lESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL Licenciatura en Nutricin

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS II Laboratorio N 9

Tema: PRUEBAS BIOQUIMICAS DE IDENTIFICACION Autor: JORGE ANDR ROMN PERERO Docente: MSc. ABEL ROSADO Ayudante: FAUSTO CARRASCO Fecha de Entrega: 31 de Junio del 2012 Curso: 2012-2013

INTRODUCCION
PRUEBAS API Los sistemas miniaturizados API son mtodos rpidos que permiten la identificacin de microorganismos a travs de la realizacin de diferentes pruebas bioqumicas. Estos sistemas consisten en un dispositivo de plstico con varios microtubos que contienen diferentes medios de cultivo deshidratados o diferentes sustratos de enzimas de acuerdo al tipo de prueba que se requiere montar. Entre algunas de las pruebas bioqumicas que pueden realizarse con estos sistemas estn las pruebas de fermentacin de carbohidratos, la determinacin de la produccin de H2S, la determinacin de la hidrlisis de la gelatina, entre otras. El ndice Analtico de Perfil (API) son un conjunto de pruebas bioqumicas que se concentran en muy poco espacio mediante el uso de pocillos con el reactivo correspondiente ya preparado para ser usado. Se llenan los pocillos siguiendo las instrucciones del fabricante con la muestra problema. Se sellan los pocillos que sean obligatorios. Se incuba la estufa a unos 37 C normalmente. Posteriormente se comprueba los resultados pasado el tiempo indicado en la tira. Los resultados se apuntan por cada prueba bioqumica en el casillero correspondiente, de manera que al final dar un nmero de varias cifras. Con este nmero se puede buscar en el libro de referencia de las tiras API, el tipo de bacteria que se tiene en la muestra. Son muy tiles, capaces de identificar en poco tiempo la bacteria problema (actualmente unas 600 especies). Sistemas de identificacin multipruebas (API): La batera de pruebas API20E es un sistema de identificacin rpida para bacterias de la

familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram-. Bsicamente consta de 21 tests bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira. Las pruebas de que consta la galera son las siguientes:

Batera de pruebas API: Pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones positivas y negativas
Pueba ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX Reaccin / Enzimas beta-galactosidasa arginina deshidrolasa lisina descarboxilasa ornitina descarboxilasa utilizacin del citrato produccin de H2S ureasa triptfano desaminasa produccin de indol produccin de acetona (VogesProskauer) gelatinasa fermentacin/oxidacin de glucosa fermentacin/oxidacin de manitol fermentacin/oxidacin de inositol fermentacin/oxidacin de sorbitol fermentacin/oxidacin de ramnosa fermentacin/oxidacin de sacarosa fermentacin/oxidacin de melobiosa fermentacin/oxidacin de amigdalina fermentacin/oxidacin de arabinosa citocromo oxidasa Negativo sin color amarillo amarillo amarillo verde Positivo amarillo rojo o naranja rojo o naranja rojo o naranja azul oscuro o turquesa

sin precipitado precipitado negro negro amarillo amarillo amarillo sin color sin difusin azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde rojo o naranja marrn-rojo color rosa o anillo rosa-rojo rosa-rojo difusin de pigmento amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo

Pruebas API que actualmente se encuentran siendo utilizadas en la gran mayora de laboratorios de Microbiologa son: API 20E: Permite la identificacin de microorganismos pertenecientes al grupo de las enterobacterias y de otros bacilos gram negativos. API 20 NE: Permite la identificacin de bacilos gram negativos no pertenecientes al grupo de las enterobacterias como por ejemplo Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros. API 20 A: Con este sistema miniaturizado se pueden montar las pruebas bioqumicas que permiten la identificacin de bacterias anaerobias. API STAPH: Este sistema permite la identificacin de microorganismos pertenecientes al gnero Staphylococcus, Micrococcus y Kocuria. API 50 CHL: Utilizado para la identificacin de Lactobacilos. Existen otros sistemas miniaturizados API; entre ellos podemos sealar el API20 STREP, el API CAMPY, el APICORYNE, el APICANDIDA.

OBJETIVO
Identificar mediante pruebas bioqumicas la cepa de Salmonella spp (Aislada del huevo, practica pasada, especialmente de la parte interna).

DESARROLLO
Pruebas Bioqumicas desarrolladas en la prctica: Urea Agar. MR-VP Medio Agar Citrato de Simmnons Agar Hierro Tres Azcares Agar Levine EMB Agar SIM mdium Oxidasa Catalasa Microscopia

Urea Agar: Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.

Fundamento En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH. Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Frmula (en gramos por litro) Triptena 1.0 Glucosa 1.0 Cloruro de sodio 5.0 Fosfato monopotsico 2.0 Rojo de fenol 0.012 Agar Instrucciones Suspender 24 g de polvo en 950 ml de agua destilada. Dejar reposar 2 minutos. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 50C y agregar 50 ml de una solucin de urea al 40% previamente esterilizada por 15.0 filtracin o cloroformo. Fraccionar en tubos de hemlisis y solidificar en pico de flauta con fondo profundo. pH final: 6.8 0.2

Siembra: A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de flauta. Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de incubacin. Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color. Incubacin: En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C. Resultados
Microorganismo Actividad uresica Proteus mirabilis ATCC 43071 Positiva K. pneumoniae ATCC 700603 Positiva dbil Escherichia coli ATCC 25922 Negativa S. flexneri ATCC 12022 Negativa S. typhimurium ATCC 14028 Negativa Color del medio Rojo-Rosado Rojo-Rosado Amarillo Amarillo Amarillo

MR-VP Medio: Medio utilizado para la realizacin del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer. Es particularmente til para la clasificacin de

enterobacterias. Fundamento: En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos finales cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la adicin de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos cidos, y por la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros.

Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus de adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo.

