Aclimatacin y siembra de postlarva

ACLIMATACIN Y SIEMBRA DE POSTLARVA

Granvil D. Treece Texas A&M University Sea Grant College Program 2700 Earl Rudder Frwy. South College Station, Texas 77845

a aclimatacin es un proceso de ajuste fisiolgico gradual de las postlarvas, desde condiciones del laboratorio a las del estanque en las que sern sembradas. Las variables ms importantes de aclimatacin son salinidad y temperatura, no obstante, algunas veces deben considerarse otros valores de calidad de agua. El evitar el estrs y los rpidos cambios ambientales son claves para una aclimatacin exitosa y mejoramiento en la sobrevivencia. Se hace nfasis en procedimientos apropiados de aclimatacin dado que el costo de la postlarva representa un porcentaje significativo del costo de produccin. El estadio de postlarva es el estadio de vida mas sensitivo del camarn y requiere de manipulacin cuidadosa y manejo para evitar altas mortalidades e inadecuado crecimiento. Entender bien los procedimientos de aclimatacin y siembra puede ayudar a mejorar significativamente los ingresos econmicos de la operacin, y potenciar la conservacin de otros insumos y recursos.

Fuentes de postlarvas
La postlarva silvestre a menudo es usada para sembrar estanques, y tiene la ventaja de estar disponible localmente en algunos lugares. Tambin representa una fuente de ingresos para algunos residentes locales. Sin embargo, el uso de esta postlarva conlleva muchos problemas potenciales, entre estos: la composicin multi-especies de las capturas, amplias fluctuaciones en abundancia y disminucin de las poblaciones debido a la destruccin de habitats. La industria del camarn se dirige hacia la casi total dependencia en la postlarva producida en laboratorio pues tiende a un abastecimiento ms regular, evita cualquier controversia sobre la pesquera de las poblaciones silvestres, y garantiza la obtencin de la especie de inters. Un beneficio extra es el reproducir camarn selectivamente. Las enfermedades son una de las principales amenazas a la industria, por eso para una siembra altamente ventajosa se procura organismos Resistentes a Enfermedades Especficas (SPR), Libres de Patgenos Especficos (SPF), o de Alta Salud Mejorada Genticamente (HHGI) (ver Captulo 7). Se recomienda el cultivo de especies nativas de camarn o que ya han sido cultivadas en el rea, para evitar la introduccin de especies exticas. En el caso de Latinoamrica, las especies nativas principales cultivadas son Litopenaeus vannamei y Litopenaeus stylirostris,

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a pesar que se encuentran otras especies de peneidos de menor importancia en cultivo cuando se usa postlarva silvestre. Cuando se compra postlarva, la regla general es la del "comprador cauteloso". Dos aspectos, la salud general y la calidad, son claves para el xito, y el comprador se debe responsabilizar de asegurar que la condicin sea satisfactoria. Es generalmente buena idea que el comprador o su representante inspeccione la postlarva antes del envo, acompae el envo y supervise su sobrevivencia despus de la siembra. La persona a cargo tambin debera medir y reportar a la estacin de aclimatacin los parmetros de calidad de agua en el laboratorio de tal manera que los reservorios de agua sean preparados. Existen varias formas de evaluar la condicin de la postlarva y monitorear su sobrevivencia despus de la siembra. Estas son detalladas en Villaln (1994). El estado de salud de la postlarva es importante. Si es vendida como SPR, SPF o HHGI, debe estar certificada por la autoridad apropiada. La evidencia de la certificacin debe guardarse. Los compradores tambin pueden por su lado verificar que la postlarva no presente signos de enfermedad aunque no tengan el estatus de SPF, SPR o HHGI. Detalles relacionados a mtodos de diagnstico son descritos en el captulo 7. El personal que realiza los diagnsticos debe ser experimentado y contar con equipos adecuados para que sus resultados sean tiles.

