Validacin de mtodos Bioanaliticos I.

INTRODUCCIN Esta gua proporciona asistencia a los patrocinadores de investigacin solicitudes de frmacos nuevos (IND), nuevos solicitudes de frmacos (NDA), solicitudes abreviadas de frmacos nuevos (ANDA), y suplementos de desarrollo de informacin bioanaltico validacin del mtodo utilizado en farmacologa clnica en humanos, biodisponibilidad (BA) y bioequivalencia (BE) que requieren estudios de farmacocintica (PK) de evaluacin. Esta gua tambin se aplica a los mtodos bioanalticos utilizados para los no-humanos farmacologa / toxicologa estudios y los estudios preclnicos. Para los estudios relacionados con el proceso de aprobacin de medicamentos veterinarios, esta gua slo se aplica a BA sangre y orina, BE, y los estudios PK. La informacin en esta orientacin se aplica generalmente a los procedimientos bioanalticos tales como gas cromatografa (GC), de alta presin cromatografa lquida (LC), combinado GC y LC masa espectromtricos (MS), tales como los procedimientos de LC-MS, LC-MS-MS, GC-MS y GC-MS-MS realiza para la determinacin cuantitativa de frmacos y / o metabolitos en matrices biolgicas tal como sangre, suero, plasma, u orina. Esta orientacin tambin se aplica a otros mtodos bioanalticos, tales como procedimientos inmunolgicos y microbiolgicos, y a otras matrices biolgicas, tales como tejido y muestras de piel. Esta gua ofrece recomendaciones generales para la validacin de mtodos bioanalticos. La recomendaciones puede ajustarse o modificarse en funcin del tipo especfico de mtodo analtico utilizado. II. ANTECEDENTES Esta gua ha sido elaborada sobre la base de las deliberaciones de dos talleres: (1) Analtica Mtodos de validacin: biodisponibilidad, bioequivalencia, y farmacocinticas (celebradas en diciembre 3B5, 19902) y (2) los mtodos bioanalticos Validacin CA Revisar Con una dcada de progreso (que tuvo lugar de enero 12B14, 20003). Mtodos analticos selectivos y sensibles para la evaluacin cuantitativa de frmacos y sus metabolitos (Analitos) son fundamentales para el buen desarrollo de estudios preclnicos y / o clnicos y biofarmacia estudios de farmacologa. Validacin del mtodo Bioanalytical incluye todos los procedimientos que demuestren que un mtodo particular usado para la medicin cuantitativa de analitos en una matriz biolgica dada, tal como sangre, plasma, suero u orina, es fiable y reproducible para el uso previsto. Los fundamentales parmetros para esta validacin incluyen (1) la exactitud, precisin (2), la selectividad (3), la sensibilidad (4), (5) reproducibilidad y la estabilidad (6). La validacin implica documentar, a travs del uso de laboratorio especfica investigaciones, que las caractersticas de funcionamiento del mtodo son adecuados y fiables para la destina aplicaciones analticas. La aceptabilidad de los datos analticos se corresponde directamente con los criterios utilizado para validar el mtodo.

Mtodos publicados de anlisis a menudo se modifican para adaptarse a los requisitos del laboratorio que realice el ensayo. Estas modificaciones deben ser validados para asegurar un rendimiento adecuado de la analtica mtodo. Cuando se realizan cambios en un mtodo validado previamente, el analista debe ejercer juicio en cuanto a la cantidad de validacin adicional que se necesita. Durante el curso de un medicamento tpico programa de desarrollo, un mtodo definido bioanaltico sufre muchas modificaciones. La evolucin cambios necesarios para apoyar los estudios especficos y diferentes niveles de validacin demostrar la validez de un ensayo de rendimiento. Los diferentes tipos y niveles de validacin se definen y se caracteriz como sigue: A. Validacin completa Validacin completa es importante en el desarrollo e implementacin de un mtodo para bioanaltico la primera vez. Validacin completa es importante para una entidad nueva droga. La validacin completa del ensayo revisado es importante si metabolitos se aade a una ya existente ensayo para la cuantificacin. B. Validacin Parcial Validaciones parciales son modificaciones de los ya validados los mtodos bioanalticos. Convalidacin parcial puede variar desde tan poco como uno intra-ensayo de exactitud y precisin de la determinacin de una casi completa validacin. Tpicos cambios de mtodos bioanalticos que entran en esta categora se incluyen, pero no estn limitado a: Traslados mtodo Bioanalytical entre laboratorios o analistas Cambio en la metodologa de anlisis (por ejemplo, cambio en los sistemas de deteccin) Cambio en el anticoagulante en la cosecha de fluido biolgico Cambio en la matriz dentro de las especies (por ejemplo, el plasma humano a la orina humana) Modificacin de los procedimientos de procesamiento de muestras Cambio de especies dentro de la matriz (por ejemplo, el plasma de rata a ratn plasma) Cambio de gama de concentracin que Cambios en los instrumentos y / o plataformas de software Volumen limitado de la muestra (por ejemplo, el estudio peditrico) Matrices Raras Selectividad demostracin de un analito en la presencia de medicaciones concomitantes