Frmula (en gramos por litro) Pluripeptona 7.0 Glucosa 5.0 Fosfato dipotsico

Instrucciones Suspender 17 g del polvo por litro de agua destilada. Calentar suavemente agitando hasta disolver. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C 5.0 durante 15 minutos. pH final: 6.9 0.2

Siembra: Por inoculacin directa, a partir del cultivo en estudio. Incubacin: En aerobiosis, a 35-37C por 3 das. Revelado de pruebas bioqumicas. a. Prueba del rojo de metilo: Aadir unas gotas de rojo de metilo al 0.04%, observar el color del medio. b. Prueba del Voges Proskauer: Aadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico absoluto y 0.2 ml de hidrxido de potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar el tubo, y dejar a T ambiente durante 10-15 mins. Observar el color de la superficie del medio. Resultados 1. Prueba del rojo de metilo: Positivo: color rojo. Negativo: color amarillo.

2. Prueba de Voges Proskauer: Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos despus de una completa agitacin del tubo. Negativo: ausencia de color rojo.
Crecimiento Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno RM + + + + VP + +

Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 Citrobacter freundii Enterobacter aerogenes

Agar Citrato de Simmnons: Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa. Fundamento: En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.
Frmula (en gramos Citrato de sodio Cloruro de sodio Fosfato dipotsico Fosfato monoamnico Sulfato de magnesio Azul de bromotimol Agar pH final: 6.9 0.2 por litro) Instrucciones 2.0 Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y 5.0 mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 1.0 minutos. Distribuir en tubos y esterilizar en 1.0 autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar en 0.2 posicin inclinada. 0.08 15.0

Siembra: A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo ligero, usando un asa sin arrastrar el agar. Incubacin: A 35-37 C, durante 24-48 hrs, en aerobiosis. Algunos MO pueden requerir hasta 4 das de incubacin. Resultados

Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad. Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Microorganismo Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 S. typhimurium ATCC 14028 E. coli ATCC 25922 S. flexneri ATCC 12022

Citrato permeasa Color del medio Positivo Azul Positivo Azul Negativo Verde Negativo Verde

Agar Hierro Tres Azcares: Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para producir de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones Extracto de carne 3.0 Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua Pluripeptona 20.0 destilada. Mezclar bien y calentar con Cloruro de sodio 5.0 agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos Lactosa 10.0 hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a Sacarosa 10.0 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de Glucosa 1.0 flauta profundo. Sulfato de hierro y amonio 0.2 Tiosulfato de sodio 0.2 Rojo de fenol 0.025 Agar 13.0 pH final: 7.3 0.2

Siembra A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Incubacin A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis. Resultados 1. Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el MO solamente fermenta la glucosa. 2. Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el MO fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. 3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el MO es no fermentador de azcares. 4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el MO produce gas. 5. Ennegrecimiento del medio indica que el MO produce cido sulfhdrico.
Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 S. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022 P. aeruginosa ATCC 27853 Pico/Fondo A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K Produce gas + + + + Produce H2S + + + -

A: cido

K: alcalino

Agar Levine EMB: Medio adecuado para la bsqueda y diferenciacin de bacilos entricos, a partir de muestras clnicas, aguas servidas, y otros materiales.

Fundamento La frmula original de este medio de cultivo, fue modificada por Levine, eliminando la sacarosa e incrementando la concentracin de lactosa, lo que permite una mejor diferenciacin de E. coli.

Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias. La combinacin utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y tambin, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color azulado-negro, con brillo metlico. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras.

Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos, enterococos) y levaduras, pueden crecer, originando

colonias incoloras y puntiformes. Este medio de cultivo,es til para la orientacin y no confirmacin de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. producen colonias con brillo metlico), por lo cual ser necesario realizar pruebas bioqumicas, para la identificacin de gnero y especie.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones Peptona 10.0 Lactosa 10.0 Suspender 37,4 g de polvo por litro de agua destilada, dejar reposar 5 minutos. Fosfato dipotsico 2.0 Calentar a ebullicin hasta disolucin Agar 15.0 total. Distribuir y esterilizar 15 minutos a Eosina 0.4 121C. Azul de metileno 0.065 pH final:7.1 0.2

Siembra: Directa, estriando la superficie. Incubacin: De 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Resultados
Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 P. aeruginosa ATCC 27853 Proteus mirabilis ATCC 43071 S. aureus ATCC 25923 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Crecimiento Bueno a excelente Bueno a excelente Bueno a excelente Bueno a excelente Pobre Pobre Bueno a excelente Bueno a excelente Caractersticas de las colonias Verdosas con brillo metlico y centro negro azulado Mucosas, rosa prpura, confluentes Incoloras Incoloras Incoloras, pequeas, puntiformes Incoloras, pequeas, puntiformes Incoloras Incoloras

Agar SIM mdium: Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento: El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.
Frmula (en gramos por litro) Triptena 20.0 Peptona 6.1 Sulfato de hierro y amonio 0.2 Tiosulfato de sodio 0.2 Agar Instrucciones Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar hasta disolver; calentar agitando y hervir durante un minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemlisis y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Solidificar en 3.5 posicin vertical. pH final: 7.3 0.2

Siembra: A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta. Incubacin: Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.

Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.

Resultados Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra. Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.

Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich.

Cepas indol negativas: sin cambio de color.

Microorganismo Movilidad + + + + Indol + Produccin de cido sulfhdrico + + + -

E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 S. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022

Oxidasa: Tirillas de Oxidasa: tiras reactivas que sirven para la deteccin rpida y sencilla del enzima citocromo-oxidasa en el diagnstico microbiolgico. A diferencia con el ensayo tradicional de laboratorio, donde el reactivo tetrametil pfenilendiamina, posee una gran inestabilidad, en las tiras de la oxidasa Panreac, gracias a que el reactivo se encuentra fijado en la almohadilla, su estabilidad es muy superior. Principales ventajas: Estabilidad Superior, el reactivo se encuentra fijado en la almohadilla. Rapidez y comodidad, no son necesarios ni calibraciones, ni

preparaciones ni largos tiempos de espera. Catalasa: Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin es Streptococcus. Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros:

Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+). Bacillus (+) de Clostridium (-). Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de C. pyogenes y C. haemolyticum, ambos - ) de Erysipelothrix (-)

Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos tcnicas: 1. Mtodo del portaobjetos (recomendado):

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.

Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo. Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo). Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante. Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos.

2. Mtodo del tubo de ensayo:

Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente inoculado. Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).

Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienen catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo. TECNICA SIEMBRA POR ESTRIAS SUPERFICIE
El mtodo de siembra por estra en placa Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la poblacin mixta y a continuacin se hacen estras sobre la superficie de un medio slido preparado en una placa Petr. Conforme se van haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuacin, se flamea el asa, se toca en la regin donde se han realizado las ltimas estras y se contina la siembra con la misma tcnica, en la superficie de medio sin sembrar an. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar clulas individuales.

A continuacin, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las clulas aisladas experimenten un nmero suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola clula, no podemos asegurarlo. Quizs, dos clulas quedaron depositadas tan juntas que han originado una nica colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axnico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, sern, casi con toda seguridad, cultivos axenicos. Siembra por picadura: El inoculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que de salida. Debe flamearse la boca del tubo antes y despus de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapn de goma para evitar que los gases expulsen el tapn. Siembra en superficie y picadura: El inoculo es introducido con el asa recta o pipeta Pasteur hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que de salida, se retira hacia la superficie inclinada del agar haciendo suavemente una estra ondulada. Debe flamearse la boca del tubo antes y despus de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapn de goma para evitar que los gases expulsen el tapn. Tincin de GRAM La tincin de Gram la es un tipo de de tincin bacterias. diferencial empleado Debe su nombre

en microbiologa para

visualizacin

al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo.

Metodologa.

Recoger muestras. Hacer el extendido en espiral. Dejar secar a temperatura ambiente. Fijar la muestra con calor (flameado 3 veces aprox.) Agregar azul violeta (cristal violeta) y esperar 1 min. Todas las clulas gram positivas y gram negativas se tien de color azul-purpura.

Enjuagar con agua. Agregar lugol y esperar entre 1 minuto. Enjuagar con agua. Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracin)

Enjuagar con agua. Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1-2 min Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

Enjuagar con agua.

Observar al microscopio a 100x con aceite de inmersin.

Bacterias resistentes a la Tincin de Gram Las siguientes bacterias de naturaleza grampositiva, tien como gramnegativas:

Mycobacterias (estn encapsuladas). Mycoplasmas (no tienen pared). Formas L (prdida ocasional de la pared). Protoplastos y esferoplastos (eliminacin respectivamente). total y parcial de la pared,

Diagrama del proceso de la Tincin de Gram

MICROSCOPIA Conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo normal. Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopa, el uso del mismo requiere para producir las imgenes adecuadas, de todo un conjunto de mtodos y tcnicas afines pero extrnsecas al aparato. Algunas de ellas son, tcnicas de preparacin y manejo de los objetos de estudio, tcnicas de salida, procesamiento, interpretacin y registro de imgenes, etc. PREPARACIONES MICROSCOPICAS. Para realizar observaciones de los microorganismos presentes en una

muestra es necesario manipular previamente dicha muestra. Esta manipulacin permite obtener una preparacin microscpica, que es el material que finalmente se colocar en la pletina del microscopio. Esta preparacin constar obligatoriamente de un portaobjetos (ya sea convencional o de uso especfico), una porcin de la muestra (que en muchos casos habr sido modificada) y podr o no incluir un cubreobjetos y otros materiales. Las preparaciones microscpicas se obtienen de modos diversos

que dependen de la queremos observar.

naturaleza de la

muestra

y de los

parmetros

que

Hay distintos criterios que pueden utilizarse para clasificar las diferentes preparaciones microscpicas existentes. El criterio que vamos a seguir aqu consiste en establecer tres grupos: Preparaciones para examen en fresco sin modificar. Preparaciones para examen en fresco ligeramente modifica das. Preparaciones fijadas y teidas. La muestra a partir de la cual se obtiene debe ser una muestra directa fresca o un cultivo reciente, pues la utilizacin de muestras y cultivos envejecidos y no conservados adecuadamente puede hacer que las caractersticas observadas no correspondan a la realidad. LIMITACIONES DEL MICROSCOPIO PTICO. Por qu se trabaja a un mximo de 1.000 aumentos en los microscopios pticos? La limitacin bsica no es una cuestin de aumentos,

sino de poder de resolucin, que es la capacidad de distincin entre dos puntos adyacentes como distintos y separados. Por cuestiones relacionadas con la longitud de onda de la luz visible en las que no vamos a entrar, la luz visible no permite distinguir ntidamente objetos menores de 0'2 m de dimetro. Con algunas modificaciones pueden

construirse microscopios pticos de 2.000 o 3.000 aumentos. Sin embargo, los microscopios pticos de ms de 2.000 o 3.000 aumentos proporcionarn imgenes ms grandes pero ms borrosas y esto no tiene ninguna utilidad.

