas agrcolas, siempre que cumplan con las caractersticas de ser sostenibles y socialmente justas, estas pueden ser:

Cultivos asociados Abonos verdes Cultivos de cobertura Compost

Enmiendas con minerales de rocas Inoculacin de bacterias fijadoras de nitrgeno Bioestimulantes Labores culturales puntuales Pesticidas botnicos, microorganismos antagnicos, entomopatgenos, liberacin de parasitoides, trampas con feromonas, etc.

Arichbala (2006) dice que la sigatoka negra es uno de los rublos ms altos dentro del manejo de las plantaciones bananeras, es por tal motivo que se deben realizar muestreos de preaviso biolgico del estado evolutivo dos, para conocer y evaluar el grado de infeccin tanto en la tercera como cuarta hoja de una planta adulta.

2.4.1 MANEJO DE INOCULO Arichbala (2006) dice que el manejo de la nervadura central una vez realizada las diferentes cirugas en vez de eliminar completamente la hoja se deja la sola nervadura por un tiempo que depender de las condiciones del manejo del cultivo ya que dicha nervadura no puede tornarse amarillenta o caf sin ser eliminada, ya que la literatura seala que genera cantidades suficientes de etileno que podran ayudar a acelerar los procesos de maduracin y comprometer la calidad de la fruta.

El deshoje en si debe constar de lo siguiente: Despunte temprano Ciruga (poda fitosanitaria) Deslamine Deshoje

2.4.2 DESPUNTE TEMPRANO Arichbala (2006) manifiesta que el despunte temprano consiste en la eliminacin de una porcin apical del limbo a partir de la tercera hoja en plantaciones orgnicas y quinta en plantaciones convencionales. Herrera *asesor tcnico de plantaciones orgnicas en Santa Martha Colombia, propuso este sistema de control de inculo temprano para evitar que los conidios o fase asexual provoquen reinfecciones que llevaran a realizar mayor numero de atomizaciones y riesgo de prdida de fruta por el impacto de la sigatoka negra.

CENIBANANO (2004) citados por Arichabala (2006) manifiestan que realizaron un trabajo en el que compararon el despunte temprano con el deshoje convencional en tres zonas de diferentes condiciones climticas de Colombia, obtuvieron un mayor nmero de hojas a la paricin y cosecha.

Dada la importancia de esta metodologa de regulacin de inculo las plantaciones orgnicas deben considerarlo para mejorar su condicin fitosanitaria ya que realizado el despunte es mucho ms fcil realizar deslaminado de reas con grado 5 y 6, y as evitar que se comprometa la calidad de la fruta en cuanto a la almendra, porque ya se ha demostrado que los metabolitos del hongo circulan hacia el racimo generando su maduracin ya que son precursores de etileno.

La labor en si consiste en eliminar alrededor del 16% de la porcin apical en plantas desde que tienen 6 hojas funcionales pudiendo ser incluso hijos de buenas secuencia en plantas con racimo, la planta parida tiene que llegar con todas las hojas despuntadas hasta la tercera y quinta respectivamente dependiendo si es orgnica o convencional.

2.4.3 CIRUGA PODA FITOSANITARIA Arichbala (2006) dice que es conocido tambin con el nombre de poda fitosanitaria, que consiste en eliminar las porciones foliares que presentan estadios 5 y 6 de la enfermedad, es

10

decir eliminar el rea foliar que presenta color amarillento pardo a caf, para reducir o regular la presencia de inoculo dentro de la plantacin.

2.4.4 DESLAMINE Arichbala (2006) manifiesta que una de las herramientas que ha resultado bastante promisoria para realizar todas estas operaciones es la aleta de tiburn que consiste en una hoja de machete de 18cm con un ngulo soldado a la base del podn con un ngulo de 35 a 40 grados con una punta en la parte superior un corte igual con un mismo ngulo, el ancho es de 3cm. Esta herramienta nos permite eliminar solo la parte laminar quemada de la hoja, conservando intacta la nervadura central, buscando as evitar un trastorno fisiolgico menor a la planta.

2.4.5 DESHOJE Arichbala (2006) expresa que la labor de deshoje cumple una funcin muy importante dentro de las plantaciones bananeras, ya que de ella depende que las plantas tengas mayor captacin de horas luz lo que les ayudar a incrementar el crecimiento de los hijos, tomando en cuenta que al mismo tiempo se debe realizar esta prctica como control fitosanitario para disminuir el foco de infeccin de la sigatoka negra. Esta labor se debe realizar todas las semanas, y el deshoje fitosanitario cada 2 semanas en poca seca y hasta 2 veces por semana en poca lluviosa, eliminando todo el material seco producido por la enfermedad.

2.5. CONTROL BIOLGICO DE ENFERMEDADES

2.5.1. ANTECEDENTES DEL CONTROL BIOLGICO O ANTAGNICO Campbell (1989) citado por Garca y Melchor (2005) dice que el control biolgico en su amplio sentido ha sido usado por el hombre desde los inicios de la agricultura. Durante el tercer y cuarto milenio se utilizaba el barbecho como la tcnica principal en los sistemas de produccin en los pases de Europa, poste se combin con la rotacin de cultivos con la finalidad de disminuir las enfermedades e incrementar la fertilidad de los suelos.

11

Los mismos autores citan a Cook (1985) quien estableci que el control biolgico contemporneo presenta uno de los ms grandes cambios de todos los tiempos, es por ello que se necesita de la atencin de varias disciplinas a cambio de ofrecer intereses comerciales, adems de conducir a bases cientficas slidas de investigacin.

Garca y Melchor (2005) manifiesta que el control biolgico no solo incorpora la introduccin de antagonistas en los sistemas de produccin, si no que tambin incluye la manipulacin del medio ambiente, manejo de residuos de cosecha y un amplio rango de prcticas culturales. Entre los mtodos de control biolgico es importante la utilizacin de microorganismos antagnicos. En este grupo tienen un gran empleo los miembros del gnero Trichoderma.

2.5.2. MECANISMO DE ACCIN Garca y Melchor (2005) manifiestan que en la actualidad en varios pases del mundo se estn desarrollando movimientos de tipo ecologista para reducir la cantidad, persistencia y acumulacin de las sustancias qumicas que son vertidas al medio ambiente, especialmente en el suelo y en el ecosistema acutico. En el caso de la contaminacin del suelo se debe principalmente al uso irracional de pesticidas que son utilizados para aumentar la produccin de alimentos que satisfacen las necesidades alimentaras de la poblacin mundial en constante aumento.

Estos autores tambin dicen que el control biolgico en la fitopatologa aparece seguido de dos mtodos, el primero est enfocado en el sentido ms tradicional del control biolgico como antagonismo. El antagonismo es de tres tipos: antibiosis, competencia y parasitismo (predacin directa e hiperparasitismo). El segundo mtodo, proteccin cruzada, est dirigido hacia la introduccin de organismos benficos y uso de plantas resistentes a organismos patgenos, en esta categora de interaccin se involucra la resistencia, inhibidores/competidores e hip virulencia.

12

2.5.2.1. Antagonismo El mismo autor dice que el medio ambiente del suelo puede ser dividido en dos nichos ecolgicos mayores: masa del suelo (parte del suelo que no llega a ser colonizada por la raz) y rizosfera (zona del suelo que existe alrededor de las races). Estos medios ambientes existen ms temporalmente que espacialmente, es decir durante el ciclo de vida del cultivo la mayor parte del suelo es ocupada por races, pero despus de la cosecha y antes de la prxima plantacin el suelo se convierte en una sola masa. Los microorganismos antagonistas se encuentran en propgulos latentes o en micelio saprofito en la masa del suelo y tienen como funcin llevar a cabo el saneamiento del suelo. Garca y Melchor (2005) dicen que la colonizacin previa de un sustrato por microorganismos no patognicos presentes en la masa del suelo es un factor importante para prevenir el establecimiento de microorganismos patgenos sobre el mismo sustrato. Una vez establecidos los colonizadores no patognicos deben mantenerse mediante la competencia hiperparasitismo y antibiosis para retener su sustrato de desarrollo.

Una alternativa directa para el ataque previo del micelio o propgulos patgenos es mediante la lisis y germinacin-lisis, el primer fenmeno puede ser causado por la produccin externa de antibiticos o toxinas que son producidas por otros microorganismos y el segundo fenmeno se debe a la estimulacin de la germinacin de las esporas por la presencia de nutrientes y posteriormente se produce la lisis de esa germinacin a travs de la accin de la microbiota del suelo.

2.5.2.2. Antibiosis Baker (1990) citado por Garca y Melchor (2005) defini la antibiosis como el proceso en el cual el producto o productos metablicos de un organismo inhiben directamente o mata a otros. Generalmente estos organismos son saprofitos que tienen relativamente una especie blanco no especfica y dependen de los recursos de carbono en el suelo. Los antibiticos actan en reas no localizadas para mantener su posicin en la superficie del sustrato para excluir a los organismos patgenos durante un perodo de tiempo largo.

13

2.5.2.3. Competencia Clark (1965) citado por Garca y Melchor (2005) defini la competencia como los efectos dainos de un organismo sobre otro, debido a la utilizacin de un mismo recurso del medio ambiente. Estos recursos pueden ser, nutrientes, oxgeno y espacio. El espacio y el oxigeno son probablemente variables importantes que pueden cambiar en la rizosfera para generar una disminucin en el establecimiento de microorganismos patgenos, el carbono, nitrgeno y nutrientes son elementos importantes que determinan el desarrollo e infeccin de los fitopatgenos en competencia con otros microorganismos.

2.5.2.4. Hiperparasitismo Singh (1988) citado por Garca y Melchor (2005) plantea que los trminos hiperparasitismo, micoparasitismo, parasitismo directo y parasitismo entre hongos, son usados con referencia al fenmeno de parasitismo de un hongo sobre otro. El hiperparasitismo incluye una gran variedad de interacciones que generan daos morfolgicos tales como: cobertura de las hifas del hongo patgeno, penetracin y parasitismo directo por la produccin de haustorios y la lisis de una hifa por otra.

2.5.2.5. Proteccin cruzada Garca y Melchor (2005) manifiesta que est dirigida a la introduccin de organismos benficos y uso de plantas resistentes a organismos patgenos, en esta categora de interaccin se involucran la resistencia, inhibidores/competidores e hip virulencia.

2.6 PRINCIPALES HONGOS ANTAGONISTAS

Martn (1977) citado por Garca y Melchor (2005) refiere que la rizosfera en muchos casos puede ser considerada como la zona buffer microbiolgica, donde la microflora sirve para proteger a la planta de los ataques del patgeno. Dentro de los microorganismos antagonistas que ms abundan en la rizosfera y rizoplano de las plantas se encuentran Aspergillus, Fusarium, Penicillium y Trichoderma.

14

Pineda y Gonnella (1988) citado por Garca y Melchor (2005) mostraron en condiciones de laboratorio la capacidad inhibitoria de los antagonistas Aspergillus spp. y Trichoderma spp. frente al hongo patgeno Macrophomina phaseolina aislada de ajonjol, las cuales detuvieron la produccin de esclerocios, Trichoderma limit el crecimiento de Macrophomina en un 30 %.

Borrs (1997) citado por Garca y Melchor (2005) comprob la efectividad de Trichoderma spp. Como agente biocontrolador frente a la pudricin de la pia causada por Phytophthora parasitica var nicotianae en segmentos de tallos, observndose un incremento sobre la brotacin de las yemas en las secciones de tallos, as como una reduccin de la incidencia de la enfermedad.

2.7 SEGURIDAD DE HONGOS COMO AGENTES DE CONTROL BIOLGICO

Goettel et al (2001) citado por Garca y Melchor (2005) quien dice que dentro del grupo de bioplaguicidas de origen microbiano se destaca el uso de los hongos por su amplio nmero de gneros y especies eficaces en el control de diferentes plagas. Sin embargo, dichos hongos tambin contienen muchas especies que son plagas y que causan prdidas incalculables a las cosechas, bosques, productos almacenados, edificios y afectan a la salud humana y animal. Por consiguiente, el desarrollo y uso de los hongos como control, requieren una valoracin de efectos imprevistos asociados con su uso.

Los mismos autores citan a Tuset (1999) quien seala que cuando un microorganismo va a ser empleado como antagonista, adems de estudiar su poder inhibitorio, se deben tener en cuenta otros factores: Estabilidad gentica. Efectividad a bajas concentraciones.

15

Poca exigencia en cuanto a necesidades nutricionales (incluida las bajas temperaturas y el almacenamiento bajo condiciones controladas).

Efectividad para un gran nmero de patgenos y para diversos frutos y vegetales. Tener capacidad para reproducirse en medios de crecimientos que sean econmicos. Formulacin estable en el tiempo. Fcil de aplicar. No productores de metabolitos secundarios, que sean perjudiciales al hombre y animales.

