EJERCICIOS INTERLABORATORIOS DE FANGOS ACTIVOS. E. Reina.

GBS INTRODUCCIN
El Grupo Bioindicacin Sevilla, fundado en 1998, tiene como objetivos la estandarizacin de los anlisis biolgicos en los fangos activos, unificando criterios para todos sus componentes, as como la investigacin y difusin de este tipo de controles que tanta informacin aporta para la optimizacin de los procesos de depuracin de aguas residuales. Los Organismos y Entidades de acreditacin y certificacin, tanto en el mbito nacional como internacional, recomiendan la participacin de los laboratorios en sesiones de ejercicios interlaboratorios, ya que constituyen un medio independiente por el cual se puede evaluar objetivamente y demostrar la fiabilidad y precisin de los datos obtenidos (Pulls et al., 2006, ENAC, 2008). La participacin rutinaria en estos ejercicios de intercomparacin permite a los participantes obtener un control de calidad externo, muy valorado por los auditores y reevaluar sus propios mtodos. La posicin de valoracin para cada participante, en un ejercicio interlaboratorio, genera confianza y fiabilidad de los resultados frente a clientes internos y externos de la entidad que participa, constituyendo un importante elemento de ayuda a la mejora de la calidad del participante. Los ejercicios interlaboratorio de Fangos activos, pueden ser calificados tanto como ensayos de aptitud (asesoramiento externo de la competencia de la tcnica de cada participante, Sagrado, S. et al., 2005), como ensayos colaborativos (Permiten ajustar un mtodo de referencia en el campo de la microbiologa, Sagrado, S. et al., 2005). Es por todo esto por lo que GBS organiza anualmente los ejercicios interlaboratorios sobre

microbiologa de los fangos activos que se definen como una herramienta bsica en este tipo de ensayos. Entre los objetivos de esto ejercicios podemos destacar la unificacin de criterios debido a la alta densidad de microorganismos por mililitro y a la gran dispersin de valores que pueden ocasionar pequeas diferencias en la metodologa de anlisis de los fangos activos. As pues, estos ejercicios ofrecen la oportunidad de comparar los resultados y mtodos con los dems laboratorios participantes, con la intencin de detectar errores sistemticos y eliminar este tipo de desviaciones.

DESCRIPCIN DE LA PLANIFICACIN DEL TRABAJO.

La planificacin de los ejercicios interlaboratorios es fundamental para lograr los objetivos marcados, ya que organiza y jerarquiza qu y cmo se realizarn; por lo tanto involucra al conjunto de decisiones y acciones que se toman en el transcurso de dicho programa. As ese definen las actividades a realizar: 1.- Divulgacin del ejercicio
Todas la divulgacin y gestin de informacin sobre los ejercicios interlaboratorios se realiza desde el departamento de administracin de GBS y el personal responsable del correcto desarrollo de los ejercicios, realizndose todas las comunicaciones a travs de su direccin de correo electrnico interlaboratorios@asociaciongbs.com, desde donde se responden y hacen frente a todas las consultas y solicitudes de participacin recibidas. Los ejercicios se desarrollan en convocatoria anual, coincidiendo con el ao natural. Cada convocatoria consta de dos rondas, febrero y mayo generalmente. A finales del mes de enero se realiza el envi del calendario en el que se disponen las fechas relevantes. Previo a la fecha de cada uno de las rondas se enva una notificacin informativa que incluye la direccin y fecha de recogida de las muestras, material solicitado, persona de contacto y fechas importantes. En el mismo momento de envi del calendario anual, cada participante recibe su cdigo numrico que le identifica aportando la confidencialidad requerida en estas formas de trabajo. En ningn momento se facilitar informacin del resto de laboratorios que no sean propios. A continuacin se muestra el calendario de eventos para los ejercicios del prximo ao 2013.

LUNES 18 25 4

MARTES 19 26 5

MIERCOLES 20 27 6

JUEVES 21 28 7

VIERNES 22 1 8

SBADO 23 2 9

DOMINGO 24 3 10

Fig. 1 Fechas fijadas para el primer ejercicio interlaboratorio de febrero - marzo de 2013

LUNES 13 20 27

MARTES 14 21 28

MIERCOLES 15 22 29

JUEVES 16 23 30

VIERNES 17 24 31

SBADO 18 25 1

DOMINGO 19 26 2

Fig. 2 Fechas fijadas para el segundo ejercicio interlaboratorio de mayo- junio de 2013

Toma de muestras

Envio de muestras a todos los participantes Fecha lmite para entrega de los resultados.

Realizacin de los ensayos

Los participantes pueden realizar los ejercicios interlaboratorios en varias modalidades: De forma total, realizando todos y cada unos de los apartados a analizar en cada uno de los dos ejercicios planificados. De forma parcial, realizando solo algunos de los ensayos planificados o solo uno de los ejercicios programados.