 Selectividad demostracin de un analito en la presencia de metabolitos especficos C. Validacin cruzada La validacin cruzada es una comparacin de los parmetros de validacin cuando dos o ms mtodos bioanalticos se utilizan para generar los datos dentro del mismo estudio o en los diferentes estudios. Un ejemplo de validacin cruzada sera una situacin en la que un original mtodo validado bioanaltico sirve como de referencia y el mtodo bioanaltico revisado es el comparador. Las comparaciones deben hecho en ambos sentidos. Cuando los anlisis de la muestra dentro de un nico estudio se llev a cabo en ms de un sitio o ms de uno laboratorio, la validacin cruzada con las normas de la matriz con pas y las muestras de sujetos debe realizarse en cada sitio o de laboratorio para establecer la fiabilidad entre laboratorios. La validacin cruzada tambin deben ser considerarse cuando los datos generados utilizando diferentes tcnicas analticas (por ejemplo, LC-MS-MS vs ELISA4) en diferentes estudios se incluyen en una presentacin regulatoria. Todas las modificaciones deben ser evaluados para determinar el grado recomendado de validacin. La laboratorio de anlisis realizacin de farmacologa / toxicologa y otros estudios preclnicos para la regulacin presentaciones deben cumplir con buenas prcticas de laboratorio FDA = s (GLP) 5 (21 CFR parte 58) y al slidos principios de garanta de calidad en todo el proceso de pruebas. El mtodo para bioanaltico humano BA, BE, PK, y los estudios de interaccin farmacolgica debe cumplir con los criterios establecidos en 21 CFR 320.29. La anlisis de laboratorio debe tener un conjunto escrito de procedimientos normalizados de trabajo (PNT) para asegurar una sistema completo de control de calidad y seguridad. Los SOP deben abarcar todos los aspectos del anlisis desde el tiempo de la muestra se recoge y se alcanza el laboratorio hasta que los resultados del anlisis son los inform. Los SOP deben incluir tambin el mantenimiento de registros, la seguridad y la cadena de custodia de la muestra (Sistemas de rendicin de cuentas que garanticen la integridad de los artculos de prueba), preparacin de muestras y herramientas analticas tales como los mtodos, reactivos, equipo, instrumentacin, y procedimientos para el control de calidad y verificacin de resultados. El proceso por el cual se desarrolla un mtodo especfico bioanalticos, validado y utilizado en la rutina anlisis de la muestra se puede dividir en (1) preparacin de referencia estndar, (2) mtodo bioanaltico desarrollo e implantacin de procedimiento de ensayo, y (3) la aplicacin de bioanaltico validado mtodo para el anlisis de drogas de rutina y los criterios de aceptacin para la realizacin de un anlisis y / o lote. Estos tres procesos se describen en las siguientes secciones de esta gua. III. NORMA DE REFERENCIA El anlisis de los frmacos y sus metabolitos en una matriz biolgica se lleva a cabo utilizando muestras adicionadas con calibracin (de referencia) utilizando estndares y control de calidad (QC) muestras. La pureza de la referencia estndar que se utiliza para preparar muestras

enriquecidas pueden afectar a los datos de estudio. Por esta razn, una autenticada estndar de referencia analtico de identidad conocida y pureza se debe utilizar para preparar soluciones de conocida concentraciones. Si es posible, el patrn de referencia debe ser idntico al analito. Cuando esto no sea posible, una forma qumica establecida (base o cido libre, sal o ster) de pureza conocida se puede utilizar. Hay tres tipos de patrones de referencia se utilizan generalmente: (1) los estndares de referencia certificados (por ejemplo, USP normas compendio), (2) los patrones de referencia suministrados comercialmente obtenido de una buena reputacin fuente comercial, y / o (3) otros materiales de pureza documentado medida sintetiz mediante un anlisis laboratorio o establecimiento comercial s. La fuente y el nmero de lote, fecha de caducidad, certificados de anlisis cuando estn disponibles, y / o evidencia interna o externamente generado de identidad y pureza debe aportarse para cada estndar de referencia. IV. Desarrollo del mtodo: anlisis qumico El desarrollo de mtodos y fase de establecimiento se define el anlisis qumico. La fundamental parmetros para la validacin de un mtodo bioanaltico son exactitud, precisin, selectividad, sensibilidad, reproducibilidad y la estabilidad. Las mediciones para cada analito en la matriz biolgica debe ser validado. Adems, la estabilidad del analito en muestras enriquecidas se debe determinar. Tpico mtodo de desarrollo y establecimiento de un mtodo bioanaltico incluyen la determinacin de (1) selectividad, (2) la exactitud, precisin, recuperacin, (3) la curva de calibracin, y (4) la estabilidad del analito en claveteado muestras. A. Selectividad La selectividad es la capacidad de un mtodo analtico para diferenciar y cuantificar el analito en la presencia de otros componentes en la muestra. Por selectividad, anlisis de muestras en blanco de la matriz apropiada biolgicos (plasma, orina, u otra matriz) debe ser obtenida de al menos seis fuentes. Cada muestra en blanco debe hacerse la prueba de interferencia, y la selectividad debe ser asegurado en el lmite inferior de cuantificacin (LLOQ). Las sustancias potencialmente interferentes en una matriz biolgica son componentes endgenos de la matriz, metabolitos, productos de descomposicin, y en el estudio actual, la medicacin concomitante y otras xenobiticos exgenos. Si el mtodo est destinado a cuantificar ms de un analito, cada uno analito deben ser probados para asegurar que no hay interferencia. B. Exactitud, Precisin y Recuperacin La precisin de un mtodo analtico describe la cercana de resultados de la prueba obtenidos por el mtodo y el valor real (concentracin) del analito. La precisin est determinada por duplicado anlisis de muestras que contienen cantidades conocidas del analito. La precisin se debe medir utilizando un mnimo de cinco determinaciones por concentracin. Un mnimo de tres concentraciones en el intervalo de concentracin que se espera se recomienda. El valor medio

debe estar dentro del 15% del valor real excepto en LLOQ, donde no debe desviarse en ms de 20%. La desviacin de la media del valor real sirve como la medida de la precisin. La precisin de un mtodo analtico describe la proximidad de las medidas individuales de un analito cuando el procedimiento se aplica repetidamente para varias alcuotas de una nica y homognea volumen de matriz biolgica. Precision debe medirse utilizando un mnimo de cinco determinaciones por concentracin. Un mnimo de tres concentraciones en el intervalo de espera Las concentraciones se recomienda. La precisin determinada en cada nivel de concentracin debe no exceda del 15% del coeficiente de variacin (CV) excepto por el LLOQ, donde no debe superar el 20% de la CV. La precisin se subdivide en intraserial, intra-lote precisin o repetibilidad, que evala la precisin durante una serie de anlisis individual, y entre distintas series, interbatch precisin o reproducibilidad, que mide la precisin con el tiempo, y pueden implicar diferentes analistas, equipos, reactivos y laboratorios. La recuperacin de un analito en un ensayo de la respuesta del detector es obtenido a partir de una cantidad de la analito aadido a y se extrae de la matriz biolgica, en comparacin con la respuesta del detector obtenido para la concentracin real de la estndar autntico puro. Se refiere a la recuperacin de extraccin de la eficiencia de un mtodo analtico dentro de los lmites de la variabilidad. Recuperacin de la analito no necesita ser 100%, pero el grado de recuperacin de un analito y del estndar interno debe ser coherente, preciso y reproducible. Experimentos de recuperacin deben ser realizados por la comparacin de los resultados analticos para las muestras extradas a tres concentraciones (bajo, medio, y alta) con las normas no extrados que representan 100% de recuperacin. C. Calibracin / Standard Curve Una calibracin (estndar) curva es la relacin entre la respuesta del instrumento y conocido concentraciones del analito. Una curva de calibracin debe ser generado para cada analito en la muestra. Un nmero suficiente de las normas se debe utilizar para definir adecuadamente la relacin entre la concentracin y la respuesta. Una curva de calibracin debe ser preparada de la misma matriz biolgica como las muestras en el estudio pretenda por adicin con la matriz conocida concentraciones del analito. El nmero de normas utilizadas en la construccin de una curva de calibracin ser una funcin de la gama prevista de los valores analticos y la naturaleza de la analito / respuesta. Las concentraciones de los estndares debe ser elegido sobre la base de la rango de concentracin esperado en un estudio en particular. Una curva de calibracin debe consistir en una pieza en bruto muestra (matriz de la muestra procesada sin patrn interno), una muestra cero (matriz de la muestra procesada con patrn interno), y de seis a ocho no cero muestras que cubre la esperada rango, incluyendo LLOQ. 1. Lmite inferior de cuantificacin (LLOQ) El estndar ms bajo de la curva de calibracin debe ser aceptado como el lmite de cuantificacin, si se cumplen los siguientes requisitos:

C La respuesta del analito en el LLOQ debe ser al menos 5 veces la respuesta en comparacin con la respuesta testigo. Pico del analito C (respuesta) deben ser identificables, discreto y reproducible conuna precisin de 20% y la exactitud de 80-120%. 2. Curva de Calibracin / Standard Curve / concentracin-respuesta El modelo ms simple que describa adecuadamente la relacin concentracin-respuesta se debe utilizar. Seleccin de ponderacin y el uso de una ecuacin de regresin complejo debe justificarse. Las siguientes condiciones se deben cumplir en el desarrollo de una curva de calibracin: C desviacin # 20% de la concentracin nominal de LLOQ C # desviacin del 15% de las dems normas que LLOQ de la concentracin nominal Por lo menos cuatro de los seis distintos de cero normas deben cumplir con los criterios anteriores, incluyendo el LLOQ y el estndar de calibracin a la mayor concentracin. Excluyendo el normas no debe cambiar el modelo utilizado. D. Estabilidad La estabilidad del frmaco en un fluido biolgico es una funcin de las condiciones de almacenamiento, las propiedades qumicas del frmaco, la matriz, y el sistema de recipiente. La estabilidad de un analito en una determinada sistema de la matriz y el recipiente slo es pertinente para que el sistema de matriz y el contenedor y no debe extrapolarse a otras matrices y sistemas de contenedores. Procedimientos de Estabilidad debe evaluar la estabilidad de los analitos durante la recogida y manipulacin de muestras, despus de largo plazo (congelado a la almacenamiento previsto temperatura) ya corto plazo (mesa de trabajo, temperatura ambiente) de almacenamiento, y despus de pasando por ciclos de hielo y deshielo y el proceso analtico. Las condiciones utilizadas en la estabilidad experimentos deben reflejar situaciones que puedan presentarse durante el manejo real de la muestra y anlisis. El procedimiento tambin debe incluir una evaluacin de la estabilidad del analito en la solucin madre. Todas las determinaciones de estabilidad debe utilizar un conjunto de muestras preparadas a partir de un stock recin hecho solucin de analito en la apropiada libre de analito, libre de interferencias matriz biolgica. Valores soluciones de los analitos para la evaluacin de la estabilidad debe ser preparado en un disolvente apropiado a concentraciones conocidas. 1. Congelar y Descongelar Estabilidad Estabilidad del analito debe ser determinada despus de tres ciclos de congelacin y descongelacin. Por lo menos tres alcuotas a cada una de las concentraciones bajas y altas deben ser almacenados a la prevista temperatura de almacenamiento de 24 horas y se descongelaron a temperatura ambiente sin ayuda. Cundo completamente descongelado, las muestras deben volver a congelarse durante 12 a 24 horas bajo las mismas condiciones. El ciclo de congelacin-

descongelacin debe repetirse dos veces ms, luego se analiz en el tercer ciclo. Si un analito es inestable a la temperatura de almacenamiento deseada, la muestra de estabilidad deben congelarse a-700C durante los tres ciclos de congelacin y descongelacin. 2. Corto Plazo Temperatura de Estabilidad Tres partes alcuotas de cada una de las concentraciones bajas y altas deben ser descongeladas a habitacin temperatura y se mantiene a esta temperatura de 4 a 24 horas (basado en la espera duracin que las muestras se mantuvieron a temperatura ambiente en el estudio previsto) y analizado. 3. Estabilidad a largo plazo El tiempo de almacenamiento en una evaluacin de la estabilidad a largo plazo debera exceder el tiempo entre la fecha de la toma de muestras primera y la fecha de anlisis de la ltima muestra. Estabilidad a largo plazo se debe determinar mediante el almacenamiento de al menos tres alcuotas de cada uno de los bajo y alto concentraciones en las mismas condiciones que las muestras de estudio. El volumen de las muestras debe ser suficiente para el anlisis en tres ocasiones separadas. Las concentraciones de todos las muestras de estabilidad debe ser comparado con la media de back-valores calculados para la normas en las concentraciones apropiadas desde el primer da de estabilidad a largo plazo pruebas. 4. De la estabilidad de la solucin La estabilidad de las soluciones madre de frmaco y el estndar interno debe ser evaluado en a temperatura ambiente durante al menos 6 horas. Si las soluciones madre son refrigerados o congelados Para El Periodo en Cuestin, la Estabilidad debe Ser documentado. Despues de la terminacin de la Deseado Tiempo de storage, la Estabilidad debe Ser probada comparando el Instrumento Respuesta con la de las Soluciones Recin preparadas. 5. Post-preparativo Estabilidad La Estabilidad de las Muestras procesadas, incluyendo El Tiempo de Residencia en El inyector automtico, deberan determinar. La Estabilidad del Frmaco y el patrn interno s debe evaluar Durante El Tiempo de Ejecucion esperado el prrafo Tamano del lote en las Muestras de Validacin MEDIANTE la determination Concentraciones Sobre la base de estndares Certificacin de calibracin de original. Aunque el Enfoque tradicional de la COMPARACION de los Resultados Analticos de las Muestras almacenadas con los de las Muestras Recin preparadas s ha mencionado en this Gua, Otra estadstica los Enfoques basados en los Lmites de confianza prrafo la evaluation de la Estabilidad de las Naciones Unidas analito = s en la ONU Matriz Biolgica Se Puede utilizar. POE debe describir claramente el Mtodo estadstico yNormas utilizadas. Validacin Adicional Florerias INCLUIR la Investigacin de Muestras de dosis Sujetos.

