PRACTICA N 6 UREA DETERMINACION ENZIMATICA DE UREA EN SUERO, PLASMA Y FLUIDOS BIOLOGICOS (VALTEK)

1. INTRODUCCIN
La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) ms abundantes en el cuerpo. Los dems son la creatinina, el cido rico, el amonio y los aminocidos. En otros tiempos todos eran medidos juntos (prueba del NNP), pero debido a que el anlisis de cada componente por separado es bastante sencillo y proporciona datos ms precisos, las pruebas individuales han sustituido al global casi por completo. La urea es el principal producto nitrogenado de desecho del metabolismo de las protenas y slo se sintetiza en el hgado. Su concentracin es igual en todos los lquidos corporales, con excepcin de la sangre entera debido a la diferencia de valores que existe entre el suero y los eritrocitos. Por lo tanto, se prefiere el suero o plasma a la sangre entera para analizar el nitrgeno de urea. Las determinaciones de urea y creatinina en suero son dos de los estudios ms solicitados para detecta la capacidad del rin para excretar desechos metablicos. La elevacin de estos valores s e emplea, junto con otros, como indicador de la necesidad de dilisis en pacientes con insuficiencia renal crnica. La interpretacin de los valores del nitrgeno de urea exige el conocimiento de la ingestin de protena exgena y de lquidos, y las condiciones que pueden incrementar la produccin endgena (por ejemplo: la actividad muscular, un traumatismo, la infeccin de una dieta muy restringida, el ayuno o la inanicin). Cualquiera de estas variables pueden aumentar la concentracin sangunea o urinaria que en si mismo no es un reflejo real de la depuracin renal de urea. Pueden usarse dos pruebas, con las debidas precauciones e la interpretacin, como indicadores aproximados de mejora o deterioro de la funcin renal del individuo. Aunque las determinaciones de urea es mucho menos especfica que de la creatinina srica, es de uso comn, particularmente en pediatra, como una prueba de rutina para la funcin renal y para conocer algo sobre el estado de hidratacin del individuo. Grados menores de disfuncin renal requieren anlisis ms sostificados como las pruebas de depuracin. UREA COMO PRODUCTO FINAL EN EL SER HUMANO Un ser humano moderadamente activo que consume cerca de 300 g de carbohidratos, 100 g de grasa y 100 g de protenas diariamente, debe excretar aproximadamente 16.5 g de nitrgeno al da, 95% en al orina y 5% en las heces. Para las personas que consumen dietas occidentales, la urea sintetizada ene l hgado, liberada hacia la sangre y depurada por los riones, constituye de 80-90% del nitrgeno excretado. FORMACIN DE LA UREA La sntesis de un mol de urea requiere de tres moles de ATP, un mol de amoniaco y el nitrgeno de alfaamino del aspartato. Enzimas que catalizan las reacciones:1. Carbamoil fostafo sintasa I2. Orinitin transcabamoilasa3. Arginasa4. Argininosuccinasa5. Acido argininosuccnico sintasa De los seis aminocidos participantes el N-acetilglutamato funciona nicamente como un activador enzimtico. Los dems sirven como portadores de tomos que en ltima instancia se convierten en urea. En los mamferos, la funcin principal de la ornitina, la citrulina y al argininosucinato est en la sntesis de urea. La biosntesis de urea es un proceso cclico. La

ornitina consumida en la reaccin es degenerada en la reaccin5 y no hay prdida ni ganancia total de ornitina, citrulina, argininosuccinato o arginina. Sin embargo el ion amonio, CO2 y ATP y aspartato s se consumen, algunas reacciones de la sntesis de urea tiene lugar en la matriz mitocondrial en tanto que otras se realizan en el citosol FISIOLOGA La urea se forma a travs de un proceso de degradacin protenica, la protena se transforma a partir de aminocidos en amoniaco (desaminacin oxidatixa), como un producto final y de ah en urea (ciclo de la ornitina) dentro del hgado. Debido a que el organismo no utiliza urea, es trasportada en la sangre hasta que es excretada por va urinaria. Sus concentraciones varan fisiolgicamente, dependiendo de una manera directa del consumo de protenas en la dieta (exgeno) y del estado de hidratacin (proporcin de soluto a solvente ene l cuerpo), o de modo indirecto por al tasa del catabolismo tisular (rpida degradacin corporal, que incrementa el desperdicio de nitrgeno), o por la tasa de anabolismo tisular (disminucin de las concentraciones por un mayor ndice de construccin tisular, como sucede durante al gestacin o convalecencia. La urea se excreta en el filtrado glomerular y se reabsorbe (probablemente por difusin) en el tbulo de la neurona. Slo se excreta una fraccin de todo el material de desperdicio contenido en el filtrado glomerular, pero a causa de que la urea se reabsorbe en los tbulos de manera deficiente, se reabsorbe poca urea, esto es un efecto benfico.

