UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA CENTRO UNIVERSITARIO METROPOLITANO FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS UNIDAD DIDACTICA DE INMUNOLOGA Y MICROBIOLOGA MDICA

TERCER AO 2008

BASES CELULARES Y MOLECULARES EN EL DESARROLLO DE LINFOCITOS B

Dr. Mario Roberto Pinto
INTRODUCCIN El ser humano tiene que enfrentar para sobrevivir en un medio ambiente adverso, a los microorganismos que lo rodean. Continuamente se interrelacionan, estableciendo una serie de luchas biolgicas. Para lo cual ha desarrollado una respuesta inmune innata y adquirida, por lo que posee una serie de clulas y molculas entre las cuales se encuentran los anticuerpos que pertenecen a la inmunidad adquirida. Las clulas que producen los anticuerpos son las plasmticas, que a su vez se originan en los linfocitos B maduros que se han originado en la mdula sea, a partir de clulas madres hematopoyticas. Las inmunoglobulinas son molculas de naturaleza glicoprotena y tienen su origen en los linfocitos B inmaduros. Las inmunoglobulinas tienen cuatro cadenas polipeptdicas: dos ligeras (L) con dominios constituidos por una variable y una constante y dos cadenas pesadas (H), que tienen una regin variable y una regin constante, a las regiones se les denominan dominios que tienen aproximadamente 110 aminocidos. Tienen 2 sitios donde se une al antgeno (FAB) y una regin que se denomina FC (Factor cristalizable) que le da las caractersticas biolgicas a las inmunoglobulinas. Los genes que participan en la sntesis de una inmunoglobulina son: por la cadena ligera una de variable y uno de constante, por la cadena pesada son un gen de variable y 4 o 5 de la constante. La diversidad de las inmunoglobulinas hacia los diferentes antgenos es de aproximadamente 108 y el mecanismo utilizado para la misma es el rearreglo gentico que se produce en las regiones variables tanto de la cadena pesada como de la ligera. Los segmentos de genes que participan en la regin variable de la cadena ligera son dos: 1) el de variable y 2) el de unin, formando un nico exn (segmento codificado). (VJ) En la cadena pesada, participan 3 segmentos que conforman el gen de la variable: variable, diversidad y unin. (VDJ). El estadio de maduracin del linfocito B, en el que se expresan la cadena pesada son: el pro-B y el de la cadena ligera es el pre-B, inicialmente la inmunoglobulina que sintetiza el linfocito B, es IgM y es expresada como inmunoglobulina de membrana en el estadio de Linfocito B inmaduro y la expresin de la IgD adicional en la membrana es caracterstica del linfocito B maduro.