El potencial de los efectos imprevistos variar en dependencia de los organismos potenciales diana y no-diana y los ecosistemas que ellos habitan. Estos efectos potenciales no intencionales sobre organismos no-diana son tambin efectos intencionales sobre organismos diana, excepto la alergenicidad.

Dichos efectos intencionales sobre organismos diana, a diferencia de los no intencionales, son independientes del origen del organismo (nativo o extico) y de la forma, si es natural o modificado; de ah que la habilidad para evaluar el potencial de riesgo depender mucho de estos factores.

2.7.1 DESPLAZAMIENTO COMPETITIVO Freeman y Rodrguez (1993) citados por Garca y Melchor (2005) dicen que el control biolgico a travs del desplazamiento competitivo tiene gran potencial para el manejo de plagas de las plantas ya que utiliza cepas relacionadas y ecolgicamente similares a los patgenos; ya sean organismos naturales o modificados genticamente.

Como efecto intencional los hongos introducidos o aplicados como medio de control tienen potencial para ocupar competitivamente un nicho y afectar adversamente uno o ms organismos nativos dentro de ese nicho. Los efectos imprevistos ocurriran si este

16

desplazamiento del competidor afectara un organismo no-diana (llevndolo quizs a su extincin), o si de alguna otra manera afectara perjudicialmente un componente del ecosistema.

Los microorganismos introducidos para el control biolgico desplazan organismos no-diana como parte de las interacciones microbio-microbio mediada a travs de la competencia por sitios o nutrientes. Desafortunadamente es muy difcil monitorear los efectos del desplazamiento competitivo sobre la ecologa de los microorganismos no-diana.

Los mismos autores dicen que se han realizado estudios de compatibilidad de P. chlamydosporia con otros microorganismos, tales como Micorrizas, Tricoderma y Rhizobium donde se ha demostrado que no se produce desplazamiento competitivo de estos microorganismos beneficiosos que tambin forman parte de la rizosfera.

2.7.2 ALERGENICIDAD Garca y Melchor (2005) dicen que no existe ningn efecto diana de alergenicidad como mecanismo de control de plagas. Sin embargo, est demostrado que los hongos mitospricos pueden causar alergias o reacciones alrgicas; no obstante, los controles fngicos reales o potenciales no estn entre las especies que producen alergenos comunes.

Existen informes de reacciones alrgicas relacionadas con los hongos de control microbiano, principalmente, en personas expuestas durante la produccin masiva y la aplicacin. Un grupo de cientficos que trabajan con Beuveria bassiana (Bals) Vuill informaron la aparicin de reacciones alrgicas de grado moderado a severo, y por consiguiente la Agencia de Proteccin Ambiental (EPA) lista este hongo como un sensibilizante drmico. Adems, se ha demostrado que el extracto crudo de Metarhizium anisopliae contienen uno o ms potentes alrgenos.

2.7.3 TOXICIDAD

17

Garca y Melchor (2005) manifiestan que la toxicidad como efecto diana est basada en la capacidad que tienen los microorganismos para producir compuestos que inhiben el crecimiento, desarrollo y comportamiento de otros organismos. Los hongos secretan una amplia variedad de compuestos muchos de los cuales son txico a las plantas, los invertebrados o los vertebrados. M. anisopliae produce destruxins y cytochalasins; B. bassiana: oosporein, beauvericin, bassianolide y beauveriolide, Hirsutella thompsonii: hirsutellin y Trichoderma harzianum: peptaibols, por slo nombrar algunos.

El papel que estas toxinas juegan en la patognesis no est definido; aunque se sabe que algunos pueden contribuir a la capacidad del hongo de superar a su hospedero. Sin embargo, la produccin de toxinas vara segn el aislamiento y necesariamente no juega un papel importante en la virulencia en cada caso.

La seguridad de estas toxinas para los vertebrados se establece por la combinacin del conocimiento del modo de accin de la toxina y los datos de pruebas de seguridad acumulados a travs de los aos.

La produccin de toxinas de un candidato fngico no debe utilizarse como nico elemento para impedir su uso como ACB. Primero deben hacerse consideraciones respecto a los posibles efectos de la presencia de la toxina en el producto formulado, su destino despus de la aplicacin (Ej. proporcin de degradacin) y la posible bioacumulacin en el hospedante o ambiente.

2.7.4 PATOGENICIDAD Garca y Melchor (2005) dicen que el principal uso de los microorganismos empleados para el control biolgico ha sido, como patgeno de plagas, de ah que la patogenicidad hacia el organismo diana normalmente es el efecto deseado. Sin embargo, la patogenicidad hacia los organismos no-diana podra aparecer como un efecto imprevisto y es sin duda el problema ms importante y controversial relativo al uso de los patgenos microbianos como control.

18

Los hongos, incluso las especies utilizadas para el control biolgico, pueden infectar una amplia variedad de hospedantes que a veces incluyen mamferos, por ejemplo, se informa de B. bassiana infectando caimanes americanos cautivos y Aspergillus ochraceus Wilhelm que se cita como patgeno oportunista en humanos. Adems, se han informado varios casos de infecciones en humanos por M. anisopliae y por P. lilacinus en individuos immunocompetentes e immunoincompetentes.

En 1999, este ltimo fue nombrado por la Fundacin Nacional para las enfermedades Infecciosas como un importante patgeno fngico. Conidiobolus coronatus es otro hongo entomopatgeno que ha sido asociado con lesiones encontradas en humanos y caballos. Evidentemente la evaluacin de agentes fngicos de control microbiano debe incluir una evaluacin de su patogenicidad en organismos no-diana, sobre todo los vertebrados, teniendo en cuenta la exposicin humana durante los procesos de produccin y aplicacin.

2.7.5 CARACTERSTICAS ESPECFICAS DE UN HONGO RELACIONADAS CON EL RIESGO DE TOXICIDAD Hajek et al (2003) citada por Garca y Melchor (2005) dicen que el potencial de efectos adversos de un hongo depende no slo del patgeno en cuestin y de su origen (nativo o extico), sino tambin de la forma de uso propuesta (liberacin inundativa o inoculativa) y el rea donde se va a aplicar.

Dentro de las caractersticas de los hongos relacionadas con el riesgo tenemos: rango de hospedero, susceptibilidad relacionada con la dosis, persistencia y dispersin, organismos naturales o genticamente modificados y organismos exticos o nativos. Los hongos nematfagos utilizan gran diversidad de tipos de asociaciones con sus hospederos y se agrupan en atrapadores o parasitarios.

Los atrapadores han especializado estructuras como anillos contrctiles y/o clavijas para atrapar nemtodos y se considera que tienen poca especificidad de hospedante; en este grupo, el gnero Arthrobotrys ha recibido la mayor atencin. Ms recientemente, ha cambiado el

19

inters hacia al uso de hongos parsitos que atacan fases sedentarias de los de nemtodos. Las dos especies ms estudiadas han sido: P. lilacinus y P. chlamydosporia. Estos hongos son parsitos oportunistas; cada aislamiento puede diferir del resto en su capacidad de atacar huevos y quistes de nemtodos.

Otros autores han demostrado que el mecanismo de accin de P. chlamydosporia es dosis dependiente, siendo la dosis mnima efectiva 5000 clamidosporas/g de suelo y el parmetro que podra afectar su efectividad es la temperatura del suelo, donde aparece de 22-30 C como el rango ptimo.

Todos los estados de P. chlamydosporia ocurren en el suelo. Las clamidosporas le permiten al hongo sobrevivir cuando el hospedante es escaso y pueden ser usadas para el establecimiento del hongo sobreviviendo en un nmero considerable, hasta tres meses. La dispersin en el suelo producto del crecimiento de las hifas es muy limitada, no obstante el hongo puede colonizar la rizosfera y proliferar en el suelo. Como AMCP se usar en su forma natural y se propone un uso inundativo, pero con una sola administracin al ao que es lo suficientemente baja como para que los riesgos sean mnimos.

2.8. FACTORES AMBIENTALES QUE INFLUYEN EN EL CONTROL BIOLGICO

Castillo (2005) manifiesta que entre los factores ambientales que afectan el desarrollo de microorganismos encargados del control biolgico, temperatura, humedad y tipo de suelo. se considera la nutricin, pH,

2.8.1 NUTRICIN La disponibilidad de nutrientes en el suelo es uno de los factores ms importantes que afectan al micoparasitismo, debido a que los antagonistas toman la materia orgnica y nutrientes como alimento base antes de atacar al patgeno.

20

2.8.2 TEMPERATURA DEL SUELO La temperatura del suelo afecta a los microorganismos que habitan en este, debido a que no todos tienen la misma capacidad para sobrevivir a la misma temperatura, el rango establecido para el desarrollo de estas oscila entre los 12 y 30 C.

2.8.3 pH DEL SUELO Garca y Melchor (2005) dicen que el pH en la mayora de los suelos agrcolas es favorable para la actividad de los microparsitos, sealando que algunas necesitan un pH especfico para desarrollarse adecuadamente. La tolerancia al pH que han registrado algunos antagonistas ha sido de 5.5 a 7.5. El pH del suelo ejerce gran influencia sobre el agente en biocontrol, condiciones cidas favorecen la actividad de Trichoderma.

2.8.4 HUMEDAD Y TEXTURA DEL SUELO Castillo (2005) dice que la humedad del suelo afecta directamente al microorganismo, cuando las estructuras de resistencia de los antagonistas son lavadas, pierde su capacidad germinativa. La escasez de agua trae consigo un retardo en el micoparasitsmo. La humedad y textura del suelo estn muy relacionadas ya que el encharcamiento y el drenaje dependen de la proporcin de arena, lino, arcilla y materia orgnica, elementos fundamentales que influyen en la modificacin del medio ambiente del suelo a favor de los antagonistas.

2.9. INFLUENCIA DE LAS PRCTICAS CULTURALES EN EL CONTROL BIOLGICO

Garca y Melchor (2005) dicen que las prcticas culturales ms comunes que tienen influencia sobre el control biolgico son: incorporacin de materia orgnica, solarizacin, sequa, inundacin y modificacin del microclima. Estos mismos autores plantan que stos tienen influencia sobre la supresividad del suelo y la induccin de fungstasis. 21

Adems Baker y Cook (1974) citados por Garca y Melchor (2005) consideraron que los suelos supresivos son aquellos en que el microorganismo patgeno: no puede establecerse o persistir, se establece, pero causa poco o ningn dao a las plantas normalmente susceptibles, puede generar la enfermedad y causar daos por un tiempo, despus del cual disminuye la importancia de esta, hasta desaparecer, an cuando el parsito persista en el suelo.

Cook y Baker (1983) citados por Garca y Melchor (2005) dicen que el efecto supresor de los suelos se divide en dos clases: supresin de tipo general y de tipo especfica. La mayora de los suelos poseen o exhiben cierto grado de resistencia al desarrollo del microorganismo patgeno como forma general de control.

La supresin generalizada para un determinado organismo patgeno est directamente relacionada con el nivel de actividad microbiana del suelo en un tiempo crtico para el desarrollo del patgeno, en este perodo el microorganismo patgeno est en competencia directa con el resto de los microorganismos del suelo que le rodean. Estos mismos autores refieren que la supresin especfica tiene como base la supresin general y que sta a su vez se ve incrementada por las actividades supresoras de un grupo de especies o especies individuales de microorganismos antagnicos al parsito en un momento crtico de su desarrollo en el suelo, la capacidad supresora de los suelos est basada en parte a la competencia existente entre los microorganismo del suelo por fuentes de carbono y energa.

La convivencia de los hongos del suelo con varios microorganismos antagonistas que producen metabolitos txicos trae como resultado que las esporas de muchos hongos que habitan stos no puedan germinar, este fenmeno se conoce como fungstasis.

Papavizas y Lumsden (1980) citados por Garca y Melchor (2005) sealan que el fenmeno de fungstasis se eleva a un nivel superior cuando permite la germinacin de propgulos patgenos en presencia de un hospedero susceptible. Por otra parte, citan a Nigam y Mukerji 22

(1988) quienes plantean que al originarse la situacin antes mencionada lo ms conveniente es manipular el ambiente del suelo con la incorporacin de materia orgnica para inactivar el ciclo de la enfermedad con altas concentraciones de amonio producidas por los compuestos orgnicos.

Cuando se trata de modificar el medio ambiente las prcticas culturales juegan un papel muy importante, al aadir materia orgnica al suelo, los antagonistas nativos manifiestan el mximo de su potencial antagnico contra los fitopatgenos. Los cambios estacionales modifican las condiciones atmosfricas sobre la superficie de las plantas provocando cambios en los microorganismos que habitan en ella.

El microclima es difcil cambiarlo, pero la arquitectura y el estado nutricional de la planta puede ser modificado e intervenir en la poblacin masiva, no obstante la manipulacin del ambiente que rodea la planta contribuye a disminuir la presencia de hongos patgenos y aumentar la actividad del antagonismo.

