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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE CENTRO DE CINCIAS E TECNOLOGIA AGROALIMENTAR UNIDADE ACADMICA DE AGRONOMIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS

MICROBIOLOGIA GERAL

PROFESSORA: Dra. Alfredina dos Santos Arajo

Pombal
2010

2 MDULO I 1.0 INTRODUO MICROBIOLOGIA MICROBIOLOGIA a cincia que estuda os microrganismos e suas atividades. Preocupa-se com a forma, estrutura, reproduo, fisiologia, metabolismo e a identificao dos seres microscpicos. Inclui o estudo de sua distribuio natural, suas relaes recprocas e com outros seres vivos, seus efeitos benficos e prejudiciais sobre os homens; suas alteraes fsicas e qumicas que provocam em seu meio ambiente. Est associada ao estudo das clulas vivas e ao seu funcionamento O metabolismo divide-se em duas fases: Anabolismo e Catabolismo Anabolismo (ASSIMILAO) a formao de substncias prprias e especificas do organismo para crescer, manter-se ou reparar-se. Por este processo os alimentos chegados s clulas so transformados em substancias idnticas s que constituem o protoplasma (matria viva) Catabolismo (DESASSIMILAO) consiste num processo de desintegrao de substncias incorporadas e de sua transformao em outros compostos mais simples chamados Catablitos , destinados a serem excretados para o interior das clulas. A Microbiologia aborda dois grandes temas: Aspectos de Natureza Bsica Aspectos de Natureza Prtica ou Aplicada

2.0 DISTRIBUIO DOS MICRORGANISMOS NA NATUREZA 3.0 REAS DE APLICAO Microbiologia Mdica Microbiologia Aqutica Microbiologia do Ar

3 Microbiologia do Leite Microbiologia dos Alimentos Microbiologia do Solo Microbiologia Industrial Microbiologia dos Insetos Microbiologia Espacial 4.0 DIVISO DOS REINOS

REINO PROTISTA DE HAECKEL Em 1866 o zologo alemo E. H. Haeckel sugeriu a criao de um terceiro reino, o qual foi denominado PROTISTA. ANIMALLES animais VEGETALLES vegetais o SUPERIOR Algas, Fungos e Protozorios. PROTISTA o INFERIOR Bactrias e cianobactrias (cianofcias) 3

CONCEITO DOS CINCO REINOS outro sistema de classificao foi proposto por Whittaker em 1969.

PLANTAE Plantas verdes, multicelulares e algas superiores. ANIMALIA Animais pluricelulares; FUNGI Mofos e leveduras; PROTISTA Micro algas e protozorios; MONERA Bactrias e cianobacterias VIRUS- dependem de alguns estudos fisiolgicos. No possuem vida prpria e s crescem quando esto dentro da clula do organismo do homem e animais. O homem adquire esses microrganismos atravs da ingesto de gua leite ou outro alimento contaminado, como tambm pelo ar ou atravs de pessoas doentes pelo contato direto ou da manipulao de alimentos (hepatite, sarampo, gripe, rubola)

5 4.0 TEORIA CLULAR Todas as clulas so basicamente semelhantes. Compem-se de protoplasma, um complexo coloidal constitudo principalmente de protenas, lipdios e cidos nuclicos: o conjunto circundado por membranas limitantes ou parede celular, e todas tm um ncleo ou uma substancia nuclear equivalente. Todos os sistemas biolgicos apresentam as seguintes caractersticas comuns: 1) Habilidade de reproduo; 2) Capacidade de ingesto ou assimilao de substancias alimentares, metabolizando-as para suas necessidades de energia e de crescimento; 3) Habilidade de excreo de produto de escria; 4) Capacidade de reagir as alteraes do meio ambiente; 5) Suscetibilidade mutao. Clula - Corresponde unidade fundamental do ser vivo. Uma nica clula corresponde a uma entidade, separada das outras clulas por uma membrana, contendo uma variedade de compostos qumicos e estruturas sub-celulares em seu interior. De acordo com a estrutura celular os seres vivos se dividem em duas categorias: PROCARIONTES E EUCARIONTES. Esta diviso se baseia nas diferenas na organizao da mquina celular. PROCARIONTES no possuem ncleos bem definidos, no possuem membrana nuclear, por isso a regio do ncleo se confunde com o citoplasma. EUCARIONTES possuem ncleos bem definidos, circundado por duas camadas. As clulas dos organismos eucariontes compem-se de trs partes: 1. Membrana celular constituda de lipdios (40%), protenas (60%) e alguns carboidratos. a camada que envolve a clula, tem a funo de transportar nutrientes e servir de suporte ao sistema de formao de energia da celula. 2. Citoplasma toda substancia encontrada entre a membrana e o ncleo. Seu trabalho garante a vida da clula, pois no citoplasma se realizam as funes de nutrio, fundamentais para a conservao da vida; digesto, respirao, circulao e excreo.

6 3. Ncleo parte central da clula. Estrutura chave onde a informao gentica (DNA) armazenada.

Organelas citoplasmticas so estruturas encontradas no citoplasma e que desempenham funes vitais na clula. So elas: Mitocndria responsvel pela respirao da clula. Constituem verdadeiras usinas de energias, onde a matria orgnica moda de maneira a fornecer, para o metabolismo celular, a energia qumica acumulada em suas ligaes. Complexo de Golgi o local de acumulo e concentrao de varias substancias; onde ocorre a sntese das protenas dos carboidratos e dos lipdios. Reticulo Endoplasmtico aumenta a superfcie da clula, o que amplia o campo de atividades das enzimas, facilitando a ocorrncia de reaes qumicas necessrias ao metabolismo celular; facilita o intercambio de substancias entre a clula e o meio externo; armazena substancias diversas; regula a presso osmtica; produz lipdios. Cpsula envoltrio protetor e pode servir tambm como reservatrio de alimentos armazenado e como local de despejo de substncias de escoria.

Esquema de clulas animal e de uma clula vegetal tpica. 5 COMPONENTES DA CLULA 5.1 - COMPONENTES INORGNICOS 1) GUA um importante veculo de transporte de substancias, permitindo o continuo intercambio de molculas entre os lquidos extra e intracelular. Funes desempenhadas pela gua nos seres vivos: Solventes de lquidos corpreos; Meio de transporte de molculas; Regulao trmica; Ao lubrificante; Atuao nas reaes de hidrlise.

8 2) SAIS MINERAIS So encontrados nos seres vivos sob duas formas bsicas: insolvel e solvel. Insolvel acham-se imobilizados como componentes do arcabouo esqueltico. Solvel acham-se dissolvidos na gua em forma de ons Ca ++ ; Mg++; F++; PO4- - -; K+; Na+; Cl - - Os sais minerais desempenham um importante papel biolgico nos seres vivos, agindo como ativadores de enzimas, como componentes estruturais de molculas orgnicas fundamentais e participando da manuteno do equilbrio osmtico. 5.2 - COMPONENTES ORGNICOS DA CLULA Os principais componentes orgnicos da clula so: carboidratos; lipdios; protenas; enzimas; cidos nuclicos e vitaminas. 5.2.1- CARBODRATOS compostos orgnicos constitudos de carbono, hidrognio e oxignio. Na molcula de um carboidrato existe sempre um grupo aldedo ou um grupo cetona. Nos demais carbonos existem grupamentos hidroxilas (-OH) Por essa razo, os carboidratos so definidos como poliidroxialdedos ou poliidroxicetonas.

Monossacardeo so carboidratos simples que no sofrem hidrlise, de frmula geral Cn(H2O)n, onde n varia de 3 a 7(trioses, tetroses, pentoses, hexoses e heptoses.

9 Oligossacardeos carboidratos formados pela juno de 2 a 10 monossacardeos que se separam por hidrlise Sacarose (glicose + frutose) Lactose (glicose + galactose) Maltose (glicose + glicose) Polissacardeos formados pela juno de muitos monossacardeos. Tem frmula geral (C5H10O5)n Ex: Amido; Celulose; Glicognio. 5.2.2 LIPDIOS (do grego lipo gordura) so molculas orgnicas que resultam da associao entre cidos graxos e lcool. Insolveis em gua. Solveis em solventes orgnicos como benzena, ter e lcool. Lipdios simples possuem em sua composio apenas tomos de carbono, hidrognio e oxignio. Compreendem os glicerdeos, cerdeos e os esterdeos. Lipdios Complexos apresentam, alm do Carbono, Hidrognio e Oxignio, tomos de fsforo e nitrognio, Ex: fosfolipdios - encontrados em plantas e animais. Esfingolipdios abundantes no tecido nervoso. Funo: So reservas alimentares Fornecem energia Protegem mecanicamente So isolantes trmicos Auxiliam a absoro de vitaminas e outras substncias lipossolveis.

