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UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

SAPONINAS ESTEROIDES

Profesor Alejandro Martnez Martnez Facultad de Qumica Farmacutica

E-mail: amart@muiscas.udea.edu.co

Medelln, Junio de 2001

Alejandro Martnez M.

SAPONINAS ESTEROIDES

Las saponinas esteroides son glicsidos esteroides con un ncleo espirostano (Figura 1) que tienen la propiedad de hemolizar los glbulos rojos y forman espuma abundante y estable al agitar sus soluciones acuosas1,2.

RO R=H, Sapogenina esteroide R=Carbohidratos (Deoxi), Saponina esteroide

BIOGENESIS La porcin esteroide de las saponinas esteroides (tambin denominada sapogenina o aglicona esteroide) se origina por la ruta de la acetilCoenzima va cido 1Hostettman, K., Marston, A.; "Chemistry and Pharmacology of Natural Products. Saponins", Cambridge University Press, New York, NY, 1995, 548 pp, ISBN 0-521-329701.

Wallen, G. R. y Yamazuki, K., editores; En: Advances in Experimental Medicine and Biology, Vol. 404, Plenum Press, N. Y. 1996 (ISBN 0-306-45393-2).
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mevalnico y escualeno. La Figura 2 resume esquemticamente el proceso. Una vez formado un precursor esteroide con 27 tomos de carbono (p.ej. colesterol), este es deshidrogenado para originar 3-colestanona. La colestanona es hidroxilada en los carbonos 16, 22 y 27. Este intermedio altamente hidroxilado en la cadena lateral puede sufrir una deshidratacin entre los hidroxilos 16 y 22, lo que origina 3-furostanona; o puede sufrir adems otra deshidratacin entre los hidroxilos 22 y 27 restantes, lo que da lugar al anillo espirostano propiamente dicho. La 3espirostanona puede ser reducida a 3-espirostanol, el cual puede sufrir procesos enzimticos de glicosilacin para originar las saponinas esteroides.

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Figura 2. Origen biogentico de sapogeninas y saponinas esteroides HIDROLISIS3 Como O-glicsidos, las saponinas esteroides se hidrolizan fcilmente en medio cido o enzimticamente. Ambos procesos liberan una o varias unidades de

3Tschesche, R., y col.; PHYTOCHEMISTRY 17, 1781-1782 (1978).

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carbohidratos ligados, y la denominada SAPOGENINA ESTEROIDE4. Las saponinas y sapogeninas presentan propiedades fsicas, qumicas y biolgicas diferentes. Para la hidrlisis cida a 20 mg de saponina se adiciona HCl 2N metanlico. Se refluja al menos durante una hora. Se neutraliza con NaHCO3 y se extrae la sapogenina mediante particin con cloroformo5.

NOMENCLATURA Muy comnmente, a las saponinas esteroides se las denomina con nombres vulgares con terminacin INA. La IUPAC establece el nombre de estas a partir del ncleo bsico ESPIROSTANO. La figura 3 muestra las estructuras de varias saponinas esteroides conocidas.

R 3Glu-1Ram 3Glu

R1 R2 R12 H H H H H H

C-5 C-C C=C

C-25 -

NOMBRE COMUN Sarsaporrillsido Dioscina

H H H H H

H H O H H

C=C C=C C-C C=C C-C -

Diosgenina Ruscogenina Hecogenina Yamogenina Digitogenina

OH H H H H H

H OH

FUENTE Smilax sp., Liliceas Dioscorea sp., Dioscorceas, por ejemplo "ame" Dioscorea sp., Dioscorceas, por ejemplo "ame" Ruscus sp., Liliceas Agave sp., Agavceas, por ejemplo "Fique" Digitalis sp., Escrofulariceas

