NUTRIO ESPORTIVA

PITGORAS

DISCIPLINA: EXERCCIO E ALTERAES CELULARES

CONTEUDISTA: LUIZ ROBERTO G. BECHARA

Tema: Estresse Oxidativo: Espcies reativas do oxignio e do nitrognio

1. INTRODUO A respirao celular e o conseqente consumo de oxignio oferecem vantagem metablica sobre a vida anaerbica devido a maior obteno de energia (ATP) durante a oxidao completa dos combustveis moleculares, como a glicose e os cidos graxos. No entanto, o metabolismo oxidativo tambm gera, intencionalmente ou no, uma srie de subprodutos reativos e potencialmente txicos, conhecidos como radicais livres Atualmente, j sabemos que os radicais livres so naturais, j que so produzidos continuamente nos seres vivos. So maus, porque em altos nveis participam direta ou indiretamente de uma srie de doenas. Mas tambm so bons, j que, em baixos a moderados nveis, participam no combate a infeces e tambm assumem funes reguladoras como controle da expresso gnica, regulao das vias de sinalizao celular e controle da produo de fora muscular esqueltica (AUGUSTO, 2006; POWERS & JACKSON, 2008). Assim, de espcies que nem os qumicos consideravam no incio do sculo XX, os radicais livres e os oxidantes deles derivados esto revolucionando a biologia e a medicina no sculo XXI. Durante esta leitura, sero esclarecidos os principais questionamentos relacionados aos radicais livres e as espcies reativas de oxignio e nitrognio, destacando os principais agentes oxidantes e as fontes de produo. Ser abordado tambm como funciona o sistema de defesa antioxidante, e quais os principais constituintes deste sistema

2. RADICAIS LIVRES, ESPCIES REATIVAS DE OXIGNIO E DE NITROGNIO Como bem relatado pelo Professor Doutor Rafael Radi, presidente de uma das mais importantes sociedades de pesquisa na rea de radicais livres (The Society for Free Radical Biology and Medicine), a vida aerbica impe seus prprios riscos j que, apesar da respirao celular e o conseqente consumo de oxignio oferecem vantagem metablica sobre a vida anaerbica devido a maior obteno de energia (ATP) durante a oxidao completa dos combustveis moleculares, o metabolismo oxidativo tambm gera, intencionalmente ou no, uma srie de subprodutos reativos e

potencialmente txicos, conhecidos como radicais livres (AUGUSTO, 2006). Mas afinal, o que so radicais livres? Os tomos e molculas possuem eltrons que geralmente so associados em pares, onde cada par se movimenta em um espao definido ao redor do ncleo denominado orbital atmico ou molecular (Figura 1). Se um tomo ou molcula contm um ou mais eltrons desemparelhados na camada orbital mais externa, e for capaz de existncia independente, este considerado um radical livre (HALLIWELL & GUTTERIDGE, 2007). este no-emparelhamento de eltrons que confere aos radicais livres uma meia-vida curta e uma alta velocidade de interao com outras biomolculas (incluindo protenas, lipdios, cidos nuclicos e aucares), atravs da captao (comportando-se como oxidantes) ou da doao (comportando-se como redutores) de eltrons e/ou tomos de hidrognio, podendo lev-las a prejuzos ou perda completa de funo (CRUZAT ET AL,. 2007).

Figura 1: Representao simplificada do modelo atmico. (Fonte: AUGUSTO, 2006).

Na verdade, radicais livres no o melhor termo utilizado para relatar todos os agentes com alta reatividade para oxidar biomolculas, j que algumas espcies qumicas tambm reativas no apresentam eltrons desemparelhados em sua ltima camada eletrnica, como o caso do perxido de hidrognio (H 2O2). Como estas espcies qumicas so, em sua maioria, derivadas do metabolismo do oxignio, utilizamos o termo geral espcies reativas de oxignio (EROs) para referirmos no somente aos radicais livres mas tambm aos agentes no-radicalares porm reativos derivados do metabolismo do oxignio. Similarmente, o termo espcies reativas de nitrognio (ERNs) refere-se a ambos radicais livres do nitrognio e outras molculas

reativas no-radicalares onde o centro reativo o nitrognio. A partir de ento, utilizaremos o termo espcies reativas de oxignio e de nitrognio para generalizar todos os radicais livres e agentes reativos no-radicalares que promovem a oxidao de biomolculas. Como no objetivo desta leitura saber detalhadamente as propriedades de cada espcie reativa, a seguir citaremos as EROs e as ERNs mais relevantes e as principais fontes de produo destes agentes oxidantes. As principais espcies reativas de oxignio incluem os radicais livres nion superxido (O2-), hidroxila (OH), peroxila (RO2), e alcoxila (RO), e tambm espcies no-radicalares que so agentes oxidantes e/ou agentes facilmente convertidos em radicais, como o perxido de hidrognio (H2O2), cido hipocloroso (HOCL) e oxignio singlete (1O2). J as ERNs mais importantes so o xido ntrico (NO ), o dixido de nitrognio (NO2) e o peroxinitrito (ONOO-). O Quadro 1 resume as principais espcies reativas de oxignio e de nitrognio destacadas nesta leitura.