Las distintas modalidades de inscripcin en dichos ejercicios atendiendo al siguiente desglose:

o Caractersticas macroscpicas, caractersticas microscpicas, contrataste de V30, MLSS y MLVSS e ndice de fango (IF). o Determinacin de bacterias filamentosas y cuantificacin de su abundancia relativa o Determinacin protozoaria: Densidad de organismos, nmero de especies detectadas, ndice de Madoni, ndice de Shannon y reparto porcentual de los grupos de protozoos presentes o Determinacin de bacterias filamentosas en una EDAR Industrial. o Parmetros fsico-qumicos de un agua de EDAR tratada (SS, DQO, DBO,NK y PT). o Interlaboratorio completo (IF, Bacterias filamentosas, Protistas e ndices biolgicos, muestra industrial y parmetros fsico-qumicos del agua tratada) anual para contraste del anlisis biolgico de dos muestras de fangos activos.

3.- Seleccin de la muestra a analizar. Envo de la muestra y documentacin. GBS realiza un estudio previo de las muestras de los reactores biolgicos, de varias depuradoras de aguas residuales urbanas o con poco aporte industrial, seleccionando aquella ms estable y con mayor inters para la intercomparativa. En todo momento se salvaguarda el anonimato del origen de la muestra. Cada ronda cuenta con varias muestras para el anlisis de determinados parmetros y aspectos a cada una de ellas tal y como se determina en la tabla adjunta.

Muestra Fango activo de EDAR Urbana Muestra de EDAR Urbana Agua tratada en EDAR Urbana Muestra de Edar Industrial

Analtica Anlisis microbiolgico completo, determinando ndice de fango, valoracin de filamentos y protistas. Determinacin fsico-qumica de la calidad del agua Valoracin de bacterias filamentosas y estado del flculo

Fango activo de EDAR Industrial

La toma de muestras es realizada por personal de GBS o algunos de sus colaboradores, tomando un volumen de al menos 50 litros de fango activo del final del proceso biolgico, en el momento de mxima agitacin y como paso previo a la decantacin en el caso de fango activo de EDAR urbana. El mismo volumen es tomado de agua tratada y en el caso de muestra de fango activo de Edar de origen industrial se tomar un volumen tal que permita la distribucin de unos 50 ml a cada unos de los participantes. Estas muestras son trasladadas a las instalaciones de GBS, donde se llevar a cabo la homogenizacin y divisin de las mismas en alcuotas de los siguientes volmenes: Muestra Fango activo de EDAR Urbana Agua tratada en Edar Urbana Fango activo de EDAR Industrial Volumen (ml) 1500 1000 50

Figura 3. Muestras preparadas para ser enviadas.

Los participantes envan a las instalaciones de GBS los sistemas de contencin de muestras refrigeradas, incluyendo: frasco de plstico de 2 L de cierre hermtico vaco, placas refrigerantes y material de relleno de la muestra para evitar movimientos bruscos. Dicho envo debe hacerse en la modalidad de envo con retorno, de modo que en el mismo momento en el que la nevera llega a GBS, es completada con las muestras anteriormente definidas y de nuevo entregada a la misma mensajera garantizando as la entrega en destino, como muy tarde, al siguiente da de la toma de muestra, evitando as alteraciones de las misma. Todas las muestras van contenidas en frascos de plsticos de 2 litros de capacidad y cierre hermtico en el caso de fango activo y agua tratada de la Edar Urbana, y en frascos de iguales caractersticas pero mucho menor volumen para la muestra de fango activo de la Edar industrial. En cualquier caso todas las muestras ocuparn aproximadamente dos tercios de la capacidad del frasco, de forma que quede una cmara de aire a fin de evitar la anoxia durante el transporte de las muestras. Igualmente todos los frascos estarn rotulados con el cdigo de participante, el tipo de muestra y la fecha de envasado de la misma.

Figura 4. Momento del proceso de distribucin de muestras.

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De forma simultnea a la distribucin de las muestras y ya sea aprovechando este mismo envo o bien por correo electrnico, cada participante recibe la documentacin necesaria para el desarrollo de las analticas, documentacin que est en continua revisin y actualizacin. Entre estos documentos destacan: Entrega protocolo estandarizado: validado por GBS desde 2004 y actualizado anualmente. Pilar bsico para iniciarse y profundizar en el estudio de anlisis de fangos activos Formatos de recogida de datos: con clculos automticos

Figura 5. Fichas de trabajo para la valoracin de protistas.

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El personal tcnico de GBS, durante el mismo da de distribucin de la muestra realiza un estudio de comprobacin de la estabilidad del fango activo enviado; determinando los posibles efectos sobre los resultados finales. De esta forma se establece una comparativa entre el da del envo y el da del anlisis.