2.10. GENERALIDADES DEL GNERO Trichoderma sp.

2.10.1. CLASIFICACIN Y DESCRIPCIN TAXONMICA Castillo (2005) dice que segn Alexopoulos y Mims (1979), Trichoderma sp pertenece a la subdivisin Deuteromycotina clase de forma Deuteromycetes, su clase de forma Hyphomycetidae. Los representantes de Hyphomycetidae, no producen nunca picnidio ni acervulo. Su orden es de forma Moniliales. Constituye un gran orden que agrupa probablemente ms de 7.000 especies.

El gnero Trichoderma tiene conidiforos muy ramificados que portan filides aisladas o en grupos. Las especies de Trichoderma producen colonias blancas, amarillentas o verdes cuando se encuentran en placas.

23

En algunas especies de Trichoderma el eje principal del conidiforo y las ramificaciones primarias son terminados en conidiforos elongados estriles, los cuales pueden ser simples o ramificados; los conidiforos adyacentes frecuentemente forman anastomosis, cabe aclarar que esto slo se presenta en algunas especies. En varias especies, las filides y las ramificaciones frtiles tambin levantadas no se diferencian de las hifas areas de conidiacin efusiva. Las clulas conidigenas (filides) usualmente estn dispuestas en verticilos divergentes que terminan en ramas de conidiforos.

El gnero Trichoderma est dividido en 5 secciones segn Bissette (1991) citado por Castillo (2005). a) Seccin Trichoderma.

b) Seccin Pachybasium (Sacc) c) Seccin Longibrachiatum (Bissette) d) Seccin Saturnisporum (Doi) e) Seccin Hypocreanum (Doi)

2.10.2. BIOLOGA Garca y Melchor (2005) dicen que las especies de Trichoderma para su crecimiento necesitan un alto porcentaje de compuestos de carbono y fuentes de nitrgeno. El carbono y los requerimientos de energa de Trichoderma son obtenidos de monosacridos y disacridos, polisacridos complejos, purinas, pirimidina y aminocidos.

La esporulacin en la mayora de las especies del gnero Trichoderma se debe a su fotosensibilidad y como consecuencia esporulan de buena forma en varios sustratos naturales y artificiales en un patrn concntrico de anillos alternos y en respuesta a la luz diurna y oscuridad se origina la produccin de conidios durante el perodo de luz. Adems determin que la conidiacin fotoinducida en Trichoderma puede ser inhibida por compuestos qumicos, tales como: azaquanina, 5-fluorouracil, actinomaycin D, cicloheximide y phenethyl alcohol.

24

Lewis y Papavizas (1980) citados por Garca y Melchor (2005) dicen que Trichoderma sp posee la habilidad de producir clamidosporas, las cules tienen gran importancia para llevar a cabo un control biolgico. Cabe mencionar que las clamidosporas recin formadas presentan un alto porcentaje de germinacin (aproximadamente 75%) bajo condiciones ptimas y en caso contrario solamente de 13% a 31% de las preparaciones con clamidosporas son viables.

Estos autores plantean que el primer experimento para determinar la produccin de metabolitos txicos por las especies de Trichoderma fue realizado por Weindling (1941), quin demostr la produccin de un metabolito fungicida por Trichoderma lignorum, el cual ms tarde fue nombrado por Papavizas en 1985 como Gliotoxin, muy txico para Rhizoctonia solani. Este ltimo autor descubri un segundo antibitico altamente fungisttico, el cual se conoci como Viridin y fue producido por Trichoderma viridi.

Dennis y Webster (1971) citados por Garca y Melchor (2005) comprobaron que Trichoderma sp. produce antibiticos diferentes a Gliotoxin y Viridin, aunque ellos fueron incapaces de demostrar la produccin de Gliotoxin por las nuevas especies agregadas de Trichoderma sp.

Tambin obtuvieron la produccin de otros antibiticos solubles en cloroformo tales como: Trichodermin producido por Trichoderma viridi y Trichoderma polysporum y otros antibiticos peptdicos producidos por Trichoderma hamatum.

2.10.3. DISTRIBUCIN Guzmn (1993) citado por Garca y Melchor (2005) dice que las especies del genero Trichoderma son mohos verdes cosmopolitas, se les pueden encontrar en diferentes materiales orgnicos y suelos de varios hbitat; estn adaptados a diferentes condiciones ambientales y a eso se debe su amplia distribucin.

Algunas especies prefieren localidades secas y templadas y otras templadas y fras.

25

Frecuentemente Trichoderma sp. se presenta como un colonizador secundario en el material orgnico bien descompuesto, tambin se encuentra en la superficie de las races de varias plantas y algunas veces es posible encontrarlos en la corteza descompuesta, especialmente cuando est daada por otros hongos y slo algunas veces se encuentra en esclerocias y propgulos de otros hongos.

2.10.4.Trichoderma

sp.

COMO

BIOCONTROLADOR

DE

HONGOS

FITOPATGENOS Garca y Melchor (2005) manifiestan que la mayora de los resultados obtenidos con Trichoderma sp. se han realizado bajo condiciones de laboratorio y/o invernaderos, sin embargo en los ltimos aos se han llevado a cabo varios experimentos en campo, con la finalidad de obtener resultados reales de la actividad biolgica de Trichoderma sp. Bajo condiciones naturales. En pruebas de laboratorio encontraron que cepas de Trichoderma sp. son activas como hiperparsito a hongos de las plantas.

El empleo de tcnicas para la obtencin de nuevos biotipos de especies de Trichoderma es un campo muy estudiado en la actualidad.

Papavizas (1982) citado por Garca y Melchor (2005) obtuvo biotipos inducidos por luz ultravioleta que tuvieron gran produccin de metabolitos fungotxicos contra hongos patgenos de las plantas.

Estos mismos autores citan a Weels (1988) quin plante que el gnero Trichoderma es un excelente modelo para ser estudiado debido a su fcil aislamiento, cultivo, rpido desarrollo en varios substratos, afecta un amplio rango de hongos fitopatgenos al actuar como micoparsito, compite por un sitio y nutrientes y es capaz de producir antibiticos voltiles y no voltiles.

En general la mayora de los investigadores han reportado que Trichoderma puede controlar efectivamente varios hongos fitopatgenos que se encuentran en el suelo como: Sclerotium sp, 26

Sclerotinia sp, Helminthosporium sp; Fusarium sp, Amillaria sp, Rhizoctonia sp; Collectotrichum sp, Verticillum sp, Pythium sp, Phytopthora sp y Rhizopus sp.

En condiciones de produccin es posible el uso de Trichoderma viride T-13-6 como agente biocontrolador de severas enfermedades en plantas. Trichoderma spp en suspensin conidial para el control de Sclerotium rolfsii y Fusarium sp en rizomas de jengibre (Zimjiber officinale) despus de dos meses de plantado el cultivo, los resultados mostraron una infeccin de 8,5% con 12% de severidad.

Stefanova y Sandoval (1995) citados por Garca y Melchor (2005) dicen que en Cuba se ha extendido ampliamente el uso del biopreparado Trichoderma harzianum Rifai cepa A-34 para el control de los hongos del suelo en tabaco, hortalizas, pimiento, tomate en hidropnico y otros cultivos, as como tambin en el tratamiento de la semilla y semilleros con el biopreparado donde se reduce notablemente la incidencia de microorganismos patgenos del suelo.

Prez (1995) citado por Garca y Melchor (2005) comprob el efecto del biopreparado de Trichoderma spp. en semilleros de tabaco, el cual mostr inhibicin del desarrollo de hongos del suelo que producen Damping off, resultado que fue corroborado por Fernndez en 1998 en semilleros de tabaco en Pinar del Ro, quien plantea que cuando la densidad de inculo en el suelo de hongos que producen Damping off es baja, el biocontrolador aplicado al suelo tiene buena efectividad.

Por otra parte se estudi in vitro la accin antagnica de Trichoderma spp. contra Sclerotium rolffi aislado de Topinambur (Helianthus tuberosun L), logrando la inhibicin del hongo patgeno.

El potencial biocontrolador de Trichoderma spp. fue evaluado al enfrentar este a Fusarium spp. aislado de semilla de papa, observando un marcado efecto hiperparsitico de las cepas

27

estudiadas Trichoderma harzianum cepa A-34, Trichoderma spp. cepa C-66 y Trichoderma sp. con una colonizacin total sobre el hongo patgeno a los 10 das.

La efectividad de Trichoderma como agente de biocontrol no slo ha sido estudiada contra hongos patgenos del suelo y la semilla, sino tambin se ha utilizado como estimulante del crecimiento de las plantas, al respecto se estudio el efecto de Trichoderma spp. contra enfermedades raduculares en viveros de caf donde no observaron presencia de enfermedad, pero s una accin estimulante en las posturas, las cuales presentaron mayor dimetro y altura, as como un mayor nmero de hojas funcionales.

Los estudios relacionados con el empleo de Trichoderma spp. como biocontrol de enfermedades foliares no han sido muy difundidos, no obstante algunos investigadores como Prez y Echemenda en 1994 sealaron que bajo condiciones de infeccin natural de Alternaria porri obtuvieron una disminucin de un 20% del hongo patgeno con la aplicacin foliar de Trichoderma harzianum en plantas de cebolla. Resultados similares se obtuvieron frente a Alternaria solani Sor. en papa en parcelas experimentales.

Por otra parte se comprob la efectividad del biopreparado de Trichoderma spp. frente al tizn temprano en papa, roya del frjol y mildiu del pepino, donde observaron una disminucin de las enfermedades, con una densidad baja de inculo.

Estos resultados coinciden con los obtenidos por otros investigadores, con la aplicacin foliar de Trichoderma harzianum en el cultivo del pepino frente a Pseudoperonospora cubensis (Berk Curt) Rostow. mildiu velludo quienes obtuvieron una reduccin de la incidencia del patgeno entre un 35% y 23,2% para el mildiu polvoriento, E. cichoracearum D.C., adems de observar estimulacin del crecimiento de las plantas.

2.10.4.1. Mecanismo de accin de Trichoderma sp. Duran (2005) expresa que las interacciones antagnicas que pueden ocurrir entre hongos son caracterizadas como comensalismo, parasitismo y competencia, aunque la mayora de los 28

trabajos realizados no excluyen otras posibles soluciones entre Trichoderma sp. y su hospedero, por lo que tambin en algunos trabajos se anexan los conceptos de micoparasitismo y la antibisis. Competencia de Trichoderma sp. Duran (2005) manifiesta que la omnipresencia de Trichoderma sp. en los suelos de todo el mundo es una evidencia ms de que este gnero puede ser un excelente competidor por espacio y recursos nutricionales. Para mostrar esta habilidad de Trichoderma sp. existen ejemplos que evidencian su habilidad competitiva por medio de la cual afecta directamente la actividad del hongo patgeno, reflejando con ello su efectividad en la planta enferma. Tambin este autor mencion que el aprovechamiento del hierro es importante para el desarrollo y competencia de Trichoderma sp. esto puede estar ligado indirectamente en algunas observaciones del pH, es decir entre ms alto sea el pH puede hacer al hierro menos aprovechable.

Antibiosis de Trichoderma harzianum Duran (2005) dice que antibiosis o lisis ocurre cuando existe la inhibicin o destruccin de un organismo por un producto metablico de otro. Algunos hongos hospederos sufren lisis rpidamente en presencia de los antagonistas, lo que resulta de las enzimas autolticas liberadas en respuesta a la escasez de nutrientes o a las toxinas o a los antibiticos producidos por los hongos antagonistas; en forma alternativa, puede ser un proceso heteroltico llevado a cabo por enzimas necesarias para destruir la pared (Fig.4).

Fig. 4. Hifas de Trichoderma sp., enrrollada alrededor de las hifas de Rhizoctonia solani. Fuente: Duran (2005) 29

De tal forma que los antibiticos voltiles tienen un efecto esencialmente fungisttico debilitando al agente patgeno y hacindolo ms sensible a los antibiticos solubles, lo que se conoce como un hiperparsitismo de origen enzimtico.

Trichoderma

harzianum,

por

ejemplo

produce

antibiticos

como:

Trichodermin,

Suzukacilina, Alameticina, Dermadina, Penicilina, Trichotecenosa, Tricorzianinos.

Micoparasitismo de Trichoderma harzianum Chet y Elad (1993) citados por Obregn (2001) dicen que el Trichoderma harzianum manifiesta propiedades parasitarias contra diversos hongos, produciendo alteraciones en las hifas del parsito. Inicialmente Trichoderma realiza un reconocimiento y adherencia sobre la pared del patgeno. En segundo trmino, Trichoderma promueve la hidrlisis de las hifas y esclerocios del patgeno por medio de las enzimas producidas (xilasas, quitinasas, pectinasas, glucanasas y glucosidasas, entre otras).

Trichoderma harzianum induce a la planta, por medio de sustancias secretadas por el microorganismo a producir fitoalexinas, a las cuales son sensibles algunos hongos patgenos.

