Crecimiento microbiano

En microbiologa el crecimiento se define como el incremento en el nmero de clulas.

La biparticin (fisin binaria) es el proceso por el cual una clula se divide para formar dos clulas iguales. El intervalo que transcurre en la formacin de dos clulas a partir de una clula se llama generacin y el tiempo requerido para esto es el tiempo de generacin o tiempo de duplicacin.

Fisin binaria
Durante la fisin binaria cada clula hija recibe una copia del cromosoma, de los ribosomas, complejos macromoleculares, as como monmeros y iones inorgnicos para existir como una clula independiente. El ADN se ancla a la membrana y as, cada clula hija se queda con una copia. Se forma un septo que dar lugar a cada una de las clulas, las envolturas rodean a cada copia del ADN y finalmente se da la separacin de las clulas.

Protenas Fts
Las protenas Fts (filamentous temperature sensitive) interactan para formar el aparato de divisin llamado divisoma. FtsZ polimeriza y forman una anillo en el centro de la clula. FtsA es una enzima ATP hidrolasa que provee la energa para ensamblar protenas en el divisoma. ZipA ancla a FtsZ a la membrana citoplasmtica. FtsI es una protena involucrada en la sntesis de peptidoglucano y es tambin llamada protena de unin a penicilina (su actividad es bloqueada por el antibitico).

Replicacin del ADN

La replicacin del ADN ocurre previo a la formacin del anillo FtsZ, este se forma en el espacio entre los cromosmas duplicados. MinC es un inhibidor de la divisin celular y previene que FtsZ ensamble el anillo hasta que el centro se encuentre formado. MinE inhibe la actividad de MinC y se ancla al centro de la divisin. FstK participa en la elongacin. FstZ tambin tiene actividad de GTP hidrolasa, libera energa para la polimerizacin y despolimerizacin, as como para el ensamblaje y desensamblaje del anillo.

Protena MreB y la forma de las bacterias

La presencia de la protena MreB se ha relacionado con la forma de las bacterias no cocoides. FtsZ tubulina bacteriana. MreB actina bacteriana.

Nature Cell Biology 5, 175 - 178 (2003)

Autolisinas
Pequeas aberturas son llevadas a cabo por las enzimas autolisinas que tiene una funcin similar a la lisozima. Las autolisinas se encuentran presentes en el complejo divisoma. La sntesis del nuevo peptidoglocano deja en la clulas Gram positivas una cicatriz. Las aberturas y la sntesis debe ser coordinada para evitar la autolsis de la clula.

Bactoprenol y transpeptidacin
El bactoprenol acarrea los precursores de la pared celular, en el periplasma interacta con la enzima que inserta los precursores de pared celular y cataliza la formacin del enlace glucosdico.
La transpeptidasa forma el enlace peptdico entre las cadenas de aminocidos de las unidades de murena.

Crecimiento exponencial
Cuando un cultivo se duplica de manera regular durante un intervalo de tiempo, se denomina crecimiento exponencial.
Una grfica aritmtica del crecimiento muestra un incremento constante mientras una logartmica (log10) permite observar con respecto al tiempo cuando el crecimiento es exponencial y puede entonces calcularse el tiempo de generacin.

Tiempo de generacin
Tiempo de generacin (G) es el tiempo requerido para que una clula se divida o una poblacin se duplique.

G = t/n
Si partimos de una clula al cabo de una generacin habr duplicado su nmero y as sucesivamente en cada generacin. Como se puede comprobar el crecimiento se produce en progresin geomtrica: 1 generacin -------------> 2 clulas 2 generaciones -------------> 4 clulas 3 generaciones -------------> 8 clulas 4 generaciones -------------> 16 clulas 5 generaciones -------------> 32 clulas

Tiempo de generacin
To -------------> No 1 generacin -------------> 2No = No21 2 generaciones -------------> 4No = No22 3 generaciones -------------> 8No = No23 4 generaciones -------------> 16No = No24 5 generaciones -------------> 32No = No25 n generaciones (T) -------------> N = No2n