E. Principios de Validacin de Metodos Establecimiento Bioanalytical y Los Lista de parmetros FUNDAMENTALES prr asegurar la aceptabilidad de la ejecucion de las Naciones Unidas Validacin de Metodos bioanalticos hijo la exactitud, la PRECISIN, selectividad, sensibilidad, reproducibilidad y la Estabilidad. Una Descripcin Especfica y detallada del Mtodo bioanaltico debe Escrito servicio. ESTO Puede Ser-en- La Forma De Un protocolo sanitario, plan de Estudio, Informe y / o SOP. Cada paso en el Mtodo servicios investigado prrafo debe determinar el Grado en Que ambiental, Matriz, material, o de las variables de Procedure pueden afectar a la estimacin de analito en la Matriz desde el Momento de la Recogida del material de Hasta e incluyendo El Tiempo de Anlisis. Puede Ser Importante Tener en Cuenta la variabilidad de la Matriz debido a la Naturaleza fisiolgica de la Muestra. En el Caso de LC-MS-MS procedimientos basados en Medidas apropiadas Debn servicios adoptado prr Garantizar la Falta de Efectos de la Matriz a lo largo de la Aplicacin del Mtodo, especialmente si la Naturaleza de los Cambios de la Matriz de la Matriz utilizada Durante la Validacin del Mtodo. Un Mtodo bioanalticos Debn servicios validados Por El BSG o application. Todos Experimentos utilizados prrafo HACER afirmaciones o extraer Conclusiones about la Validez del Mtodo Debn servicios presentados en Informe de las Naciones Unidas (informe Mtodo de Validacin). Siempre que sea posible, la misma matriz biolgica como la matriz en las muestras intencionales debera ser usado para propsitos de validacin. (Para los tejidos de disponibilidad limitada, como la mdula sea, matrices de proxy fisiolgicamente apropiados puede ser sustituido.) La estabilidad del analito (frmaco y / o metabolito) en la matriz durante la recoleccin proceso y el perodo de almacenamiento de la muestra debe ser evaluado, preferiblemente antes de la muestra anlisis. Para los compuestos con metabolitos potencialmente lbiles, la estabilidad del analito en la matriz de sujetos tratados (o especies) deben ser confirmados. La exactitud, precisin, reproducibilidad, funcin de respuesta, y la selectividad del mtodo para sustancias endgenas, metabolitos y productos de degradacin deben ser conocidos establecido para la matriz biolgica. Para la selectividad, no debe haber evidencia de que el sustancia, ser cuantificados es el analito deseado. El rango de concentracin en el que se determina el analito debe ser definida en el bioanaltico mtodo, basado en la evaluacin de las muestras reales de serie en toda la gama, incluyendo su variacin estadstica. Esto define la curva estndar. Un nmero suficiente de las normas debe ser utilizado para definir adecuadamente la relacin entre la concentracin y la respuesta. La relacin entre la respuesta y la concentracin Debe

demostrarse que ser continua y reproducible. El nmero de normas utilizadas debera ser una funcin de la gama dinmica y la naturaleza de la concentracin-respuesta relacin. En muchos casos, de seis a ocho concentraciones (con exclusin de los valores en blanco) puede definir la curva estndar. Las concentraciones ms estandarizadas se puede recomendar para no lineal que para las relaciones lineales. La capacidad para diluir las muestras originalmente por encima del lmite superior de la curva estndar debe ser demostrada por la exactitud y precisin los parmetros en la validacin. En consideracin de anlisis de alto rendimiento, incluyendo pero no limitado a la multiplexacin, multicolumna, y sistemas paralelos, suficientes muestras de control de calidad se debe utilizar para asegurar el control del ensayo. El nmero de muestras de control de calidad para asegurar el control correcto del ensayo debe ser determinado con base en el tamao de ejecucin. La colocacin de las muestras de control de calidad deben ser juiciosamente considerado en la ejecucin. Para los mtodos bioanalticos se considere vlido, los criterios especficos de aceptacin se debe establecer en avance y lograr la exactitud y la precisin para la validacin de muestras de QC ms el rango de las normas. F. Recomendaciones especficas para la validacin de mtodos La curva estndar matricial debe constar de un mnimo de seis puntos estndar, excluyendo espacios en blanco, utilizando muestras individuales o repetido. La curva estndar debe cubrir el toda la gama de concentraciones esperadas. Accesorio curva estndar se determina aplicando el modelo ms simple que adecuadamente describe la relacin concentracin-respuesta utilizando ponderacin adecuada y estadstica pruebas de bondad de ajuste. LLOQ es la concentracin ms baja de la curva estndar que se puede medir con exactitud y precisin adecuadas. El LLOQ deben establecerse con al menos cinco muestras independientes de estndares y determinar el coeficiente de variacin y / o intervalo de confianza apropiado. El LLOQ debe servir como la concentracin ms baja en la curva estndar y no se debe confundir con el lmite de deteccin y / o el control de calidad baja muestra. El ms alto nivel se define el lmite superior de cuantificacin (ULOQ) de un mtodo analtico. Para la validacin del mtodo bioanalticos, la exactitud y la precisin debe ser determinada con un mnimo de cinco determinaciones por nivel de concentracin (con exclusin de las muestras en blanco). El valor promedio debera ser de 15% del valor terico, excepto en LLOQ, donde se no debe diferir en ms de 20%. La precisin en torno al valor medio no debe exceda del 15% de la CV, a excepcin de LLOQ, donde no debe exceder del 20% de la CV.