Desarrollo de la prctica Materiales. Algodn Mechero Lpiz graso Asa de platino en forma de asa Asa de platino en forma de punta Caja Petri (con muestra) Sustancias. Agua Destilada Estril Medio de cultivo con muestra (Salmonella) Alcohol Antisptico

Tirillas de Oxidas Incubadora (1) Encendedor Papel Aluminio Cinta Masking tape Guante de seguridad Gradilla Porta objetos (3) Cubre Objetos Microscopio ptico Pipeta volumtrica Vaso de precipitacin Tubo de ensayo con tapa (6) Cmara de flujo laminar

Cristal Violeta Lugol Alcohol Safranina Aceite de Inmersin Perxido de Hidrgeno (agua oxigenada)

Rojo de Metilo Urea Agar. MR-VP Medio Agar Citrato de Simmnons Agar Hierro Tres Azcares Agar Levine EMB Agar SIM mdium

Siembras por Estra de Superficie (S.E.S.), resuspensin (R) y picadura (P). En diferentes agares para desarrollo de pruebas bioqumica y

determinacin del tipo de MO especfico. 1. Ingresamos al laboratorio de microbiologa manteniendo las normas de bioseguridad. 2. Escuchamos una breve introduccin de lo que ser la prctica a realizar (pruebas bioqumicas de identificacin). 3. Escuchar con atencin las pautas, recomendaciones y normas para realizar la prctica (indicaciones) por parte del profesor y ayudante. 4. Observar con detenimiento y anotar todos los pasos realizados por el docente al realizar una demostracin rpida de lo que ser la prctica a realizar (pruebas bioqumicas de identificacin y desarrollar los mtodos S.E.S., P, R). 5. Preparar el rtulo respectivo para tubo asignado (6 tubos por subgrupo) (Fecha, agar, tcnica, muestra, T, nombre, grupo, subgrupo, etc) 6. Plaqueamos los tubos asiganados, ya con los medios (agares) dentro de ellos, para realizar la siempra.

7. Ubicarse (Cabina de flujo laminar) y preparar (cono de seguridad) todo en el lugar de trabajo asignado, tomando en cuenta las indicaciones y recomendaciones del profesor. 8. Siembra en Urea Agar (P). 8.1. Tomamos de la placa con el medio de cultivo de muestra con el asa de platino en forma de punta, previamente flameada. 8.2. Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el urea agar. 8.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por picadura. 8.4. Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla.

9. Siembra en MR-VP Medio (R). 9.1. Tomamos de la placa con el medio de cultivo de muestra con el asa de platino en forma de asa, previamente flameada. 9.2. Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el MR-VP medio. 9.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por resuspensin. 9.4. Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla.

10. Siembra en Agar Citrato de Simmons (P/S.E.S.). 10.1. Tomamos de la placa con el medio de cultivo de muestra con el asa de platino en forma de punta, previamente flameada. 10.2. Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el Agar Citrato de Simmons. 10.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por picadura. 10.4. Una vez realizada la siembra por picadura, antes de sacar el asa, de manera inmediata, con mucho cuidado realizar la siembra por estria de superfie, guardando mucho cuidado para no romper el agar. 10.5. Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla. 11. Siembra en Agar Hierro Tres Azucares (T.S.I.) (P/S.E.S.). 11.1. Tomamos de la placa con el medio de cultivo de muestra con el asa de platino en forma de punta, previamente flameada.

11.2. Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el Agar Hierro Tres Azucares. 11.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por picadura. 11.4. Una vez realizada la siembra por picadura, antes de sacar el asa, de manera inmediata, con mucho cuidado realizar la siembra por estria de superfie, guardando mucho cuidado para no romper el agar. 11.5. Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla. 12. Siembra en Agar Levine - EMB (S.E.S.). 12.1. Tomamos de la placa con el medio de cultivo de muestra con el asa de platino en forma de punta, previamente flameada. 12.2. Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el Agar Levine - EMB. 12.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa en forma de asa y realizar la siembra por estria de superfie, guardando mucho cuidado para no romper el agar. 12.4. Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla. 13. Siembra en Agar SIM mdium (P). 13.1. Tomamos de la placa con el medio de cultivo de muestra con el asa de platino en forma de punta, previamente flameada. 13.2. Tomamos el tubo de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el agar SIM. 13.3. Luego flameamos el tubo al abrir y sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por picadura. 13.4. Cerrar despus de sembrar y colocar en la gradilla. 14. Luego de sembrar, llevamos la gradilla a la incubadora 1 y dejamos a una T= 37C por 24 hrs. 15. Tincin de GRAM y microscopia 15.1. Colocamos una gota de agua destilada utilizando el gotero sobre el portaobjetos. 15.2. Encender el mechero, esterilizamos el asa de platino en forma de asa.

15.3. Luego, tomar la placa (caja petri), abrirla y enfriar el asa en la parte superior de esta. 15.4. Luego, tomamos con el asa de platino una muestra muy muy pequea (un ligero roce sobre la muestra). 15.5. Tomamos el portaobjetos (con la gota de agua destilada) y realizamos el frotis sobre este (sobre la gota) esparcimos solo en la zona a trabajar, expandir bien. 15.6. Luego tomamos el portaobjeto con las pinzas para hacer la fijacin (flameo) sobre la llama (de adentro hacia afuera). 15.7. Luego de la fijacin, dejamos enfriar un poco, y con el lpiz graso delimitamos la muestra con dos lneas dibujadas que la dividan desde el centro formando una cuadrado. 15.8. Llevamos el portaobjetos al lavabo, lo colocamos sobre el soporte del lavabo, para realizar la tincin. 15.9. Procedemos a colocar el violeta cristal sobre el portaobjetos (en la zona delimitada por el lpiz graso) y dejamos reposar 1min. 15.10. Luego, verter el liquido en la rejilla del lavabo y enjuagamos a chorro ligero, dejando caer el agua sobre nuestro dedo ndice y con este hacerla llegar al portaobjetos para dejarla parcialmente limpia. 15.11. Luego, procedemos a colocar el lugol sobre el portaobjetos (en la zona delimitada por el lpiz graso) y dejamos reposar 1min. 15.12. Luego, verter el liquido en la rejilla del lavabo y enjuagamos a chorro ligero, dejando caer el agua sobre nuestro dedo ndice y con este hacerla llegar al portaobjetos para dejarla parcialmente limpia. 15.13. Despus verter alcohol sobre el portaobjetos, as mismo como en el violeta cristal y lugol, por la zona delimitada, por 20seg. 15.14. Luego, enjuagamos a chorro ligero, dejando caer el agua sobre nuestro dedo ndice y con este hacerla llegar al portaobjetos para dejarla parcialmente limpia. 15.15. Finalmente colocamos la safranina sobre el portaobjetos (en la zona delimitada por el lpiz graso) y dejamos reposar 1min. 15.16. Luego, verter el liquido en la rejilla del lavabo y enjuagamos a chorro ligero, dejando caer el agua sobre nuestro dedo ndice y con este hacerla llegar al portaobjetos para dejarla parcialmente limpia.