En el ADN las cadenas de las inmunoglobulinas estn codificadas: las ligeras en el cromosoma 2, la Kappa y en el cromosoma 22 la Lambda y las cadenas pesadas estn codificadas en el cromosoma 14. Los anticuerpos ya elaborados tienen algunos cambios genticos en el Linfocito B maduro, para mejorar la afinidad hacia el antgeno y es la hipermutacin somtica y tambin cambian las regiones constantes de IgM a IgG, IgA e IgE, a lo que se denomina cambio de isotipo. CLULAS MADRES PLURIPOTENCIALES HEMATOPOYTICAS Las clulas del sistema inmunitario son los leucocitos y las clulas titulares relacionadas con ellos. Estas clulas tienen un origen en una clula progenitora comn llamada clulas madre pluripotencial hematopoytica (Stern Cell CMPH), de la que tambin derivan los eritrocitos y los megacaricitos (plaquetas). A este grupo de clulas se les denomina en conjunto clulas hematopoyticas y al proceso por el que las clulas madre hematopoyticas producen esta variedad de clulas se denomina hematopoyesis. Adems de generar distintos tipos celulares, tienen capacidad de autorenovarse. El sitio anatmico de la hematopoyesis cambia con la edad. En el embrin, las clulas sanguneas se producen en el saco vitelino y aparecen en la tercera semana de vida. A medida que el feto se desarrolla, algunas de estas clulas migran al hgado y bazo, a partir del cuarto y quinto mes de vida fetal, los huesos y la mdula sea empiezan a desarrollarse y la hematopoyesis empieza a desplazarse a la mdula sea y en el momento del nacimiento prcticamente toda la hematopoyesis tiene lugar all. En los adultos, la mayora de las CMPH se encuentran en la mdula sea, sin embargo estas clulas tienen capacidad de migrar hacia la circulacin, por lo que se encuentra en bajas cantidades de la sangre perifrica. A partir de las CMPH, se generan distintos progenitores. a) Progenitor mieloide, que dan lugar a la clula de estirpe mieloide. b) Progenitor Linfoide comn (PLC) a partir del cual se generan los linfocitos B y T. No se sabe como el PLC se diferencia al linaje B o T. La sealizacin a travs de un receptor presente en la membrana de los PLC, denominado NOTCH 1, induciran la diferenciacin hacia el linaje T, mientras la ausencia de esta seal permite el desarrollo y diferenciacin B. Los PLC que no expresan receptores NOTCH, expresan molculas de adhesin celular (CAM), que se unen a receptores del estroma y tambin la molcula VLA-4, que se une a la molcula de adherencia de clula vascular 1 (VCAM-1) de las clulas del estroma de la mdula sea y empieza a diferenciarse en la primera clula de linaje B que se reconoce en la mdula sea que es la Pro-B temprana, cuya caracterstica ms importante es expresar en la membrana celular el receptor C-Kit que recibe la citoquina producida por las clulas del estroma Factor de Clula Madre (SCF) y posiblemente sea el factor principal para expresar el receptor para IL-7 que tambin expresan la lnea de linfocitos T y clulas NK. En este momento, se expresan los factores de transcripcin PU-1, encargados de controlar la diferenciacin, proliferacin y supervivencia del linaje de clulas B. Los

niveles intermedios de PU-1, son decisivos para el desarrollo en la mdula sea del linaje de linfocitos B. Se han identificado otros factores de transcripcin que cumplen un papel fundamental en las etapas tempranas de la maduracin linfocitaria, agrupados con el nombre de Ikaros y que incluye los factores Helios y Aiolos. Ikaros pertenece a la familia dedos de Zinc y se asocia con el compromiso temprano de la serie linfoidea, siendo fundamental su coexistencia con PU-1 para generar las clulas Pro-B. Otros factores involucrados en la maduracin de los linfocitos B, en su transcripcional temprana, son dos factores pertenecientes a la familia hlice-bucle-hlice. a) La protena E2A b) La protena EBF (early B-cell factor) La ausencia de cualquiera de estos factores en el desarrollo de las clulas B, se bloquea en una etapa temprana, antes del rearreglo DH-JH de la cadena pesada de las inmunoglobulinas. Estos dos factores son imprescindibles en la sntesis de: Las cadenas sustitutas 5 y V pre B La molcula de sealizacin Ig (Alfa) e Ig (Beta) Los genes de recombinacin Rag-1 y Rag-2 El repertorio de anticuerpos es generado por sucesivos rearreglos de los genes de la cadena pesada y liviana, durante la etapa Pro-B y Pre-B. LINFOCITOS PRO-B La recombinacin V(D)J de genes de inmunoglobulina depende de la actividad de protena especfica, como las recombinasas Rag-1 y Rag-2, que reconocen especficamente secuencia de seales de recombinacin (SSR). Este proceso se halla controlado por los factores de transcripcin E2A y EBF, que regulan la expresin espacio temporal de Rag-1 y Rag-2 y lo hacen en forma secuencial. La activacin del programa de genes especficos de los linfocitos B y la recombinacin V(D)J por E2A y EBF no es suficiente por lo que es necesaria la participacin del Factor de Transcripcin Pax 5 que es de tipo secuencial en la activacin de estos factores de transcripcin. El Pax 5, es un regulador crtico en el desarrollo de los Linfocitos B y acta en forma subsecuente a E2A y EBF. Los Linfocitos Pro-B tienen 2 etapas, el Pro-B temprano en el que se establece la primera recombinacin (o rearreglo) del ADN y es entre los genes D-J en los dos cromosomas de la cadena pesada (H), luego en la etapa de Pro-B tardo, se recombina el gen de la variable (V) con los genes D-J, en el primer cromosoma (14), si falla, utiliza el segundo cromosoma, si hay fallo en ambos cromosomas, el linfocito Pro-B entra en apoptosis.