Otros mtodos de evaluacin de la exactitud y precisin que cumplen estos lmites pueden ser igualmente aceptable. La exactitud y la precisin con la que concentraciones conocidas de analito en la matriz biolgica puede ser determinado debe ser demostrada. Esto se puede lograr mediante anlisis de reproducir juegos de muestras de concentraciones conocidas de analito C QC muestras C a partir de una matriz biolgica equivalente. Como mnimo, tres concentraciones que representa el entero rango de la curva estndar debe ser estudiado: una dentro de 3 veces el lmite inferior de cuantificacin (LLOQ) (muestra de control de calidad baja), uno cerca del centro (QC medio), y otro cerca de la parte superior lmite de la curva estndar (QC alta). Informaron los datos de validacin del mtodo y la determinacin de la exactitud y la precisin deben incluyen todos los valores atpicos, sin embargo, los clculos de exactitud y precisin excluyendo los valores que estn estadsticamente determinado como valores extremos tambin pueden ser reportados. La estabilidad del analito en la matriz biolgica a temperaturas de almacenamiento deben ser destinados establecido. La influencia de los ciclos de congelacin y descongelacin-(un mnimo de tres ciclos a las dos concentraciones por triplicado) debern ser estudiados. La estabilidad del analito en la matriz a temperatura ambiente deben ser evaluados durante un tiempo perodo igual a la preparacin de la muestra tpico, manipulacin de la muestra, y los tiempos de ejecucin de anlisis. Reinyeccin reproducibilidad debe ser evaluado para determinar si una serie de anlisis podra ser volvieron a analizar en el caso de fallo del instrumento. La especificidad de la metodologa de ensayo debe ser establecida utilizando un mnimo de seis fuentes independientes de la misma matriz. Para la masa con guin basado en la espectrometra de mtodos, sin embargo, las pruebas seis matrices independientes para la interferencia puede no ser importante. En el caso de LC-MS y los procedimientos de LC-MS-MS-basados, efectos de matriz debe ser investigado para asegurar que la precisin, selectividad, sensibilidad y no se ver comprometida. Mtodo de selectividad deberan ser evaluados durante el desarrollo del mtodo y en todo mtodo validacin y puede continuar durante toda la aplicacin del mtodo para el estudio de muestras reales. Aceptacin / rechazo de los criterios de las normas de pas, calibracin de matriz con sede y validacin Muestras de control de calidad deben basarse en la nominal (terica) concentracin de analitos. Los criterios especficos se puede configurar con antelacin y consigue la exactitud y precisin sobre el rango de los estndares, si as se desea. V. El desarrollo del mtodo: MICROBIOLGICO Y la unin del ligando- ENSAYOS

Muchos de los parmetros de validacin bioanalticos y principios descritos anteriormente tambin son aplicables a Los ensayos microbiolgicos y de unin a ligando-. Sin embargo, estos ensayos tienen algunas caractersticas nicas que deben tenerse en cuenta durante la validacin del mtodo. A. Cuestiones de Selectividad Como en los mtodos cromatogrficos, ensayos microbiolgicos y de unin a ligando-se debe mostrar ser selectivo para el analito. Las siguientes recomendaciones para hacer frente a dos selectividad temas deben ser considerados: 1. La interferencia de sustancias Physiochemically similares al analito La reactividad cruzada de metabolitos, medicacin concomitante, o endgenos compuestos deben ser evaluados individualmente y en combinacin con el analito de inters. Cuando sea posible, el inmunoensayo se debe comparar con una referencia validado mtodo (como LC-MS), utilizando muestras efectuados y criterios predeterminados para de acuerdo exactitud de inmunoensayo y mtodo de referencia. La linealidad dilucional a la norma de referencia deben ser evaluados utilizando estudio (Incurridos) muestras. Selectividad puede ser mejorado para algunos analitos mediante la incorporacin de separacin pasos antes de inmunoensayo. 2. Matrix relacionados con el analito efectos La curva estndar en fluidos biolgicos deben ser comparados con el estndar en tampn para detectar los efectos de la matriz. Paralelismo de las muestras del estudio diluidas deben ser evaluados con los estndares diluidos a detectar los efectos de la matriz. Unin no especfica debe ser determinada. B. Cuestiones de cuantificacin Curvas estndar microbiolgicas y de imunoassay son inherentemente no lineal y, en general, ms puntos de concentracin se puede recomendar para definir el ajuste en el rango de la curva estndar de para ensayos qumicos. Adems de sus caractersticas no lineales, la respuesta de error relacin de las curvas de calibracin de inmunoensayo es una funcin no constante de la respuesta media (Heteroscadisticity). Por estas razones, un mnimo de seis concentraciones de los calibradores no cero, por duplicado, se recomienda. La relacin de concentracin-respuesta es ms a menudo equipados a un 4 - modelo logstico o 5-parmetro, aunque otros pueden ser utilizados con la validacin adecuada. La el uso de puntos de anclaje en los extremos asintticas de alta y baja concentracin de la norma curva puede mejorar el ajuste de la curva general.

Generalmente, estos puntos de anclaje ser a concentraciones por debajo de la LLOQ establecido y por encima de la ULOQ establecido. Siempre que sea posible, los calibradores deben ser preparados en la misma matriz que las muestras de estudio o en una matriz alternativa de rendimiento equivalente. Tanto ULOQ y LLOQ debe ser definido por precisin aceptable, precisin, o los criterios de intervalos de confianza basados en los requisitos del estudio. Para todos los ensayos el factor clave es la exactitud de los resultados presentados. Esta precisin puede sermejorarse mediante el uso de muestras repetidas. En el caso en que las muestras repetidas deben estar medido durante la validacin para mejorar la precisin, el mismo procedimiento debe ser seguido como para las muestras desconocidas. Las recomendaciones siguientes se aplican a los problemas de cuantificacin: Si la separacin se utiliza antes del ensayo para las muestras de estudio, pero no para los estndares, es importante establecer recuperacin y utilizarlo en la determinacin de resultados. Los posibles enfoques para evaluar la eficiencia y la reproducibilidad de recuperacin son (1) el uso de analito trazador radiomarcado (cantidad demasiado pequea para afectar el ensayo), (2) el avance establecimiento de recuperacin reproducible, (3) la el uso de un patrn interno que no es reconocido por el anticuerpo, pero se puede medir por Otra tcnica. Reactivos clave, tales como anticuerpos, trazador, estndar de referencia, y de la matriz debe estar caracterizado apropiadamente y se almacena en condiciones definidas. Las evaluaciones de la estabilidad del analito debe llevarse a cabo en la matriz verdadero estudio (por ejemplo, no debe utilizar una matriz de pelado para eliminar interferencias endgenas). Criterio de aceptacin: Como mnimo el 67% (4 de 6) de las muestras de control de calidad deben estar dentro del 15% de su respectivo valor nominal, el 33% de las muestras de control de calidad (no todas las repeticiones en el mismo concentracin) pueden estar fuera de 15% del valor nominal. En ciertas situaciones, ms amplio criterios de aceptacin puede estar justificada. Reoptimizacin Ensayo o validacin puede ser importante cuando se producen cambios en la clave reactivos, como sigue: Analito marcado (marcador) Binding debe reoptimized. Rendimiento debe ser verificada con curva estndar y QC. Anticuerpo Llave reactividad cruzada debe ser revisado. Tracer experimentos anteriores deben repetirse. Matriz