5.2.3 PROTENAS quimicamente so macromolculas complexas, de alto peso molecular constitudas de molculas menores denominadas AMINOCIDOS. AMINOCIDOS so substncias orgnicas que contem sempre um grupo amina (- NH2) e um radical cido, com seguinte frmula geral.

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Figura representativa da estrutura de uma protena.

PAPEL BIOLGICO DAS PROTENAS Funo estrutural Funo enzimtica funo hormonal Funo de defesa Funo nutritiva. 10

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5.2.4 ENZIMAS: So substncias de natureza protica, elaborada pelos seres vivos, funcionando como agente cataltico que acelera a velocidade da reao qumica e no so consumidoras durante a reao que catalisam.

E + S ES .E + P

FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE REAO DE UMA ENZIMA CONCENTRAO DO SUBSTRATO a medida que transcorre uma reao, ocorre uma diminuio na concentrao dos reagentes. Em geral a velocidade da reao depende da concentrao dos reagentes pelo que a velocidade especifica de converso diminui simultaneamente.

TEMPERATURA Devido a sua natureza protica a desnaturao enzimtica diminui a concentrao efetiva e conseqentemente, decresce a velocidade da reao.

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PH Extremos de pH podem levar a desnaturao da enzima pois afetaro o carter inico dos grupos amina e carboxila da protena, conseqentemente modificaro suas propriedades.

5.2.6 CIDOS NUCLICOS So molculas gigantes, constitudas por unidades menores denominadas nucleotdeos. Cada nucleotdeo constitudo de uma molcula de cido fosfrico ligada a uma pentose, que se acha ligada a uma base nitrogenada. Nos seres vivos existem dois grandes tipos de cidos nuclicos: cido desoxirribonuclicos (DNA ou ADN) e o cido ribonuclico (RNA ou ARN). As bases nitrogenadas so classificadas em duas categorias: pricas e pirimdicas.

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13 o Uma das mais importantes caractersticas do DNA a sua capacidade de autoduplicao, de forma a originar cpias exatas de si mesmo. o O DNA produz RNA e o RNA comanda a fabricao de enzimas e outras protenas.

Frmulas estruturais das cinco bases nitrogenadas que podem ser encontradas nos cidos nuclicos. 5.2.7 VITAMINAS So substncias orgnicas de natureza qumica heterognea que atuam como coenzima, ativando enzimas fundamentais no processo metablico dos seres vivos. Coenzimas - So compostos orgnicos, quase sempre derivados de vitaminas, que atuam em conjunto Ligando-se com as enzima enzimas. com Podem afinidade atuar segundo 3 do modelos: substrato semelhante

- Ligando-se covalentemente em local prximo ou no prprio stio cataltico da apoenzima - Atuando de maneira intermediria aos dois extremos acima citados.

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Vitaminas so substncias necessrias para o metabolismo no organismo, mas

que no podem ser produzidas em nosso corpo. Assim, elas so obtidas atravs de alimentos, bebidas ou suplementos vitamnicos. As excees so a vitamina D, que sintetizada no organismo em uma escala limitada, e as vitaminas B12 e K, as quais so sintetizadas pela flora bacteriana no intestino. Sem as vitaminas as reaes metablicas em nosso organismo ficariam to lentas que no seriam efetivas. Algumas vitaminas (C, E e A) tambm tem papel antioxidante diminuindo a ao nociva dos radicais livres. Ao contrario dos carboidratos lipdios e protenas as vitaminas no tem funo estrutural, nem funo energtica; alem disso so exigidas pelo organismo em doses mnimas. Cada vitamina tem um papel biolgico especifico; portanto nenhuma vitamina pode substituir outra vitamina diferente. As vitaminas podem ser classificadas de acordo com a sua solubilidade em lipdios ou gua Hidrossolveis As vitaminas solveis em gua so absorvidas pelo intestino e transportadas pelo sistema circulatrio at os tecidos em que sero utilizadas. O grau de solubilidade varia de acordo com cada vitamina e influi no caminho que essa substncia percorre no organismo. Quando ingeridas em excesso, as vitaminas hidrossolveis so

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15 armazenadas at uma quantidade limitada nos tecidos orgnicos, mas a maior parte secretada na urina.

Lipossolveis As vitaminas solveis em gorduras so absorvidas no intestino humano com a ajuda de sais biliares segregados pelo fgado. O sistema linftico as transporta as diferentes partes do organismo. O corpo pode armazenar uma quantidade maior de vitaminas lipossolveis do que de hidrossolveis. As vitaminas A e D so armazenadas sobre tudo no fgado e a E nos tecidos gordurosos e, em menor escala, nos rgos reprodutores. O organismo consegue armazenar pouca quantidade de vitamina K. Ingeridas em excesso, algumas vitaminas hidrossolveis podem alcanar nveis txicos no interior do organismo.

As vitaminas so produzidas pelas plantas clorofiladas e por certos organismos unicelulares. Os animais adquirem as vitaminas de que necessitam atravs dos alimentos que ingerem. Esses grupos possuem caractersticas importantes:

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16 As vitaminas hidrossolveis devem ser ingeridas diariamente pois no podem ser armazenadas e so expelidas dentro de um a quatro dias . Elas no resistem ao cozimento. Como exemplo citamos a vitamina C e as vitaminas do complexo B. As vitaminas lipossolveis podem ser armazenadas por perodos maiores no tecido adiposo e no fgado . Elas so solveis em gordura e geralmente so resistentes ao cozimento . Dentre essas encontram-se as vitaminas A , D , E e K . As vitaminas lipossolveis devem ser administradas antes das refeies e as vitaminas hidrossolveis entre ou aps as refeies 7.0 - NUTRIO DOS MICRORGANISMOS Para o crescimento e multiplicao os organismos necessitam de: Uma fonte de carbono, hidrognio e oxignio. Uma fonte de sais minerais, ferro, enxofre, fsforo, sdio e magnsio. Uma fonte de energia. Existem entre os seres vivos 2 tipos de comportamento que caracterizem as maneiras de enfrentar o problema de obteno de alimentos, ou seja sua fonte de energia. O comportamento AUTOTRFICO E HETEROTRFICO. AUTOTRFICO so seres que sintetizam seu prprio alimento, a partir de molculas de baixa E. desenvolve-se em meios minerais. FOTOSSNTESE E QUIMIOSSINTESE HETEROTRFOS seres que no conseguem sintetizar seu prprio alimento e o adquirem do meio onde se encontram. Necessitam de substancias orgnicas para o seu desenvolvimento. FERMENTAO E RESPIRAO. AUTOTRFICO FOTOSSNTESE um processo de produo de alimentos onde ocorre a transformao de substancias simples em compostos orgnicos atravs da luz solar.

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CO2 + H2O CH2O + O2 QUIMIOSSINTESE o processo pelo qual certos organismos sintetizam molculas orgnicas utilizando energia proveniente da oxidao de compostos inorgnicos. Estes organismos oxidam substancias inorgnicas e a energia liberada nesta reao utilizada na sntese da glicose que serve ento como matria prima para sntese de outras molculas orgnicas e como fonte de energia para as reaes celulares. HETEROTRFOS FERMENTAO um processo de obteno de energia utilizado pelos seres vivos. um conjunto de reaes enzimticas atravs das quais uma molcula orgnica degradada a molcula orgnica mais simples. Neste processo o aceptor final de hidrognio produzido pela oxidao das molculas orgnicas uma substancia orgnica, produto da reao em questo. RESPIRAO consiste no processo de extrato de energia qumica acumulada nas molculas de substancias orgnicas diversas, tais como carboidratos e lipdios. Nesse processo, verifica-se a oxidao ou queima de compostos orgnicos de alto teor energtico conseqentemente, formam-se substancias de menor contedo energtico, como CO2 e H2O. Respirao aerbica quando o aceptor final de hidrognio produzido pela oxidao das molculas orgnicas o oxignio. O2 + 4H+ + 4 e- 2H2O Respirao anaerbica - quando o aceptor final de hidrognio produzido pela oxidao das molculas orgnicas uma substancia inorgnica diferente do oxignio. Ex. nitrato, sulfato, carbonato etc. 2HNO3 + 10 H+ + 4 e- N2 + 6 H2O