4N.A.: Algunos autores tambin usan el trmino AGLICONA en lugar de SAPOGENINA. 5 Abdel-Gawad, M. M., et al., FITOTERAPIA 70 (4) 371-381 (1999).
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Figura 3. Estructuras de algunas saponinas esteroides naturales Para el caso de la sapogenina de la dioscina, la cual se conoce con el nombre comn de diosgenina, su nombre IUPAC es (24R)-Espirost-5-n-3-ol. Por otro lado, para la hecogenina (la sapogenina de la heconina) su nombre IUPAC es: (24R)-11-oxa-espirostn-3-ol. ENSAYOS DE RECONOCIMIENTO Las saponinas esteroides se pueden reconocer fcilmente en los anlisis fitoqumicos preliminares mediante los ensayos de la espuma, hemlisis de glbulos rojos, Liebermann-Burchard y ensayos para carbohidratos. a. Ensayo de la Espuma Al agitar una solucin acuosa de una muestra que sea o contenga saponinas, se forma una espuma estable como la obtenida al agitar la solucin acuosa de un jabn. Puesto que existen otras sustancias que pueden formar tambin espuma, se debe asumir este ensayo como una prueba presuntiva de la presencia de saponinas esteroides. b. Ensayo de Hemlisis Este ensayo es ms confiable que el de la espuma. A una suspensin de glbulos rojos en solucin salina diluida, se aade una solucin de la muestra que se presume que es o que contiene saponinas. Si los glbulos rojos se rompen (lisan o hemolizan), se asume que la prueba es positiva. Este ensayo puede realizarse en tubo de ensayo49, en cajas de Petri con agar-sangre o en cajas de Petri con gelatina-sangre51. Cuando la muestra contiene taninos, deben eliminarse antes de realizar la prueba ya que la interfieren. Esto se logra por tratamiento repetido de la muestra con xido de magnesio, el cual forma complejos insolubles con los taninos, por lo cual es fcil eliminarlos por filtracin. Este ensayo, junto con el de la espuma, cuando ambos resultan positivos en una muestra vegetal (extracto, fraccin sustancia pura) permiten establecer que la muestra es contiene saponinas. La sola prueba de espuma positiva no es concluyente para determinar la presencia de saponinas. Adems hay sustancias que interfieren estas dos pruebas como son los taninos. Si la muestra contiene taninos, estos pueden eliminarse pues se absorben en MgO. c. Ensayo de Liebermann-Burchard Por la porcin esteroide que poseen las saponinas esteroides, este ensayo puede confirmar su presencia por ejemplo en muestras y extractos vegetales, tal como se indic anteriormente para los esteroles, pero debe tenerse en cuenta que al igual que en el caso de los esteroles -y los esteroides en general- solamente dan un resultado positivo los que tengan grupos dienos conjugados reales o potenciales. Sin embargo otras saponinas como las triterpenoides tambin dan

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positiva la prueba. d. Ensayos para carbohidratos La presencia de carbohidratos ligados puede reconocerse fcilmente mediante ensayos como el de Molisch, el de la Antrona, etc., o mediante anlisis por cromatografa en papel, utilizando carbohidratos de referencia. EXTRACCION Y AISLAMIENTO Las saponinas esteroides por su carcter glicosdico, son insolubles en solventes apolares. Para obtenerlas de las plantas o animales, el material seco y molido se desengrasa previamente con un solvente apolar (generalmente ter de petrleo o n-hexano). El marco se extrae con etanol, metanol, n-butanol, mezclas de diferentes proporciones de estos alcoholes y agua. El extracto acuoso (libre de alcohol) se liofiliza o se concentra en rotavapor, y se hace pasar por resinas de intercambio inico a fin de eliminar sustancias inicas. El eluato acuoso se pasa luego a travs de materiales como el Sephadex LH-20 para separar las saponinas de otras molculas como pptidos y macromolculas que dificultan su purificacin cromatogrfica. Una vez obtenidas las saponinas crudas, se pueden purificar por cromatografa en columna o lquida de alta eficiencia. En el caso de la cromatografa en columna, se puede utilizar slica gel y eluentes como los BAW y mezclas Cloroformo-Metanol-Agua. Para el anlisis por cromatografa en capa fina pueden utilizarse condiciones como las reportadas para el anlisis de saponinas en frutas6. Para el anlisis y fraccionamiento por HPLC pueden utilizarse condiciones similares a las reportadas para saponinas triterpenoides7, gimsensidos8 y saponinas de la soya9. La determinacin de los carbohidratos ligados se hace mediante la hidrlisis cida. Los carbohidratos liberados se identifican por cromatografa en papel frente a muestras autnticas o por cromatografa de gases de derivados estables (p. ej. trimetilsililteres, metilteres, etc.). Ciertos derivados como los teres TMS-(+)butilglicsidos permiten adems identificar los ismeros D y L10. La tcnica combinada cromatografa de gases-espectrometra de masas (CG-EM) permite tambin el reconocimiento de los carbohidratos ligados en forma de derivados trimetilsililteres de alditoles-MBA11 mediante el mtodo de Hakomori, como se explica ms adelante.