La diversidad de unin es de 65 segmentos de genes variables (V), 27 de diversidad (D) y 6 de unin (J), para un total de 10,530 dominios variables posibles de la cadena pesada (H). El dominio de la cadena pesada, est conformada por los genes V/D/J. El proceso de recombinacin somtico que produce su dominio variable de la cadena pesada, se produce por corte y empalme del ARN mensajero. Hay un sistema que asegura el ensamblado correcto de los distintos fragmentos gnicos durante el proceso de recombinacin somtica de manera que un fragmento V se asocie a uno D, pero no con otro gen V. La recombinacin solo ocurre entre fragmentos gnicos, que se encuentran en un mismo cromosoma y est guiado por secuencias conservadas de ADN no codificante, denominado secuencias seales de recombinacin (SSR). Las SSR se encuentran adyacentes a los puntos donde se lleva a cabo la recombinacin. La unin entre los fragmentos recombinados (VH-DH-JH) es imprecisa y puede ser un fuerte adicional de variabilidad para la porcin variable de las inmunoglobulinas. El complejo enzimtico que acta para producir la recombinacin (VDJ), se conoce con el nombre de recombinasa VDJ. Los productos de los genes RAG-1 y RAG-2, forman parte de esa recombinasa y solo se expresan en los linfocitos B en desarrollo (Pro y Pre-B). Estas enzimas poseen actividad endonucleasas y son responsables del corte de la cadena ADN. El resto de las enzimas que forman parte de la recombinasa, como

ligasa IV o la enzima ADN-PK, estn involucradas en la separacin, modificacin y plegado del ADN. El complejo RAG- se une al espaciador de 23pb (pares de bases) y otro al espaciador de 12pb, de tal forma que una secuencia de SSR que contiene un espaciador de 12pb es adosado a una que contiene un espaciador de 23pb. Esto se conoce como la regla 12/23 y asegura que los segmentos gnicos se unen en el orden correcto. Las molculas de ADN se cortan en los extremos de las secuencias heptameras y luego se unen con topologas diferentes. La regin del ADN que estaba originalmente entre los segmentos V y DJ se eliminan como un crculo pequeo que no tiene ninguna funcin. La unin constituida para formar este crculo se llama unin de seal. Dentro del ADN cromosmico, los segmentos V y DJ, se unen para formar una unin codificante. La formacin de esta unin implica la apertura de las horquillas que se formaron en el punto original de corte en cada segmento de V y DJ y la reparacin del ADN de una manera que introduce variabilidad adicional en la secuencia de nucletidos alrededor de la unin. Las enzimas de separacin de la cadena de ADN incrementan aun ms la diversidad, ya que son capaces de agregar o eliminar nucletidos al azar en los sitios de unin de los fragmentos gnicos. Los nucletidos adicionados, se conocen con los nombres de nucletidos P y N. Los nucletidos P, se adicionan por las enzimas responsables de la separacin del ADN y reciben este nombre, ya que generan secuencias poliandrmicas. Los nucletidos N, son adicionales sin templado por la enzima TdT (Deoxinucleotidil Transferasa Terminal) y se encuentran principalmente en la unin VH- DH y DH JH. La presencia de nucletidos N en la cadena L es rara, debido a que la enzima TdT, en los linfocitos B, solo se expresa durante los rearreglos de la cadena H que es previo al de la cadena L.