Las fitoalexinas son producidas en forma natural por la planta como respuesta a heridas. La cumarina acta como una defensa de la planta contra animales; otros productos slo son formados cuando se produce la invasin de las races u otros rganos por hongos como el orquinol, la trifolirizina o la isocumarina, las que hipotticamente actan en forma comparable a los anticuerpos en los animales. En el caso de Trichoderma harzianum, ste induce altos niveles de fitoalexinas de tal forma que el nivel txico alcanzado evita que otros hongos patgenos se puedan establecer.

Una apreciacin general de cmo acta el micelio de Trichoderma sp. se dio cuando se observ creciendo, atacando y desarrollndose adyacentemente a una hifa de Rhizoctonia sp.

30

En este caso especfico las hifas de los dos organismos no tuvieron que hacer contacto para que la hifa hospedera perdiera la integridad de su protoplasma para posteriormente quedar las clulas sin vidas, con estos se concluy que Trichoderma sp. es capaz de actuar como un parsito de varios hongos sin llevar a cabo un contacto fsico.

Chet et al. (1981) citado por Obregn (2001) encontraron que las hifas de Trichoderma hamatum se desarrollaron directamente haca las hifas de Rhizoctonia solani y con esto se concluy que no se trataba de un simple fenmeno al azar. Posteriormente mejoraron la explicacin de la naturaleza del micoparasitismo de Trichoderma sp. al observar que sus hifas penetraron las de Rhizoctonia solani y Sclerotium rolfsii.

Dicha penetracin gener hoyos en las hifas hospederas y al removerlas se observ una lisis parcial del rea que estuvo en contacto con Trichoderma sp. Henis et al. (1983) citado por Obregn (2001) estudiaron el micoparasitismo de 28 especies de Trichoderma sobre Sclerotium rolfsii y concluyeron que existe una gran diferencia entre las especies para penetrar los esclerosius del patgeno hospedero.

2.11. TCNICAS

DE

APLICACIN

DE

AGENTES

BIOCONTROLADORES

Cook y Baker (1983) citados por Obregn (2001) manifiestan que la efectividad de la aplicacin de los agentes biocontroladores al ser aplicados, depende del mtodo de aplicacin que se utilice, stos pueden realizarse por aspersin al follaje, diseminacin directa en el suelo e inoculacin a la semilla como tratamiento preventivo. La aplicacin de los agentes biocontroladores puede ser:

2.11.1 A TRAVS DEL RIEGO

31

Existen diferentes formas de incorporar los agentes biocontroladores al suelo: uno lo es mediante la tcnica de aplicacin directa y otra mediante la incorporacin de propgulos en forma de suspensin a travs del riego. Stack et al. (1988) citado por Obregn (2001) sealan que cuando el agente es aplicado en la parte superior del suelo el biocontrol entra en competencia con la fauna nativa disponible, quedando el antagonista expuesto a los predatores, parsitos y fungstasis, resultando esto un inconveniente.

2.11.2 INCORPORACIN DE SUSTRATOS NATURALES Obregn (2001) expone que la incorporacin de agentes biocontroladores a travs de sustratos naturales, dependen en gran medida del sustrato utilizado. Los sustratos naturales proporcionan a los microorganismos el alimento hasta que entra en contacto con su hospedero.

Elad et al. (1981) citados por este mismo autor sealan que el patgeno Rhizoctonia solani fue colonizado en viveros de fresa con la incorporacin al suelo de sustrato natural colonizado por antagonistas.

En Cuba Brito (1996) citado por Obregn (2001) sustituy los sustratos comnmente utilizados para la reproduccin del antagonista Trichoderma spp. (cabecilla de arroz, harina de maz, paja de arroz y cscara de caf), por trigo y sorgo de desecho, comprobando que stos, unidos con el antagonista e incubados en sobres de papel, pueden llegar a alcanzar concentraciones entre 7 x 109 y 1,4 x 1010, adems de comprobar su efectividad y desplazamiento sobre Rhizoctonia solani y Sclerotium rolfsii.

2.11.3 ASPERSIN EN EL FOLLAJE Centeno (2005) dice que el control de hongos fitopatgenos del follaje generalmente se realiza a travs de la aspersin directa de los agentes sobre la planta.

32

Cullen y Andrews (1985) citados por Centeno (2005) sealan que los factores fsicos que afectan la eficacia del control son las dosis de aplicacin, horario de aspersin y tipo de adherente empleado. Por otra parte, refieren como desventaja para el uso de las aplicaciones foliares las variaciones de temperatura y humedad que perjudican la sobrevivencia de los agentes haciendo necesario el incremento del nmero de aplicaciones. 2.11.4 INCORPORACIN EN LA SEMILLA Centeno (2005) cita a Mehrotra et al (1988) los que exponen que la inoculacin de semillas con microorganismos antagonistas seleccionados del suelo, tienen como funcin la proteccin de las plantas contra los microorganismos fitopatgenos que puedan existir en el y estimular el crecimiento de los cultivos.

Los antagonistas incorporados a la semilla ofrecen un excelente potencial del control contra hongos patgenos que afectan a sta. Se comprob la actividad beneficiosa y estimulante para el incremento de la germinacin y calidad de la semilla, mediante tratamiento en inmersin con Trichoderma harzianum al 10%.

Andrews et al. (1995) citados por Centeno (2005) aplicaron el biopreparado T. viride (Ts-III) por el mtodo de inmersin a estacas de caa de las variedades Jaron 60-5 y Cuba 1051, comprobaron una disminucin de las afectaciones causadas por Fusarium moniliforme y Chalara paradoxa, adems observaron incremento en el ahijamiento de las estacas.

2.12 PRODUCCIN MASIVA DE Trichoderma spp.

Upadhyay y Bharat (1988) citados por Durn (2005) plantean que para la produccin masiva de agentes biocontrololadores es conveniente aprovechar residuos frescos que proporcionan carbono, nitrgeno y mineral que pueden ser balanceados para obtener un biopesticida con calidad.

33

En Cuba la produccin artesanal de biopreparados a base de especies del gnero Trichoderma ha sido muy difundida por su fcil reproduccin y efectividad en la proteccin de los cultivos contra hongos del suelo.

La produccin masiva de Trichoderma spp. puede realizarse mediante fermentaciones slidas y lquidas. Estas fermentaciones contienen esporas, micelios, clamidosporas o mezcla de estas estructuras conocida como unidades formadoras de colonias.

La produccin de Trichoderma spp. en fermentaciones lquidas se obtiene a partir de subproductos agrcolas como almidones, maz hidrolizado, con este sistema de fermentacin se desarrollan grandes cantidades de biomasa en un perodo de seis das de incubacin.

Castellanos (1996) citado por Centeno (2005) se refiere que la calidad del biopreparado por una tecnologa lquida fue de 1 a 5 x 108 ufc/ml, mientras que por una tecnologa de fermentacin slida para la produccin masiva de Trichoderma spp. se obtuvo un ttulo de 5 x 109 ufc/ml, por lo cual, sta constituye la forma principal para su obtencin, debido a que no se requieren elevadas inversiones econmicas y tecnolgicas, y permite la utilizacin de sustratos locales de bajo costo como cabecilla de arroz, harina de maz, paja de arroz y cscara de caf.

34

3.

MATERIALES Y MTODOS

3.1. MATERIALES.

3.1.1

LUGAR DE REALIZACIN

La investigacin se realiz en la hacienda EL Po de propiedad del Grupo Agrcola Prieto, ubicada a 5 minutos de la Parroquia Buena Vista, en el margen izquierdo de la carretera Pedregal-Ro Negro, provincia de El Oro y cuyas coordenadas son:

Latitud: Longitud: Altitud:

0316 S 79 57 W 33 msnm

3.1.2 CLIMA De acuerdo a las zonas de vida natural de Holdridge y el mapa ecolgico del Ecuador, el sitio de la investigacin corresponde a un bosque muy seco tropical (bms-T), con una precipitacin media anual de 800 mm y una temperatura media de 24C.

3.1.3 SUELO 35

La investigacin se realiz en un rea experimental de 1,3 ha, de relieve plano, con las siguientes caractersticas fsico-qumicas realizadas en el laboratorio:

3.1.3.1 Caractersticas fsicas: Clase textural: Arcilloso arenoso

3.1.3.2 Caractersticas qumicas: M.O.: C.I.C.: C.E: pH: 1.10 % 22 meq/l 0.60 mmhos/cm2 6.90

3.1.3.3 Materiales de campo y laboratorio Plntulas de banano var. Willians Compost (M.O) Roca fosfrica Sulfato de potasio Trichoderma harzianum Beauveria bassiana Biosolar Rozadora mecnica Plantas de puerara

3.1.4 FACTORES ESTUDIADOS. Los factores estudiados fueron Trichoderma harzianum + Biosolar, en diferentes concentraciones, todas en 200litros de agua/ha.

3.1.5 TRATAMIENTOS

36

T1: T2: T3: T4: T5: T6: T7: T8: T9:

Hacienda = Programa establecido para las Haciendas del Grupo Agrcola Prieto. Qumico = c1 (Tilt 0.4L/ha), c2 (Calixin 0.5L/ha), c3 (Bankit 0,4L/ha) Testigo = Sin aplicaciones 150cc Trichoderma + 45cc Biosolar + 21L agua. 300cc Trichoderma + 45cc Biosolar + 21L agua. 450cc Trichoderma + 45cc Biosolar + 21L agua. 600cc Trichoderma + 45cc Biosolar + 21L agua. 750cc Trichoderma + 45cc Biosolar + 21L agua. 300cc Trichoderma + 45cc Biosolar + 450cc Forti-Banano + 30cc Ecxal Crops + 21L de agua.

Las dosis expresadas en los tratamientos fueron para las tres repeticiones, las cantidades de agua variaron conforme crecieron las plantas.

3.2 MTODOS

3.2.1 MANEJO DE LOS TRATAMIENTOS Para el estudio se utiliz plantas de banano Willians, obtenidas a partir de rizomas procedentes de una plantacin comercial, las mismas que fueron debidamente seleccionadas, desinfectadas y colocadas en fundas de polietileno llenas con sustrato, una vez prendidas y presentando de 3 a 4 hojas fueron sembradas en el lugar definitivo. La siembra se realiz bajo el sistema de tres bolillos. El ensayo se mont en un suelo clase III para banano y dio inicio cuando las plantas tenan 30 das de edad.

Se llevaron a cabo las prcticas culturales posteriormente detalladas, adems de ciclo de fertilizacin, combate de nematodos, picudo negro y control de malezas. Las aplicaciones de los tratamientos fueron realizadas fecha calendario cada 15 das. Al comienzo las aplicaciones se efectuaron con bomba CP3 con boquilla 08 de cono, dirigiendo la aplicacin del producto hacia el envs de la hoja para que Trichoderma harzianum acte de 37

mejor manera, debido a que por ser un microorganismo no se puede translocar como lo hara una molcula.

Cuando las plantas alcanzaron un mayor tamao (>1.20 m) las aplicaciones se realizaron con neblinadora, con esto se obtuvo una mayor cobertura en menor tiempo. Con el inicio de las lluvias se acortaron las frecuencias de las aplicaciones a cada 8 12 das segn las condiciones climatolgicas y a la infeccin del patgeno, la cual se monitore semanalmente a partir de los 6 meses despus de la siembra hasta el inicio de la paricin, utilizando la metodologa de Stover modificada.1

3.2.2 DISEO EXPERIMENTAL. Para el anlisis de los tratamientos y verificacin de la hiptesis formulada sobre el antagonista Trichoderma harzianum y su efectividad dentro de un manejo integrado de Sigatoka negra en banano orgnico, se empleo el diseo de bloques al azar modelo fijo (I) con 3 repeticiones y nueve tratamientos.

3.2.2.1.

Esquema del anlisis de varianza.

FV Repeticiones Tratamientos Error Total

GL 2 8 16 26

3.2.2.2.

Prueba de significancia.

Para la comparacin de medias se emple la prueba de significancia de Dunkan a un nivel de 1%. El modelo matemtico del diseo fue dado por la siguiente ecuacin:

Revisar la literatura citada en las pginas 10 a 16 sobre esta metodologa.

38

Yij = U + ri + Bj + Eij Donde: Yij= U = Variable evaluada en las unidades experimentales. Promedio general del ensayo.

Ri = Efecto del tratamiento. Bj = Efecto de las repeticiones B. Eij = Error experimental.