EN ANLISIS CLNICOS La urea Es el principal metabolito de las protenas. Los valores oscilan entre 16 y 45 mg/dl. Se suele expresar como BUN o nitrgeno ureico sanguneo (urea = BUN x 2,146). Se cuantifica mediante una prueba espectrofotomtrica cintica.

Su aumento puede ser debido a un incremento importante del aporte proteico, a aumento del catabolismo proteico, a disminucin de la perfusin renal (shock, deshidratacin, insuficiencia cardiaca, sndrome hepatorrenal), a insuficiencia renal parenquimatosa aguda o crnica o a insuficiencia renal postrenal por obstruccin. Aunque la urea sangunea es un parmetro muy utilizado en la valoracin de la funcin renal, es poco sensible, ya que slo se eleva cuando se ha perdido ms de la mitad de la funcin renal, y no demasiado especfica. La urea sangunea disminuye en situaciones de hemodilucin y en la insuficiencia heptica, ya que se sintetiza en el hgado. La uremia es mejor evaluada en conjunto con la creatinina. Tanto en la azotemia prerenal y postrenal el BUN est ms elevado que la creatinina. Sin embargo en el 88% de los nios deshidratados por gastroenteritis quienes presentan una acidsis metablica presentan concentraciones de BUN < de 18 mg/dl. En la enfermedad renal progresiva crnica, cerca del 75% del parmquima renal es destruido antes de que se desarrolle la azotemia. El nitrgeno ureico refleja el radio entre la produccin de urea y su depuracin. El BUN aumentado puede ser debido al aumento o disminucin de la produccin de excrecin. A pesar de que la creatinina es considerada la prueba ms especfica para evaluar la funcin renal, se utilizan la mayora de las veces juntos. Valores normales: 16-45 mg /dl Preparacin del paciente: ayuno de 8 hrs Muestra: Suero o plasma. Metodologa: Espectrofotometra

NTERFERENCIAS: Se puede reducir el nivel del BUN si se combina con una dieta con pocas protenas y abundantes carbohidratos. El BUN normalmente es bajo en nios y mujeres debido a que en su masa muscular es menor que la del varn adulto. Al final del embarazo y durante al lactancia el BUN se eleva ya que aumentan el uso de protenas. Los ancianos pueden padecer BUN elevado cuando su rin no concentra al orina de manera adecuada. Al principio del embarazo el BUN puede disminuir tambin por hidremia fisiolgica.

2. PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO

MEZCLAR 1 ml DE REACTIVO SALICILATO + 1 GOTA DE SUSPENSION DE UREASA PREPARAE EL VOLUMEN DE REACTIVO NECESARIO MENTENIENDO LA PROPORCION.

MUESTRA: SUERO

EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de leer absorbancias a 600 nm ( rango 580 620 nm)

TCNICA:
Estndar(ml) Muestra(ml) Reactivo de trabajo ( ml) Blanco ----------------------------------1,00 Estndar -----------0,10 1,00 Muestra --------------------------1,00

INCUBAR 10 MINUTOS A TEMPERATURA AMBIENTE A 3 MINUTOS A 37C AGREGAR A CADA TUBO REACTIVO HIPOCLORITO 1.00 1.00 1.00

Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente a 5 minutos a 37C leer las observaciones dentro del plazo de una hora.