Los dominios variables de las inmunoglobulinas presentan tres regiones hivervariables denominadas CDR1, CDR2 y CDR (regin de diversidad complementaria). Tantos en las cadenas L como H, los CDR1 y CDR2, estn codificados dentro de los genes V. En la cadena H el CDR3 est ubicado en la unin del segmento VH y DH JH. En ambas cadenas el CDR3 es la que presenta mayor variabilidad debido a la adicin y sustraccin de nucletidos que se producen durante la unin de los segmentos gnicos. LINFOCITOS PRE-B Tiene 2 etapas, la clula Pre-B grande, la cual ya tiene reordenada la cadena pesada (H) que forma una protena asociada a la membrana llamada Mn. Las cadenas pesadas no pueden transportarse y expresarse en la membrana celular a menos que formen un complejo con las cadenas ligeras. Al final de las clulas Pro-B, empiezan a sintetizarse dos protenas conocidas con el nombre de cadenas ligeras, sustitutas o subrogadas, que pueden fijarse a las cadenas pesadas, toman el lugar de las cadena aligeras y mostrarse transitoriamente en la membrana celular. Estas no son protenas de inmunoglobulinas verdaderas, solo se expresan durante este breve periodo, derivan de genes que no sufren rearreglo somtico y no desempean ninguna funcin inmune. Una vez en la membrana, ambas cadenas se asocian con el heterodmero Ig Alfa e Ig Beta para formar el denominado Pre-BCR, este complejo identifica el siguiente estadio de maduracin. El pre-BCR traduce seales de supervivencia. La segunda etapa de este perodo es la clulas Pre-B pequea, deja de expresarse las cadenas ligeras subrogadas e inicia una etapa de proliferacin hasta que comienza el reordenamiento de los genes que codifican la cadena L. El inductor de esta proliferacin es la IL-7 producida por las clulas del estroma y se deja de expresar la TdT y para que pueda producirse este rearreglo vuelven a expresar los genes RAg-1 y RAG-2. Los rearreglos de la porcin variable de la cadena ligera (L), tambin estn dirigidos por el fenmeno de la exclusin alelica e involucra la asociacin de fragmentos V L y JL. Existen dos locus distintos para la cadena L: Kappa () y Lambda (). Los genes de la cadena Kappa, son los ms simples y estn codificados en el cromosoma 2 y la Lambda est codificada en el cromosoma 22. La recombinasa primeramente intentar un rearreglo productivo de la cadena L y en caso que no lo consiga, intentar rearreglar esa misma cadena en el alelo presente en el otro cromosoma. Si estos intentos no fueran exitosos, comienzan los rearreglos en la cadena L, primero en un cromosoma y luego en el otro, normalmente un 65% de los linfocitos B logra un rearreglo exitoso en la cadena y el restante 35% en la cadena Lambda. El primer gen denominado gen VL codifica el dominio variable y est contenido por 2 segmentos de gen separados, llamado segmento variable (V) y segmento de unin (J). Una vez que se produjo la asociacin VL JL, este segmento queda separado de la regin constante de la cadena liviana (CL) por un intrn y esta configuracin, la que se transcribe al ARNm. Para producir la cadena liviana completa, luego de la

transcripcin, el intrn se separa del fragmento VL JL del CL, se elimina por un proceso denominado corte y empalme (Splicing) del ARNm. Figura 4