De acuerdo al modelo matemtico, se plante la siguiente hiptesis para los tratamientos. Ho: Los tratamientos no difieren significativamente: Y1 = y2 y12 Ha: Al menos uno de los tratamientos se difiere significativamente: Y1 = y2 y12

La distribucin de bloques y tratamientos fue la siguiente:

I T1 T2 T6 T5 T4 T3 T9 T8 T7

III T5 T3 T1 T7 T6 T8 T2 T9 T4

II T6 T1 T7 T5 T3 T9 T8 T2 T4

Unidad experimental: Plantas muestra/tratamiento: Nmero de tratamientos: Nmero de repeticiones: Nmero de plantas muestreadas:

63 plantas 10 9 3 270

39

rea del bloque: rea del ensayo: 3.2.4 VARIABLES -

352 m2 10.300 m2

Altura de planta a los 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 das Nmero de hojas a los 180, 210, 240, 270 das rea foliar a los 90, 120, 150 das Circunferencia del seudo tallo a los 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 das Fecha de la primera infeccin en das Hoja ms joven enferma (HMJE) a los 180, 210, 240, 270 das Hoja ms joven necrosada (HMJN) a los 180, 210, 240, 270 das Estado evolutivo de infeccin (EE) desde las semana 50 del 2006 a la semana 9 del 2008 Nmero de hojas a la paricin (270 das)

Para la toma de datos de los Tratamientos aplicados se seleccion 10 plantas de las hileras centrales al azar del total que formaban la unidad experimental, descartando las de los bordes, esto ltimo con el fin de eliminar el conocido efecto borde.

2.3 METODOLOGA DE CAMPO

2.3.1 IMPLEMENTACIN DE PARCELAS DE PREAVISO EN EL

CAMPO
Stover (1977) manifiesta que para poder monitorear la sigatoka negra es necesaria la implementacin de parcelas de preaviso biolgico en el campo, para lo cual se deben tener presentes algunas consideraciones. 2.3.1 UBICACIN DE LAS PARCELAS EN LA BANANERA La ubicacin de las parcelas de preaviso biolgico deben estar alejadas de las instalaciones; planta empacadora, tendidos elctricos, carreteras, casas y lugares donde existen elevados focos de infeccin. 40

Se seleccionan 40 plantas de aproximadamente tres meses de edad, con un promedio de 10 hojas funcionales, las cuales servirn para la evaluacin. Se escogen plantas descubiertas con la finalidad de que al momento de realizar el control con fungicidas reciban el tratamiento adecuado. Las plantas deben ser identificadas individualmente, para lo cul se utiliza la numeracin del uno al diez. Para facilitar la ubicacin de las plantas a evaluar se pinta un nmero grande en el pseudotallo, visible a distancia.

En estas parcelas se sigue los trabajos normales de la plantacin, salvo la eliminacin de los retoos y las hojas bajeras.

La metodologa de evaluacin del preaviso biolgico es la metodologa francesa con arreglos a nuestro medio, el estado de evolucin es la expresin del desarrollo de la enfermedad en funcin del material vegetal. Por lo tanto es necesario llevar a cabo las evaluaciones, tomando en cuenta el crecimiento vegetativo de la planta (emisin foliar) tanto como los sntomas (estadios) de la enfermedad.

2.3.2.1 Toma de datos Para iniciar la toma de datos se marca en la base de la vena de la hoja I, semanalmente se anota los datos tratando de que siempre sea el mismo da cada semana. Esta informacin se anota en la columna EFA del formulario de datos de campo. Adems del nmero total de hojas, se observa el estado de desarrollo del cigarro o candela, el cul se anota en el formulario como fraccin decimal del total de hojas emitidas a la observacin. Esta fraccin decimal corresponde a cada estado del desarrollo del cigarro o candela: 0.0; 0.2; 0.4; 0.6; 0.8.

Fig. 1 Estado de la candela Fuente: Soto M. (1990)

Fig. 2 Posicin de las hojas

41

2.3.2.2 Sintomatologa de la infeccin (OJO) A fin de facilitar la observacin de la enfermedad, su desarrollo dividido en sus seis estadios, los cuales presentan las siguientes caractersticas.

ESTADIO 1. Generalmente se presenta bajo la forma de una pequea mancha despigmentada de color negruzco amarillento, sntoma que slo se observa en el envs de la hoja. ESTADIO 2. Se presenta al principio bajo forma de una lnea de color marrn, visible en el envs de la hoja, apareciendo luego en la parte superior del limbo. ESTADIO 3. La pequea lnea se alarga y se ensancha hasta lograr un mximo de 10 a 20 cm. ESTADIO 4. La lesin se presenta bajo la forma de una mancha de color marrn en el envs de la hoja y negra sobre el haz. Su forma es redonda o elptica. ESTADIO 5. El ennegrecimiento de la mancha elptica es total, tanto en el haz como en el envs de la hoja, envuelta por un halo de color amarillo. ESTADIO 6. El centro de la mancha se seca y se torna de color gris, la lesin va acompaada con un margen estrecho, de color negro, margen que a su vez lleva una franja de color amarillo.

Adems del estadio ms avanzado se cuantifica los sntomas siguientes: Cuando se contabiliza ms de 50 manchas del estado ms avanzado o de otro estado anterior, se pone un + en la columna del estado ms avanzado. Cuando se contabiliza menos de 50 manchas se pone . La severidad se determin de forma visual de acuerdo a la siguiente escala: Grado 1: Menos de 10 manchas. Grado 2: 6% del rea foliar manchada. Grado 3: 12% del rea foliar manchada. Grado 4: 25% del rea foliar manchada. Grado 5: 50% del rea foliar manchada. Grado 6: 75% del rea foliar manchada. Grado 7: 100% del rea foliar manchada. As dependiendo del rea manchada se estim el dao. 42

2.3.2.3 Observacin de la enfermedad Stover (1980) expresa que como se seal anteriormente, en forma semanal se evaluarn las mismas plantas y en cada oportunidad, siempre las hojas II, III, IV. El fundamento de la norma es que:

Las hojas nuevas son generalmente, las que se infectan primero. La metodologa trata de intervenir sobre la enfermedad en sus etapas ms indicadas de desarrollo.

Los sntomas sobre una misma hoja podrn, eventualmente ser observados por ms de una semana y con ello como han evolucionado. Para determinar la presencia de los diferentes estados, la observacin o bsqueda se inicia en el envs del semilimbo izquierdo en su parte apical ya que por ser sta la primera parte de la hoja que se expone al desenrollarse el cigarro o candela, es el rea que primero se inocula con la enfermedad. A partir de esta zona se observa el resto de la hoja para detectar el estado ms avanzado de la enfermedad as como un estimado del nmero de sntomas presentes.

Esta informacin se la lleva al formulario para efecto de los clculos respectivos, anotando en las columnas correspondientes a cada hoja ( rango de la hoja ) .Para cada una se anot nicamente un estado, el ms avanzado y se agrega una calificacin que puede ser + (ms ) cuando se estima superior a 50 sntomas se coloca ( menos ) cuando es inferior a 50.

Normalmente, las manchas controladas no se toman en cuenta durante la toma de datos, sin embargo, a veces es difcil diferenciar los sntomas semicontrolados. En caso de incertidumbre, se prefiere no tomarlos en consideracin y se anota los sntomas que se encuentren, pero remarcando aquellos con un crculo para su posterior observacin.

43

Aunque no forma parte de la metodologa ni de los clculos para determinar el estado de evolucin, se observa y se anota la informacin correspondiente a la hoja ms joven enferma (H.M.J.E.) y la hoja ms joven necrosada (H.M.J.N.) lo que nos dar una idea del estado fitosanitario de la plantacin con respecto a la sigatoka negra y de la eficiencia del mtodo empleado. A partir de estas observaciones se realizarn los siguientes clculos:

2.3.2.4 Clculo del estado de evolucin En la primera toma de datos regularmente no se puede establecer el Estado de Ritmo de Emisin Foliar (R.E.F.) ya que no se tiene el Estado de Emisin pasado (E.F.P.) tampoco se puede obtener el dato de Estado de Evolucin por cuanto al no haber Ritmo de Emisin Foliar ponderado que determina a aquel; lo que si se obtiene es la Suma Bruta (S. B).

En la segunda toma de datos, as como en las siguientes, se calcula el Ritmo de Emisin Foliar para cada planta.

Esto se consigue restando la Emisin Foliar Pasada (E.F.P) con la Emisin Foliar Actual (E.F.A) R.E.F. = E.F.P. - E.F.A.

Sumando EL Ritmo de Emisin Foliar de cada planta y dividiendo esta sumatoria entre el nmero de das que transcurrieron entre las dos observaciones, se obtiene el dato de Ritmo de Emisin Foliar Presente (R.E.Fi) para el lote de plantas en observacin. R.E.Fi = R.F.P.

A continuacin se gener la informacin denominada correccin de candela (CC).Esta se obtiene de multiplicar en cada planta, el valor asignado a su estado de cigarro o candela por el nmero de hojas (II, III, IV) encontradas con sntomas de enfermedad. A partir de los datos de correccin de candela, se obtiene el Coeficiente de Evolucin (C.E.). Este se logra 44

multiplicando el resultado de la sumatoria de correccin de candela de todas las plantas por 2; el cual es un factor preestablecido: CE = CC x 2

Para finalizar con la informacin necesaria vinculada al desarrollo de la planta (desarrollo foliar) slo queda obtener el dato de Ritmo de Emisin Foliar ponderado (R.E.Fp) el que es tan slo el promedio de la Suma del Ritmo de Emisin Foliar de la semana anterior ms el Ritmo de la Emisin Foliar presente. R.E.F. + R.E.Fi R.E.Fp = -----------------------2 La informacin del desarrollo de la planta (emisin foliar) es requerida para combinarla con los factores sintomatolgicos expresados en la planta, lo cual conduce a obtener el Estado de Evolucin (E.E.) de la enfermedad y que llevado a una grfica representa el comportamiento evolutivo permanente de la enfermedad en la plantacin.

Este proceso se inicia con el clculo de la Suma Bruta (S. B.) para ello, es necesario sumar la cantidad de hojas de igual numeracin que en todas las plantas evaluadas presenten el mismo estado. (Columna correspondiente en el formulario al nmero de hojas daadas).

Cuadro 1. Coeficiente de Severidad para el clculo de la Suma Bruta Estado 11+ 22+ 33+ Hoja II 60 80 100 120 140 160 Hoja III 40 60 80 100 120 140 Hoja IV 20 40 60 80 100 120

Fuente: Datos del clculo de estado de evolucin

45

Para continuar se calcula la suma de evolucin (S.E.V) la cual se la obtiene al sustraer el coeficiente de evolucin de la suma bruta. S.E.V. = S.B. - C.E. Este dato (S.E.V) se multiplica por el ritmo de emisin foliar ponderado y da como resultado el Estado de Evolucin (E.E.) de la enfermedad para la semana. E.E. = S.E.V. x R.E.Fp Esta cifra es llevada a una grfica que nos permite seguir el nivel de infeccin a medida que aumenta o disminuye la enfermedad.

P E V OB L G OC N R LD S A O AN G A R A IS IO O IC O T O E IG T K E R
N m re d F ca o b e in : T sista e s: P n la t. T ta ra m Ea . v lu 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 RF E C C C E C E C x2 C P md ro e P md ro e T ta ie to ra m n N P ro o e d: S mn : e aa H J ME IV 1 1 + 2 2 + 3 3 + S MT U A. S B H J O. 1 1 + 2 II 6 0 8 0 10 0 III 4 0 6 0 8 0 IV 2 0 4 0 6 0 C E IC N E D S V R A O F IE T E E E ID D 2 + 1O 2 10 0 8 0 3 3 + 10 10 4 8 10 10 2 4 10 10 0 2 H J N ME F ch a te r e a n rio F ch a a e a ctu l
E T DO SA I S

F ch F m a n e a u ig ci F ch to a d to e a m a s S MT R U A O IA C E. OF III

EP F

EA F

RF E

C C

R N OD L H J A G E A OA II III

H J S OA III

DDS A A A IV

IV

S m n a te r e a a n rio RF EI RF E /N

RF E

RF Ep E+ E FRF

S V E S V E

S --C B E

E E S VRF E . Ep E E T ta ie t E cto P m lo + im n + S a e t 1 0 + 2 0 ra m n xtra o e L e wa 0 % 0 0 P n -a u la ta d l H ja o s Cn l o tro 3 ra . e .H Au d lta 1 .E ro st. P rid a a 2o E d . st. C se a o ch

4 .H ta .

O S R A IO E : BE V C N S

Fig. 3 Formato para toma de datos de Preaviso Biolgico en sigatoka negra. Fuente: Stover (1990)

3.2.5.1 LIMPIEZA DEL TERRENO Se tomaron muestras de ste y con los resultados en mano, se estableci el ensayo, en un rea que se encontraba cultivada de banano orgnico, se procedi con la eliminacin de la 46

plantacin anterior, para posteriormente redisear los drenajes y replantear el sistema de riego subfoliar, dndole de esta forma las condiciones apropiadas para que se puedan desarrollar de manera optima las plantas posteriormente sembradas y as medir la eficiencia de los tratamientos.

Balizada del terreno Se realiz la balizada del terreno teniendo en cuenta la incidencia solar y el viento, estableciendo las distancias de siembra para poder tener la densidad requerida.

Hoyada Los hoyos fueron de 30 cm x 30 cm, colocando la tierra de llos al borde, la cual se mezcl con el compost al momento de la siembra.