15.17. Secamos la parte inferior del portaobjetos con una toalla, y luego dejamos reposar hasta que se seque. 15.18. Una vez seco nuestro portaobjetos, colocamos unas gotas de aceite de inmersin en el rea delimitada por el lpiz graso. 15.19. Colocamos encima del acite de inmersin de nuestro porta objetos, el cubre objetos. 15.20. Luego, llevamos al microscopio ptico (a una visualizacin de 100X) para realizar las observaciones respectivas y distinguir, Gram- (Salmonellas) 15.21. Anotar y dibujar los resultados de esta observacin. (Resultados) 16. Finalmente lavamos todo lo utilizado. 17. Observar despus de las 24hrs y anotar resultados.

RESULTADOS Segn lo realizado en esta prctica, de la muestra que tomamos (placa petri con Medio de Cultivo de muestra - Salmonellas) fue adquirida de los cultivos obtenidos del huevo que muestreamos la semana pasada, La muestra presentaba las siguientes caractersticas: Agar (SS) Color: Verde. Colonias de color: Rosa, grises, incoloras. Colonias con caracteristicas cremosas (ciertas), con centros de color gris o negro. En las pruebas realizadas en el laboratorio se obtuvo los siguientes resultados (mismo da de la prctica):

Oxidasa: Tirillas de oxidasa al reaccionar con la muestra: Tono azul Positivo

Catalasa: Perxido de Hidrgeno al reaccionar con la muestra: Produce efervescencia (burbujas liberacin de O2 + H2O) Positivo. Tincin de Gram: Resultado favorable: Coloracin de gram (lo que buscbamos) logrando ver en la microscopia Salmonellas

Despus de 24hrs los tubos en la incubadora 1 se obtuvieron los siguientes resultados:

Urea Agar: Coloracin sin cambio alguno (Amarillo) Negativo MR-VP Medio: Al agregar las gotas de rojo de metilo (MR) coloracin roja (parte media-superior) Positivo Agar Citrato de Simmnons: Coloracin azul (medio del tubo) Positivo Agar Hierro Tres Azcares: Coloracin del agar no presenta cambio alguno (Rojo) Negativo Agar Levine EMB: Coloracin del agar no presenta cambio alguno Negativo.

Agar SIM mdium: El medio presenta turbidez que se extiende ms all de la lnea de siembra La cepa presenta movilidad (Muy mvil, ya que extenda por todo el agar en el tubo).

En la microscopia pudimos observar los MO gram negativas Salmonellas

DISCUSIN Se obtuvo de la muestra (del huevo; tomada la prctica anterior/ Interno y externo, Pero especficamente de la muestra externa).

Como se infectan los huevos: Varias cepas de Salmonella habitan el intestino de animales y aves y son transmitidas a los humanos por alimentos de origen animal. La contaminacin del huevo con deposiciones de la gallina y/o la rotura facilita la infeccin. Este mecanismo en otros pases se ha controlado casi totalmente por medio de la inspeccin cuidadosa de los huevos y tcnicas de aseo. Sin embargo pese al consumo exclusivo de huevos con cscara intacta y desinfectados el problema persiste ya que la Salmonella enteritidis infecta silenciosamente los ovarios de gallinas aparentemente sanas y contamina los huevos antes de la formacin de la cscara. En ciertas zonas de EU se estima que 1 de cada 10.000 huevos puede estar contaminado internamente. Slo un pequeo nmero de gallinas estn infectadas en un momento preciso e incluso una gallina infectada puede poner muchos huevos sanos y slo ocasionalmente algunos infectados.

Quienes pueden enfermar: Los ancianos, nios pequeos y personas con deficiencia de la inmunidad estn en mayor riesgo de enfermedad grave. En ellos una pequea cantidad de salmonellas puede producir la enfermedad. La mayora de los casos fatales por esta infeccin se producen en ancianos internados en asilos. Los adultos sanos y nios tambin pueden sufrir la infeccin pero habitualmente en forma ms benigna.

Al observar (todos los tubos) pudimos observar los diversos resultados y colores de colonias (cultivos obtenidos) y reacciones de los MO que all haban, de lo que pude observar he elaborado una tabla de resultados, tomando como referencia al tipo de prueba bioqumica (agar o medio, reaccin) y el resultado observado, en dependencia de si es positivo o negativo, coloracin de MO en tincin de gram, microscopia.

PRUEBA BIOQUIMICA Urea Agar. MR-VP Medio Agar Citrato de Simmons Agar Levine EMB Agar SIM mdium Oxidasa Catalasa Tincin de Gram Microscopia Negativo Positivo Positivo

RESULTADO

Agar Hierro Tres Azcares Negativo Negativo Positivo Positivo Positivo Gram Negativas Bacilos flagelados gran negativos

S. marcescens: Vistas en 3D a una

visualizacin de 80x (Gram negativas)

S. marcescens: Vista macroscpicamente (colonias-color rojo)

S. marcescens: Vista microscpicamente: Microscopio ptico (bacilo con flagelo)

S.

marcescens:

Observacin

microscopio electrnico (ptico) (bacilos con flagelos)

Tomando en cuenta estos resultados y guindonos en las tablas para determinar el tipo de MO especifico (sealando y descartando posibles MO que cumplen estas caractersticas en cuanto a los resultados) que se ha obtenido es Serratia marcescens. Serratia marcescens Reino: Bacteria; Filo: Proteobacteria; Clase: Gamma Proteobacteria; Orden: Enterobacteriales; Familia: Enterobacteriaceae;