Figura 5

LINFOCITO B INMADURO Una vez que los genes de la cadena L se reordenan con xito, la cadena empieza a sintetizarse y se combina con la cadena HM, que se encontrar anclada en el retculo endoplsmico rugoso junto al heterodmero Ig - Ig y entonces empieza a expresarse el BCR caracterstico del estadio B inmaduro en la membrana celular. Una vez que el linfocito alcanza el estadio B inmaduro, los mecanismos de control se orientan hacia la especificidad del receptor y se activan mecanismos capaces de controlar a los linfocitos cuyos BCR puedan reconocer molculas propias en el ambiente de la mdula sea. Los linfocitos B inmaduros que no reciben seales a travs de su BCR, salen de la mdula sea hacia el bazo, para continuar su proceso de maduracin. La ausencia de seales a travs del BCR del linfocito B inmaduro induce disminucin de la expresin de protena RAG y el cese de los reordenamientos. Las protenas RAG continan disminuyendo hasta desaparecer cuando el linfocito B alcanza la madurez en el bazo. Los linfocitos B inmaduros generados en la mdula sea que son capaces de reconocer antgenos propios, tienen dos destinos, si perciben una seal interna a travs del BCR (ejemplo reconocimiento de molculas multivalentes) producen entrelazamiento extensivo con los BCR de membrana y mueren por apoptosis en la mdula sea. Antes de morir el linfocito B puede reemplazar el BCR autoreactivo por otro que no lo sea, a travs de reactivar la protena RAG, a este mecanismo se le conoce con el nombre de Edicin de BCR. Los linfocitos B inmaduros que en la mdula sea entrecruzan levemente su BCR con antgenos propios solubles, se inactivan y entran en un estado irreversible de no respuesta a la que se denomina anergia. Estos linfocitos B autoreactivos, si bien emigran de la mdula sea, no son capaces de activarse en la periferia y mueren pronto. Los linfocitos B que no reconocieron antgenos propios en la mdula sea, porque no fueron expuestos a los mismos, pueden en la periferia exponerse y entrar en anergia y luego apoptosis. LINFOCITOS B MADUROS Los linfocitos que tienen BCR una inmunoglobulina M y que han sobrevivido en la mdula sea de la seleccin central, un reconocimiento de antgenos propios pasan al Bazo y tiene un periodo corto de tiempo cuando empiezan a expresar la IgD de membrana y se les conoce como linfocitos B transicionales (BTr) que tiene 2 subpoblaciones, el tipo 1 (BTr 1) tiene IgM alto e IgD bajo, se encuentran en la circulacin, en la vaina linfoide periarterial del Bazo y el tipo 2 (BTr 2) con expresin de IgM alto e IgD alto que se ubican preferentemente en los folculos esplnicos y luego pasan a linfocitos B maduros, para lo cual son necesarias seales de sobrevivencia a travs del BCR y al parecer el factor activador de los linfocitos B (BAFF), es fundamental en esta etapa, utiliza receptores de la familia del FNT y es producido por macrfagos, clulas dendrticas y linfocito T activado y es capaz de activar los factores de transcripcin NF KB y AP 1 y es un factor importante de sobrevivencia del linfocito B maduro. En los linfocitos B maduros existen tres poblaciones: las clulas B1, B2 y las clulas B de la zona marginal del Bazo. Los linfocitos B1, son las primeras clulas B que se generan durante el desarrollo embrionario y el hgado fetal que es el principal productor, se encuentran raramente en rganos linfoideos secundarios y sangre, pero prevalecen en las cavidades