3.2.5.2 Siembra La siembra se realiz en tres bolillos con una distancia entre plantas de 2,35m por 2,50m entre hileras, lo que da una poblacin de 1700 plantas por hectrea.

3.2.5.3 Riego Se realiz un replanteo de las torres de riego el cual consisti en colocar los emisores a 14 m entre s y a 18 m entre laterales, ya que haba una deficiencia de cobertura debido a que los emisores se encontraban a 18 m entre si y a 18 entre laterales. Se realizaron 36 riegos en 288 das, es decir un riego de 2 horas cada 8 das, el modulo estaba conformado por 42 aspersores Senninger 30-12 con una descarga de 0,765 m3/h.

3.2.5.4 Drenajes Se construyeron terciarias cada dos hileras de plantas, esta operacin evit la formacin de charcos en el suelo despus del riego, favoreciendo la evacuacin de los excesos de agua y contribuyendo a la oxigenacin del sistema radicular de las plantas.

47

3.2.5.5 Control de malezas Se realizaron en forma mecanizada con una rozadora SOLO 140 a gasolina motor 2T.

3.2.5.6 Cobertura vegetal Se realiz la siembra de kutz (puerara) que es una leguminosa que fija nitrgeno con sus ndulos en toda el rea del ensayo, adems de mantener la humedad y controlar el crecimiento de malezas que competan con el cultivo.

3.2.5.7 Fertilizacin La fertilizacin se llev a cabo de acuerdo al resultado del anlisis de suelo.

Cuadro 2: La fertilizacin

Anlisis de Suelo N P S K Ca Mg Zn Cu Fe Mn B

Valor 44,00 19,00 8,80 0,26 14,70 4,70 2,90 8,50 78,00 11,10 0,80

Unidades Ppm Ppm Ppm Meq/100mL Meq/100mL Meq/100mL Ppm Ppm Ppm Ppm Ppm

Fertilizante usado M.O. Roca Fosf. Sulf. de K Sulf. de K N.A. N.A. Zn(q) Biosolar N.A. N.A. Mn(q) Biosolar Borax Biosolar

Dosis Kg/ha 6t 147 1248 1248 ----------Biosolar --------Biosolar Biosolar

3.2.5.8 Deshije

48

Se deshij eliminando retoos e hijos a los 248 das que fue cuando el 80% de los hijos estaban sobre los 50cm. de altura, se dej un solo hijo considerando el vigor y la posicin, utilizando una palanca de deshije que forma parte de una nueva tcnica de deshije que se estaba implementando al momento en todas las haciendas del Grupo Agrcola Prieto.

3.2.5.9 Deshoje Dentro de esta labor, se realiz: Despunte temprano, ciruga o poda fitosanitaria, deslamine, deshoje.

3.2.5.10 Control de nemtodos Se realizaron muestreos de races en donde se pudo observar leves lesiones causadas por nemtodos, cuyo control de poblaciones se realizaron con aplicaciones de Paecilomyces lilacinus 2.8x108. 3.2.5.11 Labores fitosanitarias Se realizaron evaluaciones de preaviso biolgico cuando las plantas alcanzaron un metro veinte de altura. En cuanto a Picudo negro se aplic como medida de control y preventiva Beuveria bassiana inyectada al suelo, con bomba inyectora en los cuatros puntos cardinales alrededor de la planta, se realizo un trampeo para verificar la presencia de picudos en las cuales se obtuvieron resultado alarmantes de hasta 23 picudos por trampa. Cabe recalcar que no se presentaron plagas como caterpillar, monturita, etc.

49

4. RESULTADOS Y DISCUSIN

Con el propsito de mantener siempre la presin de la enfermedad sobre todas las parcelas del ensayo, ste fue realizado en una zona de alto inoculo. A los treinta das despus de la siembra se di inicio a las primeras aspersiones consideradas como preventivas, puesto que a esta fecha ya se pudo detectar la presencia de la Sigatoka negra en toda la plantacin del ensayo; las primeras evaluaciones de preaviso biolgico se realizaron a los seis meses despus de la siembra, porque es en este tiempo en donde la mayor parte de las plantas a evaluar presentaron una altura superior a 1.20m.

El potencial de inculo de la enfermedad y las condiciones ambientales favorables para su desarrollo permitieron una alta infeccin a los 60 das, uniforme en todas las parcelas y 50

detectndose diferencias estadsticas significativas al inicio y parte del desarrollo del ensayo. La paricin de esta variedad Willians, como en las dems existentes en nuestro pas es a los 6 meses, lo cual se cumpli solo en el tratamiento nueve (T9), que siempre estuvo adelante en la variable altura de plantas y nmero de hojas, hasta llegar a la paricin.

En los cuadros posteriores se presentan el resumen de los anlisis de varianza correspondiente a las variables evaluadas cuyos resultados se discuten a continuacin:

4.1. ALTURA DE PLANTAS

Se observa que las mayores alturas de plantas o donde presentan significancia los tratamientos son los correspondientes a Trichoderma harzianum, presentndose la mayor en el T9 donde participa Trichoderma harzianum + Biosolar + Fortibanano + Exalcrops, y la menor registrada por el testigo absoluto, evidenciando de esta forma que a parte de ser un antagonista, Trichoderma es un estimulante del crecimiento de las plantas (Castellanos y col. 1996).

Cuadro 3. Altura de plantas en cm.

TRAT. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9

90 das
49.24 a 55.38 a 50.57 a 54.33 a 51.53 a 48.19 a 52.43 a 54.57 a 61.53 a

120 das
61.95 ab 66.91 ab 60.19 ab 63.28 ab 60.71 ab 56.33 b

150 das
82.10 85.81 82.57 104.7 bc 84.76 90.19 cd bcd d cd d

180 das
105.1 b 112.7 ab 128.1 ab 133.9 ab 115.0 ab 116.1 ab 128.6 ab 135.9 ab 146.5 a

210 das
143.0 164.1 151.7 169.7 162.4 172.6 182.9 183.4 189.6 bcd de abcd cde abc abc ab a e

240 das
156.9 c 173.8 abc 163.7 bc

270 das
167.0 192.1 ab 176.9 bc 194.1 ab 193.7 ab 201.6 ab 203.0 ab 203.7 ab 206.5 a c

185.8 ab 179.3 abc 184.9 ab 189.1 a 189.9 a 195.4 a

60.10 ab 63.00 ab 71.19 a

97.71 abcd 117.0 a 109.5 ab

Los promedios ms significativo correspondientes a Trichoderma harzianum evidencian el efecto positivo del mismo como lo podemos apreciar en la Fig. 4. Tambin se debe notar que Trichoderma enriquecido con agentes activos favoreci la nutricin de las plantas. 51

250,0 201,6 194,1 167,0 176,9 200,0 150,0 100,0 50,0 0,0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 TRATAMIENTOS 192,1 193,7 203,0 203,7 206,5
Serie1

Figura 5. Altura de plantas a la paricin (270 das)

4.2.- NMERO DE HOJAS POR PLANTA

Se observa que desde un inicio el nmero total de hojas por planta es bajo (5-7 hojas) y muy similar entre tratamientos. Como se puede apreciar en el cuadro 4, esta variable presento su mayor significancia a los 270 das en el T9, pudindosele atribuir esto a que en dos de las tres repeticiones este tratamiento estuvo junto al testigo absoluto recibiendo mayor presin de inculo, as mismo fue en este tratamiento en donde se registraron el mayor nmero de plantas paridas y prontas a la paricin a los 6 meses y meses posteriores, por lo tanto al dejar de emitir hojas ms pronto que los dems y al haber ms tiempo de exposicin de estas, se favoreci la infeccin, y por consiguiente la perdida de rea foliar.

Como era de esperarse el tratamiento que presenta el mayor nmero de hojas es el tratamiento qumico, indiferentemente de las plantas paridas o prontas a parir, debido a que las molculas de los qumicos presentan mayor eficacia y residualidad que Trichoderma harzianum. Dentro del manejo orgnico el T9 se coloca como primera opcin, compartiendo un mismo nivel de significancia con el T7. La dosis empleada en el T4 pareciera ser la ms indicada para tener 52

un mayor nmero de hojas por planta, si descartamos las causas antes mencionadas en el T9, debido a que Trichoderma harzianum por ser un micoparsito es capaz de producir metabolitos fungotxicos, antibiticos voltiles y no voltiles (Papavizas, 1988), que se dispersan por toda la hoja reduciendo as el efecto negativo da Sigatoka negra.

Cuadro 4. Numero de hojas por planta

TRAT. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9

180 das 5.667 ab 6.953 a 5.427 b 6.237 ab 6.000 ab 5.953 ab 6.380 ab 6.527 ab 6.763 ab

210 das 5.133 6.567 5.000 5.333 5.467 5.133 6.067 6.167 ab a a c c bc c c

240 das 6.967 a 6.800 a 7.100 a 7.000 a 7.067 a 6.800 a 6.933 a 7.333 a 6.700 a

270 das 6.633 ab 6.867 a 6.633 ab 6.700 ab 6.267 abc 6.000 5.867 6.033 5.733 bc c bc c

6.100 ab

El comportamiento de los tratamientos respecto a la enfermedad se ve influenciado por las condiciones climticas. No siendo as para el nmero total de hojas por planta ya que se puede observar como en el tratamiento qumico (T2) este parmetro se mantuvo bastante constante durante los muestreos. La diferencia entre los tratamientos del nmero de hojas total va a depender directamente del grado de proteccin de los mismos ya que las condiciones climticas son las mismas para todos.

En la grafica vemos como la curva va decreciendo desde su punto mximo en el T2 hasta llegar a T9 como su punto mnimo en cuanto respecta a cual de los tratamientos presento el mayor nmero de hojas a los 270 das despus de la siembra.

6,867

7 6,633 Numero de Hojas 7 6 6 5 T1 T2

6,633

6,700

6,267

6,000

5,867

6,033

5,733

Serie1

T3

T4

T5

T6

T7

T8

T9

53

TRATAMIENTOS

Figura 6. Nmero de hojas a la paricin.

4.3.- REA FOLIAR

Esta variable fue tomada considerando el total de la hoja tercera de cada planta evaluada antes de realizar el despunte temprano, cirugas, y deslamine. Observamos que el promedio de rea foliar se hace significativo conforme aumenta la edad del cultivo y presin del inculo, encontrndose la mayor rea foliar en el T8, Trichoderma harzianum ejerce una accin estimulante en el crecimiento y presencia de mayor nmero de hojas funcionales en las plantas (Castellanos y col. 1996), adems podemos acotar que debido a que este tratamiento en dos de sus tres repeticiones se encontraba junto al tratamiento qumico, presentando igual circunstancia para el T4, tuvo mayor eficacia, lo cual justifica este resultado sin restarle merito a Trichoderma harzianum, el T9 en cambio ocupa el segundo lugar siendo afectado este por estar junto al testigo absoluto en dos de sus tres repeticiones. El rea foliar se clculo mediante la siguiente formula propuesta por Kumar et al (2002):

rea foliar Total= L x A x 0.8 x N x 0.662 En donde: L = Largo de la hoja en metros A = Ancho de la hoja en metros 0.8= Factor de proporcionalidad Murray (1960) N = nmero de hojas en la planta 0.662 = nuevo factor Kumar (2002)

Cuadro 5. rea foliar en das

TRAT. T1 T2 T3 90 0.1800 a 0.1767 a 0.1767 a 120 0.2333 b 0.2800 ab 0.2567 ab 150 0.2767 0.3100 c bc 0.3667 abc Promedio 0.230 0.274 0.248

54

T4 T5 T6 T7 T8 T9

0.1700 a 0.1900 a 0.1867 a 0.1833 a 0.1867 a 0.2233 a

0.2700 ab 0.2567 ab 0.2833 ab 0.2567 ab 0.2533 ab 0.3233 a

0.5167 ab 0.3633 abc 0.4100 abc 0.4767 abc 0.5900 a 0.5233 ab

0.319 0.270 0.293 0.306 0.343 0.357

La Fig. 7 muestra la diferencia de los resultados de esta variable tomando en consideracin lo antes expuesto podemos afirmar que Trichoderma harzianum promueve el desarrollo foliar de las plantas, esta teora confirmada ya en otros cultivos como el caf, tabaco, pepino. (Fernndez 1998, Castellanos 1996, Rodrguez 1998), ahora es vista en banano. As mismo podemos decir que los valores mas bajos obtenidos y vistos en la grafica corresponden al T3 y T5 respectivamente, en el primer caso por ser testigo absoluto no se aplico nada para prevenir o detener el avance de la enfermedad, y en el T5 podemos sealar que en dos de sus tres repeticiones se encontraron altas poblaciones de picudo negro (hasta 23 por trampa), lo que indica un deterioro de la base del seudotallo y una afeccin radicular lo cual influy para una optima absorcin de nutrientes lo que condujo a un desorden fisiolgico en el desarrollo de las plantas.

