UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES. ZARAGOZA

TITULO: DESTILACIN POR ARRASTRE DE VAPOR

MATERIA: LABORATORIO DE CIENCIA BASICA III

CARRERA: INGENIERIA QUIMICA.

Mxico, D.F. a 10 de noviembre de 2012

RESUMEN: Se debe extraer el pigmento de la espinaca para llevarlo a la C.C.F pero antes de eso ya preparamos nuestra cromato-placas para encontrar el disolvente. Posteriormente se verificara por C.C.F. si se logr la separacin de los pigmentos por C.C donde si se logro separar el pigmento y se distinguen la diferencia de colores. INTRODUCCIN: Fundamento terico: La cromatografa puede definirse como la tcnica de separacin de una mezcla de solutos, basndose esta separacin en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a travs de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. La cromatografa agrupa un grupo importante de mtodos que permite separar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible en otros mtodos. En todas las separaciones, la muestra se desplaza con una fase mvil que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase estacionaria con la que es inmiscible y que se fija a una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil por el contrario los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Cromatografa de particin: La mayora de las sustancias tendrn distinta solubilidad en diferentes solventes. Si una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se mezclan entre s, se distribuir entre los dos solventes en relacin a su solubilidad en cada uno. Se llama efecto de particin a la distribucin de un soluto entre dos o ms solventes que no se mezclan. El solvente o el liquido que es atrapado por el medio del sostn sea este papel, gel, slice o almina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelador se le llama fase mvil. Se puede obtener una fragmentacin completa si se permite al soluto equilibrarse entre las fases estacionaria y mvil. Cromatografa de adsorcin: La cromatografa de adsorcin o liquido-slido, es la forma clsica de cromatografa de lquidos. La adsorcin se lleva a cabo cuando hay una concentracin ms alta en la superficie de un slido que en la solucin circundante. La adsorcin se refiere al enlace de una sustancia a la superficie de otra. Generalmente los adsorbentes usados en cromatografa son el carbn mineral, el gel de slice, y la almina. Cromatografa en columna, cromatografa en capa fina: placa preparativa y analtica: adsorbentes, eluyentes y equipo utilizado.

 Cromatografa en columna: Las separaciones en la cromatografa en columna pueden realizarse por reparto, adsorcin o intercambio inico. Puede usarse cualquier medio adsorbente siendo los ms generales la celulosa, gel de slice, almina oxido de magnesio, oxido de clcico y carbn activo (para separaciones por adsorcin y de intercambio inico). En todos los casos solo pueden obtenerse ptimos resultados si se tiene cuidado en la seleccin del medio. Llenado de la columna El primer paso en el montaje de la columna cromatogrfica es colocarla fija en posicin vertical. A continuacin se pone en el fondo de la columna un pequeo disco de porcelana con varios orificios (si es posible) y encima de este un poco de lana de vidrio. El adsorbente puede introducirse en seco, pero lo ms frecuente es agregarlo en forma de una papilla con el eluyente. Antes de introducir el adsorbente se agrega en el interior de la columna un poco de disolvente puro (2 a 4 cm. por encima de la lana de vidrio) y se elimina el aire que puede permanecer retenido en las paredes, agitando por medio de una varilla larga de vidrio. Finalmente se abre la llave inferior de la columna para que salga exceso de disolvente contenido. La altura del disolvente no debe exceder de 2 a 5 mm sobre el slido. Una vez realizado todo esto, la columna esta lista para introducir la muestra que se desea separar. Cromatografa en capa fina Los mtodos de cromatografa en plano, incluyen la cromatografa en capa fina, cromatografa en papel y electrocromatografa. En todos los casos se emplea una capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien que recubre una superficie de vidrio, plstico o metlica. La fase mvil se mueve a travs de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicacin de un potencial elctrico. En la actualidad la cromatografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina, que es mas rpida, tiene mejor resolucin y es mas sensible que su alternativa en papel. Placa preparativa Las separaciones en capa fina caractersticas se realizan en placas de vidrio o plstico que se recubren con una capa delgada y adherente de partculas finamente divididas; esta capa constituye la fase estacionaria. *Adsorbentes La sustancia adsorbida se llama adsorbato y la fase sobre cuya superficie se acumula el adsorbato se llama adsorbente. En un slido, las interfaces son fijas, cuando es liquido la interface es mvil y la superficie de contacto puede variar debido a la tensin superficial. Los adsorbentes se dividen en dos grupos principales: los polares (almina, slice, carbonato clcico) y los no polares (carbn activo, talco). Entre los del primer grupo la intensidad de la adsorcin es determinada por la polaridad de las molculas. Adsorbentes en orden de menor a mayor