peritoneales y pleural. Son capaces de autorenovarse localmente o sea expandirse sin el estmulo antignico. La quimiocina CXCL 13 cumple un papel fundamental en la migracin y la residencia de los linfocitos B1, estos expresan niveles altos de IgM y bajos de IgD y su principal funcin es la produccin de anticuerpos dirigida contra antgenos bacterianos no proteicos como polisacridos, fosfotidilcolina y lipopolisacridos, a estos antgenos se les denomina antgenos T independientes de tipo 2 (Ti-2), presentan eptopos repetidos que producen entrecruzamiento marcado con el BCR, probablemente son estos tipos de antgenos los que marcan a este grupo de linfocitos y no la influencia del sistema T. Estos linfocitos producen cantidades importantes de anticuerpos IgM que reciben el nombre de anticuerpos naturales. Ejemplo las aglutininas de los grupos sanguneos A, B, O. Los linfocitos B de la zona marginal del Bazo (BZM) estn especialmente adaptados para producir grandes cantidades de IgM especfica en los primeros 3 a 4 das despus de la estimulacin antignica. En la zona marginal esplnica, donde residen estos linfocitos, se reduce el flujo sanguneo y permite el contacto ntimo entre los antgenos y los linfocitos BZM, lo que posibilita que estos linfocitos sean los primeros en entrar en contacto con antgenos que circulan en la sangre, dado el flujo sanguneo que pasa a travs del Bazo. Una vez activados, los linfocitos BZM se transforman en plasmoblastos, se dirigen a la periferia de la lmina periarterial linfoctica y proliferan activamente, formando focos de clulas plasmticas productoras de anticuerpos IgM, no recibiendo seales coestimuladas de los linfocitos TH2 y responden preferentemente a antgenos polisacridos de bacterias capsulares. El complemento y sus receptores representan un papel crucial en los linfocitos BZM. El receptor 2 para el complemento (CR2 o CD21) al formar un complejo con CCD1 y TAPA-1, constituye el correceptor del receptor de los linfocitos B para el antgeno (BCR). El receptor CD21 une el componente C3d, fraccin del complemento activado, sin las fracciones estas del complemento, los linfocitos BZM no pueden unirse al antgeno eficientemente, lo que reduce sus anticuerpos necesarios para opsonizar bacterias con cpsula y que puedan ser fagocitadas. Los Linfocitos B2 Constituyen el 90% de los linfocitos B de la sangre y de rganos linfoideos y su funcin principal es reconocer antgenos proteicos y diferenciarse en clulas productora de anticuerpos (clulas plasmticas), gracias a la colaboracin de los linfocitos TH2. El primer paso en la activacin de los linfocitos B consiste en el reconocimiento de antgenos solubles por su receptor de membrana (BCR). El cual puede ser en la sangre o bien en los folculos linfoideos de los rganos linfoideos secundarios. El entrecruzamiento del BCR de la membrana del linfocito induce la activacin de proteincinasa de la familia Src, que median la fosforilacin de tirosina de los dominios ITAM (motivo de activacin de Tirosina por el inmunoreceptor), del heterodmero Ig Alfa Ig Beta. La fosforilacin de los dominios ITAM permite el reclutamiento de otra tirosincinasa denominada Syk, que fosforila a la protena adaptada BNLK, esta ltima favorece el reclutamiento de las Tec cinasas, las cuales fosforilan y activan a la enzima fosfolipasa C-Gamma (PLC-), que escinde a los fosfolpidos de membrana PIP 2 y da lugar a la formacin de IP3 y diacilglicerol (DAG). El IP3 induce la liberacin de calcio de los reservorios intracelulares, mientras el DAG activa la Protein Cinasa C (PKC). Una tercera va transduccional se pone en marcha que involucra la activacin de protenas G de bajo peso molecular, como Ras y Rac, por factores llamados GEF (Guanin Exchange Factors), que conduce a la activacin de los MAP cinasas (MAPK). Las distintas vas de sealizacin conducen en ltima instancia a la activacin de los

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factores de trascripcin NFB, NFAT y AP-1 capaces de regular la transcripcin de diversos genes que conducen a la expresin de receptores para IL-2, IL-4, IL-5, Gamma Interfern, CCDR2, as como expresin de CD40, CD80, CD86 y CMH tipo II, que se traducir en divisin celular y presentacin de antgenos a linfocitos TH2 y a recibir la cooperacin T a travs de citoquinas, que inducirn cambio del isotipo en las inmunoglobulinas y maduracin a clulas plasmticas a travs de activar factores de transduccin. Figura 6