N = No2n lg N = lg No + n lg 2

n = ___________________ lg 2

lg N - lg No

n = ____________________ 0.301

lg N - lg No

n = 3.3 (lg N - lg No)

G = ___________________________ 3.3 (lg N - lg No)

Tiempos de duplicacin
Bacteria Medio Tiempo de duplicacin (minutos)
17 25 26

Escherichia coli Bacillus megaterium Streptococcus lactis

Glucosa-sales Sacarosa-sales Leche

Staphylococcus aureus
Streptococcus lactis

Medio de infusin de corazn

Medio con lactosa

27-30
48

Lactobacillus acidophilus
Rhizobium japonicum Mycobacterium tuberculosis Treponema pallidum

Leche
Manitol-sales-extracto de levadura Medio definido Testculos de conejo

66-87
344-461 762-932 1980

Log del nmero de microorganismos A B C D E Tiempo

Curva de crecimiento

Curva de crecimiento
A (Fase Lag). Periodo de latencia o adaptacin: no hay aumento significativo de la densidad celular, el crecimiento es asincrnico. B (Fase Log). Periodo de crecimiento exponencial, el crecimiento es sincrnico y se alcanza la mxima velocidad de crecimiento. C (Fase pre-estacionaria). Periodo de retardo desaparece el crecimiento exponencial, los microorganismos entran en estrs. D (Fase estacionaria). Periodo estacionario: no hay cambios significativos de la densidad celular con respecto al tiempo, existe un equilibrio entre los microorganismos vivos y muertos. E (Fase de muerte). Fase en la que el equilibro desaparece y predominan los microorganismos muertos. No hay nutrientes para el recambio y las condiciones del medio de cultivo son adversas para el crecimiento.

Tipos de cultivo
Cultivo en lote Cultivo en lote alimentado

Cultivo en continuo

Temperatura
Velocidad de crecimiento (2)

ptimo

(3)

(1). Gelificacin de la Mnimo membrana; los Mximo procesos de transporte se llevan a (1) (4) cabo lentamente y Temperatura no hay crecimiento. (2). Las reacciones enzimticas aumentan su velocidad. (3). Las reacciones enzimticas se llevan a cabo a su mxima velocidad. (4). Desnaturalizacin de protenas y membrana citoplasmtica. Lisis trmica.

Temperatura.

Temperatura. Clasificacin.
Clasificacin de microorganismos de acuerdo a su temperatura ptima de crecimiento
Psicrfilos Mesfilos Termfilos Hipertermfilos Termfilos extremos 0 - 20C 20 - 40C 40 60C 60 80C > 80C Flavobacterium sp. 13C (b-) Escherichia coli 37C (b-) G. stearothermophylus 60C (b+, esp) Thermococcus celer Pyrodictium brockii

Psicotrficos: Microorganismos que crecen a temperatura ambiente pero causan contaminacin en condiciones de refrigeracin.

Temperatura.

Nature 409, 1092-1101 (22 February 2001)

Microorganismos patgenos

E. coli

Candida albicas

Trichomonas vaginalis

Helicobacter pylori

pH
Microorganismos pH
1 2 Acidfilos 3 4 5 6 Neutrfilos 7 8 9

10
Alcalfilos 11 12 13

14

pH

Nature 409, 1092-1101 (22 February 2001)

pH 3.33.5

pH 8.88.3

Temperature and pH requirements for growth distinguish thermophilic bacteria and archaea.
Zona en la que las bacterias estn mejor adaptadas. Zona en la que las arqueas estn mejor adaptadas. Zona en la que ambas estn bien adaptadas.