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8.0 - NECESSIDADE DE OXIGNIO De acordo com o oxignio, os microrganismos so divididos em 4 grupos fisiolgicos: Microrganismos Aerbios necessitam de oxignio Microrganismos Anaerbios no podem crescer em presena do ar e no utilizam oxignio para as reaes de produo de energia Microrganismos Facultativos so aqueles que crescem na presena do ar atmosfrico e podem crescer tambm na ausncia de oxignio. Eles no requerem oxignio para o crescimento, embora possam utiliza-lo para a produo de energia em reaes qumicas. Microrganismos Microaerfilos necessitam de pequena quantidade de oxignio (1 a 15%). 9.0 - FAIXA DE TEMPERATURA Para todos os microrganismos existem 3 temperaturas cardeais a) Temperatura mnima abaixo da qual no h crescimento b) Temperatura mxima acima da qual no h crescimento c) Temperatura tima onde o crescimento mximo De acordo com essa temperatura os microrganismos podem ser classificados em 3 grandes grupos: a) Psicrfilos crescem em baixa temperatura b) c) Mesoflicos crescem em temperatura moderada Termoflicos crescem em alta temperatura T. mxima 25C 45C 95C T. mnima < 0C 20C 45C T. tima 15C 35 37C 60 70C

Psicrfilos Mesoflicos Termoflicos

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10.0 CARACTERSTICAS DOS MICRORGANISMOS CARACTERSTICAS CULTURAIS CARACTERSTICAS MOFOLGICAS CARACTERSTICAS METABLICAS CARACTERSTICAS ANTIGNAS CARACTERISTICAS GENTICAS 10.1 - CARACTERSTICAS DAS BACTRIAS Bactrias so seres procarionte amplamente distribudo na natureza, sendo encontrada em todos os ambientes. A clula bacteriana , normalmente envolvida por uma parede espessa (parede celular). Muitas bactrias possuem estruturas locomotivas denominadas FLAGELOS

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20 PRINCIPAIS CARACTERSTICAS: DIMENSES 0,5 a 10 micra de comprimento FORMA: Cocos clulas de forma esfrica Bacilos forma de bastonetes Espirilos forma espiralada Vibrio forma de vrgula ARRANJO - H formas coloniais decorrentes da agregao das formas individuais Diplococos colnias formadas por dois cocos ligados Estreptococos cocos unidos em fileiras, como se fossem contas de colar Estafilococos cocos agregados desordenadamente

ESTRUTURA - As bactrias so constitudas, normalmente, por uma parede celular, que contm em sua composio polissacardeos, protenas e tambm lipdios. Internamente parede celular, encontra-se a membrana plasmtica, que lipoprotica e o citoplasma,. O cromossomo encontra-se no citoplasma e possui forma circular. constitudo por uma molcula de DNA que est ligado a uma membrana de protena.

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REPRODUO DAS BACTERIAS Reproduzem-se por diviso binria, onde uma clula se divide, formando duas clulas. Assim sendo, partindo de uma nica bactria, o aumento populacional se faz em progresso geomtrica: 1 2 22 23 24 25 ..... 2n O tempo necessrio para que a clula se divida ou seja, que a populao duplique conhecido como TEMPO DE GERAO

A reproduo das bactrias ASSEXUADA Algumas bactrias formam sob certas condies, formas resistentes que so chamadas de ESPOROS. O fenmeno de da formao de esporos chamado ESPORULAO

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22 EXIGNCIAS NUTRICIONAIS h bactrias que fabricam seu prprio alimento (AUTOTRFICAS) e outras que retiram seu alimento do meio em que se encontram (HETEROTRFICAS). COLORAO DE GRAM De acordo com a constituio da parede, as bactrias podem ser divididas em dois grandes grupos: Gram-positivas e gram-negativas. A tcnica de Gram consiste essencialmente, no tratamento sucessivo de um esfregao bacteriano, fixado pelo calor, com os seguintes reagentes: cristal violeta, lugol, lcool e fucsina. Depois da adio de cada reagente, o esfregao lavado com gua para retirar o excesso do reagente.

Quando se examina ao microscpio um esfregao bacteriano corado pelo mtodo Gram, as bactrias Gram + se apresentam de cor roxa e as Gram -, de cor avermelhada. Diferenas bsicas entre Paredes Gram-Positivas e Gram-Negativas A parede das bactrias Gram-positivas praticamente formada de uma s camada enquanto que a parede das bactrias Gram-negativas formada de duas camadas.

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23 O complexo cristal violeta lugol no retirado do citoplasma das bactrias Gram-Positivas devido a menor permeabilidade do espesso peptidoglicano destas bactrias ao lcool. Figura (A) Representao esquemtica das diferenas entre a estrutura fina da parede celular da bactria Gram +, (B) Representao esquemtica das diferenas entre a estrutura fina da parede celular da bactria Gram -.

CIANOBACTRIAS Chamadas de algas azuis ou cianofceas, as cianobactrias tm organizao celular semelhante das bactrias. O ncleo e as organelas no so organizados, o material gentico fica em contato direto com o citoplasma. Por este motivo so do reino Monera. As cianobactrias vivem na gua, no solo bem mido, sobre plantas, em fontes termais sob altas temperaturas e at entre os plos de certos animais, como as preguias.

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24 As vezes a gua das represas torna-se esverdeada; isso acontece porque o nmero de cianobactrias aumenta muito. Nessas ocasies eliminada uma toxina, fazendo com que a gua apresente odor e sabor ruins. Como algumas bactrias, as cianobactrias do solo conseguem transformar o nitrognio gasoso em sais de nitrognio, absorvidos dos solos pelos vegetais.

11.2 - CARACTERSTICAS DOS FUNGOS Os fungos so organismos heterotrficos, obtendo sua alimentao a partir da matria orgnica inanimada ou nutrindo-se como parasitas de hospedeiros vivos. Como saprfitas, decompem resduos complexos de plantas e animais, transformando-os em formas qumicas mais simples, que retornam ao solo. Tais substncias so, ento, absorvidas pelas geraes vegetais subseqentes. Desse modo, a atividade fngica amplamente responsvel pela fertilidade do solo. O crescimento dos fungos saprofitas, contudo pode ser prejudicial apodrecimento da madeira, dos tecidos e dos alimentos. Como parasitas causam doenas em vegetais, no homem e nos animais, embora a maior parte das micoses seja menos severa que as bacterioses ou as viroses. So importantes na fabricao de queijos, antibiticos etc. MORFOLOGIA DOS FUNGOS

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So microrganismos eucariticos, pluricelulares, reproduzem-se, naturalmente, por meio de esporos. No tem clorofilas, e, portanto no podem fazer a fotossntese, so filamentosos, medem em geral 5 a 10 m de dimenso transversal, so comumente ramificados. Em sua maioria so imveis. A maior parte entre todas as classes de fungo produz esporos de dois modos: SEXUADA E ASSEXUADA. O talo de um fungo tipicamente composto por filamento tubular chamado HIFAS. O conjunto de hifas recebe a denominao de MICLIO.

Fisiologia e nutrio dos fungos Fisiologicamente, os fungos adaptam-se a sobrecargas mais severas do que a maioria dos microrganismos. Desenvolvem-se em altas concentraes de aucares. Podem tolerar e crescer em concentraes altas de cidos, suportando variaes de pH entre 2,0 e 9,0. So capazes de viverem em ambientes midos e secos. A maioria dos fungos so estritamente aerbios Desenvolve-se numa ampla faixa de temperatura, com um timo de 22 a 30C. A glicose a fonte de carbono adequada para, praticamente, todos os fungos. A sacarose e a maltose, assim como muitos compostos orgnicos

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26 de carbono mais complexos (amido celulose). Nitrognio orgnico, sob a forma de sais de amnio ou de hidratos.

11.2.1 - CARACTERISITICAS DAS LEVEDURAS As leveduras so fungos, mas deles se diferenciam por serem unicelulares. Sua reproduo se faz, geralmente por diviso binria. Como clulas crescem e se reproduzem mais rapidamente que os bolores. 26

27 So desprovidas de clorofilas Medem de 10 a 15 micras, com formato esfrico, oval ou em forma de basto. So similares as bactrias na morfologia, formao de colnias, mtodos de cultivos e atividades bioqumicas Crescem dentro da faixa de temperatura de 25 a 40C Desenvolve-se em meios contendo uma quantidade relativa de umidade Crescem na presena e tambm na ausncia de oxignio So ativos agentes oxidativos e fermentadores dos cidos orgnicos e carboidratos So proteolticos embora algumas espcies decompem a gordura So usadas na fabricao de vinhos, cervejas, aguardente, po .