3. CALCULOS

PARA EXPRESAR LOS VALORES OBTENIDOS COMO NITROGENO UREICO (mg/dl) MULTIPLICAR EL VALOR OBTENIDO POR 0,455

4. RESULTADOS:
ABSORBANCIA ESTNDAR: 0,198 NOMBRE SEXO EDAD TALLA IMC ABSORBANCIA UREA SANGRE

Agustn Mauro

Masculino

25

70 75

1,62 1,70

0.048 0.043

masculino 32

Para AGUSTIN

=0,048 X = 16 = 16 X 0,455 = 7, 28 mg/dl

Para MAURO : =0,043 X = 14, 33 X 0,455 = 14, 33 = 6, 52 mg/dl

NOMBRE Agustn Mauro O

UREA EN SANGRE (mg/dl) 16 14,33

NOMBRE Agustn Mauro

NITROGENO (mg/dl) 7, 28 6, 52

UREICO

RANGOS DE REFERENCIA: SANGRE Urea Nitrogeno ureico ORINA Urea Nitrogeno ureico INFERENCIA ESTADISTICA 15 A 30 mg/dl 7 A 14 mg/dl 10 A 50 mg/dl 4,5 A 22,7 mg/dl

UREA EN SANGRE mg/dl

8 7 6 5 4 3 2 1 0 1 2

NITROGENO UREICO

7.4 7.2 7 6.8 6.6 6.4 6.2 6 1 2

5. CONCLUSIONES:

En esta prctica se logr hacer la determinacin de urea (la cual es el resultado final del metabolismo de las protenas) en suero (debido a que si se utiliza la sangre entera, es decir plasma + suero, en estos hay una gran diferencia de valores que existe entre el suero y los eritrocitos, por lo que se prefiere el suero o en su defecto el plasma para esta determinacin) mediante una reaccin colorimtrica. Tambin con la prctica se logr observar como para cada anlisis se deben realizar los procedimientos adecuadamente y de la forma determinada para cada anlisis para que no tengamos discrepancias en nuestros resultados como ocurri con las muestras de orina. Ya que ninguno de los sujetos a prueba present datos de urea elevada se pueden descartar entonces casos de uremia y por lo tanto de enfermedades renales, insuficiencia cardaca, hemorragias gstricas hipovolemia y obstrucciones renales. En el caso del dato que fue eliminado por su baja concentracin de urea, no es de gran importancia clnica ya que la urea no es una sustancia necesaria para el funcionamiento del organismo y segn la literatura se ha sugerido que una concentracin disminuida de nitrgeno de urea puede ser signo de un pronstico favorable, debido a que indica una funcin renal normal con excrecin adecuada.

6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Ballcells, G.A. La clnica y el laboratorio 18 Edicin, Editorial Masson, Mxico, 2001. Fisbach, T.F. Manual de pruebas diagnosticas, 5 Edicin, Editorial McGrawhill interamericana, Mxico, 1997. Govantes, B.J. Dr, Lorenzo, V.P Dr, Manual Normon, 8 Edicin, Editorial laboratorios Normon S.A, Departamento de publicaciones cientficas, Espaa, 2007. Koolman, Color Atlas of Biochemistry, 2nd edition 2005 Thieme Murray, R.K, Bioqumica de Harper, 14 Edicin, 2 reimpresin, Editorial el manual moderno, Mxico, 1997.

