CIENCIA 17(3), 211 - 224, 2009 Maracaibo, Venezuela

Calidad bacteriolgica de las aguas embotelladas comercializadas en la Isla de Margarita (Venezuela) durante 2002-2008
Mara M. Iriarte R.*
Fundacin La Salle de Ciencias Naturales. Campus de Margarita

Recibido: 22-06-09 Aceptado 01-09-09

Resumen
En el Estado Nueva Esparta se prefiere el agua embotellada comercialmente, pues la suministrada por la red de distribucin, en ocasiones presenta turbiedad, olores y sabores extraos. Para establecer si la calidad (recuentos bacterianos y pH) de las aguas envasadas (potable, mineral, mineral natural y mineral con gas) cumplan con la norma venezolana, desde 2002 a 2008 se analizaron 462 botellas (154 lotes) de procedencia nacional (insular y de tierra firme) e importada. Se determinaron coliformes totales, Pseudomonas aeruginosa y pH segn normas COVENIN y coliformes fecales, Escherichia coli, estreptococos fecales, enterococos y recuentos de hetertrofos aerobios segn APHA et al, 1992. El 6,8% (24/354) de las aguas nacionales no eran aptas para su consumo por contener coliformes. De las muestras insulares con coliformes totales, 3,8% eran de aguas minerales y 4,6% potables; con coliformes fecales, 2,5% pertenecan a aguas minerales y 1,3% a potables; con P. aeruginosa, 52,3% eran aguas minerales y 27,0% potables y con pH inferior a 6,50, 42,2% eran de aguas minerales y 1,3% potables. En las de tierra firme, se encontraron coliformes totales en 3,4% de las aguas minerales; P. aeruginosa (35,0% en aguas minerales; 32,5% en minerales naturales y 3,4% en potables) e incumplimiento en pH en 15,4% de aguas minerales; 10,3% de minerales naturales y 5,1% de potables. En 30,6% de las aguas minerales naturales importadas se hall P. aeruginosa y en 16,7% el pH no acat el requisito. En ninguna de las 462 botellas se detect estreptococos fecales, enterococos ni E. coli. El tipo de agua con mejor calidad microbiolgica fue la carbonatada. La prueba de Kruskal Wallis refleja que los resultados obtenidos dependen (p < 0,05) de la procedencia y de los tipos de agua y que los valores microbiolgicos y de pH difieren entre las marcas comerciales evaluadas. Palabras clave: agua envasada, monitoreo bacteriolgico, coliformes, Pseudomonas aeruginosa, recuento de hetertrofos aerobios, Venezuela.

Bacteriological quality of bottled waters sold in Margaritas Island (Venezuela) during 2002-2008
Abstract
In Nueva Esparta State (Venezuela), people prefer bottled water because of suspicion of tap water due the turbidity and unpleasant odors and flavor. To asses if bottled water quality (potable, mineral, natural mineral and mineral with gas) in bacteriological counts and pH de* Autor para la correspondencia: miriarte2000@yahoo.es

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terminations fulfill Venezuelan normative 462 sample units (154 lots) were analyzed: domestic origin (island and mainland) and also imported products. Samples were collected from the factory and the supermarket and total coliforms, Pseudomonas aeruginosa and pH were determined according to COVENIN, Venezuelan norms, and faecal coliforms, Escherichia coli, faecal streptococcaceae, enterococcus and heterotrophic organisms plate counts in accordance with APHA et al, 1992. The 6.8% (24/354) of domestic origin (island and mainland) bottled water is not apt because of the presence of coliforms. There were total coliforms in samples of island origin (3.8% was mineral water and 4.6% potable water). Also fecal coliforms (2.5% in mineral water and 1.3% in potable water); P. aeruginosa (52.3% in mineral water and 27.0% in potable water) and pH values lower than 6.50 (lowest limit recommended) in the 42.2% in mineral water and 1.3% in potable water. On the other hand, total coliforms were detected in mineral water (3.4%) in bottles from the mainland; P. aeruginosa (35.0% in mineral water; 32.5% in mineral natural and 3.4% in potable water) and pH values under the inferior limit of 15.4% of mineral water, 10.3% of natural mineral water and 5.1% of potable water. Imported bottled water presented the lowest non observance (only P. aeruginosa in 30.6% and 16.7% in pH values of mineral natural water). In none of the 462 bottles, faecal streptococcus, enterococcus or E. coli were detected. The type of water with the best bacteriological quality was carbonated water. The study of statistical variation of data through the Kruskal Wallis test shows that the obtained results (p < 0,05) depend on the place where water was bottled, the type of water, and that commercial trademarks differ in the results of microbiological tests and pH values. Key words: bottled drinking water, bacteriological monitoring, coliforms, Pseudomonas aeruginosa, heterotrophic plate count, Venezuela.