Nature Reviews Microbiology 5, 316-323 (April 2007)

Oxgeno
Enzimas
Aerobios
Obligados Facultativos Es necesario para el crecimiento, contiene SOD y catalasa. Crecen mejor en presencia de oxgeno, presentan SOD y catalasa. Requieren baja concentracin de O2, presentan SOD y catalasa. Respiracin aerobia Respiracin aerobia, anaerobia y fermentacin Respiracin aerobia Micrococcus luteus P. aeruginosa Enterobacter sp. S. cerevisiae

Metabolismo

Ejemplos

Microaerofilicos

Spirillum vollutans

Anaerobios
Aerotolerantes Obligados No requieren O2, pero crecen en su presencia. Slo SOD. El O2 es letal, no contiene enzimas destoxificantes Fermentacin Fermentacin o respiracin anaerobia S. pyogenes Clostridium sp. Metanobacterium formicicum

Relacin con el O2
Crecimiento en medio fluido de Tioglicolato.

Aerobio obligado

Aerobio facultativo

Microaeroflico

Anaerobio aerotolerante

Anaerobio obligado

Cultivo de anaerobios
Jarra de anaerobiosis NaHCO3 + NaBH4 + O2 CO2 + H2O + H2

Enzimas destoxificantes
O2 + e- O2- + e- + 2H+ H2O2 + e- + H+ HO. + e- + H+ Reaccin general: O2- Superoxido H2O2 Peroxido de hidrgeno H2O + OH. Radical hidroxilo H2O Agua O2 + 4e- + 4H+ 2H2O

Superoxido dismutasa (SOD) O2- + O2- + 2H+ H2O2 + O2 Catalasa H2O2 + H2O2 2H2O + O2 Peroxidasa H2O2 + NADH + H+ 2H2O + NAD+

Concentracin de solutos
Concepto
No Halfilos Halfilos moderados Halfilos extremos Halotolerantes

Definicin
Crecen en concentraciones de 1-6 % de NaCl Crecen en concentraciones de 6-15% de NaCl Crecen en concentraciones de 15-30% de NaCl Toleran disminuciones en el aw pero crecen mejor en ausencia de solutos. Son capaces de vivir en altas concentraciones de azcares. Crecen en condiciones de aw bajo.

Osmfilos Xerfilos

Actividad del Agua

aw es la relacin entre la presin de vapor del aire
aw
1.000 0.995

en equilibrio con una sustancia o solucin a la presin de vapor a la misma temperatura del agua pura. Medio de crecimiento
Agua pura Sangre humana

Microorganismos que desarrollan

Caulobacter, Spirillum Streptococcus, Escherichia

0.980
0.950 0.900 0.850 0.850

Agua salada
Pan Miel de maple, jamn Salami Pastel de frutas, jalea

Pseudomonas, Vibrio
Muchos cocos G+ Cocos GSaccharomyces rouxii Saccharomyces bailii, Penicillium

0.800
0.750

Lagos salados
Cereales, dulces, frutas secas

Halobacterium, Halococcus
Xeromyces bisporus y otros hongos xerfilos.

Solutos compatibles
Son compuestos que forman los microorganismos para compensar la concentracin de solutos exterior.
Aminocidos: Glicina-betana y ectoina
CH3 CH3 N CH2 COOC CH3 N
Ectoina

CH2 N CH2 C COO-

CH3
Glicina-Betaina

Carbohidratos: Sacarosa y trehalosa Poli alcoholes: Manitol y glicerol Otros: KCl y propionato dimetilsulfonico (PDS)

Formacin de solutos compatibles

Organismo
Bacterias no fottrofas
Cianobacterias de agua dulce Cianobacterias marinas Algas marinas Cianobacterias de lagos salados Bacterias fototrpicas, anoxignicas haloflicas ( Ectothiorhodospira) Arqueas halfilas extremas (Halobacterium) y algunas bacterias (Haloanaerobium) Alga verde haloflica (Dunaliella) Levaduras xerfilas Hongos filamentosos xerfilos

Soluto principal
Glicina betana , prolina (G+), glutamato (G-)
Sacarosa, trehalosa a-glucosilglicerol Manitol, glucosidos, prolina, PDS Glicina betana Glinina betana. Ectona, trehalosa KCl

aw mximo
0.97 0.90
0.98 0.92

0.90 0.75

0.75

Glicerol Glicerol Glicerol

0.75 0.83 0.62 0.72 0.61