3.- Realizacin de las determinaciones por parte del participante. Una vez recibidas las muestras el participante debe realizar la determinacin de las mismas y rellenar las fichas de recogida de datos enviadas para tal fin, y enviarlas a GBS debidamente cumplimentadas antes de la fecha lmite establecida en la programacin del ejercicio. Los requisitos necesarios para la realizacin de estas analticas ser disponer de un microscopio con objetivos de 10X, 20X, 40X y 100X, as como del material para su uso (portaobjetos, cubreobjetos). Adems de probetas para el estudio de decantacin y reactivos y material necesario para las tinciones Neisser, Gram, test de azufre y PHB. Entre las determinaciones que debe realizar: Determinacin del ndice de fango, para lo cual realizar una valoracin de las caractersticas macroscpica y microscpicas del fango activo. o Valoracin macroscpica. Dicha valoracin se realiza a travs del ensayo de la V30, que determina la cantidad de fango activado que decanta en una probeta o cono de imhoff, tras un periodo de 30 minutos. El anlisis consiste en dejar que la muestra de fango activo sedimente los slidos fcilmente decantables, sin necesidad de adicin de productos qumicos, simplemente dejando decantar durante un tiempo determinado. Se analizarn tanto las propiedades del proceso de decantacin como las caractersticas del clarificado. Se valora: Turbidez: Que ser alta, media y baja, en funcin de la visibilidad a travs de la probeta. Flculos en suspensin. Alta, media o baja en funcin de la abundancia, presencia o ausencia de dichos flculos. Sedimentabilidad: Alta, media o baja, en funcin de si el fango decanta mayormente a los 10, 20 o 30 minutos del ensayo de la V30. Olor: Calificado como correcto e incorrecto, indicando este ltimo situaciones como septicidad, presencia de vertidos, etc.

o Valoracin microscpica. El conjunto de caractersticas microscpicas recogidas durante la observacin microscpica se refieren al examen del estado morfolgico y estructural del flculo de fango activo y al examen del componente bitico del ecosistema fango activo, representado por las poblaciones de bacterias filamentosas y de protozoos. La evaluacin de estas caractersticas proporciona

informacin sobre las propiedades de decantacin y compactacin del fango activo durante la fase de clarificacin del licor mezcla, as como el nivel y estado de colonizacin de la microfauna, aludiendo, indirectamente, al grado de actividad biolgica del proceso. Las caractersticas estudiadas son: Forma: define la morfologa externa del flculo como regular e irregular. Tamao: define el tamao flocular como pequeo (menor 150 micras),

mediano (entre 150 y 500 micras) y grande (mayor de 500 micras). Estructura: define la compactacin del flculo calificndose como abierto, medio y compacto. Textura: caractersticas que valora el grado de cohesin entre las partculas que forman el flculo. Cobertura: caractersticas que valora si la unin de todos los flculos presentes en el ocular de 10x cubren menos del 10 % de su superficie, del 10 50%o ms del 50 %. Filamentos en flculo: determinando si existen menos de 5, entre 5 y 20, o ms de 20 filamentos por flculo. Filamentos en disolucin: caractersticas que cuantifica la existencia de filamentos libres entre los espacios interfloculares del licor mezcla. Diversidad de protozoos: determina el nmero de especies identificadas siendo menor de 4, entre 4 y 7, o ms de 7.

Valoracin de bacterias filamentosas. En esta apartado el participante deber identificar las bacterias presentes en la muestra, para lo cual podr apoyarse en las visualizaciones In vivo y en tinciones. Igualmente deber cuantificar los filamentos presentes en la muestra mediantes dos tcnicas distintas, de un lado mediante la abundancia relativa (contando los filamentos por flculos) y de otro, segn el procedimiento desarrollado por el profesor Humbert Salvad. Se realizarn otras valoraciones complementarias tales como el efecto de los filamentos en el flculo y la ecologa de las especies presentes.
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Valoracin de la comunidad de protistas. Al igual que en el caso de las bacterias filamentosas el participante debe identificar las especies protozoarias presentes y establecer una densidad de protozoos presentes en el ecosistema. Una vez obtenida dicha informacin, se podr definir algunas caractersticas que pueden aportar muchos conocimientos sobre ecosistema en el que trabajamos. (grupo dominante de protistas, reparto porcentual de grupos funcionales, ndice de Shannon, ndice de Madoni,)

Valoracin general de la calidad del fango. Finalmente y la vista de las observaciones realizadas en los anteriores apartados se podr establecer una valoracin general de la calidad del fango.

Determinacin fsico qumica de la calidad del agua tratada. En este caso se realizarn las determinaciones de slidos en suspensin (SS), demanda qumica de oxgeno (DQO), demanda bioqumica de oxgeno a los cinto das (DBO5), nitrgeno total (NT) y fosforo total (PT). Cada participante actuar en base a los mtodos establecidos en su laboratorio, si bien es necesario definir est metodologa en los documentos de recogida de informacin.

Determinacin de la poblacin de bacterias filamentosas identificadas en la muestra de fango activo. Aquellos participantes con inters en los procesos de depuracin de aguas residuales de origen industrial o aguas residuales urbanas con un alto componente industrial, pueden profundizar en la identificacin de las bacterias filamentosas.

El anlisis de las caractersticas macroscpicas y microscpicas del fango y el anlisis de protozoos, debern realizarse inmediatamente a la recepcin de la muestra y a lo sumo al siguiente da del envasado de la misma. El anlisis de filamentos debe realizarse tambin en ese plazo, pero puede demorarse un par de das siempre que se fijen frotis de forma adecuada. Deber indicarse la fecha de anlisis de cada bloque. Se recomienda que, una vez recibido el bote con la alcuota de fango activo a analizar, se destape y someta a agitacin suave durante algunos minutos. En cualquier caso, se destapar el bote y homogeneizar suavemente antes de cada uno de los anlisis propuestos, evitando derrames y agitaciones bruscas que puedan alterar o destruir la representatividad de la muestra, la estructura y cohesin flocular.