Introduccin
El consumo de agua mineral envasada es popular en Venezuela, al igual que en otros pases, debido a la creencia de que es superior al agua de grifo y no contiene microorganismos (1), adems de no presentar sabores y olores desagradables. De hecho, la ausencia de cloro residual (y su sabor caracterstico) es una de las estrategias promocionales que utilizan las industrias envasadoras (2). Otros aspectos para preferirla son los efectos teraputicos positivos que aportan sus minerales (3), el acceso limitado de agua potable cuando se viaja (4), y la irregularidad del suministro de agua potable por la redes de distribucin. Es notorio que mientras en algunos pases se puede optar entre beber agua envasada o de la red de distribucin, solo considerando su costo o su sabor, en vez de su grado de potabilidad, en otros, escoger agua envasada representa una alternativa ms saludable (5).

El agua mineral natural se origina de pozos que son ecosistemas oligotrficos con niveles limitados de materia orgnica y de bio-disponibilidad (6). Un acufero ideal debe ser profundo, con pocas grietas o fisuras en la roca que lo contiene, para que no penetren contaminantes y permita largos tiempos de permanencia, ya que en el caso de utilizarse acuferos poco profundos es necesario proteger el rea de captacin de una probable contaminacin humana y agrcola (5) y realizar monitoreos del agua a intervalos regulares (4). La composicin qumica del agua, al emerger de sus fuentes subterrneas, est condicionada por la naturaleza del estrato de roca a travs del cual percola el agua de lluvia. Por tanto, el agua resultante es un reflejo de la geologa del rea; por ejemplo, piedra caliza aportar calcio, rocas gneas, sodio y magnesio (7). El agua subterrnea tiene un contenido de nutrientes orgnicos bajo, que no fa-

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vorece la multiplicacin de microorganismos; sin embargo, en estos hbitats oligotrficos existe una flora microbiana natural de bacterias autctonas (7, 8). Estas poblaciones son heterotrficas y se encuentran en un estado de inanicin-supervivencia como resultado de la escasa cantidad de nutrientes. Por esta razn suelen ser viables pero no cultivables (6). Por otra parte, la contaminacin potencial de los acuferos con patgenos entricos constituye un riesgo para la salud pblica; por tanto, existe una legislacin con los parmetros de calidad requeridos, entre ellos regulaciones con los lmites de microorganismos especficos (8). Varios tipos de aguas se ofrecen envasadas al consumidor. Uno de estos es la potable, que proviene de fuentes superficiales o profundas, y normalmente se somete, o no, a tratamiento con el fin de hacerla apta para el consumo humano. Otra es la mineral, que emana directamente de acuferos profundos de manera natural se obtiene por perforacin sin contaminacin. Este tipo de agua se puede someter a un tratamiento fsico con el fin de mantener sus caractersticas microbianas originales. Igualmente, se les puede aplicar tratamientos permitidos para modificar, en forma parcial, las caractersticas organolpticas, fsicas y qumicas. Otro tipo es la denominada mineral natural, la cual se define como la anterior pero esta agua no recibe ningn tratamiento. Por ltimo, existe la mineral gasificada que contiene anhdrido carbnico libre, natural o adicionado, hasta una cantidad no mayor de 5 volmenes de CO2 disuelto y un pH correlacionado al mismo entre 4,50 y 7,50 (9). Las aguas envasadas presentan una microflora autctona o natural que no suele ser peligrosa para la salud (10). Estas bacterias autctonas se adaptan bien a las condiciones oligotrficas del acufero profundo (11). La microflora autctona comprende microorganismos aerobios y psicrotrficos que se multiplican inmediatamente despus del envasado, al pasar de un sistema abierto

(manantial) a otro cerrado (interior de la botella). Las bacterias autctonas sobreviven en agua envasada por varios aos y presentan un crecimiento secundario al morir algunas especies y servir de nutrientes para la multiplicacin de otras (12). Por otra parte, las aguas envasadas presentan tambin una microflora alctona adicionada en el embotellado, manipulacin y transporte. Esta flora alctona raramente se multiplica debido a sus exigencias nutritivas mayores. Entre las bacterias alctonas estn las mesfilas Gram , por ejemplo, especies del gnero Pseudomonas, en especial P. aeruginosa (13). Tambin las aguas pueden ser vehculo de patgenos entricos, tales como Aeromonas, Campylobacter, Escherichia, Salmonella, Shigella, Vibrio, Yersinia, parsitos y virus. Aunque la dosis infectiva de los patgenos oportunistas vara con las especies y los consumidores, sta podra ser bastante baja cuando son ingeridos con el agua entre comidas, particularmente por poblaciones vulnerables tales como mujeres embarazadas, ancianos, nios y personas enfermizas (14). Despus del proceso de envasado, las botellas permanecen almacenadas por semanas o meses. El tratamiento de desinfeccin que se aplica a algunos tipos de aguas no es sinnimo de esterilizacin y cualquier bacteria presente se adhiere a las paredes del envase y se multiplica a expensas de trazas de materias orgnicas presentes. Esta multiplicacin vara entre las marcas, dependiendo de la fuente de agua (1), de la contaminacin que tengan los equipos utilizados para bombear el agua hasta el lugar de envasado, del tipo y tamao de las botellas y sus tapas, de la exposicin al aire, del contacto con personas y animales durante el envasado (15) y de los mtodos de almacenamiento despus del embotellado (5). Por lo tanto, el agua envasada, al igual que cualquier otro producto alimenticio, se debe procesar, empacar, etiquetar, transportar y almacenar de una forma segura y sanitaria (16). A nivel de consumidor la aparicin de