11.3- CARACTERSTICAS DAS ALGAS As algas so organismos autotrficos, clorofilados e portanto fotossintetizantes Existem na natureza, milhares de espcies de algas. As pequenas formas aquticas formam grande parte da vida microscpica livremente flutuante na gua, chamada PLANCTON que o principal alimento dos animais aquticos MOFOLOGIA DAS ALGAS

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28 As algas demonstram grande variedade de formas e de dimenses. Muitas espcies ocorrem como clulas simples que podem ser esfricas, em basto. Outras formas colnias multicelulares.

REPRODUO DAS ALGAS As algas podem reproduzir-se por via sexuada ou assexuada. Algumas espcies demonstram complicados ciclos vitais, utilizando ambos os meios de reproduo.

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29 IMPORTNCIA ECONMICA DAS ALGAS FERTILIDADE DO SOLO fixam o nitrognio atmosfrico ALIMENTOS agente clarificante em sucos de frutas, fonte protica, carboidratos COSMTICOS DOENAS Prototheca identificada como capaz de provocar doenas no homem e outros mamferos nos trpicos.

11.4 - CARACTERSTICAS DOS PROTOZORIOS So protistas eucariticos, heterotrficos, unicelulares, em sua maioria so aquticos. Seu tamanho pode variar de 2 a 3 m a 250m ou mais existindo certas espcies visveis a olho nu. Alguns protozorios so de vida livre podendo nadar livremente ou fixados a um substrato, outros podem viver no interior de animais e nas plantas, sendo em alguns casos parasitas. Doenas causadas por protozorios: disenteria amebiana, malaria, doena das chagas.

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11.5. CARACTERISTICAS DOS VIRUS So microrganismos muito pequenos (em media 0,1 micra). No possuem estrutura celular, so construdos por cido nuclico (DNA ou RNA) circundado por uma camada protica e so incapazes de produzir ATP, ou seja, energia necessria para as atividades de uma clula ou organismo superior. Assim precisam de uma clula viva para se replicar, da qual utilizam as estruturas celulares que lhes faltam e o ATP da clula parasitada. So inativos nos alimentos. Nos alimentos provocam problemas na fabricao de iogurtes e queijos, pois os bacterifagos destroem as clulas das culturas starter. Os vrus patognicos como o da hepatite A, da poliomelite e os causadores da gastroenterite (rotavirus e vrus Norwalk) podem ser veiculados ao homem por gua e alimentos.

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12.0 CURVA DE CRESCIMENTO

A FASE LAG (fase de latncia) Imediatamente aps sua inoculao no meio, as clulas comeam a se ajustar s condies fsicas e aos nutrientes disponveis, sintetizando enzimas e coenzimas necessrias ao seu crescimento. Durante esse perodo no ocorre diviso celular. A medida que as clulas se tornam adaptadas ao meio, sintetizam componentes celulares, aumentando sua massa e comeam a se dividir. O aumento do nmero de indivduos no fim da fase lag gradual, uma vez que nem todas as clulas completam sua adaptao ao mesmo tempo. Quando todas as clulas da cultura esto aptas a se dividir em tempos regulares, inicia-se a fase seguinte. B - FASE LOG durante esta fase todas as clulas dividem-se a intervalos regulares de tempo resultando num aumento exponencial do numero de indivduos na populao. Durante a fase exponencial, o grfico que relaciona o logaritmo do nmero de microrganismo com o tempo uma reta. Esta fase de intensa multiplicao dura enquanto no houver limitao de nutrientes ou acumulo de produtos txicos. C FASE ESTACIONARIA a diminuio do ritmo de crescimento, que ocorre ao fim da fase exponencial, d incio fase estacionaria onde o nmero de individuo permanece constante no decorrer do tempo. Nesta fase existe um equilbrio entre a taxa de morte e a taxa de divises na populao e sua durao varivel, dependendo no s da espcie do microrganismo como tambm do meio e condies de cultivo.

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32 D FASE DE DECLINIO OU MORTE Algum tempo depois da populao ter entrado na fase estacionaria, a taxa de morte comea a exceder a de diviso, ocasionando um decrscimo no nmero de microrganismos, entrando a cultura na fase de morte cuja durao tambm bastante varivel. 13.0 - MEIOS DE CULTURA O cultivo dos microrganismos, em condies laboratoriais, um pr-requisito para um estudo adequado. Para que isso possa ser realizado, necessrio o conhecimento de suas exigncias nutricionais e das condies fsicas requeridas. MEIOS DE CULTURA so substancias de composio qumica definida, destinada ao cultivo de tipos especficos e conhecidos de microrganismos. Matrias primas como: peptonas, extrato de carne, extrato de levedura so empregadas nos meios de cultura resultando um meio que promove o desenvolvimento de grande nmeros de microrganismos. Os meios de cultura podem ser lquidos ou slidos. TIPOS DE MEIOS Meios de Enriquecimento permite o crescimento Meios Seletivos previne o crescimento de um grupo de microrganismos sem agir sobre outros Meios Diferenciais permite distinguir o tipo de microrganismos Meios de dosagem so empregados para dosagem de vitaminas, aminocidos e antibiticos. Meios para Contagem Meios para Identificao 14 - REGRAS BSICAS EM MICROBIOLOGIA Usar bata; no comer, beber, nem fumar no laboratrio, Limpar e sanitizar as bancadas antes e depois do trabalho

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Identificar as amostras antes de iniciar a analises, no descartar a amostra at obter os resultados. Usar bico de Busen, entre o material e o analista. As pipetas devem conter algodo na extremidade de suco para evitar contaminao do material e do analista. No conversar na hora do trabalho para evitar contaminaes

O material utilizado deve receber o seguinte tratamento: a) Esterilizao (autoclave) b) Lavagem c) Secagem em estufa d) Esterilizao em estufa 170C por 2 horas e) Armazenamento TCNICAS DE LAVAGEM a) Lavar com detergente b) Imerso em soluo de HNO3; HCl (1%) ou soluo sulfocrnica c) Lavar com gua da torneira d) Enxge com gua destilada 15.0 - CONTROLE DOS MICRORGANISMOS PELA AO DOS AGENTES FSICOS 15.1.1 -TEMPERATURA Esterilizar inativar todos os microrganismos existentes no material. a) Calor seco Flambagem em chama direta ( bico de Busen, lmpada germicida Ar quente estufas, forno de Paster b) Calor mido 33

34 Pasteurizao visa destruio dos germes patognicos e no a eliminao total de germes contaminantes. gua Fervente - A fervura destri quase que instantaneamente os germes patognicos no esporulados. Vapor sob presso autoclave. O calor mido mais eficiente, pois tem um poder de penetrao maior que o calor seco. O calor seco age, promovendo uma oxidao violenta de componentes do protoplasma, enquanto que o calor mido age promovendo a desnaturao das protenas e dissoluo de lipdios. c) Congelamento Congelamento lento promove a formao de cristais de gelo, que perfura a membrana e a parede celular. Congelamento brusco- temperaturas inferiores a 30C no leva a formao de cristais, os microrganismos sobrevivem durante muito tempo nestas condies principalmente se o processo seguido de um dessecamento vcuo Liofilizao. 15.1.2 RADIAES atividades letais dos microrganismos Ultravioleta (UV) comprimento de onda entre 240 e 280 nm so absorvidos pelas purinas e piridinas dos cidos nuclicos provocando mutaes. Anis aromticos de aminocidos tambm absorvem radiao levando inativao das enzimas. Ionizantes atingem os tomos e so incomparavelmente mais eficientes seringas, agulhas outros materiais descartveis. 15.1.3 FILTRAO passagem de solues ou gases atravs de filtros de poros suficientemente pequenos que retm os microrganismos.

