Conocimiento de la Estructura de los Microscopios Compuestos: Fotnico y Estereoscpico. (Prctica No.

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Osmar Ivn Esparza Pin. Biologa General. 5 de Marzo de 2007.

Introduccin
El microscopio es cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos. Es el aparato ms importante e indispensable en un laboratorio de Biologa; permite la observacin de objetos u organismos imposibles de ver a simple vista. La palabra microscopio proviene de dos races griegas: micros, pequeo y scopein, observar. Mediante el microscopio podemos estudiar estructura y ciclos biolgicos de muchos microorganismos que causan enfermedades, lo que nos ha permitido crear y perfeccionar tcnicas y mtodos para contrarrestarlos, mejorndose el nivel de vida de la humanidad. En la actualidad, el uso del microscopio se ha extendido a otros campos del conocimiento, adems del biolgico. Existen dos tipos de microscopios, el simple y el compuesto. El microscopio simple est formado por una lente convergente, tambin llamada lupa, que nos amplifica el objeto en unos 20 dimetros. El microscopio compuesto est constituido por dos sistemas de lentes: los lentes objetivos, as llamados por estar cerca del objeto de observacin, y, los lentes oculares, que estn cerca del ojo del observador. Cada sistema proporciona un aumento independiente, el producto de estos aumentos parciales dados por oculares y objetivos determinan el aumento total del microscopio. En biologa, el microscopio compuesto que se usa con ms frecuencia en la enseanza, laboratorios clnicos o de investigacin, es el ptico o fotnico que utiliza luz blanca que ilumina por transparencia el organismo a observar. Existen otros tipos de microscopios que son variantes del microscopio fotnico, ya que todos se basan en los mismos principios, tales como: El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda ms cortas de la luz ultravioleta, los elementos pticos de estos microscopios estn hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados. Adems, dado que la radiacin ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con fosforescencia, en fotografa o con un escner electrnico. El microscopio de luz ultravioleta se utiliza en la investigacin cientfica. El microscopio petrogrfico o de polarizacin se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales de las rocas gneas y las rocas metamrficas. Cuenta con un prisma de Nicol u otro tipo de dispositivo para polarizar la luz que pasa a travs del espcimen examinado. Otro prisma de Nicol o analizador determina la polarizacin de la luz que ha pasado a travs del espcimen. El microscopio tiene un soporte giratorio que indica el cambio de polarizacin acusado por el espcimen. El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona

hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello, las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo, en el microscopio de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminacin provoca variaciones minsculas en el ndice de refraccin de un espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina. El microscopio estereoscpico o de diseccin , se llama as porque permite realizar manipulaciones necesarias para diseccionar pequeos organismos macroscpicos; tiene un par de microscopios de baja potencia colocados de forma que convergen en el espcimen. Estos instrumentos producen una imagen tridimensional. El microscopio electrnico es el ms evolucionado, utiliza haces de electrones en lugar de luz para realizar observaciones, dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz, pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas. La longitud de onda ms corta de la luz visible es de alrededor de 4.000 ngstroms (1 ngstrom equivale a 0,0000000001 metros). La longitud de onda de los electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de alrededor de 0,5 ngstrom. Operan al vaco, que es una parte relevante del microscopio electrnico. Los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, de forma que tiene que hacerse un vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas. Por ltimo, todos los microscopios electrnicos cuentan con un sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones.; por ello impide la observacin de organismos vivos. Sin embargo, gracias a l se han logrado aumentos d hasta 800,000 dimetros, lo que ha posibilitado el anlisis de la ultra estructura de la clula e incluso de muchas macromolculas biolgicamente importantes. Esto ha sido crucial para el avance de la Biologa y Gentica moleculares. Hay dos tipos bsicos de microscopios electrnicos: el microscopio electrnico de transmisin (Transmission Electron Microscope, TEM) y el microscopio electrnico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM). Un TEM dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ngstroms. Se coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente detrs del objeto para registrar la imagen

aumentada. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. Un microscopio electrnico de barrido crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo con un SEM, sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos. El SEM explora la superficie de la imagen punto por punto, al contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse al alcanzar la muestra o provocar la aparicin de electrones secundarios. Los electrones dispersados y los secundarios son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los lados del espcimen. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en un monitor de televisin. Cuanto mayor sea el nmero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. Los microscopios electrnicos de barrido pueden ampliar los objetos 100.000 veces o ms. Este tipo de microscopio es muy til porque, al contrario que los TEM o los microscopios pticos, produce imgenes tridimensionales realistas de la superficie del objeto. Parte II-A

Objetivo: El alumno identificar las partes constitutivas de los sistemas; mecnico, ptico y de
iluminacin del microscopio fotnico y estereoscpico.

Material: Microscopio fotnico y microscopio estereoscpico. Metodologa: Con la ayuda de tu profesor o laboratorista, identifica y seala las partes de
que est constituido el microscopio fotnico compuesto y el microscopio estereoscpico en el esquema respectivo.

Resultados: sta parte consiste en observar y reconocer las partes de cada microscopio real
y poner el nombre en el esquema del manual de prcticas. Se examin cada parte de los microscopios con detenimiento, observando su uso y sus cuidados de los lentes oculares y objetivos, laminillas, y el manejo de la luz. Se completaron esquemas sobre los microscopios, al ponerle los nombres de las partes.

Conclusiones: Se aprendi el uso de cada una de las partes de ambos microscopios y la

metodologa usada fue buena, ya que se iba usando el microscopio al paso al que se nos iba explicando.

Observaciones: Me pareci interesante el uso del microscopio estereoscpico, ya que con

este se ve la imagen del espcimen ms clara y tridimensional, por lo que se le es ms fcil hacer cortes o manipularlo y ver ms claramente los cambios.