5.- Tratamiento de datos y realizacin del informe. Desde la recepcin de la muestra, el participante dispone de un periodo de unos 15 das aproximadamente para el envi de sus resultados a GBS, quien realizar una revisin provisional de los mismos, solicitando a cada participante los datos y aclaraciones que se estimen oportunas. Con toda esta informacin se crear una la tabla provisional de datos similar a la que se muestra a

continuacin, y que ser enviada a la totalidad de los participantes.

MUESTREO PARTICIPANTE MACROSCOPIA MICROSCOPIA INDICE DE FILAMENTOS CATEGORIA DE FILAMENTOS FILAMENTO DOMINANTE FILAMENTO SECUNDARIO EFECTO FLOCULO OTROS FILAMENTOS REL FIL (IRF) m/ml FILAMENTOS DENSIDAD ( org/l) * EXP 6 INDICE DE SHANON INDICE DE MADONI CLASE MADONI NUMERO DE ESPECIES GRUPO DOMINANTE OBSERVACIONES 12/11/02 1 21 43 64 4 MICROTHRIX 1701/NOSTOCOIDA DISGREGACION NOCARDIA/HALISCOM 1,32 770,24 2,86 2,83 10 1 12 SESIL/REPTANTE 4,38 2,79 10 1 13 SESIL/REPTANTE 3,23 2,65 10 1 12 SESIL/REPTANTE 3,04 2,46 10 1 10 SESIL/REPTANTE 4,6 2,56 8 1 13 SESIL/REPTANTE 1,87 2 25,5 43 68,5 4,5 MICROTHRIX 1701/ NOSTOCD LIM II DISGREGACION HALISCOMENOBC 1,55 1,68 3 26 43 69 4 MICOTHRIX 1701/NOSTOC III 4 26 50 75,5 4 MICROTHRIX 021N DISGREGACION 021N 2 5 25,5 43 68,5 4 MICROTHRIX/1701 NOSTOCOID/HALISCOM

Fig. 5. Tabla de recogida de resultados para un interlaboratorios

Como paso previo al tratamiento estadstico de los datos obtenidos debemos tener en cuenta varias ideas generales: A. La incertidumbre de medida es un parmetro asociado a la medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que pueden atribuirse razonablemente al mesurando (ENAC, 1998). Para fangos activos, la dispersin de los datos es muy elevada y el esfuerzo de sistematizacin y contraste debe ser muy alto. B. Se deben definir los mesurandos, entendidos stos como las magnitudes particulares objeto de una medicin (ENAC, 1988). En el caso particular de los fangos activos, podra estar representado por el IF, ndice de Madoni, Identificacin de filamentos.... Con los resultados remitidos por los laboratorios participantes, se proceder a la conversin logartmica (evaluacin de la microfauna) y al tratamiento tcnico y estadstico de los mismos. En cada ejercicio y para cada parmetro se calcular la media, desviacin tpica, coeficiente de variacin e intervalo global de cada uno de los ndices de biocalidad implicados. Es conveniente valorar tambin

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los porcentajes de la agrupacin de los resultados, el valor mximo y mnimo de fluctuacin de los datos y la medida de tendencia central o moda (Pola, 1993). Los conceptos empleados son: Clculo de la media: X

xi
n

Desviacin tpica:

( xi x) 2 n 1

Coeficiente de variacin: CV= 100

S X

A modo de ejemplo se muestra los datos y grficos obtenidos para la determinacin del ndice de fango. IF 1 2 3 4 7 8 9 10 11 12 13 14 15 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 MEDIA VARIANZA 65,0 75,5 74,0 71,0 69,5 80,0 59,5 69,0 66,5 51,0 80,0 67,5 67,0 82,0 75,5 52,0 68,5 51,5 68,5 71,0 68,5 69,5 65,0 71,0 68,3 68,5

Fig. 6. Tratamiento de datos.