 Tracer experimentos anteriores deben repetirse. Experimentos mtodo de desarrollo debe incluir un mnimo de seis corridas durante varios das, con al menos cuatro concentraciones (LLOQ, baja, media y alta) se analizaron por duplicado en cada serie. VI. Aplicacin del mtodo validado para el anlisis de drogas RUTINA Los ensayos de todas las muestras de un analito en una matriz biolgica debe ser completado dentro del perodo de tiempo de que los datos de estabilidad estn disponibles. En general, las muestras biolgicas pueden ser analizados con una sola determinacin sin anlisis por duplicado o replicado si el mtodo de ensayo tiene una variabilidad aceptable como definida por los datos de validacin. Esto es cierto para los procedimientos en los que variabilidades de precisin y exactitud rutinariamente caen dentro de los lmites de tolerancia aceptables. Para un procedimiento difcil con un analito lbil donde la alta especificaciones de precisin y exactitud puede ser difcil de conseguir, o incluso duplicar los anlisis por triplicado se puede realizar para una mejor estimacin de analito Una curva de calibracin debe ser generado para cada analito a las muestras de ensayo en cada serie de anlisis y se debe utilizar para calcular la concentracin del analito en las muestras desconocidas en el funcionamiento. La muestras enriquecidas pueden contener ms de un analito. Una serie de anlisis puede consistir en las muestras de control de calidad, patrones de calibracin, y, o bien (1) todas las muestras procesadas a ser analizada como un lote o una (2) lote compuesto de muestras procesadas desconocidos de uno o ms voluntarios en un estudio. La calibracin (Estndar) de la curva debe cubrir el rango esperado desconocido concentracin de la muestra, adems de un calibrador muestra en LLOQ. Estimacin de la concentracin en muestras desconocidas por extrapolacin de los curvas estndar por debajo de LLOQ o por encima del ms alto nivel, no se recomienda. En su lugar, la curva estndar debe ser redefinida o muestras con mayor concentracin debe ser diluido y volverse a analizar. Es preferible analizar todas las muestras del estudio de un sujeto en una sola corrida. Una vez que el mtodo de anlisis ha sido validado para su uso rutinario, la exactitud y la precisin debe ser monitoreado regularmente para garantizar que el mtodo sigue llevando a cabo satisfactoriamente. Para lograr este objetivo, un nmero de muestras de control de calidad preparadas por separado deben ser analizados con la prueba de procesado muestras a intervalos basado en el nmero total de muestras. Las muestras de control de calidad por duplicado en tres concentraciones (uno cerca de la LLOQ (es decir, # 3 x LLOQ), uno en el rango medio, y uno cerca del extremo alto de la gama) se debe incorporar, en cada ensayo. El nmero de muestras de control de calidad (en mltiplos de tres) depender del nmero total de muestras en el perodo previo. Los resultados de las muestras QC proporcionar la base de aceptar o rechazar la ejecucin. Al menos cuatro de cada muestras de QC Seis deberan estar dentro de "15% de los su valor nominal correspondiente. Dos de las muestras de QC seis pueden estar fuera del "15% de sus respectivos valor nominal, pero no ambas a la misma concentracin. Las siguientes recomendaciones deben tenerse en cuenta en la aplicacin de un mtodo bioanaltico a las drogas de rutina anlisis:

 Una curva estndar matricial debe constar de un mnimo de seis puntos estndar, excluyendo espacios en blanco (ya sea solo o rplica), que cubre toda la gama. Respuesta Funcin: Normalmente, el ajuste de la curva misma ponderacin, y la bondad del ajuste determinarse durante la validacin antes del estudio se debe utilizar para la curva estndar en el estudio. Funcin de respuesta est determinada por las pruebas estadsticas apropiadas sobre la base de la actual puntos estndar durante cada carrera en la validacin. Los cambios en la funcin de respuesta relacin entre la validacin antes del estudio y validacin corrida rutinaria indican el potencial problemas. Las muestras de control de calidad se debe utilizar para aceptar o rechazar la ejecucin. Estas muestras de control de calidad son la matriz enriquecida con analito. Aptitud del sistema: Basado en el analito y la tcnica, un procedimiento operativo especfico (o muestra) debe ser identificados para asegurar un funcionamiento ptimo del sistema utilizado. Cualquier diluciones de muestras requeridas deben usar como matriz (por ejemplo, un ser humano a) obviando la necesidad de incorporar reales dentro de los estudios de dilucin de muestras de control de calidad de la matriz. Repita Anlisis: Es importante establecer un POE o gua para el anlisis de repeticin y criterios de aceptacin. Este SOP o directriz debe explicar las razones de la repeticin de la muestra anlisis. Las razones para repetir los anlisis podran incluir el anlisis de repeticin clnico o preclnico muestras para fines de regulacin, anlisis de repeticin incoherente, muestras fuera del ensayo rango, los errores de procesamiento de muestras, falla del equipo, cromatografa pobre e inconsistente los datos farmacocinticos. Reassays debe hacerse por triplicado si el volumen de la muestra lo permita. La justificacin para el anlisis de repeticin y la denuncia de los anlisis de repeticin debe ser claramente documentado. Los datos de muestra Reintegracin: Una gua para el SOP o muestra la reintegracin de datos debe ser establecido. Este SOP o directriz debe explicar las razones de la reintegracin y la forma en la reintegracin se va a realizar. El fundamento para la reinsercin debe ser claramente descrito y documentado. Los datos originales y la reintegracin debe ser reportado. Criterios de Aceptacin para la ejecucin Los siguientes criterios de aceptacin deben ser considerados para la aceptacin de la corrida analtica: Patrones y las muestras de control de calidad se pueden preparar a partir de la solucin stock de spiking mismo, siempre que la estabilidad de la solucin y la precisin han sido verificadas. Una nica fuente de matriz tambin se pueden usar, selectividad proporcionada ha sido verificada. Muestras de la curva estndar, blancos, QC, y las muestras del estudio se pueden organizar segn se considere apropiado dentro de la ejecucin.