0,319

0,274

AREA FOLIAR

0,200 0,150 0,100 0,050 0,000 T1

0,230

0,250

0,248

0,270

0,300

0,293

0,306

0,350

0,343

0,357

0,400

Serie1

T2

T3

T4

T5

T6

T7

T8

T9

TRATAMIENTOS

Figura 7. rea foliar de plantas de banano.

55

4.4.- DIMETRO DEL SEUDOTALLO

Esta variable no registra significancia marcada para ninguno de los tratamientos a partir de los 240 das, pero si lo vemos desde el punto de vista en que el T9 registra el mayor promedio, podemos acotar que esto se debe a que en este tratamiento Trichoderma harzianum estuvo acompaado de agentes activos glucsidos, extracto de algas e hipofosfito de potasio que contribuyeron a una mejor nutricin de las plantas que conformaban este tratamiento, obteniendo tallos mas robustos y esperando racimos con mayor nmero de manos que en los dems.

Al momento de la ltima evaluacin de esta variable la mayor parte de las plantas evaluadas se encontraban prontas a la paricin habiendo algunas ya paridas. Cabe decir que dentro de esta variable ninguno de los tratamientos fue significativo estadsticamente al final, pero si revisamos las siete evaluaciones mensuales hechas, podremos ver el predominio del T9 en todas ellas.

Cuadro 6. Circunferencia de seudotallo en cm

TRAT. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 90 das 17.38 b 19.48 ab 18.48 ab 19.26 ab 18.48 ab 19.31 ab 19.09 ab 19.74 ab 20.55 a 120 das 19.60 c 21.31 abc 20.21 bc 21.24 abc 20.82 bc 20.95 abc 22.09 abc 22.64 ab 23.85 a 150 das 19.20 20.79 20.71 23.04 e de de cde 180 das 20.56 c 23.71 abc 21.74 bc 26.60 ab 23.38 abc 24.28 abc 26.14 abc 28.14 a 29.08 a 210 das 22.02 22.98 27.77 ab 24.17 bc 24.43 bc 26.60 abc 28.47 ab 30.40 a c c 24.20 bc 240 das 36.27 a 38.90 a 38.13 a 37.80 a 38.47 a 39.09 a 39.00 a 38.27 a 37.87 a 270 das 42.57 a 40.67 a 41.20 a 43.30 a 40.83 a 42.75 a 43.07 a 43.00 a 44.17 a

27.02 abc 24.64 bcd 26.00 abcd 29.76 ab 30.40 a

Fuente: Resultados obtenidos en el ensayo.

56

La Figura 8 demuestra que mientras se utilice Trichoderma harzianum conjuntamente con un ptimo balance nutricional de la plantacin, podremos obtener plantas vigorosas con un excelente retorno y por ende una buena produccin.

CIRCUNFERENCIA DEL SEUDO TALLO

46,00 44,00 42,00 40,00 38,00 T1

43,30

42,57

41,20

40,67

40,83

42,75

43,00

43,07

44,17

Serie1

T2

T3

T4

T5

T6

T7

T8

T9

TRATAMIENTOS

Figura 8. Circunferencia del seudotallo a los 270 das.

4.5.- FECHA DE LA PRIMERA INFECCIN

La fecha de la primera infeccin en todos los tratamientos fue a los 30 das despus de la siembra, las plantas fueron tradas desde Quevedo y por consiguiente fueron colocadas al pie del sitio definitivo de la siembra, como ya hemos comentado anteriormente el lugar de ensayo se encontr en una zona de alta presin del inculo, rodeado por los cuatro lados de bananeras orgnicas con promedios de E.E siempre sobre 1200, explicndose as esta presencia uniforme de la enfermedad en toda el rea del ensayo. Las conidias son transportadas de una hoja a otra por medio del agua del roco o la lluvia, siempre de arriba hacia abajo en Sigatoka amarilla; en el caso de Sigatoka negra no requiere de la lluvia. Las ascosporas son transportadas por el viento a grandes distancias (Stover 1980).

4.6.- HOJA MS JOVEN ENFERMA (HMJE)

57

En esta variable la posicin de la HMJE en los tratamientos correspondientes a Trichoderma harzianum fue la hoja 3, mientras que en el tratamiento qumico fue siempre la hoja 4. El control biolgico raramente elimina a un patgeno de un sitio, ms bien reduce su nmero o su habilidad de producir enfermedad, este control puede ser llevado a cabo con una pequea o ninguna reduccin de la poblacin del patgeno o tal vez sin prevenir la infeccin (Cook y Baker, 1983). Lo anterior expuesto demarca que la accin cumplida como antagonista de Trichoderma harzianum contra Mycosphaerella fijiensis con presin alta de inculo resulta poco significativa con respecto a la dosis aplicada, sin embargo en el T7 se observ una leve ventaja ya que la posicin de la HMJE fue la hoja 3.4.

Considerando la posicin del T7 en sus tres repeticiones y al encontrarse alejado de los tratamientos Testigo y Qumico respectivamente, podemos deducir que la dosis empleada en l, es la ms indicada para un control antagnico, en cuanto a la posicin de la HMJE se refiere.

Cuadro 7. Hoja ms joven enferma

TRAT. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9

180 3.143 b 4.380 a 3.097 b 3.000 b 3.143 b 3.047 b 3.337 b 3.240 b 3.190 b

210 3.300 4.100 a 2.633 3.000 2.733 3.100 3.067 3.200 3.700 ab bc bc c bc c bc bc

240 4.033 a 4.100 a 3.633 a 3.333 a 3.267 a 3.067 a 3.567 a 3.433 a 3.300 a

270 3.667 3.933 a 2.733 3.100 3.000 3.000 3.000 3.000 3.000 c cd cd cd cd cd d b

PROMEDIO 3.536 4.128 3.024 3.108 3.036 3.054 3.401 3.185 3.173

En el grafico de la Fig. 9 se aprecia claramente el predominio del tratamiento qumico y el tratamiento hacienda, sobre los tratamientos correspondientes a Trichoderma harzianum, dentro de los cuales el ms notorio es el T7, teniendo en consideracin lo antes expuesto. 58

HOJA MS JOVEN ENFERMA

4,500 4,000 3,500 3,000 2,500 2,000 1,500 1,000 0,500 0,000 T1

3,536

4,128

3,401

3,185

3,108

3,036

3,024

3,054

3,173

Serie1

T2

T3

T4

T5

T6

T7

T8

T9

TRATAMIENTOS

Figura 9. HMJE en plantas de banano.

4.7.- HOJA MS JOVEN ENFERMA NECROSADA (HMJEN)

La posicin de la HMJEN promedio en los tratamientos correspondientes a Trichoderma harzianum fue la hoja 5.4, mientras que en el tratamiento qumico el promedio fue la hoja 6.34, a los 270 das tiempo en el cual la mayora de plantas evaluadas alcanzaron la plenitud de su desarrollo, notamos que el T4 presento a la hoja 6.7 como la HMJEN, interpretndose esto como una leve ventaja que ayudo a la planta a tener una mayor rea foliar y por consiguiente una mayor capacidad fotosinttica, dentro de este mismo rango de significancia se encuentra el testigo absoluto (T3) lo cual resulta contradictorio si no lo analizamos a fondo, si vemos la ubicacin del mismo en la distribucin de los tratamientos en el campo observamos que el T3 en dos de sus tres repeticiones esta junto al T9 y en la restante junto al T1, evidenciando as una pronunciada influencia de las aspersiones realizadas en los tratamientos antes indicados sobre este.

59

A esta misma edad el T1 y en el T2 se encuentran en un mismo nivel de significancia (A), indicando como los tratamientos mas efectivos a estos dos.

El control biolgico raramente elimina a un patgeno de un sitio, ms bien reduce su nmero o su habilidad de producir enfermedad, este control puede ser llevado a cabo con una pequea o ninguna reduccin de la poblacin del patgeno o tal vez sin prevenir la infeccin (Cook y Baker, 1983). Lo anterior expuesto demarca que la accin cumplida como antagonista de Trichoderma harzianum contra Mycosphaerella fijiensis con presin alta de inculo resulta poco significativa con respecto a la dosis aplicada.

Considerando la posicin del T4 en dos de sus tres repeticiones lindero con una plantacin de banano poco cuidada, soport por ende una fuerte presin del inculo, en sus tres repeticiones estuvo junto al T3, T9 y al T2 respectivamente, dndonos una apreciacin ms clara y uniforme del comportamiento de Mycosphaerella fijiensis en este ensayo, por lo que podemos deducir que la dosis empleada en l, es la ms indicada para un control antagnico en lo que a hoja mas joven enferma necrosada se refiere, donde acompaado de una buena nutricin funcione de mejor manera para prevenir o disminuir la necrosis en el rea foliar afectada por Sigatoka negra.

Cuadro 8. Hoja ms joven enferma necrosada en das

TRAT. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 180 4.667 6.287 a 4.097 4.473 4.763 4.337 4.430 4.287 4.760 b b b b b b b b 210 4.333 5.733 3.767 4.000 4.000 4.000 4.400 4.533 5.200 a c bc bc bc bc bc ab bc 240 6.667 a 6.433 a 7.100 a 7.000 a 7.067 a 6.800 a 6.933 a 7.167 a 6.300 a 270 6.833 a 6.900 a 6.667 ab 6.700 ab 6.267 6.000 5.867 6.033 5.733 bc c c c c
PROMEDIO

5.625 6.338 5.399 5.485 5.524 5.284 5.308 5.472 5.332

60

La interpretacin de la Figura 10 pone en evidencia lo antes expuesto, demostrando as el dominio de T1 y T2 en esta variable, observando estos resultados podemos tener una idea clara del estado fitosanitario con respecto a la sigatoka negra y la eficiencia de los tratamientos estudiados. Cabe sealar que en cuanto a la nutricin respecta, todos los tratamientos recibieron la misma dosis de fertilizante.

HOJA MS JOVEN ENFERMA NECROSADA

6,000 5,625 5,500 5,000 4,500 T1 T2

6,338

6,500

5,485

5,524

5,399

5,472 T8 T9

T3

T4

T5

T6

5,284

T7

5,308

5,332
Serie1

TRATAMIENTOS

Figura 10. Promedio de la hoja ms joven enferma necrosada

4.8.- ESTADO EVOLUTIVO DE INFECCIN (EE).

61

Esta variable es la que nos permiti seguir el nivel de infeccin a medida que aumenta o disminuye la enfermedad. Cabe sealar que el rea donde fue llevado a cabo el experimento se encontraba rodeada por los cuatro lados de plantaciones de banano orgnico en donde el E.E promedio fue siempre superior a 1200. En las semanas evaluadas observamos variabilidad en la significancia del E.E.

Los valores ms significativos fueron para el tratamiento qumico (T2), cabe sealar que aun cuando en 5 de las 12 semanas monitoreadas los valores no son significativos entre los tratamientos de Trichoderma, testigo absoluto y tratamiento hacienda, el T2 si muestra significancia pues una molcula qumica se puede traslocar por lo que es ms eficiente que un hongo antagonista y otros productos fungicidas orgnicos.

Cuadro 8. Estado evolutivo de infeccin

ESTADO EVOLUTIVO A LA SEMANA TRAT. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 50 1500 ab 650.1 1305 ab 1280 ab 1426 ab 1173 b 1497 ab 1505 ab 1614 a 51 1422 c 439.0 1413 1328 bc bc bc 52 1530 ab d 709.6 1474 ab 1336 b c 1 1495 a 814.0 b 1517 a 1356 a 1658 a 1459 a 1634 a 1701 a 1724 a 2 1587 a 1161 b 1558 a 1578 a 1632 a 1662 a 1742 a 1808 a 1741 a 3 1680 ab 1287 b 1614 ab 1696 ab 1784 a 1751 ab 1777 a 1646 ab 1838 a 4 1810 a 1185 1658 a 1860 a 1698 a 1805 a 1887 a 1725 a 1878 a 5 1669 a b 1006 1681 a 1892 a 1508 ab 1816 a 1986 a 1753 a 2013 a b 6 1636 ab 1006 1681 ab 1892 ab 1508 b 1816 ab 1986 ab 2021 ab 2081 a c 7 1749 ab 1034 1742 ab 1911 ab 1597 b 1750 ab 1910 ab 1912 ab 1981 a c 8 1691 a 898.3 b 1666 a 1827 a 1472 a 1766 a 1948 a 1988 a 2026 a 9 1800 1063 2065 ab 2077 ab 2170 ab 2156 ab 2209 ab 2285 a 2367 a b c

1549 ab 1236 1565 ab 1532 ab 1993 a c

1652 ab 1357 b

1629 ab 1651 ab 1775 a

El T9 se muestra como el tratamiento que siempre mantuvo el valor ms alto en lo que a E.E se refiere, es decir que la Sigatoka negra fue mas agresiva en este tratamiento, ahora bien si tomamos en cuenta las variables antes analizadas como el numero de hojas/planta, y el rea foliar/planta, corroboran este resultado.