6. J. AGR. FOOD. CHEM. 32, 691 (1984). 7. J. CHROMATOG. 368, 433 (1986). 8. J. CHROMATOG. 362, 291 (1986). 9. J. CHROMATOG. 361, 410 (1986). 10Ferreira, F. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (5) 1409-1416 (1996). 11. J. CHROMATOG. 259, 159 (1983).
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CARACTERISTICAS ESPECTRALES a. Espectroscopia Infrarrojo Adems de las bandas de absorcin caractersticas de las sustancias esteroides, las saponinas y sapogeninas esteroides presentan varias bandas originadas por tensiones C-O de los anillos pirano y furano, localizadas alrededor de 850, 900, 920 y 987 cm-1. Por otro lado, la intensidad relativa entre las bandas a 900 y 920 cm-1 permite determinar la estereoqumica del carbono 25. De acuerdo con esto si la banda alrededcor de 900 es ms intensa que la de 920 cm-1, la configuracin del carbono 25 es R, y en el caso inverso es S12. Algunos procedimientos para la deteccin y valoracin de sapogeninas esteroides se basan en estas bandas de absorcin. En el caso de los furastanoles (sapogeninas sin el anillo pirnico), estas cuatro bandas no se observan13. b. ESPECTROMETRIA DE MASAS Las sapogeninas esteroides presentan espectros de masas 70 eV, en los cuales pueden apreciarse el ion molecular y los fragmentos m/z: 115 y 139, siendo alguno de estos el pico base del espectro. La figura 4 muestra los mecanismos de fragmentacin que explican la formacin de estos dos ltimos iones. Budzikiewicz y col. tambin racionalizaron los mecanismos de formacin probable para iones M114, M-129 y M-14350, la figura 5 describe dichos mecanismos.

12Hu, K., y col.; PLANTA MED. 62, 573-575 (1996). 13 Abdel-Gawad, M. M., et al., FITOTERAPIA 70 (4) 371-381 (1999).
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Figura 4. Mecanismos de formacin de los iones m/z 115 y 139, caractersticos en el espectro de masas 70 eV de sapogeninas espirostnicas Para las saponinas esteroides se estn utilizando actualmente tcnicas de Espectrometra de masas con ionizacin suave como Desorcin de Campo (FD), Ionizacin Qumica (CI)14 y Bombardeo con Atomos Rpidos (FAB) las cuales permiten adems de conocer el peso molecular, establecer los carbohidratos ligados15. Un ejemplo de su utilidad se observa para el caso del espectro de
14 Abdel-Gawad, M. M., et al., FITOTERAPIA 70 (4) 371-381 (1999). 15Mimaki, Y. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42(4), 1065 (1996).
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masas FAB de iones negativos de la saponina: (22s,25s)-5a-espirostn-3b-ol 3-O{O-b-D-galactopiranosil-(12)-O-[b-D-xilopiranosil]-(13)-O-b-D-glucopiranosil-(1 4)-b-D-galactopiransido}16: O m/z 577 O

xil glu

gal

O m/z 739 m/z 871

gal [M-H]- = 1033 m/z 901 Figura 6. Esquema de la fragmentacin de una saponina esteroide en Espectrometra de masas FAB de iones negativos Otras variantes de la Espectrometra de masas son por ejemplo MALDI-TOF17 y la CID (disociacin inducida por colisiones) que permiten reconocer patrones de fragmentacin de saponinas esteroides18. c. ESPECTROMETRIA DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR Las sapogeninas esteroides pueden reconocerse en sus espectros de Resonancia Magntica Protnica por las seales de los protones localizados sobre los carbonos unidos a tomos de oxgeno como son: C-16, C-3, C-26, C-18 y C-19. La seal del protn 16 aparece alrededor de 4.0-4.5 d en forma de un cuartete o un doble doblete19. La seal del protn 3 aparece alrededor de 3.5 d cuando en el carbono 3 existe un grupo hidroxilo. Los protones del C-26 resuenan en 3.3-4.0 d (H-26
16Inoue, T., et al.; PHYTOCHEMISTRY 39(5) 1103 (1995). 17a) Cotler, R. J.; ANAL CHEM. 64, 1027A-1039A (1992). b) Li, Y. et al.; ANAL. CHEM. 68 (13) 2090-2096 (1996). 18Ferreira, F. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (5) 1409-1416 (1996).
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Putalun, W., y col., J. NAT. PROD. 62, 181-183 (1999).