CUESTIONARIO:
1. DEFINIR TRANSAMINACIONES, AMINACION Y DESAMINACION TRANSAMINACIONES La reaccin qumica de transaminacin puede referirse a dos tipos de reaccin. La primera es la reaccin entre un aminocido y un alfa-cetocido, en la que el grupo amino es transferido de aquel a ste, con la consiguiente conversin del aminocido en su correspondiente alfa-cetocido. Despus de la formacin de glutamato, ste transfiere su grupo amino directamente a una variedad de alfacetocidos por varias reacciones reversibles de transaminacin: donacin libremente reversible de un grupo amino alfa de un aminocido al grupo ceto alfa de un alfa-cetocido, acompaado de la formacin de un nuevo aminocido y un nuevo alfa-cetocido. AMINACION Aminacin es el proceso de introducir el grupo amino (NH2) dentro de un compuesto orgnico, por ejemplo, la produccin de anilina (C6H5NH2) mediante la reduccin de nitrobenceno (C6H5NO2) en fase liquida (Fig. 1) o en fase vapor en un reactor de lecho fluidizado . Por muchas dcadas, el nico mtodo de colocar un grupo amino en un grupo aril implicando adicin de un grupo nitro (NO2), luego reduccin al grupo amino (NH2). DESAMINACION Degradacin de un aminocido, caracterizado por la prdida del radical amino (NH2), con formacin de un cido cetnico y de amoniaco. Es una de las fases de la digestin de materias albuminoides. 2. DESCRIBIR CICLO DE UREA 1. El primer grupo amino que ingresa al ciclo proviene del amonaco libre intramitocondrial. El amonaco producido en las mitocondrias, se utiliza junto con el bicarbonato (producto de la respiracin celular), para producir carbamoil-fosfato. Reaccin dependiente de ATP y catalizada por la carbamoil-fosfato-sintetasa I. Enzima alostrica y modulada (+) por el Nacetilglutamato. 2. El carbamoil-fosfato cede su grupo carbamoilo a la ornitina, para formar citrulina y liberar Pi. Reaccin catalizada por la ornitina transcarbamoilasa. La citrulina se libera al citoplasma. 3. El segundo grupo amino procedente del aspartato (producido en la mitocondria por transaminacin y posteriormente exportado al citosol) se condensa con la citrulina para formar argininosuccinato. Reaccin catalizada por la argininosuccinato sintetasacitoplasmtica. Enzima que necesita ATP y produce como intermediario de la reaccin citrulil-AMP.

4. El argininosuccinato se hidroliza por la arginino succinato liasa, para formar arginina libre y fumarato. 5. El fumarato ingresa en el ciclo de Krebs y la arginina libre se hidroliza en el citoplasma, por la arginasa citoplasmtica para formar urea y ornitina. 6. La ornitina puede ser transportada a la mitocondria para iniciar otra vuelta del ciclo de la urea. En resumen, el ciclo de la urea consta de dos reacciones mitocondriales y cuatro citoplasmticas

3. DETERMINAR LAS CAUSAS DEL INCREMENTO DE LA UREA EN SUERO O PLASMA Y EN LA ORIN Su aumento puede ser debido a un incremento importante del aporte proteico, a aumento Del catabolismo proteico, a disminucin de la perfusin renal (shock, deshidratacin, insuficienc

iacardiaca, sndrome hepatorrenal), a insuficiencia renal parenquimatosa aguda o crnica o ainsuficiencia renal postrenal por obstruccin.

4. CUANDO LA FUNCION RENAL ES NORMAL, EL ORIGEN DE EL AUMENTO DE UREA EN LA SANGRE A QUE CAUSAS PUEDE DEBERSE Exceso de glucosa en la sangre Aumentado: Allopurinol, aminocidos, anfotericina B, captotril, carbamacepina, cimetidina, aspirina, cisplatino, ciclosporina, furosemida, gentamicina, neomicina, tetraciclina, hidroclorotiazida, interleukina 2, pentamidina, tertratolol, ketoprofeno.

5. DEFINIR UREMIA Urea alta neuroptica y urolgica (uremia renal y posrenal). La hiperazotemia es el signo humoral ms simple de la insuficiencia renal orgnica y constituye la uremia geninua en clnica. Pero hay que tener bien clara la idea de que no toda la urea alta significa uremia ni nefropata, muchas veces la elevacin de la urea obedece a causas extrarrenales. UREMIA AGUDA Va acompaada de anuria o oliguria con orina densa. Aunque rpidamente se alcanzan cifras muy altas o muy altas de urea, el cuadro es, a veces irreversible. En la glomerulonefritis aguda en la que, a diferencia de la crnica, la reaccin xantroproteica es normal, pues salvo la anuria absoluta no existe retencin de sustancias aromticas. En la nefropata anrica (nefrosis de neurona distal, anuria traumtica, etc), el en shock, necrosis muscular isqumica, shocks hemolticos o transfusionales. En la nefrosis necrotizante por el sublimado y otros txicos. UREMIA CRONICA Con una cantidad normal de orina o con poliuria compensadora. La orina tiene una densidad densa. Corresponde a lesiones renales avanzadas e irreversibles, de ah la razn pronostica para separar este grupo del anterior.