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contaminantes depende del volumen de las botellas, pues en las de mayor capacidad, aumenta la probabilidad de contaminacin, debido a que permanecen abiertas durante ms tiempo (10). En Nueva Esparta, la produccin y consumo de agua envasada ha aumentado en los ltimos aos. Existe desconfianza hacia las aguas suministradas por la red de distribucin, debido a la presencia de turbiedad, olores y sabores desagradables, sobretodo en poca de lluvia en las zonas donde se encuentran los embalses de Clavellinos y Turimiquire de donde proceden estas aguas (17). Por lo anterior, se incluyen las aguas envasadas en la programacin regular del Convenio entre Fundacin La Salle de Ciencias Naturales, el Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel y CORPOSALUD para el control y vigilancia de alimentos y bebidas. En un perodo que abarc 7 aos (2002-2008) se captaron y realizaron anlisis bacteriolgicos a muestras de agua envasada potable, mineral, mineral natural y mineral gasificada procesadas en Venezuela (regin insular y en tierra firme) e importada a travs del Puerto Libre. La finalidad fue establecer si la calidad de estas bebidas, en trminos de recuentos bacterianos y pH, cumplan con la norma venezolana de agua envasada y determinar si los productos eran similares o diferan segn su procedencia, tipo de agua o marca comercial.

Metodologa
El personal del Dpto. de Higiene de Alimentos (CORPOSALUD) del Estado Nueva Esparta recogi las muestras a nivel de empresas embotelladoras, pero la mayora se captaron en los puntos de venta, por lo que no fue posible controlar el tiempo transcurrido tras el envasado. Las muestras venan en diferentes tipos de envases: plstico o vidrio, transparentes o con color y diversidad de volmenes. Los lugares de muestreo y marcas comerciales dependieron de la programacin regular de los inspectores de Higiene de los Alimentos. La informacin sobre los ensayos analticos se extrajo de los Libros de Certificado de Ensayo del Laboratorio de Microbiologa perteneciente al Dpto. de Control de Calidad-EDIMAR (18) y abarcaban un perodo de tiempo entre los aos 2002 a 2008. La Tabla 1 muestra la procedencia y el tipo de las aguas analizadas. Cada muestra comprenda 3 unidades; y en total, se analizaron 462 unidades (botellas). Antes de abrir cada botella, se agitaba completamente por unos 30 segundos, voltendola sucesivamente en ejes verticales y horizontales. Los anlisis realizados a cada unidad fueron: recuentos de unidades formadoras de colonias (UFC mL1) de organismos hetertrofos aerobios a 35C (19 y 20); determinacin del nmero ms probable

Tabla 1 Tipo y procedencia de muestras de aguas envasadas analizadas durante los aos 2002-2008 Procedencia Marcas Muestras Unidades Potable Nacional (regin insular) Nacional (tierra firme) Importada Totales 11 9 18 38 79 39 36 154 237 117 108 462 75 21 96 Tipos de agua Mineral 162 57 3 222 MineralNatural 39 84 123 Mineral con Gas 21 21

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(NMP 100 mL1) de coliformes totales (21); coliformes fecales, Escherichia coli, estreptococos fecales, grupo enterococos (19); Pseudomonas aeruginosa (22); medicin de pH (23) y apariencia segn los criterios de transparencia o presencia de turbiedad; ausencia de color o presencia del mismo y ausencia de olor o presencia del mismo. La data fue comparada con los requisitos microbiolgicos establecidos para agua potable envasada (9) y organismos hetertrofos aerobios segn las Normas Sanitarias de Calidad del Agua Potable (24), determinndose los valores de incumplimiento con las normas, tanto la distribucin absoluta como la porcentual (%). Para los clculos matemticos, los valores superiores o inferiores al rango de sensibilidad de las pruebas, se disminuyeron de < 2,2 (NMP 100 mL1) a 2,1 y aumentaron a 17, cuando el resultado fue de 16 (NMP 100 mL1). Posteriormente se transformaron en logaritmos base 10. Las pruebas estadsticas se apoyaron en el Programa Statgraphic (25). Por no cumplirse con la condicin de homogeneidad de varianzas no se aplic un ANOVA y se utiliz la prueba no paramtrica de Kruskal-Wallis (de una va) (p = 0,05). Se consider la procedencia de las muestras (insular, tierra firme e importada); clasificacin del agua envasada (potable, mineral, mineral natural y mineral con gas) y marcas comerciales (11 insulares; 9 de tierra firme y 18 importadas). Por ltimo, se calcularon los coeficientes de correlacin de Pearson para constatar si, entre los resultados de las variables evaluadas, existan relaciones significativas. De existir la misma, se analiz la tendencia mediante un anlisis de regresin lineal.