Instalaciones de aclimatacin
En una granja grande, la aclimatacin debera realizarse en una ubicacin central, y no al lado del estanque. Las instalaciones deben proveer sombra, aire, agua filtrada y fcil acceso. La postlarva puede ser aclimatada en una variedad de estructuras siempre que agua y aire sean provedos y se mantengan condiciones higinicas. Pistas rectangulares de fibra de vidrio han funcionado bien en la granja Nova de Belice para este propsito. Cuando las pistas no se usan para aclimatar postlarvas, son usadas para cultivar algas benficas y diatomeas las que servirn para inocular reservorios y estanques. La cantidad y capacidad de tanques para la aclimatacin debe basarse en las rutinas de siembra. La densidad recomendada para aclimatacin es 500 postlarvas/litro (Villaln 1991). La capacidad mxima es de 100 toneladas, sin embargo es preferible 50 a 75 toneladas. Si la instalacin va a ser usada solo para aclimatacin, la densidad de siembra puede ser 500 a 1,000 camarones/litro, pero si se necesita un mantenimiento mayor a 24 horas, la densidad debe caer por debajo de los 500 por litro. Algunas granjas mantienen larvas a 75 postlarvas/litro, sin embargo, pruebas de investigacin y comerciales han mostrado puede sembrarse a densidades ms altas (se discutirn posteriormente). Las densidades de siembra sugeridas dependen del tamao y edad de la postlarva, y deben ser ajustadas en periodos de mantenimiento largos.

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Procedimientos de aclimatacin de Postlarvas

Apertura de las bolsas de transporte del laboratorio Abra cada bolsa que contenga postlarva, e inmediatamente mida y anote la temperatura y concentracin de oxgeno. Evale visualmente cada bolsa. Huela el agua, observe la actividad, porcentaje de mortalidad. Si observa mortalidad en las bolsas, anote el porcentaje aproximado tomando nota, si hay, de mortalidades masivas. Si el oxgeno est bajo el nivel de saturacin (<15 mg/l), inyecte inmediatamente oxgeno al agua dentro de las bolsas de transporte hasta que se sature o alcance una lectura mnima de 12 mg\L. La saturacin de oxgeno depende directamente de la temperatura y salinidad. Preparacin de estanques de aclimatacin Toda la instalacin de aclimatacin debe ser limpiada varios das antes del arribo de la postlarva. Esto es para poder tratar los tanques, superficies y tuberas usando una solucin de hypoclorito1 por al menos una hora. Estos tambin deben ser refregados con esta solucin. Luego se debe limpiar con abundante agua y dejar secar. Se debe eliminar cuidadosamente todo residuo de hipoclorito antes que la postlarva sea llevada a la instalacin. Tambin es importante evitar usarlo en cualquier agua que contenga amonio pues puede liberar gas txico de cloro. El tanque reservorio debe llenarse con el agua del estanque a ser sembrado. La mayora de instalaciones filtra el agua de aclimatacin del reservorio a 0.5 mm o 500 micrmetros, algunos hasta a 125 micrmetros. Se debe agregar EDTA2 a cada tanque hasta alcanzar una concentracin de 2 ppm2. El agua del estanque debe enfriarse antes de colocar la postlarva. No agregue agua tibia del estanque directamente a los tanques de aclimatacin. Coloque cerca de 200 litros de agua del estanque en un tanque auxiliar y use hielo en bolsas plsticas para enfriarla a 26-27 C. Esta agua ajustar la temperatura de los tanques de aclimatacin a 25 C. Mida la temperatura, pH, oxgeno, salinidad y nivel de amonio del agua del estanque y antelas en la hoja de control de aclimatacin (Apndice 1).

Mezclas secas de cloro son el hipoclorito de sodio o calcio. Para propsitos desinfectantes, se recomienda una concentracin de 12-25 ppm. Para hacer una concentracin como sta, aada 115-168 g. de mezcla seca de cloro (la cantidad libre de cloro vara) a 500 galones de agua limpia. Use esta solucin de inmediato. Si se usa cloro de limpieza o para piscinas, se recomienda una concentracin de 2.5 ppm, la cual se obtiene mezclando 1/2 ml por litro de agua limpia. Las formulaciones lquidas contienen ms cloro libre disponible y son ms estables en el tiempo.

2 EDTA = cido tetra actico diamino etileno. Este compuesto quela rastros de metales. Dos gramos en 1,000 litros de agua rinde una solucin de 2 ppm.

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Mida la temperatura, pH, oxgeno, salinidad y nivel de amonio del agua del tanque de aclimatacin y antelas en la hoja de control de aclimatacin (Apndice 1). Mida la temperatura promedio y niveles de oxgeno en todas las bolsas plsticas y antelas en la hoja de control de aclimatacin. El agua de los tanques de aclimatacin debera ajustarse a la salinidad promedio en las bolsas de transporte, as tambin la temperatura.