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El ndice general del informe consta de los siguientes apartados: 1. Introduccin 2. Participantes 3. Resultados 4. Anlisis de datos: a. Caracterizacin macroscpica y microscpica del fango activado (IF) b. Identificacin y cuantificacin de bacterias filamentosas. c. Caracterizacin de la microfauna d. Otros parmetros de inters 5. Conclusiones: a. Generales b. Valoracin de la muestra 6. Consideraciones para los prximos ejercicios interlaboratorios. 7. Agradecimientos 8. Bibliografa. Anexo I: Reportaje fotogrfico: Macroscopia y Microscopa Bacterias filamentosas Protistas y metazoos. Anexo II: Estudio respiromtrico de la muestra. Ensayos realizados por Surcis S.L. Anexo III: Viabilidad celular. Fotografas realizadas por el profesor D. Jos Lus Alonso. Universidad Politcnica de Valencia. Anexo IV. Parmetros fsico qumicos del agua tratada. Anexo V: Estudio biolgico. Realizado por D Luca Arregui, D Raquel Libana, D Blanca Prez Uz y D Susana Serrano, de la Universidad Complutense de Madrid. Anexo VI: Valoracin ecolgica de la muestra. Realizado por el profesor D. Humbert Salvado. Universidad de Barcelona
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Adems de realizar el tratamiento estadstico de los datos, que se incluyen en el captulo n 4 del informe, este consta, como ya se ha detallado, de bastante ms documentacin recogida en los anexos, tales como reportaje fotogrfico y estudio respiromtrico de la muestra de fango activo, lo que permite establecer una valoracin global del sistema, y establecer diversas observaciones para el control y mantenimiento del proceso de depuracin. Una vez concluido la realizacin de ambos informes anuales, GBS convoca y organiza una reunin final, en las que se ofrece un interesante foro de encuentro de profesionales del sector, donde se debaten las particularidades de las muestras y las incidencias del anlisis. Generalmente, se propone la sistemtica abierta a comentarios y posibles modificaciones que puedan proponer los participantes. Dado el avance de las tecnologas que posibilitan de una forma ms dinmicas las comunicaciones, GBS ha decidido como novedad establecer un foro de debate de forma telemtica, estableciendo un dialogo entre los participantes que aportan sus experiencias e inquietudes. Es aqu donde se plantean las dificultades encontradas en la identificacin y recuento de organismos y en general, de cada bloque analtico. Se aclaran dudas, se pueden proponer alternativas complementarias a tcnicas usadas, se estudian las observaciones planteadas por los participantes (annimos) en cada anlisis, etc. En definitiva, se gesta la unificacin de criterios de los profesionales del anlisis aplicado en este tipo de muestras. Al concluir el circuito interlaboratorio, cada participante recibir un certificado que acredite su participacin en el circuito. No es competencia del organismo organizador del ejercicio de intercomparacin, el estudio individual de cada participante y mucho menos entrar en valoraciones concretas y recomendaciones. La participacin en este tipo de ejercicios debe implicar una autoevaluacin crtica y personal de cada laboratorio.

BENEFICIOS DE LA PARTICIPACIN EN LOS EJERCICIOS INTERLABORATORIOS.

La participacin en los ejercicios interlaboratorio, tal y como hemos dicho anteriormente, nos permite asegurar la calidad en la analticas de fangos activos, la determinacin de errores sistemticos y la optimizacin de los procedimientos y herramientas de trabajo. Si partimos de la propuesta establecida por Hawesh (1963) en el que consideraba la posibilidad de ver las plantas de aguas residuales con tratamiento biolgico como un modelo experimental de
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ecosistema artificial en condiciones extremas, entonces podemos afrontar el estudio ecolgico de un fango activado como el de cualquier ecosistema: Definiendo sus componentes, flujos de energa y ciclado de nutrientes. Cada estacin depuradora, y en ella el reactor biolgico presenta unas caractersticas distintas a nivel del biotopo (caractersticas ambientales, entradas y salidas de nutrientes y contaminantes, niveles de oxigenacin...) que generan una biodiversidad, donde se establecen comunidades primarias y secundarias que interrelacionan entre si. La descripcin cuantitativa y cualitativa de la comunidad presente, as como sus variaciones temporales, descubrirn la diversidad del sistema y la sucesin que se pueda establecer. Conocer el entramado ecolgico generado, as como los procesos de ciclado de nutrientes favorecern la toma de decisiones respecto al proceso depurador. Por ltimo habra que estudiar que informacin podra aportar al explotador el conocimiento de las ecuaciones ecolgicas establecidas (biodiversidad, distribucin de frecuencias, pirmides de abundancia, ....) y los tipos de respuesta que predeciran. En este sentido los ejercicios interlaboratorios de fangos activos potencian la seguridad analtica y la comprensin ecolgica del sistema a estudio. A modo de ejemplo se presentan algunas situaciones observadas en los ejercicios interlaboratorios de ediciones anteriores, en las que se establece una clara relacin entre la observacin y la casustica de la depuradora objeto de estudio.

A. En este caso la Estacin Depuradora analizada sufre una situacin de alta carga msica con altos valores de oxgeno disuelto y discontinuidad o alternancia en la carga de entrada influente al tratamiento biolgico.

Caractersticas macroscpicas: La presencia de microflculos en suspensin y espumas en superficie de origen biolgico, sin duda, es causa de empeoramiento de la calidad del efluente final. La valoracin de la turbidez del clarificado est relacionada con la presencia de organismos filamentosos en disolucin identificndose Nocardiformes como principal filamento en disolucin.

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En cuanto a la sedimentabilidad se cataloga en este caso como media-baja, consecuencia del estado de mala formacin flocular. En caso de sobrecarga hidrulica, se producir una salida masiva de SS en el efluente. El olor se define como correcto, con matices tales como olor picante, indicativo de depuracin insuficiente, quizs ante una sobrecarga orgnica que el sistema no ha sido capaz de asimilar" En lneas generales, nos encontramos ante un fango joven, poco mineralizado, en estado de formacin y mal estructurado. El color del fango tambin confirma el carcter de fango joven

Caractersticas microscpicas: El general nos encontramos ante un fango con deficiente estructuracin flocular, debida al desarrollo filamentoso de organismos con efecto disgregador del mismo. Las caractersticas microscpicas del fango se definen como: forma irregular, tamao medio, estructura media-abierta, textura fuerte, cobertura de entre el 10 y el 50%, cuantificacin de filamentos entre 5 -20 por flculo, abundantes filamentos en disolucin y diversidad de protistas media-alta. Se trata de un fango con tendencia al empeoramiento por una mala estructuracin del flculo, situacin que queda reflejada en el resto de componentes de la microfauna.