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35 15.2. CONTROLE DOS MICRORGANISMOS PELA AO DOS AGENTES QUMICOS Os agentes qumicos empregados para matar ou inativar os microrganismos so: Desinfetantes e Agentes Quimioterpicos Desinfetantes so substancias que agem diretamente sobre as estruturas microbianas, causando a morte dos microrganismos. No matam necessariamente todos os microrganismos, diminuem o numero de tal forma que os indesejveis no representam mais um risco para o processo. Quimioterpicos so substancias que interferem na grande maioria dos casos, em determinadas vias metablicas, isto , a ao dos agentes quimioterpicos se restringe as clulas de microrganismos que possuem a via metablica sensvel. Microbicida determinando a morte dos microrganismos Microbiosttico apenas impedindo a sua proliferao

MICROBIOLOGIA SANITRIA 1- SADE E SANEAMENTO o SANEAMENTO Segundo a OMS o controle de todos os fatores de meio fsico do homem, que exercem ou podem exercer efeitos nocivos sobre o bem estar fsico, mental e social. o SADE o estado de completo bem estar fsico, mental e social, e no apenas ausncia de doena. o SADE PBLICA a cincia, e a arte de evitar doenas prolongando a vida. o SANEAMENTO AMBIENTAL o conjunto de aes socioeconmicas que tem por objetivo alcanar salubridade ambiental, por meio de abastecimento de gua potvel, coleta e disposio sanitria de resduos slidos, lquidos e gasoso,

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36 promovendo a disciplina sanitria do uso do slido, drenagem urbana, controle de doenas transmissveis, com a finalidade de proteger e melhorar as condies de vida urbana. o IMPACTO AMBIENTAL qualquer alterao das propriedades fsicas, qumicas e biolgicas do meio ambiente, causada por qualquer forma de matria ou energia resultante das atividades humanas que, direta ou indiretamente, afetam: A sade a segurana e o bem estar da populao; As atividades sociais e econmicas; A biota; As condies estticas e sanitrias do meio ambiente; A qualidade dos recursos ambientais

2.0 ATIVIDADES BSICAS DO SANEAMENTO Abastecimento de gua populao, com qualidade compatvel com a proteo da sade e em quantidade suficiente para a garantia de condies bsicas de conforto. Coleta, tratamento e disposio ambientalmente adequada e sanitariamente segura dos esgotos sanitrios proveniente das atividades domesticas, comerciais e de servios pblicos. Coleta, tratamento e disposio ambientalmente adequada e sanitariamente segura dos resduos slidos rejeitados pelas mesmas atividades. Coleta de guas pluviais e controle de empoamentos e inundaes. Controle de vetores de doenas transmissveis (insetos, roedores, molsculos, etc) 3.0 SANEAMENTO E MEIO AMBIENTE 36

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O meio ambiente tem sido degradado atravs de diferentes formas: A gua utilizada como meio de transporte de dejetos e rejeitos; O solo prejudicado pelo lanamento do lixo a cu aberto A qualidade do ar alterada pela emisso de gases nocivos pelas indstrias e veculos. As aes de saneamento devem ter como principal objetivo, assegurar um meio ambiente favorvel vida humana e de outros seres vivos, atravs da poluio da gua, do solo e do ar. 4.0 POLUIO O termo poluio provm do latim polluere SUJAR POLUIO tudo que ocorre com um meio e altera prejudicialmente, suas caractersticas originais, de forma a: Afetar a sade, a segurana e o bem estar da populao; Criar condies adversas s atividades sociais e econmicas Ocasionar danos relevantes flora, fauna e a qualquer recurso natural, aos acervos histricos, culturais e paisagsticos. O termo poluio abrange hoje trs determinaes bsicas: o Introduo de substancias artificiais e estranhas ao meio (agrotxicos) ou contaminao por organismos patognicos. o Introduo de sedimentos em suspenso nas guas de um lago, ocupando seu volume til tornando-o turvo. o Alterao na proporo ou nas caractersticas dos elementos constituintes do prprio meio, como diminuio do OD nas guas de um rio, devido a presena de MO. 5.0 SANEAMENTO E SADE PBLICA

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38 O controle da transmisso das doenas, alm da interveno em saneamento e dos cuidados mdicos, completa-se quando promovida a educao sanitria, adotandose hbitos higinicos como: o Utilizao e manuteno adequada das instalaes sanitrias; o Melhoria da higiene pessoal, domstica e dos alimentos. 5.1 DOENAS RELACIONADAS COM A HABITAO o Moradias construdas a concentrao elevadas de vetores; o Nas habitaes deve ser promovida a higiene domestica, esta uma das estratgias preventivas na transmisso de doenas oral-fecal e das controladas pela limpeza com a gua. o As habitaes tm influncia nas doenas transmitidas pelo ar, como catapora, cachumba, menigite, difteria e doenas respiratrias. O projeto de uma habitao deve, ento, prever condies adequadas de espao, ventilao, temperatura e umidade, de forma a no favorecer a transmisso de patgenos pelo ar; o O acabamento inadequado nas habitaes pode favorecer a proliferao de ratos, mosquitos, carrapatos, piolhos, etc. 5.2 DOENAS RELACIONADAS COM O LIXO

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5.3 DOENAS RELACIONADAS COM A GUA De varias maneiras a gua pode afetar a sade do homem: pela ingesto direta, na preparao de alimentos; na higiene pessoal, na agricultura, na higiene do ambiente, nos processos industriais ou nas atividades de lazer. As doenas relacionadas com a gua podem ser agrupadas em duas categorias: DOENAS DE ORIGEM HDRICA so aquelas causadas por determinadas por substncias qumicas (orgnicas e inorgnicas) presentes na gua em concentraes inadequadas que causam danos sade. Estas substncias podem existir naturalmente no manancial ou resultarem da poluio Compostos Orgnicos Pesticidas Trihalometanos Hidrocarbonos Polinucleares aromticos

Compostos Inorgnicos Antimnio, Arsnico (0,10 mg/L); Brio (1,0mg/L); Cdmio (0,001mg/L); Cobalto, Chumbo (0,03mg/L); Mercrio (0,002mg/L); Molibdeno, Selnio (0,01mg/L); Urnio. Flor em concentraes de 2 a 4 mg/L causa mancha no esmalte dos dentes, rigidez e dores nas articulaes e deformao do esqueleto. A concentrao sugerida para guas de 1,0 mg/L. Tambm podem ser consideradas doenas de origem hdrica aquelas causadas pela carncia de alguns elementos na gua. Assim, a ausncia de iodo responsvel pelo bcio e consequentemente pelo cretinismo. Da mesma forma a falta de flor causa crescimento debilitado de dentes e ossos. DOENAS DE VEICULAO HDRICA neste caso a gua age como veiculo transmissor de agente infeccioso ou de vetores biolgicos e mecnicos dos mesmos.

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40 As infeces relacionadas com a gua podem ser classificadas de acordo com o mecanismo pelo qual o patgeno transmitido desde uma pessoa doente para um novo hospedeiro sadio. Essa classificao apresenta 4 categorias: MECANISMO QUE TEM COMO ORIGEM A GUA o patgeno est presente na gua e ingerido pelo novo hospedeiro (homem ou animal) o qual adquirir a infeco. Nesta categoria esto includas as infeces causadas por bactrias como: clera, febre tifide, disenteria bacilar; por vrus: hepatite infecciosa (hepatite A), poliomelite, diarrias e doenas causadas por protozorios: amebase. Todos esses patgenos seguem a via oral-fecal, isto so eliminadas com as fezes do doente e penetram pela boca da pessoa susceptvel que se tornar novo doente A gua apenas a via de transmisso. MECANISMO ASSOCIADOS A GUA DE LAVAGEM E HIGIENE PESSOAL - numerosas doenas intestinais, da pele e dos olhos esto relacionadas com a falta de higiene e/ou uso de gua contaminada.

a) Infeco do aparelho digestivo diarrias morte nas crianas b) Infeces nos olhos, pele, furnculo, micoses, sarnas, tracomas Infeces causadas por piolhos, pulgas e percevejos. MECANISMO BASEADO NA GUA - So doenas cujo agente etiolgico passa parte do seu ciclo na gua, dentro de um hospedeiro intermedirio como o caramujo. Todos estes patgenos so vermes parasitas (helmintos) que dependem do hospedeiro aqutico para completar seu desenvolvimento. Exemplos: Esquistossomose a gua poluda com excretas contm ovos de S. mansoni os quais eclodem infectam os caramujos evoluem e infectam o homem penetrando pela pele.