Genero: Serratia; Especie: S. marcescens. Serratia marcescens es motil, en forma de bacilo, Gram-negativos, anaerobios facultativos bacteria, clasificado como un patgeno oportunista. De manera ptima, Serratia marcescens crece a 37 C, pero puede crecer a temperaturas que van desde 5-40 C. Crecen en los niveles de pH que van desde 5 hasta 9. Serratia marcescens es bien conocido por la pigmentacin roja que produce llamada prodigiosina. La Prodigiosina se compone de tres anillos de pirrol y no se produce a 37 C, pero si a temperaturas inferiores a 30C. La produccin de pigmentos de color rojo no est presente en todas las cepas, pero en los que est presente, se asemejan a la sangre. Esto y el hecho de que Serratia marcescens normalmente crece en el pan y hostias almacenados en lugares hmedos, se ha llevado a los cientficos a sugerir la contaminacin Serratia como una posible explicacin para los milagros transubstanciacin (la conversin del pan en el Cuerpo y la Sangre de Cristo). Por ejemplo, la historia del Milagro de Bolsena de los estados que, en 1263, un sacerdote con dudas de la presencia de Cristo en la hostia consagrada presidi una misa en la baslica de Bolsena. Despus de hablar las palabras de la consagracin, la sangre

empez a gotear de la hostia consagrada en sus manos y el altar. Este evento fue representado por Rafael en las paredes del Vaticano El genoma de la cepa Serratia marcescens DB11 se secuenci por el Instituto Sanger de la colaboracin del Dr.Jonathan Ewbank del Centre d'Immunologie de Marsella Luminy. El genoma completo se compone de un nico cromosoma circular de 5,113,802 pares de bases que contienen un contenido de G + C, de 59,51%. Estructura de la clula y Metabolismo Serratia marcescens es un bacilo motil. Es un anaerobio facultativo, lo que significa que puede crecer en ya sea la presencia de oxgeno (aerbico) o en ausencia de oxgeno (anaerobio).Principalmente se utiliza la fermentacin como el medio de reunir la energa y tiene enzimas (superxido dismutasa, catalasa o perxidos) que lo protegen de especies reactivas del oxgeno, lo que le permite vivir en ambientes oxigenados. Serratia marcescens es una bacteria gram negativa. Las bacterias gram negativas tienen una pared celular delgada hecha de una sola capa de peptidoglicano que est encerrado por una membrana externa. La membrana externa tiene lipopolisacridos (LPS), que son una clase especial de fosfolpido compuesto de cidos grasos que estn conectados a un dmero fosfato glucosamina. Una glucosamina se fija entonces a un polisacrido bsico que se extiende a los polisacridos O. La membrana externa tambin sirve como un medio para regular la absorcin de nutrientes y la exclusin de las toxinas. Los poros de protenas y transportadores que se encuentran en las capas envolventes variar en selectividad. Serratia marcescens es mvil y se desplaza por diferentes medios. Una sola bacteria Serratia marcescens puede nadar con la utilizacin de su flagelo. Como grupo, pueden estar como un enjambre juntos en agar de concentraciones ms bajas (0 .5 a 0.8%) Las clulas de este Enjambre pueden variar en longitud de 5-30 micras y son muy flageladas y no septadas Serratia marcescens tiene alrededor de 100 1.000 flagelos por clula nadadora Serratia

marcescens tambin pueden formar un biofilm (estructura compleja formada por secretada mucilaginosa matrixto. formar una capa protectora en la que estn encerrados).

La hidrlisis de la casena no es un rasgo comn y es por lo tanto tiles en la diferenciacin de Serratia marcescens de las 438 cepas de las familias Enterobacteriaceae y Pseudomonadaceae. Serratia marcescens tiene la

capacidad de reproducirse a romper la casena produce un intercambio de informacin sobre placas de agar de leche. La casena es la protena de la leche precipitada que forma la base de queso y algunos tipos de plstico. Serratia marcescens utiliza enzimas llamadas proteasas extracelulares para romper los enlaces peptdicos (CO-NH) en la casena. De manera similar, una enzima extracelular llamado rompe gelatinasa abajo gelatina, una protena incompleta que carece de triptfano. Hidrlisis gelatina transforma la protena a los aminocidos individuales y provoca que se licuan en condiciones fras (menos de 25 C) cuando lo que debera ser slido. Hay otras pruebas bioqumicas que ayudan a identificar Serratia marcescens en el laboratorio. Es negativo para la prueba de rojo de metilo debido a su produccin de 2, 3 - butanodiol y etanol, pero positivo para la prueba de VogesProskauer, que muestra capacidad de un organismo para convertir el piruvato a acetona Serratia marcescens es negativo para el cido. Produccin (positivo) de lactosa, glucosa y sacarosa fermentacin. Las pruebas de nitratos son positivas desde que el nitrato se utiliza generalmente como el aceptor final de electrones en lugar de oxgeno. Citrato (prueba positiva) es utilizado por Serratia marcescens para producir cido pirvico. Es positivo para la descarboxilasa, que es la eliminacin de un grupo carboxilo de un aminocido, produciendo una amina y dixido de carbono. La pigmentacin de color rojo (prodigiosina) que Serratia marcescens es conocido por puede ser un factor de diferenciacin pero slo est presente en algunas cepas. No se conoce exactamente por qu es, pero hay la hiptesis de que es un producto del gen estrechamente regulado. La Prodigiosina puede activar el sistema inmunolgico del cuerpo (anticuerpos y clulas T), por lo que es posible que las Serratia marcescens que viven en un cuerpo humano limiten su sntesis de prodigiosina y, por tanto escapar a la deteccin por el sistema inmune del husped. Muchas cepas parecen haber perdido la capacidad para producirla en absoluto.