Densidades recomendadas para los tanques de aclimatacin de acuerdo a la edad de postlarvas

Densidades mximas de siembra en los tanques de aclimatacin son: (nmero de postlarva/pie2 de rea del fondo del tanque)

Un ejemplo es el de la Granja Nova (Belice) que encontr que la densidad ideal para aclimatar postlarvas mayores de 12 das es 179,404 postlarvas/m3; esto se bas en sus necesidades de siembra. Esta densidad dio sobrevivencias mejores, mientras estos volmenes tomaron el menor tiempo para completar procedimientos y colocar al camarn en los estanques. Tpicamente, una densidad de siembra entre 140,000-150,000 postlarvas/m3 debera ser posible, pero esto dependera del sitio de la granja. La estacin de aclimatacin puede requerir algo ms que solo filtracin si la postlarva es mantenida por ms tiempo que el periodo de aclimatacin. Por ejemplo, si se planea retener la postlarva de 4 a 10 das extra para propsitos de cuarentena, se deben tomar medidas adicionales para mantener una adecuada calidad de agua. En este caso, puede ser necesario un sistema de recirculacin con filtro biolgico y desinfeccin UV para conservar la supervivencia alta.

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Transferencia de Postlarvas a los tanques de aclimatacin En das muy calientes, antes de pasar las postlarvas a los tanques, coloque una bolsa plstica con hielo en el fondo de cada tanque por unos pocos minutos hasta que la temperatura baje a 25 C. Tan pronto se haya transferido la postlarva, bombee suavemente oxgeno a la columna de agua para reducir los niveles de amonio. Riegue aproximadamente 50 g de pelets de carbn activado en cada tanque. Ajuste esta cantidad dependiendo del tamao del tanque. Despus de colocar todas las bolsas de transporte en los tanques de aclimatacin, haga una evaluacin "clnica" de las postlarvas. Use un beaker plstico o de vidrio de 500-1000 ml para tomar muestras de cada tanque de aclimatacin. Observe y anote en la hoja de registro (Apndice 1) la llenura del intestino, seales de muda, seales de canibalismo, presencia de camarones muertos y opacidad de la cola. Detalles completos de la evaluacin de la condicin fisiolgica son brindados por Villaln (1994). Mida la temperatura, el oxgeno y la salinidad cada 30 minutos, y el pH y amonio cada hora. Anote los resultados en la hoja de aclimatacin. Conteos volumtricos Una vez que las postlarvas han sido colocadas en los tanques de aclimatacin, tome muestras de 20-30 animales al azar y envelas al laboratorio de la granja para su evaluacin microscpica. El personal de laboratorio debera realizar conteos volumtricos y estimados de mortalidad. Si se observa mortalidad significativa en uno de los envos, el gerente de control de calidad estimar el nmero total de las postlarvas vivas en la aclimatacin basado en el estimado de mortalidad. Este conteo debe ser hecho antes que se agregue agua del estanque a los tanque de aclimatacin. Una vez hecho el conteo, se debe proceder al llenado de los tanques de aclimatacion. Niveles de oxgeno El oxgeno debera ser administrado durante la aclimatacin de la forma siguiente: Durante las primeras horas de aclimatacin los niveles de amonio son altos, por lo que los niveles de oxgeno deben mantenerse arriba del nivel de saturacin (12 mg\L - 15 mg\L). La saturacin de oxgeno depende de la temperatura del agua.

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Niveles ptimos de oxgeno de 8-12 mg\L deben de mantenerse durante la aclimatacin. Durante toda la aclimatacin, los niveles de oxgeno no deben bajar nunca de 6 mg\L. El nivel de oxgeno debe elevarse a 10 mg\L en los tanques de aclimatacin justo antes de la siembra para compensar la prdida en el viaje. Procedimiento de aclimatacin y programa para postlarva 5 a 11 (Pl5 - Pl11) El objetivo de la aclimatacin es ajustar lentamente la temperatura y salinidad de los tanques de aclimatacin de tal forma que la postlarva pueda ajustarse fisiolgicamente a las nuevas condiciones. La aclimatacin debe empezar justo despus de haber vaciado la ltima bolsa de transporte en los tanques. Luego, se debe agregar lentamente agua de los tanques reservorios a travs de un sistema de flujo continuo de tal forma que el volumen del tanque no vare. El cambio en la salinidad debe ser cuidadosamente monitoreado y la tasa de cambio no debera exceder la proveda en la siguiente tabla.