Cuestionario
1. Cules diferencias podras sealar como ms significativas desde tu punto de vista entre los microscopios compuestos y estereoscpicos? a) En el sistema mecnico: en que el microscopio compuesto tiene macromtrico y micromtrico, el carro, y el del estereoscpico simplemente tiene un tornillo para enfoque y el carro no lo tiene ya que uno mismo puede mover el espcimen. b) En el sistema ptico: el aumento que tienen cada lentes objetivos y oculares: los oculares del fotnico pueden ser de 5x, 10x y 15x, mientras los del otro de 10x; y el de los objetivos del fotnico son de 4x, 10x, 40x y 100x, mientras los del otro son 2x y 4x. Tambin que los del fotnico estn en un revlver y los del estereoscpico basta con mover el objetivo 90 y cambia. c) En el sistema de iluminacin: uno consta de una fuente luminosa y un condensador con lo que se regula la iluminacin, mientras que el del estereoscpico se hace con luces de incidencia y transparencia, las cuales se encuentran bajo la platina y en la parte superior del aparato para cuando el espcimen es muy opaco o muy brillante, se pueden utilizar ambas. 2. Si ests observando en el microscopio compuesto, cul es el aumento total que obtienes al utilizar los objetivos de 10x, 40x y 100x, respectivamente? a) Con el objetivo de 10x, se obtiene un aumento total de: 100x b) Con el objetivo de 40x, se obtiene un aumento total de: 400x c) Con el objetivo de 100x, se obtiene un aumento total de: 1000x 3. Si ests observando en el microscopio estereoscpico, cul es aumento total que obtienes al utilizar los objetivos de 2x y 4x, respectivamente? a) Con el objetivo de 2x, se obtiene un aumento total de: 20x

b) Con el objetivo de 4x, se obtiene un aumento total de: 40x 4. Por qu razn al microscopio estereoscpico tambin se le llama de diseccin? Porque permite realizar las manipulaciones necesarias para diseccionar pequeos organismos macroscpicos. Parte II-B

Objetivo: el alumno practicar el manejo correcto de los microscopios fotnico y

estereoscpico.

Material: microscopio compuesto, microscopio estereoscpico, portaobjeto y cubreobjeto,

vaso con agua, gotero, cabellos, insecto muerto u otro objeto macroscpico pequeo, base de caja de Petri.

Metodologa (Fotnico):
1. Realiza una preparacin fresca, colocando en el centro de un portaobjetos dos trocitos de cabello dispuestos en cruz, ponles una gota de agua y cbrelos con un cubreobjetos. 2. Con el tornillo macromtrico baja hasta el fondo la platina y enciende el foco del microscopio, coloca la preparacin de manera que el objeto de observacin (el cabello) quede iluminado. 3. Coloca en el eje focal el objetivo de 10x; observando a travs de los oculares, sube lentamente la platina con el tornillo macromtrico hasta encontrar el objeto de observacin. Logrado lo anterior, ajusta la imagen con el tornillo micromtrico. Debes ver con mucha claridad. A veces, para mejorar el contraste del objeto observado, es necesario que aumentes o disminuyas la intensidad de la luz; para ello utiliza el diafragma del condensador. 4. Cuando el profesor lo indique o la prctica as lo requiera, podrs utilizar los objetivos de 40x y 100x. Para enfocarlos bastar con que gires el revlver y coloques en el eje focal el objetivo deseado, y, con el tornillo micromtrico ajustars la imagen. Previamente debers obtener el enfoque con 10x. (Recuerda que, antes de trabajar con el objetivo de 100x, debers poner encima de la preparacin una gota de aceite para inmersin, para que el lente quede sumergido en dicho aceite). 5. En una hoja por separado (o al reverso de sta), realiza un dibujo de lo que observaste con los objetivos de 10x y 40x.

Metodologa (Estereoscpico):

1. Coloca sobre la platina la base de la caja de Petri, que contiene el objeto de observacin. 2. Enciende la luz incidente y procura que el ejemplar por observar se encuentre bien iluminado; asegrate que el objetivo de 2x este correctamente colocado en su eje focal. 3. Con el tornillo para enfoque, mueve hacia arriba o hacia abajo los oculares hasta que observes con claridad al ejemplar que ests estudiando. Si no logras enfocarlo es porque est fuera del rea de observacin del objetivo, por lo que debers mover al ejemplar hasta que lo ubiques dentro del rea de observacin. 4. Obtenida la imagen del objeto, enciende ahora la luz de transparencia o a ambas simultneamente hasta que logres la mejor iluminacin para tu observacin. 5. Si el ejemplar se ve demasiado pequeo con el objetivo de 2x, o bien, te interesa analizar con un aumento mayor alguna porcin del ejemplar que ests observando, cambia al objetivo de 4x y ajusta la imagen con el tornillo de enfoque hasta que veas con claridad. 6. Realiza esquemas de lo que observaste.

Resultados: se hicieron esquemas sobre la muestras de pelo, y sobre la cabeza de un grillo

que se vieron en los microscopios; los esquemas fueron los siguientes de acuerdo al tipo de aumento:

Conclusiones: el pelo en el microscopio se ve ms rasposo y se aprecia con mayor precisin

el color y la raz del cabello. La cabeza del grillo se aprecia mejor, con colores y rasgos caractersticos. Se aprendi a utilizar, sin mirar, los tornillos macromtrico y micromtrico, junto con la platina y el carro.

Observaciones: el cabello tiene una visin ms rara que a simple vista; se pueden apreciar
demasiados rasgos que a simple vista no.

Bibliografa
La introduccin fue sacada de la Encarta 2007 Biblioteca Premium DVD.