Evaluacin del desarrollo de bacterias filamentosas en un fango activo: En las situaciones como la que nos ocupa, tal como ya se ha comentado, se establece como filamento dominante los Nocardiformes, con capacidad de formar espumas, ya que tienen la propiedad de producir sustancias extracelulares que actan como biosurfactantes. En el proceso de formacin de espumas biolgicas intervienen procesos bioqumicos y fsicoqumicos en el que aire-agua-clula bacteriana quedan unidos tal y como se observa al visualizar las burbujas de aire en el seno de las espumas, de consistencia grasienta. Igualmente es destacable la presencia de Nostocoida limcola, asociada a situaciones de bajas cargas msicas, bajos valores de oxgeno disuelto y un importante componente industrial de las aguas residuales o material rpidamente degradable.
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Existe un proceso de competencia entre los Nocardiformes y Nostocoida limicola debido a un proceso de disminucin de los niveles de oxgeno que permitira a N. limicola reemplazar el nicho de los Nocardiformes. El metabolismo fermentativo de N. limicola la hace ms

competitiva en sistemas dotados de selectores anxicos, vindose poco afectada ante variaciones en la concentracin de oxgeno disuelto. Tradicionalmente se ha asociado a N. limicola a vertidos industriales, sin embargo, hay indicios suficientes en esta muestra para pensar que no es ste el caso. S es posible que entre en planta material rpidamente degradable que favorezca el crecimiento de sta (almidn, pulpa, papel, cidos orgnicos de reboses, etc.) Otros filamentos identificados a baja concentracin han sido: Tipo 021N, Thiothrix II y Tipo 1701. Evaluacin de la microfauna presente en el fango activo En este anlisis se ha valorado de forma negativa la reducida densidad de protistas, en la que nos encontramos como grupo dominante a las "Vorticellas pequeas" (el peristoma de menor dimetro que la anchura del cuerpo: Complejo Vorticella microstoma, Complejo V. infusionum, Complejo V. aquadulcis, V. octava). Esta proliferacin indica la presencia abundante de bacterias en disolucin y una DBO5 elevada. De hecho, nos encontramos ante una poblacin de vorticelas muy diversa debido a la falta de presin competitiva por una concentracin de DBO5 en exceso en el medio y de bacterias en disolucin. En menor proporcin, las " Vorticellas grandes" (con el dimetro igual o mayor que la anchura del cuerpo: Complejo Vorticella convallaria y V. campanula), tambin pudieron ser observadas. Condiciones de transitoriedad en las instalaciones pueden dar lugar a incrementos en la densidad de poblacin de los ciliados del grupo Vorticella de peristoma estrecho. Tales condiciones son: rpido aumento de la carga msica debido a prdidas o extracciones de fangos, carga orgnica introducida de modo discontinuo, etc. (Madoni, 1994). Esta situacin de "transicin hacia el empeoramiento" ha quedado tambin reflejada en el resto de componentes de la microfauna. As, han sido observados tanto organismos especficos de buenas calidades: Vorticella convallaria, Euplotes sp., Oxytricha sp., Carchesium sp., Aspidisca cicada, etc., como organismos propios del estado "tendente" del fango, es decir, organismos habituales en las primeras fases de colonizacin, consumidores de bacterias libres,

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o de un fango desestructurado: Paramecium sp., ciliados nadadores sin identificar o Uronema sp.

B. Sistema que trabaja a baja carga msica con deficiencias de aireacin y nutricionales y alta edad de fango, con sistemas de nitrificacin/desnitrificacin secuenciales en el tiempo. Entre las caractersticas de este sistema encontramos:

Parmetro (valor medio) Tipo de proceso Nitrificacin/desnitrificacin Temperatura actual media en el biolgico MLSS/MLVSS (mg/l) F/M: Carga msica IVF (mg/l) media Oxgeno disuelto Tipo de aireacin C/N/P en proceso biolgico Nitrgeno (mg/l) total medio en influente Fsforo total (mg/l) soluble en influente Nitrgeno total (mg/l) medio en efluente Fsforo total (mg/l) soluble en efluente

Modo/Valor Canal de oxidacin (trabaja en tiempos on-off) SI/SI 15 C 3300/1800 (54 %) 0.02 100 2 mg/l Difusores de Burbuja fina 6/2/1 26+4 12+1 12+51 6+3

Caractersticas macroscpicas: Las caractersticas macroscpicas tpicas de este sistema definen una turbidez baja, con buena sedimentabilidad. A la hora de valorar la sedimentabilidad de la muestra con en el ensayo de V30 se pueden apreciar la formacin de canales de decantacin a lo largo de toda la probeta. Es necesario valorar en este tipo de procesos el levantamiento del fango pasado un tiempo debido a la desnitrificacin del mismo.