*Eluyentes El poder de la adsorcin depende tanto de la naturaleza del disolvente como de la del adsorbente. Por lo general para llevar la mezcla de compuestos a columna se utiliza un disolvente relativamente poco polar para el desarrollo del cromatograma y para la elusin de los productos adsorbidos un disolvente mas polar todava. Los disolventes ms frecuentes se pueden ordenar segn su polaridad creciente. *Disolventes Disolvente en orden creciente a su polaridad ter de petrleo, tetracloruro de carbn, sulfuro de carbono, ter, acetona, benceno, esteres de cidos orgnicos, cloroformo, alcoholes, piridina, mezclas de cidos o bases con agua, alcohol o piridina. Caractersticas principales que intervienen en las propiedades del adsorbente: Influyen tres variables independientes. Estas son el adsorbente, el disolvente y las sustancias a cromatografa. Precauciones al preparar y efectuar la cromatografa en columna y capa fina; parmetros que afecten la separacin Cromatografa en columna: Separar ms de 100 mg Se optimiza el sistema absorbente-eluyente para la separacin Sujetar verticalmente la columna Llenar la columna con el eluyente o disolvente menos polar Vaciar al adsorbente previamente pesado. La almina en forma de flujo delgado y el gel de slice como una papilla de disolvente. Disolver la sustancia en la mnima cantidad del disolvente no siendo ms polar que el eluyente, aplicar con cuidado y uniformemente en la parte superior de la columna (llave cerrada), abrir la llave y correr el disolvente hasta que quede una capa de 1mm por arriba del adsorbente, varias veces. Cromatografa en capa fina: Preparacin de las placas Conservar la placa en una solucin concentrada de carbonato sdico, enjuagndose en agua antes de su uso Las capas compactas se preparan aplicando una papilla del medio elegido en un disolvente adecuado, sobre las placas de vidrio.

 Si el material se adhiere mal es necesario agregar una pequea cantidad de un agente aglomerante como el sulfato clcico. El espesor habitual de la placa suele ser de 0.25 mm. Placas ms finas dan separaciones ms rpidas pero menos eficaces. Activar las placas preferiblemente antes de usarlas. La eleccin del disolvente depender de la naturaleza del compuesto que se va a separar y del material en que la separacin se lleve a cabo. Una regla general para la eleccin del disolvente es la comparacin de la polaridad del mismo y de la sustancia que se desea separar. Cmaras de elusin para el desarrollo de la cromatografa en capa fina: Una cmara de elusin en un recipiente, preferentemente de vidrio transparente para observar la separacin de componentes en la cromatografa en capa fina, en el cual se lleva a cabo el siguiente desarrollo: El desarrollo se lleva a cabo en frascos por el mtodo ascendente, en el interior del frasco debe colocarse un papel filtro empapado de disolvente, que cubra las paredes interiores del mismo para conseguir que la atmsfera este saturada de vapor del disolvente. El fondo del frasco se cubre de disolvente hasta una altura de 0.5 a 1 cm y despus de un periodo de tiempo apropiado en el que se consiga el equilibrio, se introduce la placa. Durante el desarrollo no puede moverse el frasco. Definiciones de los trminos de Rf y Rx, en qu casos se usa cada uno, reproducibilidad de los valores de Rf. Las constantes Rf Y Rx La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posicin de un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un componente. Se define como: La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF sean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El mximo valor de RF que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.65 y 0.7. Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo.

Tambin se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un compuesto (X), que tenga una posicin de desarrollo conveniente; todos los dems

compuestos sobre la placa se relacionan con ste. De esta manera se tiene el, RX, ya que:

Algunos compuestos que dan color a los vegetales: Clorofila: Es una cera cristalina azul-verdosa, es soluble en ter, etanol, acetona, cloroformo, sulfuro de carbono, benceno. La solucin alcohlica es azul-verdosa con fluorescencia rojo-oscura. Caroteno: Principal portador de vitamina A que se encuentra de forma natural en las plantas. El caroteno es un hidrocarburo miembro de una amplia clase de pigmentos llamados carotenoides. Cristales rojo rub, se oxida fcilmente en contacto con el aire. Procede de los pigmentos amarillo-anaranjados de las plantas. Xantofila: Pigmento amarillo carotenoide oxigenado que acompaa a la clorofila en las hojas verdes, es insoluble en agua, ligeramente soluble en alcohol. Se encuentra en la vegetacin verde y en algunos productos animales. OBJETIVOS: 1) Extraer el pigmento de la hoja de espinaca y el pigmento de la zanahoria. 2) Elegir mediante cromatografa en capa fina el eluyente o la mezcla de eluyentes ideales para separar los diferentes pigmentos de un producto natural por cromatografa en columna. 3) Separar por medio de columna los pigmentos vegetales. 4) Verificar por cromatografa si se logro la separacin de los pigmentos por cromatografa en columna. Hiptesis: DISEO EXPERIMENTAL: Reactivos: Acetato de etilo, Hexano, Salmuera, Cloruro de metileno, etanol. Instrumentos y Equipo: Material: 1 Embudo de separacin de 500mL. 2 Matraz enlermeyer de 250mL. 1 Embudo talle corto. 4 pipetas graduadas de 5mL. 20 tubos de ensayo. 1 bureta graduada de 50mL. Tubos capilares. 1 soporte universal. 1 anillo de hierro. 1 mortero. 1 pinzas de doble presin. 1 balanza granataria.