mero de muestras que incumplieron los requisitos referidos a coliformes totales, coliformes fecales y Pseudomonas aeruginosa se presentan en las Tablas 2, 3 y 4. Las aguas de procedencia nacional, envasadas en la regin insular (Tabla 2), fueron las que tuvieron mayor porcentaje de incumplimiento de coliformes totales (8,4%), siendo minerales el 3,8% (9/237) y potables el 4,6% (11/237). Este grupo de organismos tambin se detect, en menor proporcin (3,4%) en aguas minerales provenientes de tierra firme (Tabla 3). Por otra parte, en nueve botellas (3,8%) pertenecientes a tres de las 11 marcas envasadas en la regin insular se encontraron coliformes fecales (Tabla 2), 2,5% eran minerales (6/237) y 1,3% (3/237) potables. Estos organismos no fueron aislados en las aguas nacionales envasadas en tierra firme. En las muestras de agua importada no se hallaron ni coliformes totales ni coliformes fecales (Tabla 4). Adems, en ninguna de las 462 unidades de muestra analizadas se detectaron estreptococos fecales, miembros del grupo de los enterococos, ni E. coli. Si el hallazgo de coliformes en aguas indica una potencial contaminacin fecal, la confirmacin de coliformes fecales provee una evidencia convincente de la misma, por lo que la presencia de este tipo de bacterias en el agua de bebida, generalmente se considera inaceptable (26). Escherichia coli es uno de los pocos indicadores bacterianos asociados con contaminacin fecal y por tanto se considera un peligro pblico directo. No as, el grupo de coliformes, particularmente en aguas que han sido sometidas a tratamiento (6), como es el caso de la mayora de las muestras de procedencia regional, pues estas bacterias suelen indicar la efectividad del mismo. Pero si se toma en cuenta el requerimiento de ausencia total de coliformes en agua potable, tal como se especifica en la norma respectiva, los resultados de este estudio muestran que el 6,8% (24/354) de las aguas embotelladas en el pas y comercializadas durante los aos 2002 a 2008

Resultados y discusin
En general, la apariencia de las 462 botellas de agua evaluadas fue catalogada como transparente, inodora e incolora. La distribucin absoluta y porcentajes del n-

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Tabla 2 Distribucin absoluta y porcentual (%) del nmero de muestras de agua envasada de procedencia regional, comercializadas en el Edo. Nueva Esparta, Venezuela (perodo 2002-2008) que presentan coliformes totales, coliformes fecales y Pseudomonas aeruginosa Lotes Nmero de unidades analizadas Nmero de unidades positivas (%) Coliformes Coliformes Pseudomonas Tratamiento sealado totales fecales aeruginosa en etiqueta

Cdigo marca

Tipo de agua

Regional 11 9 10 5 4 5 10 10 6 4 5 79 237 15 2 (13,3) 20 (8,4) 12 6 (50,0) 18 1 (5,6) 30 2 (6,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 2 (16,7) 1 (6,7) 9 (3,8) 30 0 (0,0) 0 (0,0) 15 0 (0,0) 0 (0,0) 12 0 (0,0) 0 (0,0) 15 0 (0,0) 0 (0,0) 13 (86,7) 11 (91,7) 15 (100) 22 (73,3) 21 (70,0) 18 (100) 12 (100) 13 (86,7) 188 (79,3) 30 0 (0,0) 0 (0,0) 21 (70,0) 27 6 (22,2) 6 (22,2) 26 (96,3) 33 3 (9,1) 0 (0,0) 16 (48,5) Fsico Ninguno Fsico-Qumico Fsico Fsico Fsico Fsico L.U.V.-smosis Inversa Ninguno Fsico-Qumico Ninguno

Mineral

Mineral

Mineral

Mineral

Mineral

Mineral

Mineral

Potable

Potable

10

Potable

11

Potable

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Tabla 3 Distribucin absoluta y porcentual (%) del nmero de muestras de agua envasada de procedencia nacional, comercializadas en el Edo. Nueva Esparta, Venezuela (perodo 2002-2008) que presentan coliformes totales, coliformes fecales y Pseudomonas aeruginosa Lotes Nmero de unidades analizadas Coliformes totales Coliformes fecales Pseudomonas aeruginosa Nmero de unidades positivas (%) Tratamiento sealado en etiqueta