Caractersticas microscpicas: El fango presenta forma irregular, tamao medio, estructura media, textura fuerte, cobertura de entre el 10 y el 50 %, de 5 a 20 filamentos por flculo, baja presencia de filamentos en disolucin y diversidad de protozoos entre media y alta.
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El flculo dispone de ncleos densos, que propician una muy buena decantacin, dicha estructura es compatible con procesos de eliminacin de nitrgeno simultneos. En esta situacin es muy frecuente encontrar cierta deficiencia nutricional, como

consecuencia de la alta edad de fango del sistema, que puede provocar la liberacin de material extracelular. Tras la valoracin microscpica podemos decir que se detecta una leve interferencia flocular que sin llegar a ser preocupante, es indicadora de algn tipo de inestabilidad en el sistema. Podemos valorar el fango como un licor mezcla adecuado con tendencia a la desfloculacin. La estructura flocular con zonas nucleares ms densas, parece permitir procesos de nitrificacin que se ven potenciados con los ciclos on/off, sin embargo la escasa carga orgnica puede crear problemas de desnitrificacin que se traslade al decantador secundario.

Evaluacin del desarrollo de bacterias filamentosas en un fango activo: Respecto a los morfotipos filamentosos, se sitan principalmente extendindose desde el flculo, con una categora numrica de 3-4 (50 m/mL de filamentos), calificndose como moderada proliferacin. El efecto producido sobre el flculo es tanto la disgregacin, como la formacin de puentes interfloculares, con un peso especifico sobre los flculos bastante leve. La codominancia entre los morfotipos T0041/T0675 y T1701, debido a su longitud propician la formacin de puentes interfloculares. Por el contrario los filamentos calificados como secundarios T0092 y Nostocoida limicola asociados al interior del flculo provocan rotura del mismo. La alta diversidad de filamentos, pone de manifiesto la inestabilidad del proceso. Las variaciones de oxgeno programadas para conseguir nitrificar-desnitrificar en un mismo ambiente, pueden ser una de las causas de esta variabilidad. La combinacin de filamentos dominantes y secundarios se asocia a baja carga msica, deficiencia nutricional, alta edad de fango, que concuerda con la alta mineralizacin del sistema y la deficiencia de oxgeno. La presencia de azufre, asociada a Thiothrix pone de manifiesto la posible presencia de septicidad por reboses y/o alternancias de oxgenos significativas.

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Evaluacin de la microfauna presente en el fango activo El ecosistema presente en este tipo de situaciones puede definirse como diverso y de alta densidad, si bien es cierto que existen muchas especies presentes en densidades de poblacin bastante bajas, lo que puede definirse como un ambiente totalmente sectorizado y con problemas de disminucin de la actividad tal y como muestran los restos de testas y lorigas visualizados en el fango. La inestabilidad queda confirmada tras este anlisis de la biota, en el que si bien los grupos de protistas son bastante diversos se encuentran sectorizadas hacia los bactervoros ssiles. C. Fango activo de EDAR en la que parte del influente tratado se corresponde con un efluente de origen industrial y elevada carga orgnica. Nos encontramos ante un sistema en el que los rendimientos depuradores no deben ser buenos, en el que el estado de sobrecarga ha de ser una situacin habitual, siendo adems el principal factor causante de esta falta de calidad del efluente. La proporcin de slidos en suspensin voltiles del licor mixto, con un valor medio del 87 %, es indicativa de un fango activo de mineralizacin baja por tanto de una edad de fangos moderada baja.

Caractersticas Macroscpicas: Las caractersticas macroscpicas del fango activo de este sistema son una elevada-media turbidez, de forma tal que se dificulta la valoracin de la presencia de flculos en el clarificado. Esta turbidez es atribuida a la elevada presencia de microorganismos no filamentosos en disolucin (Bacillus sp., Streptococcus sp., agrupaciones de posibles bacterias poli P,) Debido a la influencia de los vertidos es tambin destacable la coloracin tanto del fango como del clarificado del mismo. El olor queda definido como picante e incluso puede dirigirse esta caracterstica a la presencia de vertidos industriales.

Caractersticas Microscpicas: En cuanto a las caractersticas microestructurales del fango quizs lo ms destacable es la configuracin del flculo que se presenta alargado con aspecto fibroso y estrellado y bordes poco definidos por la escasa mineralizacin en la periferia del flculo frente a un ncleo mejor
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estructurado. El crecimiento filamentoso asociado al flculo no es el causante de problemas operacionales por la moderada disgregacin que asocia sobre la estructura. Predominan los agregados bacterianos de formas cocales y bacilares prximos a los contornos floculares. Entre el abundante crecimiento disperso se incluyen formas tpicas PAO y GAO, as como bacterias helicoidales en disolucin, principalmente espiroquetas. La respuesta positiva del fango al test de viscosidad, pone de manifiesto la presencia de grandes cantidades de material exocelular en el fango activo. Normalmente, el bulking viscoso ocurre cuando las aguas residuales son ricas en compuestos orgnicos fcilmente degradables y son tratadas bajo condiciones de deficiencia nutricional. Este fenmeno tambin ha estado asociado a episodios de toxicidad.