8 frascos. 1 pliego de papel filtro. Cinta adhesiva. Tijeras. METODOLOGA: Extraccin de pigmentos de espinaca y zanahoria: Paso 1 Espinaca: Se cortan pequeos pedazos de espinaca de forma que no se tengan trozos muy grandes pero tampoco muy pequeos y se almacenan en un frasco, remojando en alcohol etlico por al menos un da de reposo. Una vez hecho esto se maceran las espinacas con ayuda de un mortero hasta dejarlas hojas con una tonalidad blanca por la misma maceracin, agregando un poco de el alcohol etlico para poder extraer el pigmento. Paso 2 Una vez hecha la maceracin de la espinaca vertemos el alcohol etlico a un embudo de separacin utilizando un embudo talle corto para mayor comodidad. Una vez hecho esto agregamos salmuera y hexano de modo que separemos las impurezas que contenga nuestro pigmento. Paso 3 Por ltimo separamos nuestro pigmento, y lo almacenamos en un frasco gerber el mismo que vamos a tapar con un poco de papel aluminio al cual le hacemos unos orificios para que se pueda evaporar un poco del solvente y a si concentrar el pigmento. Paso 1 para Zanahoria A nuestra zanahoria dejamos que seque por algn tiempo de manera natural, sobre unas hojas de papel para que pierdan humedad. Una vez secas se coloca una pequea muestra en un tubo de ensayo y se remoja en cloruro de metileno. Para extraer el pigmento de la misma. Una vez remojado comprimimos un poco la zanahoria para extraer de mejor manera el pigmento. Una vez hecho esto almacenamos el pigmento en un frasco gerber tapado con un poco de papel aluminio al cual le hacemos unos orificios para dejar que evapore un poco del solvente y a si concentre nuestro pigmento. Paso 1 para Cromatografa en capa fina En un frasco pequeo preparamos el gel slice con un poco de acetato de etilo y agitamos de modo de obtener una mezcla uniforme. Paso 2 - Preparacin de placas: Una vez mezclado el gel slice, tomamos dos portaobjetos sobre puestos el uno con el otro y los sumergimos en el gel slice de modo que se obtenga una pelcula de gel sobre nuestro portaobjetos el cual ser nuestro absorbente o fase estacionaria, procuramos eliminar el exceso sobrante de las orillas y posteriormente dejamos secar las placas. Paso 3 - Pigmentos: Una vez activadas las placas, con ayuda de dos tubo capilares previamente

preparados (los cuales ocuparemos como micro pipetas) agregamos unas pequeas gotas de pigmento sobre las placas de modo que el pigmento quede a un centmetro de elevacin. Paso 4 - Cmaras de elusin: Una vez preparadas las placas, tomamos un frasco de tamao considerable para preparar la cmara de elusin y hacer nuestro cromatograma en el mismo, al frasco le aadimos una cortina de papel filtro para que este adsorba un poco del solvente a utilizar y llene de vapores la cmara en la cual con ayuda de una pipeta graduada aadimos cerca de 5mL del solvente empleado. Ahora marcamos la cmara con el respectivo solvente que contendr, una vez hecho esto dejamos reposar un breve periodo de tiempo nuestra placa dentro de la cmara para que se lleve a cabo el cromatograma sobre nuestro adsorbente. Paso 5: Una vez fuera de la cmara, tomamos la placa y verificamos que tanto avanzo el solvente o fase mvil y que tanto subi el pigmento de nuestra cromatografa. Para poder hacer el clculo RF y RX. Paso 6: Calcular RF y RX. Y comparar resultados. Cromatografa en columna: Paso 1 - Columna: Con ayuda de un soporte universal, y unas pinzas de doble presin sujetamos nuestra columna (bureta graduada de 50mL) y colocamos una pequea capa de algodn y arena en la boquilla. Paso 2 - Gel de slice y llenado de la columna: Con ayuda de una balanza granataria pesamos 10g de gel de slice en un vidrio de reloj o papel, y lo mezclamos en 15mL de ligroina dentro de un matraz erlenmeyer y agitamos hasta obtener una mezcla uniforme. Una vez hecho esto vaciamos dentro de la columna evitando derrames.

Paso 3: Aadimos nuestro pigmento de zanahoria o espinaca segn sea el caso y esperamos a que con ayuda de nuestro eluyente o solvente a utilizar los pigmentos se separen y corran hacia abajo. Paso 4: Una vez separado el pigmento deseado conservamos el pigmento en tubos de ensayo marcando la muestra y posteriormente realizarse una cromatografa en capa fina para determinar pureza adems de su RF y RX.

ANALISIS DE RESULTADOS: Licopeno y - caroteno RF y RX. Zanahoria y espinaca en Etanol y 80/20 hexano y acetato de etilo. Etanol RF y RX. Espinaca. RF= 4.5/6 RF= 0.75. Zanahoria: RF= 4.3/6 RF=0.71. 80/20 Hexano y acetato de etilo. Espinaca. RF= 5/5.6 RF= 0.89. Zanahoria: RF= 4.9/5.6 RF= 0.87.

BIBLIOGRAFIA: Keese R. MullerTroube, Mtodos de laboratorio de qumica orgnica, Limusa, Mxico, 1999. Brewster, R.Q, Curso prctico de qumica orgnica experimental, Alhambra S.A., Madrid Espaa