En la glomrulonefritis crnica, aqu la reaccin xantoproteica de cifras altas. En la esclerosis renal primaria o secundaria. En las nefropatas quirrgicas (hidronefrosis, tuberculosis renal, pielonefritis, rin poliqustico, etc.) En la nefropata calcra de la ostetis fibrosis qustica avanzada, tambin en el mieloma mltiple se observa a menudo insuficiencia renal, en un caso neutro, la retencin ureica alcanz 360 mg.

6. CUALES SON LAS CAUSAS DE LA INSUFICIENCIA AGUDA Es un sndrome clnico caracterizado por la disminucin rpida de la TFG, la retencin de productos de desecho nitrogenados en sangre (hiperazoemia) y la alteracin del equilibrio hidroelectroltico y cido-bsico, adems puede estar acompaado por oliguria o anuria. Por lo general la IRA es asintomtica, y se diagnostica cuando un examen de laboratorio revela aumento de urea y creatinina en plasma. La mayora de las IRA son reversibles, gracias a que el rin es un rgano que puede recuperarse considerablemente de una perdida casi completa de su funcin. Dependiendo de la causa que lleva a la IRA se clasifica en: prerrenal (debido a una hipoperfusin renal), intrnseca (enfermedad renal parenquimatosa) yposrenal (obstruccin del flujo de orina distal al parnquima renal). 7. MENCIONAR LAS CAUSAS DE LA INSUFICIENCIA RENAL CRONICA La enfermedad renal crnica (ERC), anteriormente conocida como insuficiencia renal crnica (IRC), es una prdida progresiva (por 3 meses o ms) e irreversible de las funciones renales, cuyo grado de afeccin se determina con un filtrado glomerular (FG) <60 ml/min/1.73 2 1 m . Como consecuencia, los riones pierden su capacidad para eliminar desechos, concentrar 2 la orina y conservar los electrolitos en la sangre. Los sntomas de un deterioro de la funcin renal son inespecficos y pueden incluir una sensacin de malestar general y una reduccin del apetito. A menudo, la enfermedad renal crnica se diagnostica como resultado del estudio en personas en las que se sabe que estn en riesgo de problemas renales, tales como aquellos con presin arterial alta o diabetes y aquellos con parientes con enfermedad renal crnica. La insuficiencia renal crnica tambin puede ser identificada cuando conduce a una de sus reconocidas complicaciones, como las enfermedades cardiovasculares, anemia o pericarditis.

8. DESCRIBIR EL FILTRADO GLOMERULAR Y LA REABSORCION DE LA UREA EN EL GLOMERULO Capa que reviste al Glomrulo, la cual est constituida por tres capas. Una capa densa media, llamada lmina densa, formada por colgena del tipo IV. A cada lado de la lmina densa estn unas capas electrndensas, las lminas raras, las q contiene laminina, fibronectina y proteoglucano. Los cuales ayudan a los pedculos y a las clulas en doteliales a conservar su insercin contra la lmina densa. 9. PORQUE LA DIABETES ES CAUSA DE LA ELEVACION DE UREA EN LA SANGRE Debido a las alteraciones que se producen en la estructura renal en los pacientes diabticos, la funcin depuradora de la sangre que lleva a cabo este rgano se van deteriorando de forma progresiva, produciendo un aumento constante de las cifras de urea en sangre y una prdida progresiva de protenas a travs de la orina. Esto da lugar a una hipoalbuminemia, o disminucin de protenas y la consiguiente aparicin de edemas (retencin de lquidos). Despus de un perodo de aos, aparece el cuadro clnico completo, con hipertensin, edemas perifricos importantes y uremia (aumento de la urea en sangre). Algunas complicaciones, como el infarto de miocardio, la insuficiencia cardaca, los accidentes cerebrales, la neuropata (lesiones en nervios perifricos) y la enfermedad vascular perifrica agravan el problema.

