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Esunconjuntodepasosaseguirparalaobtencindepreparadoshistolgicosaptos parasuestudiomedianteelmicroscopioptico.
1Obtencindelmaterial: seefectamediantebiopsia,necropsiaoautopsia.
Biopsia: consiste en tomar un trozo de tejido de un ser vivo. Este procedimiento de uso frecuente en medicina requiere el mismo cuidado deasepsia,antisepsia,etc.,queseutilizaentodoactoquirrgicomenoro mayor. Necropsia: es el procedimiento en el cual se extrae material de un cadver Autopsia: consiste en el estudio analtico y sistemtico completo. macroscpico y microscpico de los rganos, aparatos y sistemas de un cadver.Serealizaparaestablecercausasdemuerte.
2Fijacin: una vez obtenido el material que se desea estudiar por cualquiera de
los procedimientos descriptos se procede a su fijacin con lo que se evita la destruccino lisiscelular.Esunprocesofsico qumicocomplejoporelcual se mantiene a las estructuras orgnicas en el estado ms parecido al que posean en vida. Losobjetosdelafijacinson: Mantenerlasestructurasenelestadomsparecidoalqueposean invivo. Evitarlalisiscelularylaproliferacinbacteriana Dar cierta solidez o dureza al tejido o material. La fijacin detiene los procesos vitales pero en ciertas condiciones mantiene las actividades de algunos componentes moleculares, por ejemplo la actividad de algunas enzimas
Tiposdefijadores
Fsicos: Porebullicin.Porcongelacin:bajastemperaturasde 190Ca 70C(Nitrgenoliquido.dixidodecarbono)permitenexcelentesfijaciones. Qumicos: seusansolucionessimplescomoalcoholes(etanolometanolque puedenfijarclulasenextendidos)yclformolal10%.Elformolesunasolucin dealdehdofrmicoal40%enaguadestilada.Deestasolucinsetoman10mly se leagregan10 mldeaguadestilada(10%).Estaes la solucin msusada.Se puede agregar a esta acetato de calcio, el que evita la oxidacin del aldehdo frmicoocidofrmico,elqueperjudicalafijacin.Elformolpuededisolverse al10%enbufferdefosfatoenlugardeaguadestiladaparamantenerelpHa7.4.
Mezclas fijadoras. se usan diferentes fijadores en una sola mezcla para facilitarlafijacindeciertasestructuras. Ej.:lquidosdeBouin,Zenker.etc. Relacin del volumen del tejido a fijarse con el volumen del fijador : es necesarioquelostrozosafijarseandeunespesornomayorde0.5mm.Parauna buena fijacin es necesario que la relacin volumen del tejido volumen del fijadorseade1/40. Tiempos de fijacin: depende del tejido, su volumen y el fijador usado Cuandoseusaelformollaspiezaspequeasrequierenalgunashorasyyaalas24 horassefijanbien.Lafijacinsepuedecontrolarasimplevistaporelcambiode color del tejido y su consistencia (se endurece) pero una buena fijacin solo se apreciaenelcorteyapreparadoobservandoalmicroscopioptico. Lavado: despus de la fijacin el tejido debe ser convenientemente lavado conaguaobienconotrassustanciasqueeliminanrestosdefijadoresespeciales
3Deshidratacin: secolocalamuestraenalcoholesdeconcentracincrecientepara
eliminarelaguaquecontengayaquelaparafinanoesmiscibleconagua.Seutiliza etanol70%,80%,96%y100%.
5Inclusinenparafina: laparafinaesunamezcladehidrocarburossaturadosque
tienendiferentespuntosdefusin.Parafina blanda funde a4448C y laparafina duraa5658C.LAparafinaseponeenestufadecultivoaunosgradosporencima desupuntodefusin.Sesumergelamuestra,sellevaaestufaunosminutosparaque la parafina penetre en los tejidos. Luego se enfra bruscamente colocando el recipienteenhielo.
8Colocacinsobreportaobjeto: efectuadosloscortessecolocanenaguatibiapara
que se extiendan y luego se recogen con un pincel y se los extienden en el portaobjetosysedejansecarparasuposteriorcoloracin.
11Coloracin: esuncompletocomplejofsicoqumicoqueleconfierecoloralos
tejidosdurantetiemposprolongados.Lasmolculasdecolorantestienenungrupo queeselqueleconfiereelcolor:cromforoyotroquelofijaauxocromo.Los colorantessonsalesperoselosclasificaen: bsicos: endondelamolculadesalquecoloreaeslabasecomopor ejemploelazuldetoluidina,azuldemetileno,hematoxilina cidos: dondelamolculadesalquecoloreaeselcidocomoporejemplola eosina neutros: dondelasdospartesdelasolucinsalinaproporcionancolor,esun ejemplodeestaeleosinatodeazuldemetileno. Tiposdecoloracin: Comunes: hematoxilinayeosina,azuldemetileno. EspecificasmtododeRegaud.ImpregnacinargnticadeCajaloGolgi Vitales: lntravitales: La coloracin intravital consiste en inyectar una sustancia inocuaparaelanimalperoqueesfagocitada,porciertasclulas,comopor ejemplolosmacrfagosofagocitos. Supravitales:Lacoloracinsupravitaleslaquecoloreaalostejidosvivos peroseparadosdelorganismo.Ejemplo:verdejanoparalasmitocondrias. Metacromticas:Lacoloracinmetacromticaesaquellaqueconfierealtejidoun colordiferentealdelcoloranteutilizado.Porejemploalcolorear grnulosdelasclulascebadasdecolorrojo.
13Aclaracin: se utiliza xilol o benzol, y sirve para diluir la resina adhesiva utilizadaparapegarelcubreobjeto. 14 Colocacin de cubreobjeto: se cubre el corte con un delgado vidrio (el
cubreobjeto) que se adhiere con resina (blsamo de Canad) y permite su uso prolongado.
Ar tificiosdeTcnicas:
Son todas las alteraciones que se producen en los preparados histolgicos por defectosofallasenunaomsdelasetapasdelatcnica. Defectos de fijacin, deshidratacin, inclusin, pueden causar desgarros y retracciones. Si la acidez del formol no fue neutralizada, pueden aparecer grnulos coloreadosporinteraccindelcidofrmicoconlahemoglobina. Duranteelcortepuedenaparecerdesgarrospormelladurasenlacuchilla. Si el corte no es cuidadosamente extendido pueden aparecer pliegues o arrugas. Defectos en la coloracin son inherentes a la calidad y preparacin de los colorantesascomoinsuficientecoloracin. Pasosdelatcnicahistolgica.
Actividades 1. Enumerelospasosdelatcnicahistolgica. 2. Asucriterioculeselpasoclavedelamisma?porqu? 3. Cules son los colorantes ms usados? Qu estructuras celulares tien cada uno? 4. Porqudebedesparafinarseelpreparadoantesdecolorearlo? 5. Culoculespiensaustedquesonlosartificiosdetcnicasmsfrecuentesde encontrar? 6. Estatcnicahistolgicaseusaparatejidosvivosomuertos?