Cdigo marca

Tipo de agua

Nacional 1 5 4 4 5 5 5 3 7 39 117 4 (3,4) 21 0 (0) 9 0 (0) 15 0 (0) 15 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 15 0 (0) 0 (0) 12 3 (25,0) 0 (0) 12 1 (8,3) 0 (0) 15 0 (0) 0 (0) 3 0 (0) 0 (0) 0 (0) 6 (40,0) 12 (100) 11 (91,7) 12 (80,0) 15 (100) 14 (93,3) 9 (100) 4 (19,0) 83 (70,9) Ninguno Fsico Ninguno Ninguno Ninguno Filtracin Ninguno Ninguno Ninguno

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Mineral

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Mineral

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Mineral

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Tabla 4 Distribucin absoluta y porcentual (%) del nmero de muestras de agua envasada importada, comercializada en el Edo. Nueva Esparta, Venezuela (perodo 2002-2008) que presentan coliformes totales, coliformes fecales y Pseudomonas aeruginosa Lotes Nmero de unidades analizadas 1 1 2 7 3 1 1 1 3 1 1 2 2 2 1 5 1 1 36 15 3 3 108 3 6 6 6 3 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 3 0 (0) 9 0 (0) 3 0 (0) 3 0 (0) 3 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 9 0 (0) 0 (0) 21 0 (0) 0 (0) 6 0 (0) 0 (0) 3 0 (0) 0 (0) 0 (0) 2 (33,3) 5 (23,8) 5 (55,6) 0 (0) 0 (0) 2 (66,7) 9 (100) 3 (100) 0 (0) 3 (50,0) 0 (0) 2 (33,3) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 33 (30,6) 3 0 (0) 0 (0) 2 (66,7) Coliformes totales Coliformes fecales Pseudomonas aeruginosa Nmero de unidades positivas (%) Tratamiento sealado en etiqueta Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno Ninguno

Cdigo marca

Tipo de agua

Importada

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Mineral-Natural

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Mineral-Natural

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Mineral-Natural

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Mineral-Natural

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Mineral-Natural

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Mineral-Natural

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en el Edo. Nueva Esparta, no fueron aptas para su consumo. Por otra parte, la determinacin de coliformes, en ausencia de E. coli, como se observa en el presente trabajo, puede significar que las fuentes de agua estn afectadas por agua superficial o agua que drena de superficies contaminadas. El estudio de la variacin estadstica de los datos con la prueba de Kruskal Wallis, determin que los niveles de coliformes totales en las aguas envasadas, presentaron diferencias significativas (p < 0,05) segn su origen, ya que un grupo lo conforman las aguas de procedencia insular junto con las de tierra firme y otro grupo, las muestras importadas, en las cuales no se aislaron coliformes. Los resultados de coliformes fecales, tambin presentaron diferencias significativas (p < 0,05) y se constituyeron dos grupos, uno con las muestras de procedencia insular donde fueron detectados y el otro con las aguas provenientes de tierra firme e importada. Aplicando la misma prueba estadstica, pero considerando la clasificacin del agua (potable, mineral, mineral natural y mineral con gas), se determin que las cifras de coliformes totales presentaron diferencias significativas (p< 0,05) formndose dos grupos: uno con los valores de las aguas potables y minerales y el otro con los de minerales naturales y minerales con gas, motivado a que en estos dos ltimos tipos de aguas no se detectaron coliformes. Al considerar las marcas comerciales de acuerdo a su procedencia, tambin se hallaron diferencias significativas (p < 0,05) en los valores medios de coliformes totales y coliformes fecales en las aguas embotelladas en la regin insular; al igual en lo que se refiere a coliformes totales (p < 0,05), en las muestras de agua envasadas en tierra firme, independientemente del tipo de agua. Varias publicaciones reflejan la calidad de las aguas envasadas en diferentes pases. Bharath y otros (27) concluyeron que el 5%