La eliminacin de albmina en la orina es uno de los signos fundamentales que nos va a permitir predecir el grado de lesin renal. Cuanto mayor es la tasa de excrecin de albmina, mayor valor tiene como factor predictivo de la aparicin posterior de nefropata clnica, siempre que se excluyan otras causas que pueden provocarla (mal control de la diabetes, hipertensin, infecciones, ejercicio La prevalencia de nefropata en los diabticos insulino dependientes aumenta con la duracin de la enfermedad. Muestra un predominio del sexo masculino. El 45 % de todos los pacientes con DMID desarrollan nefropata clnica. La nefropata diabtica es una complicacin grave y es la causa de muerte del 25 % de todos los DMID. Durante los primeros aos de DMID se puede encontrar microalbuminuria (albmina en orina solo detectable mediante anlisis especifico) si se busca. Despus de 15 aos aparece la macroalbuminuria (albmina detectable mediante un anlisis normal de orina), que al principio puede ser intermitente y/o provocada por el ejercicio. Posteriormente, la albuminuria es persistente y aumenta de intensidad. Los pacientes con una proteinuria de aparicin tarda mostraron una supervivencia inferior a la de los pacientes con proteinuria de aparicin precoz, lo que puede reflejar una heterogeneidad de la nefropata diabtica. La funcin renal puede permanecer normal durante aos y, posteriormente, empieza a disminuir. La ausencia de otras complicaciones diabticas, sobre todo de la retinopata, sugiere que la diabetes puede no ser la causa de la insuficiencia renal. El control estricto de la DM y de la hipertensin puede enlentecer la progresin inevitable hacia la insuficiencia renal terminal. Los requerimientos de insulina disminuyen, porque tambin disminuye el catabolismo (eliminacin metablica) renal de la insulina. En los pacientes tratados con antidiabticos orales, estos medicamentos deben sustituirse por insulina cuando aparece la insuficiencia renal, para evitar los fenmenos de acumulacin. Una vez establecida la insuficiencia renal, la eleccin se sita entre la dilisis y el trasplante. Las infecciones urinarias se dan con ms frecuencia en los diabticos que en la poblacin general. Esta disparidad es ms aparente que real, debido, en cierto modo, a la frecuencia con que se realizan anlisis de orina los diabticos. Las infecciones son a menudo graves. Debido al riesgo de infecciones graves, slo se debe realizar un sondaje vesical a diabticos cuando existen razones que lo justifiquen. El tratamiento es el convencional, aunque es necesario que dure ms para lograr la curacin completa. Es fundamental realizar exmenes frecuentes para detectar recadas y recurrencias. Debido a las alteraciones que se producen en la estructura renal en los pacientes diabticos, la funcin depuradora de la sangre que lleva a cabo este rgano se van deteriorando de forma progresiva, produciendo un aumento constante de las cifras de urea en sangre y una prdida progresiva de protenas a travs de la orina. Esto da lugar a una hipoalbuminemia, o disminucin de protenas y la consiguiente aparicin de edemas (retencin de lquidos). Despus de un perodo de aos, aparece el cuadro clnico completo, con hipertensin, edemas perifricos importantes y uremia (aumento de la urea en sangre). Algunas complicaciones, como el infarto de miocardio, la insuficiencia cardaca, los accidentes cerebrales, la neuropata (lesiones en nervios perifricos) y la enfermedad vascular perifrica (ver arterioesclerosis de las extremidades), agravan el problema. La eliminacin de albmina en la orina es uno de los signos fundamentales que nos va a permitir predecir el grado de lesin renal. Cuanto mayor es la tasa de excrecin de albmina, mayor valor tiene como factor predictivo de la aparicin posterior de nefropata clnica, siempre que se excluyan otras causas que pueden provocarla (mal control de la diabetes, hipertensin, infecciones, ejercicio )La prevalencia de nefropata en los diabticos insulino dependientes aumenta con la duracin de la enfermedad. Muestra un predominio del sexo masculino.El 45 % de todos los pacientes con DMID desarrollan nefropata clnica.La nefropata diabtica es una complicacin grave y es la causa de muerte del 25 % de todos los DMID.Durante los primeros aos de DMID se puede encontrar microalbuminuria (albmina en orina solo detectable mediante anlisis especifico) si se busca. Despus de 15 aos aparece la macroalbuminuria (albmina detectable mediante un anlisis normal de orina), que al principio puede ser intermitente y/o provocada por el ejercicio. Posteriormente, la albuminuria es persistente y aumenta de intensidad.