Tasas recomendadas en el incremento de salinidad para aclimatacin

Para aclimatar la temperatura se recomienda una tasa de cambio de 1 C/hora, para las postlarvas saludables la tasa de cambio puede ser 1 C por 10 minutos. Una buena estrategia es mantener la temperatura constante a 25 C por el primer 75% del tiempo de aclimatacin (mientras se ajusta la salinidad) y luego ajustar lentamente la temperatura hacia el final del periodo de aclimatacin. El mantener la temperatura constante reduce la agresividad y conserva la tasa metablica relativamente baja. Los programas de aclimatacin propuestos aqu son solo guas, y la velocidad de aclimatacin debera disminuir si las postlarvas muestran sntomas de muda creciente o estrs. Se requiere un monitoreo cuidadoso. La coloracin opaca o blancuzca, comportamiento de nado errtico, intestinos vacos, o canibalismo creciente son todos indicadores de estrs. Generalmente la larva emerger a la superficie si est estresada.

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Se recomienda al concluir la aclimatacin, liberar las postlarvas en los estanques tan pronto sea posible, a menos que el objetivo sea ponerlas en cuarentena. Mantener larvas a altas densidades despus de la aclimatacin puede acarrear problemas de pobre calidad de agua, estrs, mortalidad y enfermedades. Si se requiere retener las postlarvas despus de la aclimatacin, ser necesario filtrar y desinfectar el agua ya sea con luz UV y/u ozono. La calidad de agua local tambin debe considerarse. Es ms fcil mantener postlarvas en agua ocenica que en agua estuarina debido a que generalmente es de mejor calidad. Posteriores revisiones de la literatura por Clifford (1994) indican que las densidades ideales para aclimatacin y transporte de postlarvas son:

Tcnicas de alimentacin en instalaciones de aclimatacin o mantenimiento de postlarvas Se debe acompaar la aclimatacin con un buen rgimen de alimentacin, para que la postlarva tenga suficiente energa y combata el estrs causado por las condiciones ambientales cambiantes. La alimentacin puede empezar a la par con la aclimatacin siempre y cuando los conteos volumtricos hayan concluido.

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Alimentacin durante la aclimatacin Villaln (1991) sugiere para esto: nauplios de Artemia, yema de huevo (cocida), una dieta de hojuela comercial, y Artemia congelada. Alimentacin durante el mantenimiento Samocha et. al (1993) us densidades de siembra de 500 a 1000 postlarvas/L (500,000 a 1,000,000 por tonelada de agua) durante la aclimatacin. Luego, us una densidad de 3,200 postlarvas/m2 para el mantenimiento en pistas, con hasta un 90% de supervivencia despus de mantenerlas por 5 semanas. Ellos probaron densidades sobre las 7,800 postlarvas/m2 con 90% de supervivencia por un periodo similar en pistas, con 1.9 Kg/m2 de biomasa cosechada, sin daar su crecimiento. La postlarva fue despus arralada a 220-300/m2 y cultivada por otros 49 das, resultando un 81% de supervivencia, crecimiento promedio de 1.07 g/semana y peso promedio final de 7.3 g. La poblacin de 3,200 postlarvas/m2 se aliment con nauplios de Artemia por 8 das, iniciando con 160 nauplios por postlarva por da durante los 2 primeros das, y reduciendo la cantidad a la mitad hasta llegar a 20 nauplios de Artemia por postlarva por da en el da 8. Desde el primer da de mantenimiento se dio comida seca 6 veces al da con un tamao de racin crumble 0 (rango de tamao de partcula <0.59 mm) para postlarva de 1-15 mg promedio. Tambin recomendaron dar a partir del segundo da alimento suplementario (Artemia adulta congelada); otros suplementarios semanales podran ser usados dependiendo del nivel de suciedad por epibiontes y salud. Si se detecta suciedad o contaminacin bacteriana, se debe considerar alimentacin frecuente con Artemia para mejorar la muda. Con baja suciedad y buena salud, el suplemento debera darse solo 2 veces por semana. La cantidad total de Artemia dada durante un ciclo no debera exceder el 10% de la biomasa cosechada total esperada. Un rgimen de alimentacin similar con postlarvas de P. monodon es descrita en Treece y Fox (1993), donde se aliment Pl-4 con nauplios de Artemia a 6/ml. Una racin seca adicional se administr a razn del 100% del peso corporal dividindola en cuatro subraciones iguales por da; hasta el da 18 se mantuvo estas condiciones con 59% de supervivencia aproximadamente. La Artemia fue gradualmente retirada y su aplicacin suspendida completamente para el da 11 y se dio alimento seco al 200% del peso corporal a partir de Pl-6. Se encontr que el recambio diario de agua del 100% era adecuado en un ambiente ocenico. El agua se filtr con arena y se desinfect con photozone (UV y ozono). Calidad de agua en las instalaciones de aclimatacin y mantenimiento La calidad del agua debe ser monitoreada con cuidado mientras se tenga postlarva en tanques. El nivel mximo aceptable de amonio (NH3-N) (que tambin reduce el crecimiento en 1-2%) es 0.1 ppm (corresponde a 1.8 mg/L de amonio no ionizado NH4-N a 28 C, pH de 8, salinidad de 27 ppt). Dado que la mayora de algas utiliza amonio, ponerlas en tanques de acli-