del agua embotellada y comercializada en Trinidad y Tobago era impropia para el consumo humano, debido a la presencia de coliformes totales. Sin embargo, y al igual que en esta investigacin, en las botellas de agua importadas no los detectaron, lo que refleja la adherencia a estndares estrictos de fabricacin en sus pases de origen. El requisito microbiolgico analizado en esta investigacin que present los mayores porcentajes de incumplimiento fue el de P. aeruginosa, con un 79,3% (Tabla 2) en las aguas procesadas en la regin insular (52,3% eran minerales y 27,0% potables); 70,9% (tabla 3) en las de tierra firme (35,0% de aguas minerales; 32,5% minerales naturales y 3,4% potables) y 30,6% (tabla 4) en las minerales naturales importadas. Estos porcentajes son notablemente superiores a los sealados en pases como Trinidad y Tobago, donde se report un porcentaje de deteccin de P. aeruginosa del 7,6% en las aguas domsticas y Alemania, donde un 45% de las aguas carbonatadas o no presentaron Pseudomonas spp, siendo el 13,6% de estos aislamientos Stenotrophomonas maltophilia y Burkholderia cepacia, antiguamente clasificadas como Pseudomonas spp (1). Una razn para monitorear P. aeruginosa (adems de estreptococos fecales y coliformes que no son E. coli) en el agua mineral natural, es por ser indicador de vulnerabilidad de la fuente de agua y/ de un control deficiente del medio ambiente que rodea el lugar donde se embotella (6). En la normativa nacional (9) se especifica que en aguas minerales no est presente. Por el contrario, en las denominadas potables no se hace referencia a la misma. El estudio de variacin de los datos analticos (prueba de Kruskal Wallis) al examinar la procedencia del agua, reflej que los valores de P. aeruginosa constituyeron tres grupos (p < 0,05), uno por cada regin de envasado. En lo que se refiere al tipo de agua, tambin se hallan diferencias (P <

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0,05) y se forman tres grupos: uno con las cifras de las aguas potables y minerales; otro con los valores de las aguas minerales naturales y el tercero, con las de agua carbonatada con gas, donde no fue detectada esta bacteria. Tambin se hallaron diferencias significativas (p < 0,05) en los valores medios de esta bacteria, cuando se comparan entre s las diferentes marcas comerciales, tanto las de procedencia insular, las de tierra firme, as como las importadas, independientemente del tipo de aguas. El que algunos autores sealen que ciertas especies de Pseudomonas se han aislado en el agua del enjuague final de mquinas lavadoras de botellas, advierte el riesgo de contaminacin antes de ser llenadas y puestas en venta (28), pues su posterior multiplicacin durante el almacenamiento, representa un peligro para los consumidores, especialmente para personas dbiles, infantes o ancianas. Por ser un patgeno oportunista, su cantidad se debe limitar tanto como sea posible (6).

En lo que respecta a los recuentos de organismos hetertrofos aerobios, la norma de agua envasada nacional no fija un criterio para evaluarlos (9), quizs debido a que las aguas envasadas no carbonatadas estn naturalmente colonizadas con bacterias a niveles superiores de 106 UFC mL1, pero los consumidores aspiran a que el agua tenga bajos niveles de bacterias (29). Los valores absolutos y en porcentaje de los recuentos a 35C de organismos hetertrofos aerobios se presentan en la Tabla 5. Como promedio total, ms de la mitad (56,3%) de las muestras tuvieron recuentos menores a 100 UFC mL1 que es la cifra recomendada para aguas potables de distribucin pblica (24). Recuentos mayores a esta cifra indicaran fallas en el cumplimiento de las normas de buenas prcticas de manufactura. Generalmente, el agua envasada no cuenta con cloro residual libre y por tanto, es comn que presente recuentos ms elevados que el agua de distribucin pblica (a excepcin de la suministrada en aquellos pases en los que no se autorizan los desinfectantes). Por

Tabla 5 Valores absolutos y en porcentaje (%) de los recuentos en placa de organismos hetertrofos aerobios a 35C (UFC mL`) en muestras de agua envasada comercializada en el Edo. Nueva Esparta (perodo 2002-2008) UFC mL
1

Ocurrencia en agua envasada nacional (regin insular) 103 (43,5%) 16 (6,8%) 35 (14,8%) 63 (26,6%) 4 (1,7%) 16 (6,8%)

Ocurrencia en agua envasada nacional (tierra firme) 60 (51,3%) 8 (6,8%) 7 (6%) 30 (25,6%) 6 (5,1%) 6 (5,1%)

Ocurrencia en agua envasada importada 97 (89,8%) 4 (3,7%) 0 (0%) 4 (3,7%) 1 (0,9%) 2 (1,9%)

Totales

Menor a 100 De 101 a 500 De 501 a 1000 De 1001 a 5000 De 5001 a 10000 Mayor a 10000

260 (56,3%) 28 (6,1%) 42 (9,1%) 97 (21%) 11 (2,4%) 24 (5,2%)