O oxignio considerado o principal fornecedor de espcies reativas em organismos vivos. Em condies fisiolgicas do metabolismo celular aerbio, o O 2 sofre reduo tetravalente resultando na formao de H 2O. Durante esse processo so formados intermedirios reativos que so neutralizados com a entrada dos quatro eltrons, promovendo a reduo completa do O 2. A primeira reduo do oxignio molecular leva a formao do radical superxido. A adio do segundo eltron e de dois ons de hidrognio ao nion

superxido resulta no perxido de hidrognio. A adio do terceiro eltron, como ocorre na reao de Fenton, resulta na produo do radical hidroxila. E finalmente, a adio do quarto eltron produz gua. Alm disso, h a reao do nion superxido com o perxido de hidrognio formando radical hidroxila e oxignio molecular pela reao de Haber-Weiss (FERREIRA et al., 2007). A Figura 2 ilustra a reduo tetravalente do oxignio molecular at a formao de gua e os intermedirios reativos formados durante esse processo.

Figura 2: Reduo tetravalente do oxignio molecular e intermedirios reativos formados durante esse processo. (Fonte: FERREIRA et al., 2007).

3. PRODUO DAS ESPCIES REATIVAS DE OXIGNIO E DE NITROGNIO Atualmente j sabido que as clulas do organismo continuamente produzem, intencionalmente ou acidentalmente, EROs e ERNs como parte de processos metablicos. Essa produo pode ocorrer como um subproduto de reaes biolgicas, como ocorre na mitocndria, bem como por sistemas que geram EROs/ERNs no como um subproduto, mas sim pela prpria funo primria deste sistema enzimtico, como o caso do complexo NAD(P)H oxidase e da famlia das enzimas xido ntrico sintase (NOS, do ingls nitric oxide synthase). No decorrer dos anos de estudos relacionados as EROs/ERNs, a principal fonte de produo destas espcies foi atribuda primeiramente respirao mitocondrial, pois j se sabia que cerca de 90% do oxignio molecular consumido pelos organismos aerbios era utilizado para gerar a maioria da energia (na forma de ATP) produzida durante o metabolismo de nutrientes. Neste processo, os eltrons provenientes dos nutrientes so coletados e transportados por duas coenzimas na

forma de NADH e FADH2 at a cadeia de transporte de eltrons da mitocndria, onde so transferidos atravs de uma srie de complexos multiproticos por meio de reaes de xido-reduo (redox) at o complexo da citocromo c oxidase, que entrega os eltrons ao oxignio. Durante o processo, prtons so bombeados para o espao intermembranrio mitocondrial, gerando energia para a sntese de ATP (Figura 3). No entanto, durante a respirao mitocondrial ocorre um escape de eltrons, principalmente no complexo I e na coenzima Q, que reduzem o oxignio molecular de forma incompleta e formam EROs. Estima-se que 2 a 5% do oxignio consumido reduzido de forma univalente na mitocndria e forma o nion superxido e tambm perxido de hidrognio (GRISHAM, 1992).

Figura 3: Consumo de oxignio e sntese de ATP pela cadeia de transporte de eltrons. (Fonte: AUGUSTO, 2006)

A enzima xantina oxidase uma outra fonte de produo de EROs, principalmente nos casos de isquemia e reperfuso dos tecidos, como em alguns traumas e at durante o exerccio fsico. Durante a isquemia, ocorre hipxia temporria nos tecidos e com a reperfuso ocorre um grande aumento da quantidade de oxignio neste local isqumico. Nos tecidos em hipxia, a enzima xantina desidrogenase, responsvel pela converso de purinas degradadas em cido rico, pode ser convertida em xantina oxidase que, durante a reperfuso e na presena de xantina ou hipoxantina, promove a reduo do oxignio molecular a EROs (superxido, perxido de hidrognio e radical hidroxila) (FINALD et al., 2006).