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matacin o mantenimiento no debera ser un problema. El agregar oxgeno puro para conservarlo a saturacin tambin ayudar a reducir los problemas de amonio. El nitrato debera medirse ocasionalmente para asegurar que su nivel est bajo 1 mg/L; el nivel puede ser determinado por electrodo, estuches de prueba comerciales, o por mtodo analtico. Cualquier concentracin detectable de sulfuro de hidrgeno es considerada indeseable, dado que concentraciones de 0.01-0.05 mg/L de H2S pueden ser letales, y su olor a huevos podridos es reconocido fcilmente an a concentraciones bajas. La mayora de procedimientos de instalaciones de aclimatacin y mantenimiento involucran el uso de EDTA como agente quelante a 2 ppm o ms. sta ayuda a controlar desechos adhirindose a la extremidades del camarn, e incrementa la disponibilidad de metales trazas en agua de mar. Liberacin de postlarva a los estanques Los estanques deben prepararse para la siembra cuidadosamente (drenado, encalado del fondo, secado completo y llenado). Esto se detalla en el captulo 10. Se debe iniciar el llenado y el rgimen de fertilizacin a la par. Para esto se describen dos mtodos en el captulo 5. Tambin deben ser muy bien inspeccionados antes de sembrarlos para asegurar un bloom adecuado de algas y la ausencia de predadores. Es ideal el liberar las postlarvas en la parte ms fresca del da, cuando los trabajadores estn descansados y menos prontos a cometer errores. La cosecha de animales aclimatados es un paso crtico dado que han sido sometidos a estrs y se debe tener cuidado de no infligir estrs adicional durante este procedimiento. Los tanques de transporte deben limpiarse y secarse como se describe arriba, y luego llenarse con agua de los tanques reservorios o del estanque donde la postlarva ser sembrada. A este punto, los parmetros de calidad de agua deben ser similares en las dos fuentes de agua. Una evaluacin microscpica final de la postlarva debe de realizarse antes de continuar con el drenaje de los tanques de aclimatacin. Mientras la postlarva se drena desde el fondo del tanque, se debe colocar una lnea aireadora en el recipiente contenedor. Esto ayuda a conservar el filtro de la ranura de drenaje libre de suciedad previniendo derrames. Mientras el tanque se drena, moje las paredes del contenedor para evitar la adherencia de la postlarva en sus paredes.

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Slo drene el 20 % del volumen del tanque de aclimatacin en el contenedor antes de transferir la postlarva al tanque de transporte. Repita el procedimiento hasta drenar el tanque. Esto no tomar ms de media hora. Cada tanque de transporte debera tener una densidad final mxima de 800 postlarvas por litro, y deben ser oxigenados continuamente. La postlarva debe ser drenada de los tanques de transporte hacia el estanque a intervalos de 50 metros, con la ayuda de una manguera parcialmente sumergida en el estanque. Se debe evitar disturbios cerca del punto de descarga para prevenir el entierro de la postlarva en el fondo del estanque. La postlarva debe ser monitoreada mientras entra al estanque. La larva es siempre liberada en el lado del estanque a favor del viento pues as el viento y las olas ayudan a dispersarlas despus de la siembra. Para monitorear la sobrevivencia post-siembra se pueden usar jaulas forradas con tela de filtro. Se usan dos por estanque y se las coloca cerca del borde a una profundidad mnima de 50 cm. Se siembran 100 postlarvas en cada jaula, y 48 horas despus se las retira y se calcula cada porcentaje de sobrevivencia. El promedio de stos se toma como la tasa de sobrevivencia de siembra del estanque (debe ser mayor al 85%). La orilla de los estanques debe ser tambin monitoreada por la presencia de postlarvas muertas.

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APNDICE 1 HOJA DE CONTROL DE ACLIMATACION

Fuente: Villalon 1994

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