Ecologa: Serratia marcescens: Se encuentra comnmente en el suelo, agua, plantas y animales. Es ampliamente presentes en el agua no potable en los pases subdesarrollados debido a la cloracin pobres. Este microorganismo es un agente comn responsable de la contaminacin de las placas de Petri en el laboratorio, y tambin se encuentra creciendo en el

pan. Aunque S. marcescens es un microorganismo patgeno, slo es as con los individuos inmunocomprometidos, tales como los encontrados en los hospitales donde muchas de las infecciones documentadas tienen lugar. El modo de transmisin de este microorganismo es por contacto directo, o por catteres, gotas, soluciones salinas de riego, y otras soluciones que se cree que son estriles. Patologa: Serratia marcescens es un patgeno oportunista que causa infecciones nosocomiales. Es resistente a muchos antibiticos utilizados tradicionalmente para tratar infecciones bacterianas, como la penicilina y la ampicilina. Esto es debido a todas las caractersticas Serratia marcescens; membrana nica (LPS) como una bacteria Gram-negativas, la capacidad de sobrevivir en condiciones aerobias y anaerobias, y su motilidad. La mayora de las cepas son resistentes a varios antibiticos debido a la presencia de factores R (genes que codifican para resistencia a los antibiticos) en plsmidos. Hay muchas enfermedades que se asocian con Serratia marcescens: sepsis, abscesos bacteriemia, meningitis y cerebrales, infecciones del tracto urinario, osteomielitis, infecciones oculares, y endocarditis. Debido a la amplia gama de enfermedades Serratia marcescens causas, no es un sntoma o la determinacin de fuente de origen. Las biopelculas son generalmente producidas

patgenamente en el cuerpo. Tambin, como se menciona en la estructura celular, la capa de LPS est unida a la membrana externa de la bateria Gram negativas. El LPS acta como una endotoxina (un componente de la clula que es inofensivo, siempre y cuando el patgeno se mantiene intacto). La liberacin de LPS se sobre-estimular las defensas del husped y hacer que someterse a shock endotxico letal. La presencia de LPS por lo tanto hace que sea difcil de matar Serratia marcescens, sin causar la muerte de las clulas del husped.

Algunos de los antibiticos han demostrado ser eficaces contra Serratia marcescens son los antipseudomonal antibiticos beta-lactmicos, que matan las bacterias inhibiendo la sntesis de la pared celular. A pesar de que se han desarrollado y se utiliza para matar las pseudomonas, que tambin han demostrado su eficacia contra la Serratia marcescens y otras estrechamente relacionadas con las bacterias Gram negativas. Parte de la naturaleza problemtica de este organismo es su capacidad de colonizar cualquier superficie. Por ejemplo, Serratia marcescens ha sido identificado como el organismo ms comn que se encuentra en ambos de los sitios corneales y lentes de contacto. Se ha encontrado, sin embargo, que policuaternio-1 (un biocida utilizado comercialmente en una solucin desinfectante de lentes de contacto) es activo frente a la membrana citoplasmtica de Serratia marcescens Un estudio reciente sugiere que la Serratia marcescens ost3 produce una pelcula de prodigiosina llamada MAMPDM ((2,2'- [3-metoxi-1amyl-5-metil-4-(1pirrilo) dipyrrylmethene)) que puede tener un impacto importante en el tratamiento del cncer. Este pigmento rojo ha demostrado una actividad citotxica selectiva en lneas celulares de cncer, pero en el contraste se revel una toxicidad reducida para las clulas no malignas. Llegaron a la conclusin de que la Serratia marcescens ost3 puede en un tiempo ser utilizada como un fuente de desarrollo de un compuesto contra el cncer. Otro estudio sugiere que la Serratia marcescens cepa NCTC 10211 puede servir como un probitico en la inhibicin del crecimiento de H. pylori, el agente causante de las lceras de estmago. Al examinar diferentes especies y cepas de bacterias, Serratia marcescens cepa NCTC 10211 revel sorprendentes zonas de inhibicin cuando se inocularon con diferentes componentes de HP strains. El mecanismo implicado en la inhibicin de la proliferacin de HP todava no se comprende bien. Se necesita investigacin adicional para aislar y caracterizar las sustancias inhibidoras de modo que puedan ser utilizados para la terapia de Hp. Es en gran parte no est claro si Serratia marcescens tiene actividad bactericidial o si promueve cambios en la fisiologa y morfologa de Hp. Serratia marcescens tiene una capacidad nica para producir enzimas extracelulares. Varias de tales enzimas han demostrado tener la capacidad de degradar quitina, una sustancia que comprende principalmente las paredes

celulares de los hongos. Estas enzimas quitinolticas podran tener posibles usos industriales y agrcolas, tales como la introduccin de estos genes para enzimas que degradan la quitina en los cultivos, as como las bacterias fermentativas. La investigacin adicional en la modificacin de protenas de secuencias de nucletidos que permiten la expresin mejorada de quitina genes que producen, proporcionando as un mecanismo de proteccin de plantas sensibles y bacterias fermentadoras contra infecciones fngicas Se sabe que causa varias infecciones nosocomiales, sobre todo, inducido por el catter bacteriemia, infeccin del tracto urinario, e infecciones de la herida. Dada su omnipresencia en el medio ambiente, y su parcialidad hacia las condiciones de humedad, S. marcescens prolifera en los baos, donde se observa como una coloracin rosada y pelcula aceitosa sobre la proliferacin de los residuos de jabn y champ y materiales que contengan fsforo. Una vez que las bacterias se han establecido, la aniquilacin total es bastante complicada, pero se puede hacer mediante la aplicacin de un desinfectante basado en cloro. El microbio se encuentra tambin en la sub-gingival biopelcula de los dientes. Estos microbios tambin sintetizar un pigmento de color rojizoanaranjado llamado prodigiosina que podra resultar en la tincin extrnseca de los dientes. Tambin tiene una aficin por el crecimiento en los alimentos con almidn, donde las colonias pigmentadas se confunden con las gotas de sangre. Serratia marcescens puede provocar conjuntivitis, queratitis e infecciones en heridas, riones y vas urinarias, as como infecciones respiratorias,

meningitis y endocarditis. Esta bacteria afecta especialmente a pacientes hospitalizados y a pacientes que tienen la inmunidad disminuida por enfermedades sistmicas o tratamientos mdicos inmunosupresores. Serratia marcescens, sntomas

La sepsis o bacteriemia es el sntoma ms comn de presentacin de S. marcescens, y es visto como la fiebre con escalofros.