62

Nuevamente la posicin de este tratamiento en la distribucin en el campo influy, ya que como lo habamos expresado antes el T9 en dos de sus tres repeticiones estuvo junto al testigo absoluto, donde se puedo observar que en las repeticiones que estuvieron junto a este, los valores del E.E fueron superiores que en la repeticin que estuvo junto al tratamiento qumico, demostrando de esta forma que la presin de inoculo fue constante dentro del ensayo, evidenciando una vez ms que los tratamientos se fueron influenciando de uno a otro por la falta de barreras de separacin.

Esta cifra es llevada a una grfica que nos permite seguir el nivel de infeccin a medida que aumenta o disminuye la enfermedad.

2500,00 ESTADO EVOLUTIVO 1669,42 1640,33 1630,75 1614,50 1643,08 1727,25 2000,00 1500,00 1000,00 500,00 0,00 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 1814,17 1919,25
Serie1

911,58

TRATAMIENTOS

Figura 11. Estado evolutivo de infeccin Como podemos apreciar en la grafica vemos que la curva presente claramente los efectos de Trichoderma harzianum frente a los resultados del tratamiento qumico, hacienda y absoluto. La severidad de la Sigatoka negra en el testigo absoluto debi alcanzar los niveles ms altos en lo que a E.E respecta, pero vemos que no fue as, de tal forma que esto nos indica de que hubo mucha interferencia por las aplicaciones de los tratamiento entre ellos mismos; faltaron barreras que aislaren los tratamientos el uno del otro, ya que al momento de aplicarlos por 63

ms que se realizaron las aplicaciones con cuidado, la descarga pulverizada de los preparados era arrastrada por el viento creando un mezcla en la atmsfera de todos llos que terminaba por caer en el rea foliar creando una alteracin en los resultados.

4.9.- Relacin econmica de costos de control

Al estudiar la relacin econmica entre los costos de control de la enfermedad con la aplicacin de Trichoderma harzianum tenemos que stos no muestran mayor eficiencia aumentando la dosis, puesto que en los tratamientos donde se aplic la dosis mnima de Trichoderma, se present un promedio menor del estado evolutivo de la enfermedad cuando Trichoderma estuvo solo con Biosolar; y cuando ste estuvo acompaado de Biosolar ms bioestimulantes foliares present plantas mas robustas con mayor rea foliar.

Dentro de los tratamientos estudiados en este ensayo el tratamiento qumico fue el ms eficiente y econmico con un costo promedio de dlares americanos 12.00/ha por aplicacin, y en segundo lugar esta Trichoderma harzianum (T4) en su dosis mas baja correspondiente a 2 litros por hectrea ms 450 centmetros cbicos de Biosolar con un costo de $21.00/ha por aplicacin.

El tratamiento ms caro es Trichoderma harzianum 5 L/ha + 450cc de Biosolar (T8) con $61.00/ha por aplicacin, seguido muy de cerca por el Tratamiento AnnQumica (T9) que present plantas ms robustas y normal tiempo de paricin, con mayor rea foliar pero con el 64

mayor estado evolutivo en todas las evaluaciones tenemos al T9, cuya dosis estuvo compuesta por 2 litros de Trichoderma ms Biosolar, Fortibanano y ExalCrops que son bioestimulantes del crecimiento con un costo de $59.56/ha por aplicacin. Cuadro 9. Costo de los Tratamientos. Tratamientos Costo USD T1 27,71 T2 12,00 T3 0,00 T4 21,00 T5 31,00 T6 41,00 T7 51,00 T8 61,00 T9 59,56 N Aplic. 27 27 0 27 27 27 27 27 27 Total 748,17 324,00 0,00 567,00 837,00 1107,00 1377,00 1647,00 1608,12

Fuente: Almacenes de insumos agropecuarios.

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Trichoderma harzianum no redujo significativamente la severidad de la Sigatoka negra en ninguna de las dosis empleadas y comparadas con el testigo absoluto. Esto demuestra que en el campo las condiciones son diferentes a las del laboratorio, en donde este antagonismo si fue eficiente como biocontrolador.

El tratamiento ms eficiente correspondiente a las dosis de Trichoderma harzianum en cuanto al ndice del estado evolutivo se refiere a los 270 das despus de la siembra es el T4, aunque estadsticamente el T3, T4, T5, T6 y T7 comparten el mismo nivel de significancia.

65

En el promedio general de las evaluaciones del estado evolutivo aparece como el tratamiento ms eficiente entre los correspondientes a Trichoderma harzianum el T5 cuya dosis es de 2 L/ha ms 450cc de Biosolar.

Posiblemente Trichoderma harzianum estimule el crecimiento de las plantas de banano, tanto en el dimetro del seudotallo, altura de plantas, rea foliar, y nmero de hojas.

Siempre hubo una marcada diferencia entre el T2 y el T9 que radic en plantas ms robustas y por ende de ms pronta paricin, lo que suspendi la emisin foliar y produjo una mayor avance del estado evolutivo de la enfermedad (T9), mientras que en el T2 las plantas presentaron retardo y crecimiento desigual pero un avance ms lento de la evolucin de la enfermedad talvez por una escasa presencia de exudados nutritivo en la hoja debido a la escasa nutricin de las plantas en el T2.

Trichoderma harzianum es ms eficiente como estimulador del crecimiento de las plantas mezclado con agentes activos glucsidos (glucosa 6 fosfato), otros monosacridos, disacridos, polisacridos, extracto de algas marinas ricos en nutrientes y micro-nutrientes, que potencializan su accin como lo hemos visto en Tratamiento nueve, concuerda con lo que dice Papavizas 1985 en la revisin literaria.

Trichoderma harzianum por ser un hongo fotosensible, tuvo siempre condiciones adversas para esporular, ya que en los meses que se realizo las evaluaciones las temperaturas promedios fueron de 26 a 32C, teniendo la presencia del sol desde tempranas horas de la maana. El gnero Trichoderma esporula de buena forma en respuesta a la luz diurna y a la oscuridad (Papavizas 1985).

Se recomienda al momento de disear un proyecto de esta magnitud que el testigo absoluto y el testigo qumico no se encuentren cerca de los tratamientos para que los datos obtenidos sean ms significativos.

66

Se debe considerar la implementacin de barreras de proteccin entre los tratamientos para futuros ensayos, ya que la inexistencia de stas no fue posible tener datos que sean el fiel reflejo de lo aplicado en cada uno de ellos.

6.- RESUMEN

La presente investigacin se realiz en la finca Po V, de propiedad del Grupo Agrcola Prieto, ubicada en la va Buenavista Ro Negro.

Se escogi este sitio porque es una zona de alta presin de inculo, en donde el rea del ensayo se encontraba rodeada por todos sus lados de plantaciones de banano orgnico con altos niveles de estado evolutivo, ya que solo as conoceramos la verdadera eficiencia de los tratamientos estudiados.

67

Antes de establecer el ensayo, se procedi a realizar un anlisis de suelo del rea seleccionada. Con los resultados, se procedi a establecer los requerimientos nutricionales para el rea en general. La plantacin evaluada fue de plantilla.

Usando el mtodo de monitoreo conocido como Stover modificado se procedi a evaluar semanalmente 10 plantas por cada repeticin de los 9 tratamientos. Mediante el Estado Evolutivo (E.E) en cada planta observamos el avance de la Sigatoka negra en cada una de las unidades muestreadas y el efecto de los tratamientos.

El diseo experimental que se utiliz fue bloques al azar con 9 tratamientos y 3 repeticiones por tratamiento, incluidos el testigo absoluto, qumico y hacienda.

Las hojas funcionales siempre estuvieron entre 5 y 8, a medida que fueron creciendo las plantas la enfermedad era ms agresiva, se dio una marcada diferencia en el crecimiento con respecto a los tratamientos, presentndose mayor desarrollo las plantas del T9, el menor estado evolutivo se presento en el testigo qumico, dentro de los tratamientos orgnicos fue el testigo hacienda, y en segundo lugar T5 correspondiente a Trichoderma con una dosis de 2Lts/ha. No se observ una marcada significancia estadstica dentro de los tratamientos pertenecientes a Trichoderma ya que todos ellos compartieron el mismo rango de significancia con el testigo absoluto.

Analizando econmicamente los tratamientos podemos decir que por eficiencia y basndonos en el promedio general del estado evolutivo el tratamiento ms econmico y eficiente fue el tratamiento qumico (T2) a nivel general, pero dentro de los orgnicos fue el tratamiento hacienda (T1), seguido del T5 perteneciente a Trichoderma harzianum. El segundo ms caro luego del T8, que presento las plantas ms robustas y de pronta paricin, pero el mayor promedio general de estado evolutivo de Sigatoka negra fue el Tratamiento AnnQumica (T9).

68

7.- SUMARY

The present investigation was carried out in the property I Tweet V, of property of the Blackish Agricultural Group, located in the road Buenavista - Ro Negro.

This place was chosen because it is an area of high pressure of I inoculate where the area of the rehearsal was surrounded by all its sides of plantations of organic banana tree with high levels of evolutionary state, since alone we would know this way the true efficiency of the studied treatment.

69

Before establishing the rehearsal, you proceeded to carry out an analysis of floor of the selected area. With the results, you proceeded to establish the nutritional requirements for the area in general. The evaluated plantation was of insole.

Using the method of well-known monitored as modified Stover you proceeded to evaluate 10 weekly you plant cur each repetition of the 9 treatments. By means of the Evolutionary State (E.E) in each plant we observe the advance of the black Sigatoka in each one of the units mastheads and the effect of the treatments.

The experimental design that was used was blocks at random with 9 treatments and 3 repetitions for treatment, included the absolute, chemical witness and country property.

The functional leaves were always between 5 and 8, as they were growing the plants the illness it was more aggressive, a marked difference was given in the growth with regard to the treatments, being presented bigger development the plants of the T9, the smallest evolutionary state you presents in the chemical witness, inside the organic treatments it was the witness country property, and in second place T5 corresponding to Trichoderma with a dose of 2Lts/ha. a marked statistical significancia was not observed inside the treatments belonging to Trichoderma since all they shared the same significancia range with the absolute witness.

Analyzing the treatments economically can say that for efficiency and basing us on the general average of the evolutionary state the most economic and efficient treatment was the chemical treatment (T2) at general level, but inside the organic ones it was the treatment country property (T1), followed by the T5 belonging to Trichoderma harzianum. The most expensive but in turn the one that I present the most robust plants and of prompt paricin, but the biggest general average of evolutionary state of Sigatoka quarter note was the Tratamiento AnnQumica (T9).

70

8.

BIBLIOGRAFA CITADA

CASTILLO, M. 2005. Manejo de hongos para el control biolgico de plagas. (en lnea). URBES-Universidad Cien Fuegos. Fecha de consulta (Mayo 23 del 2006), disponible en
www.ucf.edu.cu/urbes/Trabajo%20Mercedes.htm CENTENO, E. 2005. Manejo de hongos para el control biolgico de plagas. (en lnea).

URBES-Universidad Cien Fuegos. Cuba. Fecha de consulta (mayo 23 del 2006), disponible en www.ucf.edu.cu/urbes/tesis%20ELENA.htm DURN, E. 2005. Control biolgico con Trichoderma harzianum. (en lnea). Revista Teorema Ambiental. Vol. 42. San Jos (Costa Rica). Fecha de consulta (Mayo 14 del 2006), disponible en www.teorema.com.mx/articulos. 71

FERNNDEZ, O. 2004. Aspectos ecolgicos del banano. (en lnea). Quito (Ecuador). Fecha de consulta (mayo 15 del 2006), disponible en www.uees.edu.ec/investigacion/cuaderno8/tema2 GARCA, L. Y MELCHOR, G. 2005. Los hongos como medio de control biolgicos. (en lnea). Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria-Grupo Farmacologa y Toxicologa. Vol. 53. La Habana (Cuba). Fecha de consulta (Mayo 23 del 2006), disponible en www.monografias.com/trabajos25/plaguicidas-microbianos.shtml OBREGN, M. 2001. INA. Centro Nacional Especializado en Agricultura Orgnica. (en lnea). Instituto Nacional de Aprendizaje, San Jos (Costa Rica). Fecha de consulta (Junio 10 del 2006), disponible en www.ina.ac.cr/revista/pag16_microorganismos.html SOTO, M. 1985. Bananos-Cultivo y Comercializacin. Cia. Agr. Ganadera Cariari. San Jos, Costa Rica. p. 99-132. SUQUILANDA, M. 1996. Agricultura Orgnica. Edicin Fundagro, Quito, p. 15-17. STOVER, R. 1974. A Proposed International Scale for estimating intensity of banana Leaf Spot (Mycosphaerella fijiensis Leach). Trop. Agric. (Trin), 48. p. 187-196. STOVER, R. 1977. Enfermedades del banano y el pltano y su control, en Colombia. Panam, UPEB. p. 19-22. STOVER, R. 1980. Las manchas producidas por las enfermedades de Sigatoka en las hojas de banano y pltanos. Honduras, p. 15-16

72