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41 Verme Guinea (Dracunculos medinensis) a larva sai do homem atravs de feridas na pele penetra no crustceo. O homem se re-infecta ao ingerir a gua com o crustceo contaminado. MECANISMO QUE TEM INSETOS COMO VETORES - so doenas transmitidas por insetos os quais se criam na gua ou se alimentam e picam o individuo prximo da gua. Exemplos: malaria; dengue, febre amarela e a doena do sono (mosca Ts-Ts).

6. DOENAS DE VEICULAO HDRICA 6.1 DOENAS DE ORIGEM VIRAL VIRUS 1. ENTEROVIRUS Polivirus Echovirus Coxsackie Adenovirus RSERVATRIO DOENA Poliomelite, febre, Homem Homem Homem Homem e animais meningite Diarria, febre, meningite, doenas respiratrias Febre, meningite, doenas respiratrias Doenas respiratrias, infeces de olhos

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Reovirus 2. Vrus da Hepatite A 3.Virus associados com gastroenterite Rotavirus

Homem e animais Homem

No tem definidas Hepatite infecciosa

Provavelmente o homem

Diarria e vmitos Diarria e vmitos

Calicivirus

6.2. DOENAS DE ORIGEM BACTERIANO

BACTERIAS E. coli patognica Salmonella S. tyfho S. paratyphi Outras Salmonellas

RESERVATORIOS Homem

DOENAS Diarria

Homem Homem Homem e animais

Febre tifide Febre para tifide Intoxicao alimentar e diarria

Shigela spp

Homem

Disenteria bacilar

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V. cholerae Outros vibrios Campylobacter spp Yersinia enterocolitica Leptospira Icterohaemonhagiae

Homem Homem Homem e animais Homem e animais Ratos

Clera Diarria Diarria Diarria e septicemias Leptospirose

6.3 DOENAS CAUSADAS POR PROTOZORIOS Os protozorios mais freqentes em fezes e transmitidos pela gua correspondem apenas a trs espcies: PROTOZOARIOS Girdia lamblia TRANSMISSO Homem-solo-agua-homem DOENA Giardiase

Entamoeba histolytica

Homem-solo-agua-homem

Amebiase

Balantidium coli

Homem-solo-agua-homem

Balantidiase

6.4 DOENAS CAUSADAS POR HELMINTOS HELMINTOS TRANSMISSO DOENA

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44 Schistosoma mansoni Homem e animaiscaramujo aqutico homem Schistosoma haematobium Homem-caramujo aqutico homem Schistosoma japonicum Homem-caramujo aqutico homem Fasciola heptica Homem-caramujo aqutico -homem Fasciolase Esquistossomose Esquistossomose Esquistossomose

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45 Principais Vias de Transmisso de Patogenos

7. INDICADORES DE POLUIO FECAL Os indicadores de poluio fecal so grupos de bactrias que pela sua origem e ecologia demonstram a contaminao por fezes ou esgotos. Os requisitos bsicos que deve reunir um bom indicador esto indicados a seguir: Ser um componente normal da flora intestinal de indivduos sadios; Estar ausente no meio ambiente e em animais Estar presente sempre que microrganismos patognicos intestinais estiverem presentes; Apresentar nmeros mais elevados que os patgenos intestinais; No se reproduzir fora do intestino Apresentar taxa de morte igual ou levemente menor que os patgenos intestinais Ter resistncia igual ou maior aos fatores ambientais que os patgenos fecais Fceis de detectar e quantificar No serem patognicos.

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46 Nenhuma bactria rene todas estas condies. Os principais grupos de bactrias que servem como indicadores que cumprem com alguns requisitos anteriores so: coliformes a 35 e 45C, Estreptococos fecais; Clostridium perfringens e os colifdos somticos. 7.1 INDICADORES DE GUAS RECREACIONAIS guas recreacionais so guas superfcies como rios e lagos destinados natao, piscinas e praias. Tradicionalmente a qualidade destas guas monitorada atravs das bactrias do grupo coliformes e contagem padro de bactrias hetertrofas. A deteco dos primeiro grupo serve para indicar a qualidade de guas destinadas para o consumo humano tratadas ou no, cuja ingesto poder causar doenas intestinais. Portanto, estes indicadores so de uso limitado em guas destinado recreao. Tornam-se necessrios microrganismos que indiquem riscos sade pelo contato direto do individuo com a gua e no apenas pela ingesto da mesma. Foram esto sugeridas, como indicadores adicionais, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. 8. DEFINIES E APLICAES DE MICRORGANISMOS INDICADORES 8.1 Coliformes O grupo de coliformes a 35C inclui as bactrias na forma de bastonetes Gramnegativos, no esporuladas, aerbias ou anaerbias facultativas, capazes de fermentar a lactose com produo de gs, em 24-48 horas a 35C, o grupo inclui cerca de 20 espcies, dentre as quais encontram-se, tanto bactrias originrias do trato gastrintestinal de humanos e outros animais de sangue quente, como tambm diversos gneros e espcies de bactrias no entricas, como Serratia e Aeromonas. Por essa razo, sua enumerao em gua e alimentos menos representativa como indicao de contaminao fecal, do que a enumerao de E. coli.

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47 8.2 Escherichia coli A E. coli um membro da famlia Enterobacteriaceae apresentando-se como um bacilo Gramnegativo anaerbio facultativo, capazes de fermentar a lactose com produo de gs, em 24-48 horas a 44-45C. geralmente encontrada no intestino do homem e animais de sangue quente e pode ser isolada de alimentos de origem animal. Cerca de 95% dos coliformes existentes nas fezes humanas e de outros animais so E. coli, e dentre as bactrias de habitat reconhecidamente fecal a E. coli o melhor indicador de contaminao fecal conhecido at o momento, pois satisfaz quase todas as exigncias de um indicador ideal. Aplicao: o Avaliao da contaminao fecal em guas superficiais, de esturios e marinas. o Monitoramento de guas recreacionais como piscinas, praias e lagos. um indicador fundamental para avaliar as condies de balneabilidade, de acordo com os padres nacionais. o Avaliao da qualidade bacteriolgica de guas destinadas irrigao, descendentao de animais, criao de ostras e mariscos. o Avaliao da eficincia dos sistemas de tratamento de ETES o Monitoramento da qualidade de gua para consumo humano, da rede de distribuio, de guas minerais, poos, etc.

Gneros: Citrobacter, Escherichia, Enterobacter e Klebsiella Citrobacter, Enterobacter e Klebsiella: coliformes ambientais

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8.3. Estreptococcus faecalis So cocos Gram-positivos presentes em fezes humanas e animais. So mais resistentes que os coliformes s condies ambientais externas (pH, temperatura, salinidade, etc). Aplicao: o As mesmas que para os coliformes o Confirmao contaminao de origem fecal, quando os resultados de coliformes so duvidosos; o Avaliao da qualidade de guas subterrneas (devido maior resistncia no solo que os coliformes, tornam-se indicadores confiveis). 8.4 Clostridium perfringens So bastonetes Gram-positivos, esporulados, anaerbios que fermentam a lactose com produo de gs. Produzem fermentao turbulenta do leite, reduzem os nitratos (atividade desnitrificante), reduzem sulfitos na gua, produzem lecitinase e fosfatase cida e hidrolizam a gelatina. Aplicao: o Avaliao da qualidade da gua de novas fontes de abastecimentos. o Deteco da contaminao em sedimentos marinos e resduos industriais. o Anlises da qualidade de guas recicladas e fontes reconhecidamente poludas. o Avaliao da qualidade de guas minerais. 8.5 Pseudomonas aeruginosas So bactrias Gram-negativas, aerbias, moveis por filamentos polares, oxidase e catalase positivos. A maioria das cepas produzem pigmentos esverdeados. Crescem a 37C e 41C, mas no a 4C.

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49 Apresentam elevada resistncia a antibiticos e desinfetantes (portanto so bons indicadores do grau de higiene de guas de piscinas) e a biocidas. Toleram valores de pH relativamente altos (pH= 8,5). Aplicao: o Avaliao da qualidade bacteriolgica de guas recreacionais, guas industriais e corpos receptores de esgotos domsticos, hospitalares e industriais. o Avaliao da qualidade bacteriolgica de guas potveis e minerais. o Monitoramento da rede de abastecimento, quando esta bactria detectada em testes prvios. 8.6 Staphylococos ureos So cocos Gram positivos, catalase positiva, fermentadores de glicose e manitol em anaerobiose. So coagulase positivo e produzem uma nuclease termoresistente. Aplicao: o Avaliao da qualidade sanitria de guas de piscinas e recreacionais em geral. o Avaliao da eficincia da desinfeco em piscinas, devido sua alta resistncia ao cloro e outros desinfectantes o Apresentam as mesmas aplicaes que os coliformes e a E. coli. 8.7 Colifagos Os colifagos so vrus (bacterifagos) que infectam e se replicam em bactrias coliformes e aparentemente esto presentes sempre que coliformes a 35C, coliformes a 45C e E.coli esto presentes.