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ecuatorial dd, J=10 y 2-3 Hz; H-26 axial dd, J=10 y 10 Hz). Los protones del metilo-18 resuenan como un singlete en 0.7-0.8 ppm y los del metilo-19 en 0.9-1.2 ppm, tambin en forma de singlete. El desplazamiento qumico de los protones de los metilos 21 y 27 depende de la estereoqumica del C-2520. As, estos resuenan como dobletes (J=7 hz) alrededor de 1.08 y 0.98 ppm respectivamente en ismeros 25S, mientras que en los ismeros 25R resuenan en 0.96 y 0.78 ppm respectivamente21.
0.96d (25R) 1.08d (25S) 0.7-0.8s O 0.9-1.2s 4.5m O 3.3-4.0m 0.78d (25R) 0.98d (25S)

3.5m RO

En los espectros de Resonancia Magntica de Carbono-1322, se aprecian las seales de los carbonos 16, 22, 25, 26 y 27, alrededor de 80, 110, 30, 65 y 17 d respectivamente. En el caso del ismero 25S los carbonos C-25, C-26 y C-27 resuenan alrededor de 27, 65 y 16 ppm respectivamente si no tienen sustituyentes oxigenados, mientras que en el ismero 25R resuenan alrededor de 30, 67 y 17 ppm, respectivamente23. Los carbohidratos ligados presentan espectros caractersticos24.

20 Tori, K. y col., STEROIDS 39(1) 73 (1982). 21QUIMICA ACTUALIDAD Y FUTURO 4(1) 35-39 (1994). 22Agrawal, P. K., Jain, D. C.; Gupta, R. K.; Thakur, R. S.; PHYTOCHEMISTRY 24 (11) 2479-2496 (1985). 23QUIMICA ACTUALIDAD Y FUTURO 4(1) 35-39 (1994). 24Agrawal, P. K.; PHYTOCHEMISTRY 31 (10) 3307-3330 (1992).
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O 110

65 (25S) 67 (25R) 27 (25S) 30 (25R) 16 (25S) 17 (25R)

O 80

RO

Debido a que esta ltima tcnica de anlisis permite asignaciones estructurales finas, es muy utilizada actualmente25. d. REGLA DE KLYNE26 A partir de las rotaciones pticas de la saponina y la sapogenina correspondiente, es posible determinar si los carbohidratos ligados estn enlazados a travs de un enlace a- b-glicosdico. Para esto se convierten los valores [a]D de la saponina y la sapogenina en valores de rotaciones moleculares [M]D mediante la frmula: [M]D = [a]D . M / 100 donde M es el peso molecular. Con estos valores se determina la diferencia:
DC

= [M]D saponina - [M]D sapogenina

La regla de Klyne establece que si DC es alrededor de +305, el enlace glicosdico es a, pero si es alrededor de -61, el enlace glicosdico es b. Un ejemplo de la aplicacin de esta regla est reportado para el b-glucopiransido de yamogenina27. Metodo de Hakomori Debido a que muchas saponinas esteroides contienen ms de un monosacrido ligado, generalmente en el C-3, para poder establecer las uniones glicosdicas
25 Abdel-Gawad, M. M., et al., FITOTERAPIA 70 (4) 371-381 (1999). 26Kawasaki, K., y col.; CHEM. PHARM. BULL. 10, 703-708 (1962). 27. PLANTA MED. 49, 38-42 (1983).
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entre ellos y asignar la estructura total de tales compuestos se utiliza el denominado mtodo de Hakomori. Este mtodo se basa en que al hacer una metilacin exhaustiva del glicsido, todos los grupos hidroxilos libres presentes en los carbohidratos ligados son convertidos en grupos metoxilos. En cambio los enlaces glicosdicos y hemiacetal permanecen estables. La hidrlisis cida del producto de metilacin libera los grupos hidroxilos que participan en los enlaces glicosdicos a determinar y rompe los enlaces hemiacetal generando un grupo carbonilo y un hidroxilo libre en cada molcula de carbohidrato. Luego de esto se hace una reduccin con NaBH4, en la cual los grupos carbonilos obtenidos a partir de los enlaces hemiacetal son reducidos hasta grupos metileno. La acetilacin de esta mezcla lleva a que los hidroxilos formados por la hidrlisis de los enlaces hemiacetal, y los hidroxilos obtenidos por la reduccin del enlace ter formen los correspondientes acetatos. Los productos obtenidos corresponden a los denominados alditoles metilados y acetilados, y el patrn de metilacin/acetilacin permite establecer las uniones entre ellos. Estos derivados son lo suficientemente estables y se pueden identificar por CG-EM, y utilizando fases estacionarias quirales se pueden reconocer si se trata de derivados alditoles de monosacridos ismeros D L. Para comprender mejor este mtodo supongamos que se tiene una saponina como la siguiente:

O HO HO

6 O 1

OH HO HO

(R = aglicona esteroide)

OH

Al someter a metilacin exhaustiva esta saponina se produce:

O MeO MeO O O OMe MeO MeO O OMe R (R = aglicona esteroide)

Al someter a hidrlisis cida este producto se rompen los enlaces glicosdico (16)
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y (1O-aglicona), y los dos enlaces hemiacetal de los dos monosacridos, se obtiene: HO OH O MeO MeO OMe OH + MeO MeO OH O OH OMe + R-OH

Al tratar esta mezcla de derivados con borohidruro de sodio se reducen los grupos carbonilo y se obtiene: HO OH MeO MeO OMe OH + MeO MeO OH OH OMe + R-OH

La acetilacin de esta mezcla produce: AcO OAc MeO MeO OMe OAc + MeO MeO OAc OAc OMe + R-OAc

II

Al analizar por CG-EM esta mezcla se obtiene por un lado el tiempo de retencin el cual es caracterstico de este tipo de derivados (denominados derivados alditol) y el espectro de masas, el cual tambin es caracterstico de cada uno de estos derivados, y se comparan con compuestos de referencia. De esta manera se identifica con precisin cada uno de ellos. Volviendo al ejemplo, el derivado alditol I corresponde al 1,5-diacetato de 2,3,4-trimetoxi-ramnitol con un peso molecular de 306 g/mol, y el derivado alditol II corresponde al 1,5,6-triacetato de 2,3,4trimetoxi-glucitol con un peso molecular de 336 g/mol. El que un derivado sea 1,5diacetilado y el otro sea 1,5,6-triacetilado sugiere que en la saponina natural el C-6
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de uno de los dos monosacridos est implicado en el enlace glicosdico con el otro monosacrido, y descartando el C-5 (presente en la mayora de carbohidratos luego de romper el enlace hemiacetal), se puede establecer que la unin glicosdica entre los dos carbohidratos en este caso es (16).

DISTRIBUCION NATURAL Las saponinas esteroides se encuentran principalmente en varias familias de la clase monocotilednea, como son: Liliaceae, Dioscoreaceae y Amaryllidaceae (Agavaceae). En las dicotiledneas, se las ha encontrado en las familias Solanaceae y Scrofulariaceae. En el reino animal, las estrellas de mar constituyen el nico ejemplo de animales con saponinas esteroides. IMPORTANCIA FARMACEUTICA DE SAPONINAS ESTEROIDES Aunque algunas saponinas esteroides han mostrado diversas actividades biolgicas (antimicrobiana, citotxica28, antitumoral, ictiotxica, molusquicida29, insecticida, antihelmntica, expectorante, diurtica, cardiovascular, antiinflamatoria, anti-lcera, espermicida, analgsica, antipirtica, sedante, antifertilidad, antihepatotxica, hemoltica30, antimictica, etc.) fundamentalmente se han constituido desde hace bastante tiempo, como precursores nicos de muchos medicamentos esteroides tales como hormonas sexuales, corticoides, contraceptivos orales y diurticos31,32. La figura 7 muestra algunos ejemplos de medicamentos esteroides producidos a partir de esteroides naturales. La produccin industrial de estas sustancias requiere una serie de procesos microbiolgicos de fermentacin y una serie de conversiones qumicas relativamente complejas33 y en su gran mayora patentadas por los grandes laboratorios farmacuticos34,35,36,37. La

Hu, K., Kobayashi, H., Dong, A., Jing, Y., Iwasaki, S., Yao, X., Antineoplasic Agents III: Steroidal glycosides from Solanum nigrum, Planta medica 65, 35-38 (1999). 29 Abdel-Gawad, M. M., y col., FITOTERAPIA 70 (4) 371-381 (1999).
28

