UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE HIDALGO INSTITUTO DE CIENCIAS DE LA SALUD REA ACADMICA DE MEDICINA

Laboratorio de Gentica

Prctica No. 1: Manipulacin de material estril en un simulacro de cultivo celular. Cultivo de linfocitos.

Integrantes: Hernndez Alejandro Juan Daniel Prez Hernndez Itzel

30 de enero del 2013

MARCO TERICO: El ambiente en el que trabajemos puede estar contaminado por microorganismos invisibles por el ojo humano y el contacto directo con materiales que nosotros ocupemos en la realizacin de pruebas de cultivo celular y puede producir una contaminacin de la muestra y para prevenir la contaminacin o alteracin de muestras en el manejo del material es necesario utilizar mtodos de esterilizacin y manipulacin del material para evitar contaminaciones en los experimentos, y contaminacin del usuario y as llevar a cabo mejores pruebas y con ello mejores resultados. Entre algunas recomendaciones y especificaciones para la correcta manipulacin y utilizacin de material estril en el simulacro de cultivos celulares son: Desinfectar el rea de trabajo Lavarse las manos antes y despus de la practica El material estril slo puede abrir dentro de la campana de cultivos, o a la llama del mechero. Desinfectar el material mediante algn mtodo de esterilizacin

Entre algunos mtodos de esterilizacin se encuentran: I esterilizacin por calor 1.- calor seco A) incineracin. Es un mtodo excelente para materiales desechables, como apsitos sucios, pauelos de papel, basura, etc B) hornos. Para esterilizar materiales secos como: vidrio, jeringas, agujas. 2.- calor hmedo A) agua hirviendo. B) vapor fluente. Este consiste en exponer a las sustancias (generalmente lquidos) a vapor fluente durante 30 min. C) vapor a presin. Para esterilizar con vapor rpida y eficazmente se utiliza al vapor a presin el auto clave. Esterilizacin sin calor 1.- esterilizacin con radiaciones A) luz ultravioleta. Es muy adecuada para esterilizar el aire en salas de operaciones y en superficies lisas B) rayos x. Se emplean sobre todo para trabajos mdicos y experimentales y en la produccin de mutantes microbianos. C) rayos alfa. Son bactericidas eficaces, carecen casi totalmente de penetracin. D) rayos gamma. Tienen ms poder de penetracin que los rayos x. E) rayos catdicos (electrones). Se utilizan cada vez ms con fines generales como la elaboracin de alimentos. Esterilizacin con productos qumicos A) oxido de etileno. Este gas se aplica en autoclaves especiales. Se le ha dado gran utilidad en la esterilizacin de materiales de plstico desechos. B) beta propiolactona.

Esterilizacin por filtracin Se logra mecnicamente obligando a los lquidos que van a esterilizarse al atravesar filtros muy finos. Este mtodo es aplicable a lquidos que se destruyen con el calor y no pueden utilizarse en ninguna otra forma como los lquidos y medicaciones, para el empleo hipodrmico o intravenoso. OBJETIVOS: Conocer las condiciones necesarias para el manejo del material estril en un simulacro de cultivo celular y de linfocitos.

MATERIAL Y MTODOS: Cultivo 2 pipetas Pasteur de 5ml 2 pipetas Pasteur de 10ml 2 frascos viables esterilizables con tapn de rosca de 15 ml 1 matraz erlenmeyer con tapn de rosca de 50 ml 1 franela 100gr de algodn RESULTADOS: Por cuestiones de tiempo solo se pudieron revisar los frascos a las 0 horas y a las 24 horas Tubo 0 horas 24 horas 1 Sin turbidez , color naranja Sin turbidez y ligeramente aumentado de tono naranja 2 Sin turbidez, color naranja Sin turbidez y muy ligeramente aumentado de tono naranja 1 fibra 1 pinza con punta de goma 1 marcador 1 bulbo para pipeta Pasteur 1 propipeta 1 mechero de alcohol 1 gradilla Cubre bocas Guantes de ltex

Al trascurrir las 24 horas los cultivos permanecieron transparentes y sin turbidez por lo que debemos concluir que nuestro cultivo no fue contaminado y los mtodos empleados fueron realizados correctamente.

En la prctica de cultivo de linfocitos al igual que en el cultivo celular por cuestiones de tiempo se tuvieron que reducir a 6 gotas la cantidad de sangre para que as la fitohemaglutinina tuviera mayor efecto.

ANLISIS DE RESULTADOS:

Nuestros cultivos no fueron contaminados debido a que mantuvimos el ambiente de esterilidad y evitamos que agentes patgenos del medio externo entraran en contacto con nuestra muestra. Esto fue gracias a que adoptamos las condiciones de asepsia al tomar el material con sus respectivos cuidados, as como para colocarlo en el medio, estas condiciones implicaron flamear la boca del tubo, en la parte de la boquilla, despus de quitar el tapn y antes de volver a ponerlo hay que pasar la boca de los tubos de igual manera por la llama de la lmpara de alcohol brevemente y trabajar en las proximidades de la lmpara de alcohol (10 cm a la redonda). Otro medio que se utilizo para que no se contaminara nuestras muestras fue el uso de guantes y cubre bocas. Antes de manejar nuestro cultivo, se aseo el area, primero con agua y jabon, despus secamos debidamente con algodn esteril y por ultimo con desinfectante en aerosol. Como punto importante en el proceso de la practica que derramo un poco de alcohol de la lmpara, en la mesa, lo cual no importo por que cambiamos de lugar para no contaminar nuestro campo. La coloracin naranja- rojizo fue debido a que le agregamos 15 gotas de rojo de fenol.

CONCLUSIONES El correcto manejo del material para que conservara su esterilidad as como haber desinfectado correctamente nuestra rea de trabajo nos permiti tener mejores resultados en nuestra prctica No se produjeron cambios que indicaran contaminacin alguna del cultivo

BIBLIOGRAFA Manuel Toledo (08 Abril, 2012) Esterilizacion, Disponible en : http://www.slideshare.net/manueltoledo91/esterilizacion-y-medios-de-cultivo [29 enero, 2013] Gobierno de chile. Ministerio de salud. subdepartamento de salud valdivia (julio 2008) manejo de material estril, disponible en: http://www.ispch.cl/sites/default/files/norma_13_manejo_material_esteril.pdf [29 enero, 2013] Ramos m; martnez a. (junio 2008) curso de cultivos celulares, disponible en: http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/ldesviat/_private/bioq%20expiii/cursocultivosuam 2008.pdf [29 enero, 2013]

http://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_celular http://www.editorialcep.com/oposiciones-sanitarias/scs/temasmuestra/15-temaAuxiliar-Enfermeria.pdf http://www.portalsida.org/repos/Bioseguridad.pdf http://www.garrahan.edu.ar/campus/file.php/37/documentos_varios/manual_induccion. pdf