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Prctica: Cromatografa en columna flash Introduccin La cromatografa en columna se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa.

Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin (cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de sta un poco de algodn o lana de vidrio, para evitar que la slica o la almina queden retenidas en la columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. A continuacin se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogindose por lo general en tubos de ensayo. Una columna de cromatografa es un tubo de vidrio relleno con una sustancia slida de propiedades adsorbentes constituida por pequeas partculas: gel de slice y almina son las ms usadas. Este relleno es lo que se conoce en cromatografa como la fase estacionaria. A travs de la columna se har pasar una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes denominada eluyente y/o fase mvil. La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequea cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente, en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por el mismo. A continuacin se pasa un flujo de eluyente a travs de la columna. Los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, hacindoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografa. Algunos compuestos se ven ms fuertemente retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarn ms despacio. Por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarn a mayor velocidad. En general se dice que la separacin en la cromatografa se basa en la afinidad diferencial de los distintos compuestos por la fase mvil o la fase estacionaria.

Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. La gran porosidad del gel de slice, que le otorga alrededor de 800 m/g de superficie especfica, le convierte en un absorbente de agua. Por este motivo se utiliza para reducir la humedad en espacio. La cromatografa en columna se ocupa en la separacin de colorantes, protenas y en separaciones de componentes de plantas medicinales. Eter de petrleo. Eter dietlico. Ciclohexano. Acetato de etilo. Tetracloruro de carbono.* Piridina. Benceno.* Etanol. Cloroformo.* Metanol. Diclorometano. Agua. cido actico. La eleccin del eluyente depender lgicamente del componente que se va a separar y del material en que la separacin se lleva a cabo. Principales eluyentes en orden creciente de polaridad: *compuestos cancergenos.

Para la eleccin del eluyente hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.

a) Toque de la muestra sin aplicar ningn eluyente. b) Aplicando un eluyente poco polar. c) Aplicando un eluyente ms polar. Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemos seguir utilizando la misma placa para aplicar otros eluyentes ms polares, hasta dar con el ms apropiado. Otra tcnica para realizar la eleccin del eluyente consiste en sembrar varias muestras distanciadas suficientemente, y aplicar con un tubo capilar distintos eluyentes sobre el centro de cada muestra. Esto permite desarrollar cada eluyente radialmente por capilaridad, de forma que se aprecie el eluyente con el cual la separacin se realiza de una manera ms eficaz. Objetivos a) Realizar la CC para la separacin y aislamiento de los componentes cloroflicos de un extracto obtenido a partir de una muestra vegetal. b) Conocer las caractersticas de la CC y los factores que en ella intervienen.

Material Procedimiento Material 1 Columna Frascos de vidrio de cromatogrfica. 20 a 25 mL. 1 Matraz bola de 250 1 Cmara de desarrollo mL. de CCF. 6 Matraces Erlenmeyer 1 Soporte universal. de 50 mL. 1 Vaso de precipitado 1 Embudo. de 500 mL. 1 Trozo de manguera. 1 Agitador. 1 Rotavapor. Placas cromatogrficas. 2 Pinzas de 3 dedos Capilares. (Se sustituy una por la pinza Mohr) 3 Pipetas Pasteur. Fibra de vidrio.

Se coloc un pequeo trozo de fibra de vidrio en el extremo inferior dentro de la columna cromatogrfica. Se sujet la columna en posicin vertical a un soporte universal utilizando una pinza de tres dedos. Se coloc un matraz Erlenmeyer en la parte inferior de la columna y un embudo en la parte superior. En un vaso de precipitado el profesor prepar una suspensin de gel de slica con el eluyente, en este caso se utiliz un compuesto clorado (Hexano). Se aadi la suspensin preparada por la parte superior de la columna con ayuda del embudo, procurando que la mezcla permaneciera lo ms homogneamente posible.

Se dej fluir el disolvente, permitiendo una sedimentacin del adsobente para que ste se compacte adecuadamente, procurando que no se formaran burbujas y evitando que se secara el gel de slice. Se dej que el eluyente bajara hasta una altura sobre el adsobente de 2 a 4 mm y se cerr la manguera de la columna para que dejara de fluir. Con ayuda de la pipeta Pasteur y la varilla de vidri, se aadi tinta de plumn procurando que esta bajara por las paredes. Se abri la manguera y se continu con la adicin de eluyente por la parte superior para desarrollar la columna hasta colectar el primer color o banda formada por la separacin. Se repiti el paso anterior hasta la obtencin de 6 componentes cloroflicos.

Anlisis de resultados Para poder analizar de manera eficiente y correcta los resultados se tiene que realizar un revelado de placas para mostrar una buena separacin de los pigmentos de la tinta de plumn podemos contribuir a que en la CC no se realiz de manera correcta,se debe tener especial cuidado diversos factores como un vaciado deficiente en la columna de la slica gel, de manera homognea, que no haya un exceso de eluyente al momento de colocar el extracto, esto factores entre otros pueden contribuir a una mala recoleccin de los componentes de la tinta de plumn al realizar el revelado de placas.

Las fuerzas con las que los solutos interactan con el adsorbente son el resultado de la polaridad de los mismos. Un eluyente muy polar tiene una fuerza de elucin grande para compuestos de naturaleza polar; un compuesto anlogo ocurre con especies no polares, esto se ve reflejado al momento de realizar el revelado de placas.

Conclusiones Cuando se realiza cualquier tipo de cromatografa, ya s en columna o en capa fina es importante escoger el eluyente con la polaridad requerida para poder separar de manera eficiente los compuestos, en este caso pigmentos cloroflicos, que se desean obtener. Mucho de esto tambin va a depender de los grupos funcionales con los que se est trabajando. La correcta preparacin del adsorbente tambin es muy importante ya que este es el que va a reducir la humedad del medio dndonos oportunidad de recolectar los pigmentos deseados del extracto vegetal. Bibliografa Mayo, D.W. 1991. Microscale Techniques for the organic laboratory. John Wiley & Sons, Inc. New York. Pp 138-142 http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/capa-fina http://es.scribd.com/doc/14172697/6-Cromatografia-en-Columna