30 Takechi, M. y col., PLANTA MED. 64 (2) 179 (1998). 31Hostettmann, K., Marston, A.; "Chemistry and Pharmacology of Natural Products: Saponins", Cambridge University Press, New York, NY , 1995, ISBN 0-521-32970-1. 32Desgagn, M. et al.; CAN. PHARM. J. 122 (8) 403 (1989). 33a) Iizuka, H.; Naito, A.; "Microbial Trajsformation of Steroids and Alkaloids", Univ. Park Press, State Coll., Pensylvania, 1984. b) Martin, C. K. A.; "Biotechnology", Vol 6a, Verlag Chemie, Weinheim, 1984, p. 79. 34Mahato, S.B.; Mukherjee, A.; PHYTOCHEMISTRY 23 (10) 2131-2154 (1984). 35Mahato, S.B.; Mukherjee, A.; PHYTOCHEMISTRY 24 (7) 1403-1421 (1985).
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Figura 8 muestra un esquema de la produccin de hormonas esteroides a partir de la diosgenina obtenida de los rizomas de Dioscorea sp. La Figura 9 muestra un esquema de la produccin de medicamentos corticoides a partir de la hecogenina acetilada. La Figura 10 muestra un esquema para la produccin de hidrocortisona a partir del estigmasterol presente en la semilla de soya ( Glycine max o Glycine soja) o del haba de calabar (Physostigma venenosum). La Figura 11 describe el proceso de produccin de medicamentos esteroides a partir de colesterol (obtenido de la lana de oveja, de la mdula espinal y cerebro de ganado vacuno) o sitosterol (obtenido de la soya o del aceite se semilla de algodn). La Figura 12 describe la obtencin de medicamentos esteroides a partir del denominado "compuesto s" que es el intermedio clave para varias clases de medicamentos esteroides. La Figura 13 describe cmo la progesterona puede ser convertida por fermentacin con hongos en varios productos esteroides. La conversin de sapogeninas 3-hidroxiladas en derivados 3-oxa-4-eno (una funcionalidad presente en muchos esteroides bioactivos) se puede realizar a travs de microorganismos como Mycobacterium sp.38 En nuestro pas existen varias especies de ames silvestres como Dioscorea coriacea, propia de los sitios altos cerca a la ciudad de Medelln (Santa Elena, La Ceja, San Pedro, etc.), Dioscorea polygonoides (sudoeste de Antioquia), Dioscorea santanderensis (en Puerto Valdivia), el "ame de aire" Dioscorea bulbifera que crece en Medelln39, y Dioscorea trifida "ame o batata" una planta promisoria de Colombia y otros pases del Convenio Andrs Bello40. El fique, el cual es usado por los campesinos para elaborar canastas y productos artesanales, se obtiene de las hojas de Agave sp., sin embargo no se ha evaluado su uso potencial como fuente de saponinas esteroides.

36Mahato, S.B.; Banerjee, S.; Podder, S.; PHYTOCHEMISTRY 28 (1) 7-40 (1989). 37Mahato, S.B.; Majundar, I.; PHYTOCHEMISTRY 34 (4) 883-898 (1993). 38 Lee, S. S. y col., J. NAT. PROD. 61, 275 (1998). 39Patio G. Daniel J.; "Utilizacin Terapetica de Nuestras Plantas Medicinales"; 1a. edicin, Ediciones Tercer Mundo, Bogot, 1984, pp. 139-140. 40Henry Yesid Bernal y otros, "ESPECIES VEGETALES PROMISORIAS", Tomo VII, Secretara del Convenio Andrs Bello, Bogot, Edit. Guadalupe, 1992.

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O Ac

O
O

O O

OAc

A cO

Ac O

AcO

O OH

O OH Br

Ac O

Br Br

AcO

F
OH HO O OH HO OH O OH O OH O OH

F
O

Hidrocortisona

Prednisolona

Prednisona

Figura 8. Esquema del proceso de obtencin de medicamentos esteroides a partir de diosgenina (F = fermentacin).
O O
AcO AcO Br O

O O Br
AcO O

OH

O O Br

O HO F O R O O

O OH R

O
O

9 etapas
AcO

O AcO

9-fluorocorticoides

Acetato de 11-cetopregnenolona

Acetato de 11-cetotigogenina

Figura 9. Esquema de la conversin de acetato de hecogenina en medicamentos fluorocorticoides

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CH O

2 etapas
H O O O

Estigmasterol

O H O F O O R H O

Oc A O O H

9 etapas
O

9-fluorocorticoides

Figura 10. Esquema de la conversin industrial de estigmasterol en derivados de la cortisona