Evaluacin del desarrollo de bacterias filamentosas en un fango activo: Se trata de una poblacin de bacterias filamentosas diversa y compleja con una poblacin de bacterias filamentosas moderada, pero muy repartida entre distintos morfotipos. El sistema presenta una dominancia de Haliscomenobacter hydrossis y Microthrix parvicella, identificndose como secundarios los morfotipos T0581 y T1863. La ecologa de todas estas bacterias est definida por aireacin intermitente con bajos niveles de oxgeno disuelto. Una buena aproximacin a la fisiologa de los filamentos observados en la muestra podra hacerse mediante la generalizacin:

Bacterias filamentosas Gram-negativas en plantas sometidas a cargas altas. En este caso, filamentos como Sphaerotilus sp. (no observado en la muestra), Haliscomenobacter hydrossis, Tipo 021N (observado de forma incidental), Tipo 1701 y Tipo 1863, son habituales (Tandoi et al., 2006). En base a nuestra experiencia, a esta lista aadiramos tambin el filamento Tipo 1702, sobre cuya fisiologa poco se sabe, pero al que habitualmente se asocian las mismas caractersticas fisiolgicas que al Tipo 1701. Todos estos organismos son seleccionados por condiciones de deficiencia nutricional, debidas a altas concentraciones de sustratos carbonados y/o limitaciones en cuanto a N y P o una escasa oxigenacin. En este tipo de sistemas, mediante la introduccin de un gradiente de sustrato (flujo pistn), el crecimiento filamentoso puede ser frenado. Una zona de premezcla a alta carga bajo condiciones aerobias (selector aerobio) previene el bulking causado por estos microorganismos.

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Bacterias filamentosas Gram-positivas en plantas sometidas a bajas cargas orgnicas. En este caso, los representantes seran morfotipos como M. parvicella, GALO, Tipo 0041/0675, Nostocoida limicola y Tipo 1851. Algunos de los cuales, como ya se expuso anteriormente, han sido recogidos en los partes de resultados de los participantes a baja densidad y podran deberse a restos de estos microorganismos en estadios anteriores de operacin.

Evaluacin de la microfauna presente en el fango activo: La densidad de la microfauna observada es alta y est representada casi en un 80% por bactervoros ssiles, siendo el de mayor importancia el complejo Vorticella convallaria, seguido de Epistylis sp, y Opercularia sp, en densidades similares. En un fango activo como el que nos ocupa en el que la poblacin de ciliados ssiles peritricos coloniza casi en exclusividad el fango, con una limitada presencia de ciliados reptantes y prcticamente inexistencia de ciliados nadadores, la actividad biolgica est en descenso y las causas posiblemente asociadas, entre otras son los fenmenos transitorios operacionales. La presencia de Opercularia sp., podra indicar la presencia de txicos en planta. Atendiendo a la elevada concentracin de bacterias en disolucin y a la prcticamente inexistente poblacin de nadadores, representada escasamente por grandes ciliados nadadores y ciliados carnvoros, es entendible una fuerte presin selectiva sobre la actividad depredadora y sobre los grupos protistas que la ejercen. Entre las bacterias en disolucin encontramos abundancia de espiroquetas, escasamente consumidas por los protozoos. Sobre el resto de bacterias en disolucin, suponemos que el tamao predominante debi situarse en un estrecho rango, con preponderancia del tamao pequeo, el cual favoreci la abundante presencia de especies del gnero Vorticella tanto de peristoma amplio como de peristoma constreido, caracterizadas todas ellas por el consumo de bacterias de este tamao. Es entendible que el estado de sobrecarga orgnica interpretado a partir de todas las circunstancias comentadas no debe ser una circunstancia transitoria sino permanente de la planta. La presencia de pequeos flagelados, caractersticos de bajas edades de fango,

sobrecarga y oxigenacin escasa as lo confirman. CONCLUSIONES. Los ejercicios intercomparacin entre laboratorios son una herramienta bsica, sobre todo en anlisis de tipo microbiolgico, para unificar criterios debido a la alta densidad de microrganismos por mililitro
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y a la gran dispersin de valores que pueden ocasionar pequeas diferencias en la metodologa de anlisis de los fangos activos y rectificar errores sistemticos de procedimiento. As pues estos ejercicios ofrecen la oportunidad de comparar los resultados y mtodos con los dems laboratorios participantes. Por otra parte, ofrecen la oportunidad de afrontar un problema real (muestra) con un protocolo validado y comparar los resultados obtenidos con la valoracin efectuada, sobre esa misma muestra, por otros profesionales. El histrico de resultados obtenidos por GBS de estas intercomparaciones, pone de manifiesto la posibilidad de obtener datos biolgicos repetitivos para la misma muestra, con distintos operadores. Las sesiones interlaboratorio, ayudan a formar con ojo crtico y evaluador a los profesionales que participan en ellos, lo que les permitir optimizar los procesos depuradores en sus EDAR. Todos los participantes, adquieren una herramienta de trabajo que les va a permitir obtener informacin adicional del sistema depurador, a la vez que van adquiriendo soltura en estos anlisis adquiriendo una herramienta clave de competencia frente a clientes externos.

AGRADECIMIENTO: Queremos dejar constancia de nuestro agradecimiento a cada una de las empresas y centros que apoyan y respaldan nuestro trabajo, especialmente a EMASESA por su constante apoyo.

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