Aplicao o Indicadores da qualidade sanitria de guas doces, salobras e salinas. o Indicadores da provvel presena de enterovirus

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50 o Servem como modelo do comportamento de enterovirus em sistema de tratamento.

9.0. AGUA NA NATUREZA 9.1 DISTRIBUI DA AGUA NA TERRA As guas cobrem da superfcie da terra; deste total, 97% da gua s salgadas 3% so gua doce. Dessa ultima 77% esto congeladas nos crculos polares; 22% compem-se de guas subterrneas. Esses valores ressaltam a grande importncia de se preservar os recursos hdricos na terra, e de se evitar a contaminao. H uma forte ligao entre a falta dgua e altos ndice de mortalidade infantil 9.2. QUALIDADE DA GUA A gua de chuva, ao cair, quase pura; ao atingir o solo seu poder de dissolver e carrear substncias altera suas qualidades. Dentre o material dissolvido encontram-se as mais variadas substncias tais como: substancias calcarias e magnesianas que tornam a gua dura; substancias ferruginosa que do cor r sabor; partculas finas que do durbidez; e tambm organismos patgenos resultantes das atividades humana. Em conseqncia da sua grande atividade, a gua pura no encontrada na natureza.

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51 gua potvel aquela que prpria para o consumo humano, pelas suas qualidades organolepticas, fsicas, qumicas e biolgicas. Em outras palavras aquela que no contem germes patognicos, nem substncias qumicas alem do limite de tolerncia. gua poluda - aquela que contem substancias que modificam suas caractersticas e a tornam imprprias para consumo. gua contaminada aquela c que contem germes patognicos. 10. ABASTECIMENTO DE GUA O Sistema de Abastecimento Pblico de gua constitui-se no conjunto de obras, instalaes e servios, destinados a produzir e distribuir gua a uma comunidade, em quantidade e qualidade compatveis com as necessidades da populao, para fins de consumi domestico, servios pblicos, industrial e outros A gua constitui elemento essencial vida vegetal e animal. O homem necessita de gua em qualidade adequada e quantidade suficiente para atender suas necessidade, para proteo da sade e para proporcionar o desenvolvimento econmico. 10.1 IMPORTANCIA DO SISTEMA DE ABASTECIMENTO DE GUA A importncia do sistema de abastecimento de gua pode ser considerada nos seguintes aspectos: 10.2 ASPECTO SANITRIO E SOCIAL o Melhoria da sade e das condies de vida de uma comunidade o Diminuio da mortalidade, principalmente infantil; o Diminuio da incidncia de doenas relacionada com a gua; o Implantao de hbitos higinicos na populao o Facilidade na implantao e melhoria dos sistemas de esgotos sanitrios o Possibilidade de proporcionar conforto e bem estar o Melhoria das condies de segurana.

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10.3 ASPECTO ECONMICO o Aumento da vida produtiva dos indivduos economicamente ativos; o Diminuio dos gastos particulares e pblicos com consultas e internaes hospitalares. o Facilidade para instalao de indstrias, onde a gua utilizada como matriaprima ou meio de operao; o Incentivo industria turstica em localidades com potencialidade para seu desenvolvimento. 10.4 SISTEMA DE ABASTECIMENTO DE GUA Quando a densidade demogrfica de uma comunidade aumenta, a soluo mais econmica e definitiva a implantao de um sistema de abastecimento de gua. Sob o ponto de vista sanitrio, a soluo coletiva a mais indicada, por ser mais eficiente no controle dos mananciais, e da qualidade da gua distribuda populao. Um sistema de abastecimento de gua composto das seguintes unidades: Manancial fonte de onde se retira a gua com condies sanitrias adequadas e vazo suficiente para atender a demanda. A escolha de um manancial feita considerando-se so s a quantidade e a qualidade mas, tambm o aspecto econmico. Captao o conjunto de equipamentos e instalaes utilizados para a tomada de gua do manancial, com a finalidade de lan-la no sistema de abastecimento. O tipo de captao varia de acordo com o manancial e com o equipamento empregado. Aduo adutora o conjunto de tubulaes, peas especiais, dispostas entre:

Captao e a estao de Tratamento; Captao e o reservatrio de distribuio; Captao e a rede de distribuio ETA e reservatrio de distribuio;

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53 ETA e a rede de distribuio A adutora pode ser por gravidade e por recalque Estao de Tratamento O trata mento de gua consiste em melhorar suas caractersticas organolepticas, fsicas, qumicas e bacteriolgicas, a fim de que se torne adequada ao consumo humano. A qualidade fsico qumica e bacteriolgica da gua obtida no manancial definir o mtodo de tratamento necessrio para atender aos padres de potabilidade estabelecidos pela portaria n 1.469/2000 do Ministrio da sade. Reservatrio empregado para o acumulo da gua com o propsito de: Atender s variaes de consumo na hora que este maior; Manter a presso mnima ou constante n a rede; Atender s demandas de emergncias, em caso de incndio, ruptura de rede, etc. Distribuio leve a gua do reservatrio ou da adutora para os pontos de consumo. 11. UNIDADES DO SISTEMA DE ABASTECIMENTO 11.1 ESTAO CONVENCIONAL A estao de tratamento tem como funo de eliminar certas impurezas e/ou corrigir algumas impropriedades que as tornem inadequadas para o consumo humano. Finalidade do tratamento submete-se a gua a um tratamento com o objetivo de melhorar a sua qualidade sob os seguintes aspectos fundamentais. a) higinico b) esttico c) econmico

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ETA ESTAO DE TRATAMENTO DE GUA

AERAO - um processo fsico onde a rea de contato, entre a gua e o ar, aumentada, de modo a facilitar a transferncia ou i intercambio de gases. DECANTAO a remoo de partculas slidas que decantam, sem emprego de processos qumicos, pela ao da gravidade em unidades de decantadores primrios. COAGULAO a desestabilizao das partculas coloidais, ou seja, fazer com que as partculas coloidais que no se agregam lentamente passem a se agregar.

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55 FLOCULAO um processo mecnico que visa aglutinar as partculas minsculas coaguladas por meio de um contato estabelecido entre elas e outras existentes na gua, atravs de uma agitao prolongada durante a qual elas se unem, aumentam de tamanho e se acondicionam, tornando-se mais densas. Coagulante: sulfato de alumnio ( Al2(SO4)3 . 18 H2O) FILTRAO a remoo de slidos dissolvidos, coloidais e em suspenso, atravs da passagem da gua por meio poroso (areia, silte, brita) resultam em um efluente de melhores caractersticas de potabilidade, em virtude da ao puramente fsica de filtrao ou reteno de impurezas. Remove alto teor de bactrias (90 a 99%), cor, turbidez, mas pouca remoo de sabor e odor. DESINFECO o processo de tratamento que visa a eliminao dos germes patognicos presentes na gua. Esta desinfeco pode ser feita atravs do cloro ou de seus compostos (clorao); por meio de oznio (ozonizao) e tambm por meio da radiao ultra-violeta, produzida em lmpadas especiais, que exerce uma ao esterilizante. 12. ANALISES MICROBIOLGICAS 12.1 COLETA DE AMOSTRAS GUA DE TORNEIRA abre-se a torneira, deixa-se correr gua para eliminar a que ficou retida na tubulao. Fecha-se, esteriliza-se com algodo embebido de lcool e cesso. BALNERIOS os pontos de coletas so os mais freqentados, as amostras devem ser coletadas na hora de maior pico; a freqncia de amostragem ser aumentada na poca de chuva. PISCINAS coletar a gua a 30 cm de profundidade. O frasco dever conter Tiosulfato de sdio, as amostras devem ser coletadas na hora de maior concorrncia. RIOS, LAGOS em reservatrios utilizados como fonte de gua potvel, os pontos de coletas sero prximos a captao. No deve coletar amostras nas

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56 bordas do rio, reservatrio, porque nessa regio a gua mais poluda e h acumulo de matria orgnica, crescimento de plantas e insetos, o que eleva o teor de microrganismos e os resultados no seriam representativos.