R O

2 etapas
HO

R=H, colesterol R=Et, sitosterol

Androstenodiona

2 etapas
OH COOH OH

etc.
O O

Etisterona

Figura 11. Esquema de la conversin de colesterol y sitosterol en medicamentos esteroides contraceptivos orales

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Dehidrotestololactona

OH O OH Cylindrocarpon radicicola O O OH Rhizopus sp. OH O OH Aspergillus sp. O O

Testololactona

Aspergillus sp. O

Compuesto S
Streptomyces fradiae HO Curvularia lunata OH O OH

Hidrocortisona Androstenodiona
HO OH O OH O OH

14-hidroxicortisona

Figura 12. Algunas conversiones microbianas del denominado compuesto "S" un intermedio clave en la produccin de medicamentos esteroides Otras drogas vegetales con saponinas esteroides incluyen la sarsaparrilla41, la alfalfa42, otras especies de Dioscorea43, etc.

41Osborne, F. et al.; CAN. PHARM. J. 129 (5) 48 (1996). 42Briggs, C.; CAN. PHARM. J. 127 (2) 84 (1994). 43Briggs, C. J.; CAN. PHARM. J. 123 (9) 413 (1990).
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PROBLEMAS 1) PHYTOCHEMISTRY 1989, 28: 2509 600 g de Frutos verdes secos y molidos de Solanum meridense, Solanaceae se reflujaron durante 2 horas con HCl 2M. Luego de esto se dej enfriar y se hizo una particin con cloroformo. La fase clorofrmica se someti a Cromatografa en Capa Fina (CCF) con slica gel y eluyendo con la mezcla Diclorometano-MetanolFormamida 93:6:1. Se obtuvo una fraccin de Rf aprox. 1.0-0.8. Esta fraccin se someti de nuevo a CCF con slica gel eluyendo con Benceno-Acetato de Etilo 10:2. De esta forma se aisl un slido de Rf aprox. 0.65, con P.F. 159-62C y con las siguientes caractersticas espectrales: IR (KBr): 1740, 1250, 1700, 980, 960, 920, 900 cm-1. Siendo la banda a 900 ms intensa que la de 920 cm-1. EMIE (70 eV): 472, 413, 139 (100), 115 (43) RMN1H (CDCl3): 0.73 d (d, 3H, j=7), 0.75 (s, 3H), 0.95 (d, 3H, j=7), 1.20 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 3.35 (m, 1H), 5,10 (m, 1H). RMN13C d : 38.4, 29.6, 72.7, 30.2, 56.5, 209.1, 96.7, 37.4, 54.0, 36.5, 21.3, 39.5, 40.8, 56.6, 31.4, 80.4, 62.4, 16.6, 13.0, 41.7, 14.3, 109.2, 31.6, 28.8, 30.2, 66.9, 16.9, 170.1. Determine la estructura de esta sustancia y asigne su nombre IUPAC. 2. PHYTOCHEMISTRY 1989, 28: 1985. Del extracto etanlico de las partes areas de Kallstroemia tabuloides, Zygophylaceae; se aisl una sustancia con las siguientes caractersticas espectrales: EMIE: 432, 139 (100), 115 EMIE (Acetilado): 516, 139, 115 IR (KBr): 920 > 900 cm-1 RMN13C d : 42.4, 14.4, 110.0, 27.3, 25.9, 26.2, 65.0, 16.1, etc. Determine la estructura ms probable para esta sustancia. 3. PHYTOCHEMISTRY 1988, 27: 3324. Del extracto metanlico de los frutos de Asparagus officinalis, Liliaceae; se obtuvo de la fraccin soluble en ter de petrleo una sustancia slida de P.F. 197-9C, [a]20D= -76 (Cloroformo, c 1.5), y con las siguientes caractersticas espectrales:

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IR (KBr): 980, 920, 900, 855 cm-1 (920 > 900). EMIE 70 eV: 416, 399, 139 (100), etc. Determine la estructura ms probable para esta sustancia. 4. PHYTOCHEMISTRY 1982, 21: 1820 Del extracto etanlico de las races de Agave cantala, Agavaceae; se aisl una sustancia la cual se someti a reflujo durante 5 horas con cido sulfrico al 9%. Luego de una particin con cloroformo se obtuvo un slido de P.F. 275-6C y con 20 [a] D= -45 (cloroformo, c 0.7). Esta sustancia posee las siguientes caractersticas espectrales: IR (KBr): 3480, 980, 950, 915, 895 (895 > 915) cm-1 EMIE (70 eV): 432 (9), 417 (1.9), 414 (0.4), 363 (10), 360 (26), 318 (16.2), 303 (11.5), 300 (8.8), 289 (26.3), 271 (10.3), 253 (3.3), 139 (100), 115 (20), etc. RMN1H (90 Mhz, CDCl3-CF3COOH): 0.70 d (s, 3H), 0.80 (d, 3H), 0.90 (d, 3H), 0.97 (s, 3H), 4.50 (q, 1H), etc. Determine la estructura ms probable de esta sustancia. 5. PHYTOCHEMISTRY 1983, 22: 2259 Del extracto metanlico de las races de Asparagus sprengeri, Liliaceae; se aisl la sustancia A. Esta sustancia se someti a reflujo durante 3 horas con HCl al 7%. Luego de una particin con cloroformo, de la fase orgnica se obtuvo una sustancia B. La fase acuosa se neutraliz con Carbonato de plata, se concentr y se analiz por cromatografa en papel eluyendo con la mezcla BAW 4:1:5; al comparar con sustancias de referencia se detect la presencia de D-xilosa (Rf 0.28) y D-glucosa (Rf 0.18). La sustancia B es un slido de P.F. 200-2C y [_]20D= -128 (cloroformo, c 1), con las siguientes caractersticas espectrales: IR (KBr): 3400, 3020, 2845, 980, 918, 898, 860, 835, 802 (898 >918) cm-1. EMIE: 414 (5.7), 396 (2.3), 345 (6.7), 300 (25), 282 (42.3), 271 (23), 253 (21.1), 139 (100), 115 (16.6). %C = 78.15 %H = 10.20

Se acetila para dar un derivado de P.F. 189-90C, [a]20D=-115, IR (KBr): 1730 cm-1.

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6. STEROIDS 24, 205 (1974) Determine las estructuras ms probables para la brisbagenina y la brisbenona, las cuales presentan las siguientes caractersticas: a) Brisbagenina P.F. 203-4C EMIE: 432, 318, 300, 290, 287, 279, 139 (100). RMN-1H: 0.77 (s, 3H), 0.85 (s, 3H), 0.77 (d, J=6 Hz, 3H), 0.95 (d, 3H, J=7 Hz). IR : 3420, 1050, 980, 920, 900, 867 cm-1. b) Brisbenona P.F. 204.5-6C EMIE: 412 (M+.), 139 (100), etc. RMN-1H: 5.81 (d, J=10.5 Hz, 1H), 7.10 (d, 1H, J=10.5 Hz), etc. IR: 1680, 980, 920, 898, 864 cm-1. UV (mx): 231 nm. Determine las dos estructuras ms probables para la sustancia A. 7) PHYTOCHEMISTRY 42 (5) 1409 (1996) A partir del extracto etanlico de las partes areas de Solanum laxum (solanaceae) se aislaron dos saponinas esteroides: las laxuminas A y B. Para ambos compuestos se determinaron los enlaces glicosdicos mediante el mtodo de Hakomori. Los productos obtenidos para el caso de la laxumina A fueron: 1,2,5-triacetato de 3,4,6-trimetoxi-D-glucitol; 1,2,4,5-tetraacetato de 3,6-dimetoxi-D-galactitol; 1,5diacetato de 2,3,4-trimetoxi-D-ramnitol y 1,5-diacetato de 2,3,4,6-tetrametoxi-Dglucitol. Determine la estructura de la porcin glicosdica de esta sustancia. 8) Bernardo, R. R. y col.; PHYTOCHEMISTRY 43 (2) 465-469 (1996). 9) (Ruizgenina) Blunden, G. y col.; STEROIDS 35 (5) 503 (1980). 10) (Dioscina, antineoplsico) Hu, K. y col.; PLANTA MED. 62 (6) 573-575 (1996). 11) (Neogitogenina, lilagenina, Anemarrhena asphodeloides, Liliceas) Baiping, M., y col., PLANTA MED. 63 , 376 (1997). Para otros ejemplos de aislamiento y elucidacin estructural de saponinas o sapogeninas esteroides consultar las revistas: Journal of Natural Products, Phytochemistry, Planta Medica, Steroids, Rev. Latin. Qum, entre otras.

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