El solo reconocimiento del antgeno por el BCR no es suficiente para inducir proliferacin del linfocito B, para lo cual el linfocito B acta como una clula presentadora de antgeno, capta el antgeno con su receptor de membrana, lo introduce en una vacuola endoctica, lo procesa y lo convierte en pequeos ppticos que introduce en las hendiduras de su CMH tipo II y se los presenta a los linfocitos TH2 tipo II, especialmente en las reas de folculos primarios a donde acuden a travs de quimiocinas como el CXCL13 por la clula folicular dendrtica, aumentando la expresin del CCR7, especfico para las quimiocinas CCL19 y CCL21 predominantes en esas zonas. Una vez en el interior del folculo primario, siguen proliferando y dan lugar al centro germinal, a estos linfocitos B se les conoce como Centroblastos, los centros germinales se desarrollan una semana despus de la estimulacin antignica, por linfocitos TCD4, que se encuentran en los folculos, son parecidos a los TH0, producen

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CXCL13 y pueden producir IL-4 y Gamma Interfern e IL-2, cuando los Centroblastos dejan de proliferar, se convierten en los centrocitos. Los linfocitos TH0 por accin de citoquinas como IL-4 se transforman en TH2 y al recibir antgenos presentados por los linfocitos B, se unen estrechamente a travs de las molculas CD40 y CD40L de los linfocitos T, as como otras molculas de CD80 y CD86 con el CD28. En el centro germinal, los genes que codifican las cadenas pesadas y livianas de la Ig, sufren una serie de modificaciones que darn como resultado la produccin de anticuerpos de mayor afinidad por el antgeno y de isotipo diferente de la IgM. Estas modificaciones moleculares comprenden:

1)
2)

Hipermutacin somtica que altera la porcin variable de la Ig. El cambio o switch del isotipo que reemplaza la porcin constante de una cadena pesada por otra de una clase diferente.

Hipermutacin somtica Es un mecanismo por el cual la porcin variable de las cadenas pesadas y livianas de las Ig sufren mutaciones puntuales con una tasa muy alta. Como consecuencia, luego de cada mitosis, las clulas hijas expresan porciones V(D)J diferentes del linfocito B que les dio origen. Se da una mutacin por cada generacin de linfocitos B. Al proceso de la hipermutacin somtica se le llama maduracin de la afinidad de los anticuerpos. Los linfocitos B que han reconocido antgenos por el BCR e inician su proceso metablico de activacin, expresan receptor para la IL-2 lo que inicia la generacin de clonas de los linfocitos B en el folculo linfoideo, pero tambin la activacin de una enzima, la citidina desaminasa, inducida por activacin (AID), una enzima que convierte los residuos de citidina del ADN un uracilo. A su vez los residuos de uracilo son cortados por la enzima uracilo ADN glucosilasa (UNG) y en la siguiente replicacin del ADN de la clula B, se introducen nucletidos no reconocidos por un molde (Nontemplated) en estos sitios. Hay ruptura del ADN y la incorporacin posterior de errores, durante la reparacin. Las mutaciones son al azar, muchas de ellas son perjudiciales para las clulas B, ejemplo: Pueden impedir la expresin de la Ig de membrana, lo que conduce a la apoptosis de la clula, otras veces disminuyen la capacidad de reconocimiento del epitopo antignico, al no reconocer el antgeno que hay que procesar para presentar al linfocito T y entonces no se producen las molculas cooperadoras que producen seales de supervivencia para los linfocitos B, por lo tanto hay muchas muertes por apoptosis en los centros germinales y los macrfagos de estas reas los eliminan. La regin donde se producen la mayora de cambios de la hipermutacin somtica, son en las regiones hipervariables de las regiones variables, que son las regiones de determinacin de complementariedad (CDR) y se designan CDR1, CDR2 y CDR3 a partir de la ms cercana al extremo amino Terminal. La CDR3 a partir de la ms cercana al extremo amino Terminal. La CDR3 es la ms larga y variable de las tres.