12.2 TCNICAS BACTERIOLGICAS 1- A amostra deve ser coletada em frascos estreis; 2- A amostra deve ser representativa 3- Deve evitar contaminao da amostra durante e aps a coleta; 4- A amostra deve ser examinada logo aps a coleta 5- Em caso de demora a amostra deve ser guardada a uma temperatura entre 0C e 10C. No Brasil os padres de potabilidade da gua para o consumo humano so estabelecidos pelo Ministrio da Sade e atualmente encontra-se em vigor a Portaria MS n 1.469/2000.

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COLORAO DE GRAM

A colorao de Gram um dos mais importantes procedimentos para a caracterizao de bactrias. As bactrias so divididas em dois grupos, baseados na capacidade de que possuem de reter ou perder o corante primrio (cristal violeta). Os organismos que retm o cristal violeta (aparecem azul escuro ou violeta) so chamados Gram positivos, aqueles que perdem o cristal violeta e so posteriormente corados pela safranina (aparecem vermelhos) so denominados Gram negativos. O mecanismo de Gram o seguinte: h um elevado contedo de lipdeos nas paredes celulares dos organismos Gram. O lcool empregado extrai as graxas, aumentando a porosidade ou permeabilidade da parede celular nas bactrias Gram (-). O complexo Cristal violeta extrado pelo lcool e o microrganismo fica descolorido. As paredes celulares das bactrias Gram (+), devido a sua diferente composio, desidratam pelo lcool, o tamanho dos poros diminui, a permeabilidade reduzida e o complexo cristal violeta se fixa. PROCEDIMENTO MATERIAL: Lmina; Bico de Bunsen; Estufa; Microscpio; Cristal violeta; Lugol; Safranina e lcool. METODOLOGIA: 1. Lavar a lmina com gua e sabo e/ou lcool e ter. Secar a lmina e verificar se toda gordura foi removida. 2. Colocar uma ou duas gotas do liquido contendo a suspenso na lmina. Espalhar sobre uma rea de cerca de 1,5 cm de dimetro. 3. Deixar o esfregao secar temperatura ambiente ou em estufa. 4. Passar o esfregao 3 vezes sobre a chama do bico de Bunsen para fixao do mesmo. 57

58 5. Adicionar o Cristal violeta, aguardar 20 a 60 segundos. 6. Aplicar soluo de Lugol esperar 60 segundos. Lavar com gua. 7. Descorar com lcool ate que a cor livre tenha sado. 8. Corar com Safranina esperar 20 a 60 segundos. Lavar e secar. 9. Examinar ao microscpio com a objetiva de imerso.

OBSERVAES: 1. Quando o material a ser analisado for viscoso, deve-se proceder diluio usando-se uma gota de gua destilada. 2. A fixao do esfregao faz-se necessria para manter o microrganismo aderido lmina. 3. O Lugol uma substancia mordente empregada com o objetivo de fixar o corante clula. 4. O lcool agente descorante que remove o corante de certas bactrias. 5. Cultivos antigos de algumas bactrias Gram positivas podem perder a propriedade de reter o Cristal violeta, e, conseqentemente, podero se corar com a safranina.

(a)

(B)

Figura 1: Tcnica para identificar as bactrias Gram e Gram+. So exemplos de bactrias Gram-positivas vrias espcies de:

- Estreptococos; - Estafilococos; - Enterococos.

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59 So exemplos de bactrias Gram-negativas:

- Vibro Colrico - Colibacilo; - Salmonelas. Entre a grande variedade de doenas provocadas por cocos salientam-se: - Pneumonia -Pneumonia nosocomial (adquirida em na meio hospitalar); comunidade; adquirida

- Infeces da pele e tecidos moles.

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60 PREPARAO E ESTERILIZAO DE MEIOS DE CULTURA

INTRODUO Os microrganismos necessitam, para o seu crescimento, de nutrientes prprios e condies fsicas e qumicas especificas. Um meio de cultura um conjunto de ingredientes formulados no laboratrio ou adquiridos desidratados, que empregado com o objetivo de possibilitar a multiplicao de microrganismos. Cada microrganismo ou grupo de microrganismo possui exigncias nutritivas especificas. MEIOS DESIDRATADOS A maior parte dos meios de cultura pode ser obtida na forma desidratada e neste caso alguns aspectos devem ser obtidos: 1. ARMAZENAMENTO E CONSERVAO Anotar em livro prprio a data da recepo dos meios de cultura e ingredientes empregados na formulao. Armazen-lo de acordo com as especificaes contidas no rotulo, em uma rea de pouca umidade, afastada da luz direta do sol, das autoclaves, estufa de secagem e qualquer outra fonte de calor. Quando especificado no rotulo, manter sob refrigerao. Aps o uso assegurar-se de que o frasco esta bem fechado e armazena-lo em local prprio. Descartar o meio caso o p no esteja fluindo facilmente ou se houver alteraes na cor e/ou consistncia. 2. PESAGEM Ao preparar meios e cultura deve-se usar primeiro o estoque mais velho. No se deve abrir um novo lote de meio ate que o anterior tenha esgotado.

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61 Usar uma balana cuja exatido se verifique freqentemente. Os meios desidratados so hidroscpicos e desta forma, a pesagem deve ser feita rapidamente e em local de pouca umidade. 3. DISSOLUO Usar vidros bem lavados e enxaguados. No usar gua suspeita de conter cloro, cobre ou detergentes. Usar gua deionizada ou destilada. Antes a aplicar calor dissolver meios desidratados deve-se ler o rotulo. Alguns meios no devem ser submetidos a temperaturas acima de 55C, (Caldo urea, Agar urea) enquanto que outros meios desidratados devem ser aquecidos a fim de garantir a completa dissoluo e distribuio uniforme dos ingredientes. O aquecimento deve ser feito sob agitao continua e suave, evitando que o mesmo se queime no fundo do frasco. A agitao do meio durante o aquecimento deve ser feita com cautela porque alguns meios, especialmente os que contm Agar, podem formar espuma e transbordar. Os meios que contm Agar devem permanecer, em geral durante 5 a 10 minutos em repouso na gua, antes de serem aquecidos, para permitir que as partculas de Agar se reidratem adequadamente, elevando a solubilidade do Agar resultando em gel mais uniforme. O meio preparado deve ser distribudo em frasco ou tubo (permitindo uma pequena folga da tampa) apropriado e levado para esterilizao. Ao distribuir o meio em recipientes adequados, no devemos colocar mais de 2/3 da capacidade do mesmo.

ESTERILIZAO Alguns meios no devem ser esterilizados em autoclave. Em alguns casos, os meios devem ser esterilizados por filtrao, outros so to seletivos que no necessitam de calor nem de filtro (Agar Salmonella-shiguella, Agar citrato desoxicolato, Caldo de tetrationato, Caldo de selenito). A atividade seletiva destes meios destruda durante a autoclavao. O microbiologista dispe de numerosos filtros de diferentes tipos e poros de tamanhos variveis. Os filtros de membrana (Millipore, Belford, Mass) so

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62 provavelmente o sistema de filtro mais usado e podem ser empregados com adaptadores prprios permitindo a esterilizao de grandes volumes. Na esterilizao por autoclavao o meio no deve ser tratado deficientemente ou excessivamente. O excesso de tratamento em um meio pode acarretar um erro pior do que a subesterilizao. necessrio pr-aquecer meios em volumes maiores, para evitar demora em alcanar a temperatura de esterilizao. Nunca deve ser autoclavado mais de dois litros por recipiente. Antes de esterilizar o pH do meio deve ser comprovado em potencimentro (ajustado com tampes). Esta medida deve ser tirada a 25C e normalmente no precisa ser ajustada. A adio de componentes pode afetar o equilbrio do meio. ARMAZENAMENTO DO MEIO PRONTO De forma geral, os meios prontos devem ser armazenados a temperatura entre 2 e 8C (geladeira). O efeito nocivo comumente associado ao armazenamento a desidratao. Esta no ser problema em meios lquidos e sim em meios em placas, principalmente em laboratrios pequenos onde certos meios so usados ocasionalmente. Estes meios em placas devem ser conservados em sacos plsticos, selados, para minimizar a perda de umidade, e estocados em posio invertida. Todos os meios devem ser levados a temperatura ambiente antes de seu uso. Meios como Agar padro, Agar batata e outros, podem ser guardados em volumes para serem adicionados em placas (15 mL). No momento da analise sero fundidos e resfriados.

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