Existem casos tambm de clulas que so especializadas, entre outras coisas, em sintetizar EROs, como neutrfilos e macrfagos. Estas clulas apresentam um complexo enzimtico, chamado NAD(P)H oxidase, que assume a primordial funo biolgica de gerar espcies reativas do oxignio pela transferncia de eltrons dos doadores NADPH ou NADH para o oxignio molecular (Bedard e Krause, 2007). Na presena de organismos invasores, disparam-se sinais que ativam este complexo enzimtico presente nestes fagcitos profissionais a produzir quantidades txicas de EROs para combater este ser invasor, participando diretamente de sua morte, o que um mecanismo fundamental de proteo clula. Atualmente, j sabido que as NAD(P)H oxidases no esto presentes apenas em fagcitos, mas tambm em inmeras clulas no-fagocticas participando diretamente do controle das vias de sinalizao intra-celular, como o controle da concentrao de clcio no citoplasma, por exemplo (ESPINOSA et al., 2006). Uma outra fonte de produo de radicais livres e que est diretamente relacionada com a sade cardiovascular a famlia das enzimas xido ntrico sintases (NOS). Estas enzimas so responsveis pela sntese de xido ntrico a partir do aminocido L-arginina utilizando NADPH e oxignio molecular. O xido ntrico um radical livre gasoso com aes biolgicas fundamentais, sendo um mensageiro celular que modula diversas funes vitais como o tnus vasomotor, a transmisso de sinais pelo sistema nervoso, a contratilidade cardaca, entre outros (DUSSE et al., 2003). Por outro lado, as prprias NOS, quando desacopladas e/ou na ausncia de seus cofatores, tambm produzem nions superxido, e isto est intimamente ligado com a progresso da aterosclerose. Independente da fonte de produo, j sabemos atualmente que as clulas dos organismos vivos produzem continuamente EROs e ERNs em baixas a moderadas concentraes operacionais como parte de seus processos metablicos, e que a gerao destas espcies qumicas desempenham inmeras funes reguladores benficas como controle da expresso gnica, regulao das vias de sinalizao celular e controle da produo de fora muscular esqueltica e cardaca, alm de participarem do combate a infeces (AUGUSTO, 2006; JACKSON, 2007; POWERS & JACKSON, 2008). No entanto, quando essa produo elevada ou descontrolada disparam-se reaes em cadeia que podem causar a oxidao de biomolculas (lipdios, protenas e DNA), consequentemente levando a prejuzos nas funes fisiolgicas e at causando injria celular, e por isso os radicais livres so considerados indesejveis pela mdia.

Mas como os organismos vivos podem ento controlar estes nveis de espcies reativas que so continuamente produzidas? A resposta : com a participao de um complexo e finamente controlado sistema de defesa antioxidante, que ser descrito a seguir. 4. SISTEMA DE DEFESA ANTIOXIDANTE O sistema de defesa antioxidante o principal mecanismo de proteo do organismo contra a produo celular contnua de EROs e ERNs, devido a sua capacidade de inibir, diminuir e remover as leses celulares causadas por estas espcies reativas. Mas afinal, o que so antioxidantes? Um antioxidante pode ser definido como qualquer substncia presente em pequena concentrao dentro da clula, comparado com as concentraes de outros substratos oxidveis, que capaz de inibir ou diminuir significativamente a oxidao destes substratos (HALLIWELL & GUTTERIDGE, 2007). Os antioxidantes podem ser tanto componentes endgenos, os quais so produzidos pelo prprio organismo como parte de sua defesa contra as EROs/ERNs, quanto podem ser componentes exgenos advindos da dieta. O sistema endgeno inclui ambos os antioxidantes enzimticos (preventivos) e os no-enzimticos (reparadores), e os antioxidantes da dieta so pequenas molculas (ALESSIO & HAGERMAN, 2006). Estes agentes antioxidantes trabalham como uma unidade complexa bem organizada e coordenada para controlar os nveis de espcies reativas. As principais enzimas antioxidantes incluem a superxido dismutase (SOD), a catalase (CAT) e a glutationa redutase (GPx). A SOD a primeira linha de defesa contra as EROs por neutralizar a formao do nion superxido (O 2-), convertendo-o em perxido de hidrognio (H2O2), uma espcie um pouco mais estvel. A catalase responsvel ento por catalisar a converso de H2O2 em gua e oxignio. Alm disso, a GPx tambm catalisa a converso de H 2O2 em gua, porm utiliza a glutationa reduzida (GSH) como agente doador de eltrons, formando a glutationa oxidada (GSSG) (POWERS & JACKSON, 2008). A figura 4 ilustra as etapas do sistema de defesa antioxidante enzimtico.

Figura 4: Etapas do sistema de defesa antioxidante enzimtico. (Fonte: DROGE, 2002).