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otra parte, se considera que recuentos mayores de 500 UFC mL1, inhiben la deteccin de coliformes cuando se utilizan medios de cultivo basados en la fermentacin de la lactosa (30). En las aguas de procedencia regional, el 56,5% de las muestras present recuentos de organismos hetertrofos aerobios superiores a 100 UFC mL1 (30,0% eran minerales, 21,4% potables y slo el 5,1% de las clasificadas como mineral natural). Tambin excedieron este requisito el 48,7% de las provenientes de tierra firme (45,3% eran minerales y 3,4% potables); al igual que el 10,2% de las aguas importadas (7,4% eran minerales naturales y 2,8% minerales). Se recomienda hacer los recuentos de hetertrofos en aguas envasadas dentro de las 24 horas despus del embotellado para comprobar si se aplicaron las buenas prcticas de manufactura (16), pues despus de ese lapso de tiempo tiene lugar la multiplicacin normal de bacterias autctonas (14) y de una flora variable alctona que es el resultado de la contaminacin durante el procesamiento (31). Como ya se inform anteriormente, no fue posible controlar el perodo de tiempo desde el envasado, en particular las de procedencia de tierra firme y las importadas, por lo que las cifras altas obtenidas en alguna de las muestras con ese origen probablemente sean debidas a la multiplicacin de bacterias autctonas. La proliferacin de bacterias tras el embotellado se ve favorecida, en parte, a la absorcin de compuestos orgnicos sobre la superficie de la botella y al aumento de oxgeno disuelto en la operacin de llenado (13). Las causas de que los recuentos de hetertrofos en el 56,5% de las muestras de procedencia insular fueran superiores a 100 UFC mL1 pueden ser la utilizacin de fuentes de agua contaminadas o debido a fallas y/o descuidos durante el embotellado (14). Al respecto, un estudio sobre agua subterrnea de la Isla de Margarita (Venezuela), report que solo un 27,7% (13 de 47 pozos)

present este tipo de recuentos inferiores a 100 UFC mL1 (32), por lo que es importante, la implementacin de los principios de anlisis de riesgos y puntos crticos de control (33, 34). En Canad y E.E.U.U. se recomienda la aplicacin de desinfeccin al agua que ser envasada; por el contrario, en la Unin Europea se prohbe el tratamiento de aguas que sern embotelladas para eliminar microorganismos lo cual obliga a utilizar fuentes y manantiales lo suficientemente puros como para poder cumplir con esta regulacin (1). Esto qued corroborado en la presente investigacin, ya que en el 89,8% de las aguas envasadas importadas que se evaluaron de procedencia europea, se obtuvieron recuentos de organismos hetertrofos aerobios por debajo de 100 UFC mL1 (tabla 5), demostrando la adherencia a las normativas existentes en sus pases de origen (13 de Italia; dos de Francia y una de Espaa, Portugal y Blgica). Por ello, en ninguna de las etiquetas de las botellas importadas se indicaba la aplicacin de tratamiento (tabla 4). Al examinar la variacin de los recuentos de organismos hetertrofos aerobios segn la procedencia del agua recurriendo a la prueba de Kruskal Wallis, se hallaron dos grupos (p < 0,05). Uno lo constituyen las muestras nacionales (insular y de tierra firme) y el otro las importadas, pues solo el 10,2% de las mismas sobrepasaron el lmite de 100 UFC mL1 (Tabla 5). Por otra parte, al evaluarlos segn la clasificacin del agua (potable, mineral, mineral natural y mineral con gas), tambin se encuentran diferencias significativas (p < 0,05), formndose tres grupos, uno con las muestras de agua potable y mineral, otro con las minerales naturales y el tercero con las minerales gasificadas, que exhibieron los recuentos de organismos hetertrofos aerobios ms bajos. Igualmente se encuentran diferencias significativas (p < 0,05) en estos recuentos, cuando se relacionan con

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las marcas comerciales de cada una de las tres procedencias, independientemente del tipo de agua. Un parmetro que influye en la multiplicacin de bacterias en el agua es el referido a carbonatacin, natural o artificial, por lo que la calidad microbiolgica de las aguas envasadas es variable (35). La disminucin del pH resultante de la carbonatacin previene la multiplicacin o supervivencia de patgenos y/ indicadores sanitarios (1, 5). En aguas minerales carbonatadas envasadas se han reportado valores de pH de 4,74 a 7,24, mientras que las no carbonatadas fluctan de 6,38 a 8,82 (35). En este trabajo, los valores de pH oscilaron de 5,04 a 7,26 en aguas carbonatadas y en las no carbonatadas de 3,40 a 8,87. La cifra de 3,40 se obtuvo en una marca de agua mineral nacional, envasada en tierra firme, especficamente en el Edo. Bolvar. De ella se evaluaron 12 unidades (4 lotes) y los valores de pH fluctuaron de 3,40 hasta 5,12 (con promedio de 4,09). De todas las muestras analizadas slo en la etiqueta de 35 (105 unidades) se declaraban los valores de pH; de ellas, el 55,2% (58/105) present niveles de pH que cumplan con estos datos. Por otra parte, el 43,5% de las muestras envasadas en la regin insular tuvieron valores de pH diferentes a los lmites sealados por la reglamentacin vigente (6,5-8,5); 42,2% (100/237) eran las muestras de agua mineral y slo el 1,3% (3/237) era potable. Es probable que la cloracin a la que se somete el agua en la isla para garantizar su potabilidad sea la causa de esta discrepancia. Tampoco un 30,8% de las provenientes de tierra firme acataron los valores lmites; de ellas, 15,4% (18/117) eran minerales; 10,3% (112/117) eran minerales naturales y 5,1% (6/117) eran potables. Las minerales naturales importadas tuvieron un 16,7% (18/108) de incumplimiento. Slo tres marcas (importadas) eran carbonatadas. En ninguna de las 21 unidades correspondien-

