EL MICROSCOPIO.

INTRODUCCION.
Una de las herramientas ms importantes para el estudio de la microbiologa es el microscopio. Este aparato aumenta el tamao de una imagen hasta el punto que facilita su visualizacin. A partir del primer microscopio elaborado por Anthony van Leeuwenhoek, esa invaluable ayuda ha sufrido cambios paulatinos que lo han perfeccionado cada vez ms. En la actualidad existen gran variedad de microscopios pticos que se emplean segn las necesidades de observacin.

I.

MICROSCOPIO SIMPLE.

Un microscopio simple es aquel que utiliza una sola lente de aumento. Es el microscopio ms bsico. El ejemplo ms clsico es la lupa. El microscopio ptico estndar utiliza dos sistemas de lentes alineados. El objeto a observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, lo que determina la formacin de una imagen virtual, derecha y mayor cuanto mayor sea el poder diptrico de la lente y cuanto ms alejado est el punto prximo de la visin ntida del sujeto. El holands Antoni van Leeuwenhoek construy microscopios muy eficaces basados en una sola lente. Esos microscopios no padecan las aberraciones que limitaban tanto la eficacia de los primeros microscopios compuestos, como los empleados por Robert Hooke, y producan una ampliacin de hasta 300 veces; gracias a ellos Leeuwenhoek fue capaz incluso de describir por primera vez las bacterias.

II.

MICROSCOPIO ELECTRONICO.
Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces ms potentes que los mejores microscopios pticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles". El primer microscopio electrnico fue diseado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1930, quines se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglieacerca de las propiedades ondulatorias de los electrones.

Un microscopio electrnico, como el de la imagen, funciona con un haz de electrones generados por un can electrnico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnticas (todo ello al alto vaco ya que los electrones son absorbidos por el aire). Un rayo de electrones atraviesa la muestra (debidamente deshidratada y en algunos casos recubierta de una fina capa metlica para resaltar su textura) y la amplificacin se produce por un conjunto de lentes magnticas que forman una imagen sobre una placa fotogrfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrnicos producen imgenes sin ninguna clase de informacin de color, puesto que este es una propiedad de la luz y no hay una forma posible de

reproducir este fenmeno mediante los electrones; sin embargo, es posible colorizar las imgenes posteriormente, aplicando tcnicas de retoque digital a travs del ordenador.

III.
1.

TIPOS DE MICROSCOPIOS QUE EXISTEN Y SU FUNCIONAMIENTO.

MICROSCOPIO DE LUZ, OPTICO O DE CAMPO CLARO.

Fue el primero que se desarroll cuando la microbiologa hizo su aparicin, inicialmente era tan simple que solo pareca una lente biconvexa y la fuente de luz que iluminaba era una vela. Despus se perfecciono adicionndole un sistema de lentes separados con los cuales se consegua mayor aumento, por esto, tomo el nombre de microscopio compuesto, que es el mismo microscopio ptico o de luz conocido actualmente. El microscopio ptico, utilizado con mayor frecuencia para la mayora de estos estudios, utilizando un sistema de iluminacin que se le conoce con el nombre de campo claro, en el cual el campo del microscopio se ilumina brillantemente, mientras que el objeto que se va a estudiar se ve claro o coloreado. Se ve coloreado en procedimientos en los cuales se utilizan uno o varios colorantes especficos que permiten ver con ms detalle el objeto que se observa. En este sistema el aumento se consigue gracias al empleo de varias lentes pticas. La mayora de los microscopios alcanzan los 1000 y hasta 2000 aumentos, con los oculares de 10 dimetros y objetivos de 100 dimetros de aumento haciendo posible que partculas de 0.2 um de dimetro puedan ser amplificadas a 0.2 mm, as resultan claramente visibles. En este tipo de microscopio, la mayor amplificacin no da mejor resolucin de los detalles, porque no se reduce el rea de observacin o campo visual. El poder de resolucin del microscopio ptico, en condiciones ideales, es aproximadamente la mitad de la longitud de oda de la luz empleada. El factor que limita el aumento en el microscopio es el poder de resolucin que corresponde a la distancia que debe separar a dos fuentes luminosas puntiformes, para que se visualicen como dos imgenes diferentes.

2. MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA. Utiliza longitudes de onda aproximadamente 0.2 um por lo que le permite la resolucin de partculas de 0.1 um de dimetro. Estos microscopios emplean lentes de cuarzo y sistemas fotogrficos demasiados costosos para uso general. 3. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO. Se emplea arreglando el sistema de lentes del condensador de tal manera que no llegue la luz al ojo al menos que sea reflejada por algn objeto que se encuentre en el campo microscpico. Las estructuras que proporcionan un contraste insuficiente con el medio que las rodea pueden hacerlas visibles. Esta tcnica es particularmente valiosa para observacin de organismos como las espiroquetas, que son difciles de observar con luz transmitida. 4. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES. Se basa en el hecho de que las ondas luminosas que pasan a travs de los objetos transparentes, como las celulosas emergen de las fases diferentes, segn las propiedades de los diferentes materiales que lo atraviesan. Un sistema ptico especial convierte esta diferencia de fase en una diferencia de intensidad de esta forma unas estructuras aparecen ms oscuras que otras. Una caracterstica muy importante es que en las clulas vivas las estructuras internas pueden ser diferenciadas, lo que no se consigue con el microscopio ordinario. Entre estos microscopios puede incluirse el microscopio de Nomarsky o de contraste diferencial, porque por causa de su sistema de prismas, ofrece unas bellsimas imgenes tridimensionales, 5. MICROSCOPIO DE FLUORESENCIA. Tipo de microscopio muy especializado, se utiliza en inmunologa, cuando se realizan los mtodos de inflorescencia. Este microscopio es una modificacin el microscopio comn, un rayo de luz de un arco de mercurio o una lmpara de cuarzo pasa a travs de una serie de filtros de vidrio o gelatina, cuya funcin es actuar como excitadores y estn ubicados entre la lmpara y el portaobjetos. El rayo de excitacin choca sobre el material del portaobjetos y el ocular, permite que pase solo la longitud de onda emitida. Se utiliza tanto como para diagnostico directo como indirecto. 6. MICROSCOPIO ELECTRONICO. La microscopia electrnica proporciona amplificaciones utilices y ostensiblemente mayores que pueden obtenerse por medio del microscopio de campo claro (microscopio ptico). Es posible lograr estos inmensos aumentos gracias al poder de resolucin que se obtiene a partir de longitudes de onda de los haces de electrones, que se usan el lugar de la luz. Los haces de electrones tienen longitudes de onda del

orden 0.005 a 0.003 nm muy cortas en comparacin de las longitudes de onda de la luz visible que se utiliza en microscopia ptica. Estas longitudes de onda permiten alcanzar poderes de resolucin varias veces ms elevadas que los obtenidos en microscopia ptica. Utilizando la microscopia electrnica es posible resolver objetos que caen dentro de un rango de 0-003 um. Las amplificaciones finales que se acercan al 1,000 0000 de veces, pueden lograrse al ampliar la imagen fotografiada. Para la microscopia electrnica, la muestra que se va a examinar se prepara en forma de una finsima pelcula seca sobre pequeas rejillas que se introducen en el instrumento en un punto que se queda entre el condensador magntico y el objetivo magntico (en microscopia electrnica no se utilizan sistemas pticos de vidrio), que son comparables al condensador y el objetivo del microscopio ptico. La imagen ampliada se visualiza sobre una pantalla fluorescente o se registra sobre una pelcula fotogrfica que utiliza una cmara incorporada al instrumento. Se han desarrollado muchas tcnicas para el examen de microorganismos por microscopia electrnica. Entre ellas figuran: los nuevos mtodos de tincin, los mtodos para hacer cortes finos de clulas microbianas, que permiten su observacin microscpica, y las tcnicas con radioactivos. Estos procedimientos son aplicables a la microscopia electrnica de transmisin (TEM). En esta clase de microscopia, el haz de electrones pasa a travs de la muestra preparada con n corte extraordinario delgado, para lo cual las clulas o tejidos se introducen en un material de plstico (parafina), que posteriormente se corta con una cuchilla de diamante vidrio. Luego se coloca la muestra en una rejilla de metal por donde pasa el haz de electrones que se dirige a una placa fotogrfica o a una pantalla fluorescente y de esta manera la dispersin de electrones da lugar a la imagen.

IV.

CARACTERISTICAS Y DIFERENCIAS ENTRE LOS MICROSCOPIOS.

V. OTROS MICROSCOPIOS. Microscopio electrnico de barrido. Microscopio petrogrfico. Microscopio de luz polarizada. Microscopio confocal. Microscopio electrnico de transmisin. Microscopio de iones en campo. Microscopio de efecto tnel. Microscopio de fuerza atmica. Microscopio virtual. Microscopio antimateria.