La infeccin urinaria es una manifestacin ms comn. Las caractersticas clnicas son: necesidad frecuente de orinar, ardor al orinar, sangre y sangre en la orina y fiebre.

La infeccin del tracto respiratorio se demuestra como fiebre, tos con expectoracin, sibilancias y jadeo y dolor en el pecho.

La meningitis o abscesos cerebrales, debido a los microbios se desarrollan en los nios, y se manifiesta como: fiebre, vmitos, convulsiones y coma.

Las infecciones intra-abdominales causar dao al hgado, la vescula biliar y los abscesos pancreticos y exudado peritoneal.

La osteomielitis y la artritis tambin son relativamente comunes, y son vistos como inflamacin en las articulaciones, enrojecimiento y dolor en las articulaciones afectadas, la rigidez y dificultad de movimiento.

La endocarditis puede ponerse de manifiesto como con fiebre, petequias y, en ocasiones, complicaciones tromboemblicas.

Serratia marcescens causa El factor de riesgo principal para la infeccin por S. marcescens es largo interminable hospitalizacin. Los que tienen un mecanismo inmunolgico dbil son ms propensos al desarrollo de estas infecciones nosocomiales. Importantes factores desencadenantes son: intra venosa peritoneal, intra o catteres urinarios, la instrumentacin de las vas respiratorias, como la broncoscopa y los ventiladores, las inyecciones intra-articulares, trauma en el crneo, la ciruga neuro-, la inyeccin epidural o una puncin lumbar. Tratamientos para infecciones o complicaciones causadas por Serratia marcescens Todas las bacterias del gnero Serratia presentan resistencia a muchos antibiticos a causa de la presencia de factores R, los cuales son una tipo de plsmido que codifica enzimas de resistencia a antibiticos. El ms importante de estos es el SmaI. Por ello, esta bacteria presenta una resistencia primaria a todas las penicilinas, a las cefalosporinas y a la polimixina. El tratamiento para infecciones leves puede realizarse

con trimetoprim, sulfamidas o fluoroquinolona. Para infecciones ms graves, se utilizan fluoroquilonas (ciprofloxacino, levofloxacino), carbapenemes (ertapenem, imipenem, meropenem), o ms frecuente cefalosporinas de tercera generacin, generalmente asociado a un aminoglucsido (gentamicina).

Serratia marcescens tratamiento

El plan de tratamiento principal es la administracin de antibiticos. Los abscesos y exudados requieren incisin y drenaje. S. marcescens es resistente a la ampicilina, macrlidos y cefalosporinas de 1 generacin. En consecuencia, la mayora de los mdicos se encargan el caso de los aminoglucsidos, junto con antipseudomonas beta-lactmicos. Adems, las quinolonas son decididamente activa contra la mayora de las cepas de Serratia.

La terapia definitiva para el caso depende de los resultados de las pruebas de vulnerabilidad, teniendo en cuenta que, de varias cepas resistentes son bastante comunes.

Inicio terapia es una alternativa para aquellos pacientes que estn clnicamente estables, mientras que otros tienen que ser hospitalizadas.

El pronstico para las infecciones por S. marcescens es moderadamente los pobres. Ciertas infecciones, como infecciones urinarias, abscesos abdominales y la artritis muestran resultados bastante buenos, mientras que la meningitis, abscesos cerebrales, sepsis y endocarditis muestran pronstico moderado.

CONCLUSIONES Al final de la prctica he concluido que ha sido muy importante para el descubrimiento de agentes microbianos como las Salmonellas y sus diferentes tipos que se hallan en huevos, son los que nosotros y nuestros hijos ingerimos, por ser al alcance de todo bolsillo y por haber un amplio recetario para preparar alimentos y tenerlos como acompaante o formando parte de otros. Considero que las pruebas bioqumicas efectuadas (en el caso de mi subgrupo) fueron plenamente exitosas, ya que se obtuvo resultados precisos que coincidieron con un solo tipo de MO en este caso los resultados indicaron que el MO detectado es Serratia marcescens. En cuanto a este MO es un bacilo motil y flagelado, causante de daos en el organismo humano tales como: Conjuntivitis, queratitis, infecciones en

heridas, riones, vas meningitis y endocarditis.

urinarias,

infecciones

respiratorias,

El tratamiento contra este MO es arduo ya que presenta algunas resistencias a antibiticos (como se indica en la zona de tratamiento en la parte superior donde se hace referencia a la vida y caractersticas de la Serratia marcescens). Leyendo los estudios realizados a este MO he concluido que es la causante principal y/o la explicacin cientfica para eventos sobrenaturales- o Milagrosos que hacen referencia al llanto de esculturas o retratos de conocidas figuras religiosas, inclusive en ostias, hasta en pan, ya que produce y secreta un pigmento llamado Prodigiosina que curiosamente es muy similar a la sangre (fcil de confundirla con esta). Se ha determinado exitosamente con la ayuda de las tablas el tipo de MO presente en la muestra segn los resultados obtenidos.

RECOMENDACIONES Se recomienda (preferible) NO consumir huevos adquiridos o comprados al granel, sin registro sanitario (no exentos de salmonellas, pero si ms confiables) por las causas ya antes expuestas. Tener mucho cuidado al manipular los tubos con los agares al momento de la siembra e inoculacin. Practicar mucho y siempre segn los resultados guiarse en las tablas de resultados de pruebas bioqumicas para tener una precisin al momento de determinar los o el tipo de MO que resulta..

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