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Cambio de Isotipo Es un proceso que ocurre luego del contacto antignico. Los primeros anticuerpos producidos en una respuesta humoral son siempre de isotipo M pero a medida que progresa la respuesta comienzan a observarse anticuerpos de igual especificidad antignica, pero de distintos isotipos. Esto es consecuencia de la asociacin de la porcin VDJ de la cadena H con una porcin constante diferente de la cadena M. A nivel genmico, se observa una regin con secuencias GAGCT y GGGGGT altamente repetidas a la izquierda (Upstream) de los genes que codifican cada una de las porciones constantes. Estas regiones llamadas regiones de switch, son imprescindibles para que se produzca la recombinacin del ADN, aunque no se han identificado con exactitud cuales son las enzimas responsables de la ruptura y religamiento del ADN. Se sabe que las citoquinas Gamma Interfern inducen el cambio a IgG, la IL4 cambio a IgE y el Factor de Transformacin de Crecimiento Beta a IgA. La citidina desaminasa inducida por activacin (AID), es una enzima capaz de modificar el ARN al convertir la citidina en Uracilo por desaminacin, este proceso se llama edicin de ARN, es una enzima que edita el ARN mensajero. En el cambio de isotipo la desaminacin del ARNm por la AID dara lugar a la ruptura del ADN. Cuando no se expresa la AID, se produce el sndrome de Hiper IgM, no hay cambio de isotipo y no hay hipermutacin somtica. Figura 7

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DIFERENCIACIN DE CENTROCITOS EN LINFOCITOS B DE MEORIA O EN CLULAS PLASMTICAS. Los centrocitos que han sobrevivido en el centro germinal, dan lugar a dos tipos de clulas: Plasmoblastos que abandonan el centro germinal para completar una diferenciacin a clulas plasmticas productora de Ig de alta afinidad y linfocitos B de memoria. Los factores que inciden en uno u otro destino son: la afinidad del BCR por el antgeno y la unin del Linfocito B al T, si se establece una unin muy fuerte entre CD40 y CD40L, favorece la formacin del LB de memoria. En cambio la unin de la molcula OX40 y el OX40L de los linfocitos T, favorece la diferencia al fenotipo plasmocito, pues deja de expresarse el factor de transduccin BCI-6 que reprime una batera de genes que incluye el factor Blimp-1 (B-Lymphocyte-induced maduration protein -1) un poderoso regulador de la diferenciacin de linfocitos B hacia clulas plasmticas. Tambin la expresin de citoquina como IL-10, IL4 e IL5 favorece a la expresin de clulas plasmticas y solo la expresin de IL-4 a un fenotipo de memoria. El Blimp 1 su expresin es suficiente para inducir la formacin de clulas plasmticas y si no se expresa este factor, la clula plasmtica no produce anticuerpos. Los plasmocitos son dos: Uno de vida media corta (pocos das) o de vida media larga (meses o aos). Es una respuesta inmune secundaria, la mayor parte de los anticuerpos sricos provienen de estos plasmocitos de vida media larga, que siguen produciendo anticuerpos, aun cuando el antgeno ya no est presente. Los plasmocitos generalmente residen en la mdula sea y las clulas del estroma les proveen de factores solubles y factores asociados a la membrana que aseguran la supervivencia de los plasmocitos. Entre los primeros, destacan la IL-6, mientras que la integrina VLA-4 expresada por las clulas plasmticas es crucial para mantener el contacto con las clulas estromales de la mdula sea y asegurar la supervivencia. Dado que las clulas plasmticas tienen como funcin principal la secrecin de Ig, su fenotipo y su morfologa se adaptan a ellos. Desaparecen de su membrana las molculas responsables de mediar la activacin antignica del linfocito B, como el BCR, CD19, CD21 y CD22, as como el CMH tipo II. Al mismo tiempo experimenta un aumento notable en la relacin citoplasma-ncleo, ya que deben sintetizarse grandes cantidades de Ig, presentando un retculo endoplsmico rugoso prominente y vacuolas secretorias.

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