Em relao aos antioxidantes endgenos no enzimticos, destacam-se o cido rico e a glutationa(GSH), que um tripeptdeo com propriedades redutoras por conter o aminocido cistena, e est expressivamente presente em abundncia no meio intracelular em concentraes de 5 a 10 mM, sendo considerado o agente protetor mais importante das clulas. A ao antioxidante da glutationa deve-se a sua reao direta com uma variedade de radicais livres por doar um tomo de hidrognio, ou por servir como substrato para a GPx para eliminar H 2O2, ou ainda restaurar outros antioxidantes das clulas, como as vitaminas E e C (POWERS & JACKSON, 2008). Quanto aos antoxidantes exgenos advindos da dieta, podemos destacar as vitaminas A, C e E, que tambm podem reagir diretamente com as espcies reativas bem como restaurar outros antioxidantes celulares e principalmente proteger a membrana celular da propagao da oxidao de seus lipdeos. O quadro 2 apresenta os principais antioxidantes relatados nesta leitura.

Quadro 2. Defesas Antioxidantes Enzimticas Superxido dismutase (SOD) Catalase (CAT) Glutationa peroxidase (GPx) No enzimticas (endgenas) Glutationa (GSH) cido rico Dieta Vitamina C Vitamina E Vitamina A

Como pudemos observar, existem inmeras fontes de produo de EROs e ERNs e existe um amplo e complexo sistema de defesa antioxidante responsvel por controlar os nveis destas espcies reativas no meio intracelular, onde em situaes fisiolgicas normais ambos os sistemas (produo e remoo) trabalham em harmonia para manter um equilbrio (homeostasia). Mas o que acontece se um dos componentes falhar? a partir da que se enquadram as primeiras especulaes a respeito do estresse oxidativo. E o que estresse oxidativo? O estresse oxidativo caracterizado por uma alterao no balano entre a produo de agentes pr-oxidantes (EROs e ERNs) e o sistema de defesa antioxidante a favor do lado oxidante, gerando um potencial dano oxidativo (HALLIWELL & GUTTERIDGE, 2007). Este tema ser melhor abordado na leitura fundamental da aula seguinte.

5. CONSIDERAES FINAIS Como visto nesta leitura, as clulas continuamente produzem espcies reativas de oxignio e de nitrognio, sendo elas radicais livres ou espcies no radicalares que, apesar de serem txicas por sua capacidade de oxidar biomolculas, podendo prejudicar suas funes, elas tambm so fundamentais para que os organismos vivos exeram suas tarefas biolgicas bsicas. Para garantir esta funcionalidade, as clulas so compostas de um complexo sistema de defesa antioxidante que, juntamente aos antioxidantes advindos da dieta, trabalham em paralelo produo das espcies reativas controlando seus nveis normais no meio intracelular, onde um desequilbrio entre estes sistemas pode gerar um quadro denominado estresse oxidativo.

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICA

ALESSIO, H.M.; HAGERMAN, A.E. Oxidative stress, exercise and aging. Imperial College Press, 2006.

AUGUSTO, O. Radicais livres: bons, maus e naturais. Oficina de textos, So Paulo, 2006.

BEDARD, K.; KRAUSE, K.H. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology. Physiol Rev. v.87. n.1, p.245-313, 2007.

CRUZAT, V.F.; ROGERO, M.M.; BORGES, M.C.; TIRAPEGUI, J. Aspectos atuais sobre estresse oxidativo, exerccios fsicos e suplementao. Rev Bras Med Esporte. v.13, n.5, p.336-342, 2007.

DUSSE, L.M.; VIEIRA, L.M.; CARVALHO, M.G. Reviso sobre xido ntrico. Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial. v.39, n.4, p.343-50, 2003.

ESPINOSA, A.; LEIVA, A.; PENA, M.; MULLER, M.; DEBANDI, A.; HIDALGO, C.; CARRASCO, M.A.; JAIMOVICH, E. Myotube depolarization generates reactive oxygen species through NAD(P)H oxidase; ROS-elicited Ca2+ stimulates ERK, CREB, early genes. J Cell Physiol. v.209, p.379388, 2006.

FERREIRA, F.; FERREIRA, R.; DUARTE, J.A. Stress oxidativo e dano oxidativo muscular esqueltico: influncia do exerccio agudo inabitual e do treino fsico. Rev. Port. Cien. Desp. v.7, n.2, p.257-275, 2007.

FINALD, J.; LAC, G.; FILAIRE, E. Oxidatve stress: relationship with exercise and training. Sports Med. v.36, n.4, p.327-358, 2006.

GRISHAM, M.B. Reactive metabolites of oxygen and nitrogen in biology and medicine. R.G. Lanes Co, Austin, 1992.

HALLIWELL, B., GUTTERIDGE, J. Free Radicals in Biology and Medicine. Oxford, UK: Oxford Univ. Press, 2007.

JACKSON, M.J.; PYE, D.; PALOMERO, J. The production of reactive oxygen and nitrogen species by skeletal muscle. J Appl Physiol. v.102, p.16641670, 2007.

POWERS, S.K.; JACKSON, M.J. Exercise-induced oxidative stress: cellular mechanisms and impact on muscle force production. Physiol Rev. v.88, n.4, p.1243-76, 2008.