Universidad de oriente Escuela de ciencias Departamento de Bioanlisis Ncleo de sucre

Realizado por: Grecia Ramos C.l 20346241 Adolfo Bastardo C.l 22631603 Cuman,28 de enero del 2013

Conclusiones La espectrofotometra es una tcnica analtica que permite determinar la concentracin de un compuesto en solucin. Las medidas espectrofotomtricas de la absorbancia se realizan normalmente a una determinada longitud de onda. La longitud de onda analtica en la solucin de creatinina fue de 474,5 La concentracin por el mtodo de curva de calibracin fue de De acuerdo a los valores obtenidos se puede decir que el ms preciso es la curva de calibracin.

Discusin de los Resultados La espectrofotometra es una tcnica analtica que permite determinar la concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y medir la cantidad de luz absorbida por la misma. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molcula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben depende de la estructura atmica y de las condiciones de medio (pH, temperatura, fuerza ionica,constante dielctrica) por lo que dichas tcnica constituye un valioso instrumento para la determinacin y caracterizacin de biomoleculas. El espectro de absorcin es una representacin grafica que indica cantidad de luz absorbida () a diferentes valores de longitudes de ondas por lo general refleja una curva de tipo Gaussiana. A partir de una solucin diluida de un compuesto, cuya absorbancia mxima entra dentro del rango de medida del espectrofotmetro, se ver el valor de absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solucin de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorcin se obtendr el valor de longitud de onda al que el compuesto presenta la mayor absorbancia a esta se llamara longitud de onda analtica. Dicha longitud se utilizara a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. De acuerdo a la longitud de onda establecida pudimos obtener las diferentes absorbancias a cada concentracin de la muestra patrn. Al calcular la concentracin de la muestra problema por los diferentes mtodos, nos arrogaron concentraciones similares con un pequeo margen de error, siendo el ms preciso el arrogado por la curva de calibracin.

Metodologa En esta prctica se prepararon 250 ml de HCL 0,1 mol/L, 25 ml de acido pcrico 0,04 mol/L, luego se prepararon25 ml de NaOH 0,75 mol/L y 100 ml de una solucin de creatinina de 200 mg% en la cual se emplea HCL 0,1 mol/L como disolvente. Posteriormente se preparan 100 ml de una solucin madre de creatinina 4mg% a partir de la solucin de 200mg% preparada anteriormente, utilizando HCL 0,1 mol/L como disolvente. Despus de haber realizado estas soluciones se tomaron cuatros balones aforados de 10 ml, se rotularon y a continuacin se prepararon cuatros patrones de concentracin: 0,2; 0,4; 0,6; y 0,8 mg/dl, a partir de la solucin madre de 4 mg% utilizando agua destilada como solvente. Las preparaciones de estas soluciones fueron descritas con anterioridad en el cuaderno de laboratorio. Se tomo una muestra de orina y se realizaron diluciones 1:10; 1:50; 1:100, a las que se les rotulo como X1, X2 y X3 correspondientemente. Luego de esto se volvi a realizar otras tres diluciones; tomando 1 ml de solucin X1 y se diluyo en un baln aforado de 10 ml y se procedi de igual forma con las soluciones X2 y X3, estas nuevas soluciones se nombraron como Y1, Y2 y Y3.

Clculos Determinacin de las concentraciones de creatinina en una muestra de orina por factor de calibracin:

A =0,1492 C =Ax X cp/Ap =Ax*Fc Cx =Ax X Fc Fc = Cp/Ap Fc = Fc1+Fc2+Fc3+Fc4/4 Fc1 =Cp1/Ap1 = 0,2mg%/0,1567= 1,567mg% Fc2 = Cp2/Ap2 = 0,4mg%/0,3752= 1,066mg% Fc3= Cp3/Ap3 = 0,6mg%/0,5775= 1,039mg% Fc4= Cp4/Ap4 = 0,8mg%/0,5808= 1,377mg% Fc=1,567mg%+1,066mg%+1,039mg%+1,377mg%/4= 1,263mg%

Cx = 0,1492 X 1,263mg% = 0,188mg% C = Cf X Fd Fd = 1/50 X 1/10 =1/500 Cx = Cf X 500 = 0,188mg% X 500 = 94mg%

Tabla 1 Datos de absorbancia en las muestras patrones obtenidas a 474,5 nm de longitud de onda

Tubo N 1 2 3 4

Concentracin (mg/dl) 0,2 0,4 0,6 0,8

Absorbancia 0,1567 0,3752 0,5775 0,5808

Tabla 2 Absorbancias de las muestras problemas a una longitud de onda de 474,5 nm Tubo N 5 6 7 Concentracin (mg%) x x x Absorbancia 0,7194 0,1492 0,0667

Determinacin de la concentracin de creatinina por mtodo de comparacin directa. Ax = 0,1492 Cx = Ax X Cp/Ap C = 0,1492 X0,4mg%/0,3752 = 0,160 mg% Cx =Cf X Fd Cf = 0,160mg% X 500 = 80 mg% Determinacin de la concentracin de creatinina por mtodo de curva de calibracin Cf = Cx X Fd Cf = 0,16 X 500 = 80mg% Concentraciones de las muestras problemas determinadas por los diferentes mtodos cualitativo (curva de calibracin, mtodo de comparacin directa y factor de calibracin.

Mtodo Curva de calibracin Comparacin directa Factor de calibracin

Concentracin (mg%) 80 80 94

Grafica: Curva de calibracin.

Y Absorbancias Vs X Concentraciones
0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Y Absorbancias