tes se detect P. aeruginosa y los recuentos de organismos hetertrofos oscilaron desde ausencia ( 1 recuento estimado) a 8 UFC mL1, comprobndose que el bajo pH generado por la carbonatacin no permite la multiplicacin o supervivencia de patgenos, ni de indicadores sanitarios (5, 36). A travs de la prueba de Kruskal Wallis, se determin que los valores de pH de las muestras de cada procedencia eran diferentes (p < 0,05), al igual que segn el tipo de la misma (p < 0,05) donde se forman tres grupos; uno con los datos de aguas potables y minerales naturales; otro con los de minerales y el tercero con los de aguas gasificadas. Tambin se obtuvieron diferencias significativas (p < 0,05) al comparar los resultados de pH de las diferentes marcas comerciales. Por ltimo, la prueba de correlacin seala los siguientes pares de variables relacionadas significativamente (p < 0,05): coliformes totales y coliformes fecales (n = 462; r = 0,66; p < 0,05), confirmando que la mayora de las bacterias coliformes determinadas eran de origen fecal; organismos hetertrofos aerobios y Pseudomonas aeruginosa (n = 462; r = 0,54; p < 0,05), pues entre las bacterias tpicamente descritas como patgenas oportunistas que se recuperan entre la microbiota de organismos hetertrofos aerobios se incluyen estirpes de P. aeruginosa (33). Tambin las variables Pseudomonas aeruginosa y lugar de envasado estn vinculadas, pero de manera inversa (n = 462; r = 0,43; p < 0,05), por cuanto los valores ms altos de esta bacteria se hallaron en las muestras provenientes de la regin insular y la numeracin que se les asign para la tabulacin de la data era inferior a las de otras procedencias. A su vez, tambin est relacionado el lugar de envasado con marca comercial, volumen del envase y clasificacin del agua (n = 462; r = 0,94; 0,44 y 0,73 respectivamente, p < 0,05), lo que es lgico ya que el sitio donde se embotella el agua est vinculado a la marca comercial y a la clasificacin del agua.

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Con estos resultados se deduce que las condiciones bacteriolgicas de las diferentes marcas comerciales de agua envasada estudiadas son diferentes y reflejan no solo la calidad de las fuentes de agua de donde proceden, sino tambin el control del proceso que se lleva en las plantas embotelladoras. Por otra parte, las etiquetas de algunos de los envases, generalmente los de origen nacional, no sealan ni numeracin de lote, ni fechas de envasado y/o vencimiento. Esto es importante, por cuanto con esta informacin tanto vendedores como consumidores pueden determinar el tiempo de envasado y adems, esto ayudara en el seguimiento de las quejas de los consumidores a la hora de remover el producto de los locales de venta (14).

Agradecimiento
Al personal del Laboratorio de Microbiologa: N. Figueroa, Y. Rodrguez y M. Torres y a los Inspectores del Dpto. de Higiene de Alimentos (CORPOSALUD). Tambin a J. Buitrago quien particip en los anlisis estadsticos de los datos y en la correccin del manuscrito, al igual que Y. Astor, a D. Quiones por la traduccin del resumen y a los rbitros por su lectura crtica y sugerencias al manuscrito final. Este artculo corresponde a la Contribucin N 408 de la Estacin de Investigaciones Marinas (EDIMAR) de Fundacin La Salle de Ciencias Naturales y fue parcialmente subvencionado por CONOCO PHILLIPS y DIAGEO DE VENEZUELA.

Conclusiones
Aun cuando el pblico consumidor escoge para beber agua envasada en la creencia de que presenta una calidad superior al agua de grifo y no contiene microorganismos, los resultados de este trabajo constatan la necesidad de cumplir, cabalmente, las normativas referidas a la evaluacin de las fuentes de agua, su proteccin para evitar la contaminacin de la misma durante la extraccin y tambin durante el envasado, particularmente, en las plantas embotelladores ubicadas en la regin insular y en tierra firme, con el fin de ofrecer al consumidor una bebida que no constituya un riesgo para su salud. Entre los tipos de agua evaluadas, la que present mejor calidad microbiolgica fue la carbonatada (importada), lo que confirma la efectividad del CO2 para controlar el desarrollo bacteriano. El estudio de la variacin estadstica de los datos, a travs de la prueba de Kruskal Wallis, refleja que los resultados obtenidos, tanto microbiolgicos como de pH, dependen (p < 0,05) del lugar de envasado, de los tipos de agua y tambin que difieren entre las marcas comerciales evaluadas.
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