Colocacin de patrones y muestras de control de calidad dentro de una serie debe ser diseado para detectar ensayo variar con el paso de la carrera. Matriz basados en muestras de calibracin estndar: 75%, o un mnimo de seis normas, cuando back-calculada (incluyendo ULOQ) debe estar dentro del 15%, excepto para LLOQ, cuando debe ser de 20% del valor nominal. Los valores que caen fuera de estos lmites se puede descartar, siempre y cuando no cambie el modelo establecido. Los criterios de aceptacin para la exactitud y precisin como se indica en la seccin IV.F, "Specific Recomendacin para la validacin de mtodos, "debe ser proporcionada tanto para el da intra e intra-run experimento. Muestras de Control de Calidad: Las muestras de control de calidad duplicada (por lo menos una vez) a un mnimo de tres concentraciones (uno dentro de 3x de la LLOQ (QC bajo), uno en el rango medio (middle QC), y uno se aproxima el extremo superior de la gama (QC alta)) deben ser incorporados en cada ejecucin. Los resultados de las muestras QC proporcionar la base de aceptar o rechazar la ejecucin. Como mnimo el 67% (cuatro de seis) de las muestras de control de calidad deben estar dentro del 15% de su respectivo nominales (terico); valores de 33% de las muestras de control de calidad (no todas las repeticiones en el mismo concentracin) pueden estar fuera del 15% del valor nominal. Un intervalo de confianza enfoque dando una precisin comparable y la precisin es una alternativa adecuada. El nmero mnimo de muestras (en mltiplos de tres) debe ser de al menos 5% del nmero de muestras desconocidas o seis QC totales, lo que sea mayor. Las muestras que implican mltiples analitos no debe ser rechazada en base a los datos de uno analito no ajustarse a los criterios de aceptacin. Los datos de carreras rechazados no necesitan ser documentados, pero el hecho de que una carrera fue rechazada y la razn del fallo debe ser registrado. VII. DOCUMENTACIN La validez de un mtodo analtico debe ser establecido y verificado por estudios de laboratorio, y documentacin de finalizacin con xito de estos estudios deber indicarse la validacin de pruebas informar. SOP generales y especficos y el mantenimiento de registros bien son una parte esencial de una validacin mtodo analtico. Los datos generados para el establecimiento y mtodo bioanaltico QC deben ser los documentados y disponibles para la auditora de datos y de control. Documentacin para la presentacin a la Agencia debe incluir (1) informacin sumaria, (2) el desarrollo de mtodos y de establecimiento, (3) bioanaltico informes de la aplicacin de cualquiera de los mtodos para el anlisis de rutina de muestras, y (4) otra informacin aplicable al desarrollo del mtodo y el establecimiento y / o para el anlisis de muestras de rutina.

A. Resumen de Informacin La informacin del resumen debe incluir: Cuadro sinptico de los informes de validacin, incluyendo la validacin del mtodo analtico, parcial revalidacin y validacin cruzada informes. La tabla debe estar en secuencia cronolgica, y incluyen el mtodo de ensayo de cdigo de identificacin, tipo de ensayo, y la razn de la nueva mtodo o validacin adicional (por ejemplo, para disminuir el lmite de cuantificacin). Tabla resumen con una lista, por protocolo, los mtodos de ensayo utilizados. El nmero de protocolo, protocolo ttulo, tipo de ensayo, el cdigo de ensayo mtodo de identificacin y el cdigo de informe bioanaltica debe ser proporcionada. Un cuadro sinptico que permite referencias cruzadas de los cdigos de identificacin de mltiples deber ser previstas (por ejemplo, cuando un ensayo tiene cdigos diferentes para el mtodo de ensayo, informes de validacin y los informes bioanalticos, especialmente cuando el patrocinador y un laboratorio contratado asignar cdigos diferentes). B. Documentacin para el Establecimiento Mtodo Documentacin para el desarrollo del mtodo y el establecimiento debe incluir: Una descripcin operativa del mtodo analtico Evidencia de la pureza y la identidad de las normas de drogas, las normas de metabolitos, e internos estndares utilizados en experimentos de validacin Una descripcin de los estudios de estabilidad y los datos de apoyo Una descripcin de los experimentos realizados para determinar la exactitud, precisin, recuperacin, selectividad, lmite de cuantificacin, la curva de calibracin (ecuaciones y funciones de ponderacin utilizados, si lo hay), y los datos relevantes obtenidos de estos estudios Documentacin de intra-e inter-ensayo de precisin y exactitud En las presentaciones de NDA, informacin sobre los datos del estudio de validacin cruzada, en su caso Cromatogramas legibles anotados o espectrogramas de masas, en su caso Cualquier desviacin de los SOP, protocolos o GLP (si procede), y la justificacin de desviaciones C. Aplicacin de Anlisis de Medicamentos de rutina La documentacin de la aplicacin de mtodos validados bioanalticos para el anlisis de drogas de rutina debe incluir:

 Evidencia de la pureza y la identidad de las normas de drogas, las normas de metabolitos, e internos estndares utilizados en los anlisis de rutina Las tablas de resumen con informacin sobre el procesamiento de muestras y almacenamiento. Las tablas deben incluir la identificacin de la muestra, fechas de recogida, almacenamiento antes del envo, la informacin sobre lote envo, almacenamiento y antes del anlisis. La informacin debe incluir fechas, horas, condicin de la muestra, y cualquier desviacin de los protocolos. Las tablas de resumen de pistas de anlisis de muestras clnicas o preclnicas. La informacin debe incluyen realiza la prueba de identificacin, fecha y hora del anlisis, el mtodo de ensayo, segn los analistas, el inicio y finalizacin, duracin, equipos importantes y cambios significativos, y los posibles problemas o desviacin del mtodo establecido. Ecuaciones utiliza para volver a calcular los resultados Tablas de datos de la curva de calibracin utilizados en el anlisis de muestras de curva de calibracin y resumen datos Informacin resumida sobre los valores intra-e inter-ensayo de las muestras de control de calidad y datos sobre intra e inter-ensayo de exactitud y precisin de las curvas de calibracin y muestras de control de calidad utilizados para aceptar el proceso analtico. Grficos de control de calidad y anlisis de tendencias, adems de los datos brutos y estadsticas de resumen se anima. Tablas de datos de ciclos de anlisis de muestras clnicas o preclnicas. Las tablas deben incluir ensayo de identificacin de ejecucin, identificacin de la muestra, datos brutos y los resultados calculados de nuevo, Cdigos de integracin y / u otros cdigos de reporte. Completar cromatogramas serie de 5B20% de los sujetos con los estndares y las muestras de control de calidad a partir de esos funcionamientos analticos. Para fundamentales los estudios de bioequivalencia para la comercializacin, cromatogramas de 20% de los sujetos en serie seleccionados deben ser incluidos. En otros estudios, cromatogramas del 5% de los sujetos seleccionados al azar en cada estudio deben ser incluidos. Los sujetos cuya cromatogramas deben ser presentados deben definirse antes del anlisis de las muestras clnicas. Motivos de muestras que faltan Documentacin para anlisis repetidos. La documentacin debe incluir la inicial y repita los resultados del anlisis, el resultado comunicado, la identificacin ensayo largo, el motivo de la repeticin anlisis, el solicitante de la anlisis de repeticin, y el gestor de la que se autoriza reanlisis. Repita el anlisis de una muestra clnica o preclnica se debe realizar solamente bajo un SOP predefinido. Documentacin de los datos reinsertados. La documentacin debe incluir la inicial y repita resultados de la integracin, el mtodo utilizado para la reintegracin, el resultado comunicado, se

realiza la prueba identificacin, el motivo de la reintegracin, el solicitante de la reintegracin y la gestor autoriza la reintegracin. Reintegracin de una muestra clnica o preclnica debe ser realizar solamente bajo un SOP predefinido. Las desviaciones del protocolo de anlisis o SOP, con razones y justificaciones para la desviaciones D. Otra informacin Otra informacin pertinente para el desarrollo de mtodos tanto y el establecimiento y / o la rutina anlisis de la muestra pueden incluir: Las listas de abreviaturas y los cdigos adicionales usados, incluidos los cdigos de condicin de la muestra, Cdigos de integracin, y los cdigos de presentacin de informes Las listas de referencias y copias legibles de las referencias SOPs o protocolos que cubren las siguientes reas: Calibracin estndar de aceptacin o rechazo de los criterios Aceptacin o rechazo curva de calibracin criterios Muestra de control de calidad y ensayo de ejecutar los criterios de aceptacin o rechazo Criterios de aceptacin para los valores reportados cuando todas las muestras desconocidas se analizaron por duplicar Designaciones ejemplo de cdigo, incluyendo los cdigos de muestra clnica o preclnica y bioensayo cdigo de ejemplo Asignacin de muestras clnicas o preclnicas a los lotes de ensayo Toma de muestras, procesamiento y almacenamiento Repita los anlisis de las muestras Reintegracin de las muestras GLOSARIO Precisin: El grado de proximidad entre el valor determinado para el verdadero valor nominal o conocido bajo las condiciones prescritas. Esto a veces se denomina veracidad. Analito: un resto qumico especfico que est siendo medido, que puede ser el medicamento intacto, biomolcula o su producto derivado, metabolito, y / o degradacin en una matriz biolgica.

Analtica de ejecucin (o lotes): Un conjunto completo de anlisis y estudio de muestras con el nmero adecuado de normas y QC para su validacin. Hay varias pistas (o lotes) se puede completar en un da, o una ejecutar (o lote) puede tardar varios das en completarse. Biolgica matriz: Un material discreto de origen biolgico que puede ser muestreada y procesada en un de manera reproducible. Ejemplos son sangre, suero, plasma, orina, heces, saliva, esputo, y varios tejidos discretos. Estndar de calibracin: una matriz biolgica a la que ha sido una cantidad conocida de analito aadido o se dispar. Los patrones de calibracin se utilizan para construir las curvas de calibracin a partir de la cual las concentraciones de los analitos en QC y en el estudio de muestras desconocidas se determinan. Estndar interno: Compuesto de ensayo (s) (por ejemplo, estructuralmente similar compuesto analgico, estables marcado) aadido a los estndares de calibracin y las muestras de ambos a una concentracin conocida y constante para facilitar la cuantificacin del analito (s) objetivo. Lmite de deteccin (LOD): La menor concentracin de un analito que el procedimiento bioanaltico fiable puede diferenciarse de ruido de fondo. Lmite inferior de cuantificacin (LLOQ): La cantidad ms baja de un analito en una muestra que puede ser determinarse cuantitativamente con precisin y exactitud adecuada. Efecto de la matriz: la alteracin directa o indirecta o de interferencia en la respuesta debido a la presencia de analitos deseados (para anlisis) u otras substancias que interfieren en la muestra. Mtodo: Una descripcin completa de todos los procedimientos utilizados en el anlisis de la muestra. Precisin: El grado de concordancia (grado de dispersin) entre una serie de mediciones obtenido a partir de un muestreo mltiple de la muestra homognea mismo bajo las condiciones prescritas. Procesado: El extracto final (antes del anlisis instrumental) de una muestra que ha sido sometida a diversas manipulaciones (por ejemplo, extraccin, dilucin, concentracin). Cuantificacin rango: El rango de concentracin, incluyendo ULOQ y LLOQ, que puede ser confiablemente y reproducible cuantificado con exactitud y precisin a travs del uso de una operacin de concentracin-respuesta relacin. Recuperacin: La eficacia de la extraccin de un proceso analtico, expresada como un porcentaje de la conocida cantidad de un analito llevado a travs de los pasos de extraccin de muestras y procesamiento del mtodo. Reproducibilidad: La precisin entre dos laboratorios. Tambin representa la precisin del mtodo bajo las mismas condiciones de funcionamiento durante un perodo corto de tiempo.

Ejemplo: Un trmino que abarca controles genricos, blancos, incgnitas, y las muestras procesadas, como se describe a continuacin: Blanco: Una muestra de una matriz biolgica a la que no se han aadido analitos que se utiliza para evaluar la especificidad del mtodo de bioanlisis. Muestra de control de calidad (QC): Una muestra de pas utiliza para supervisar el rendimiento de un mtodo bioanaltico y para evaluar la integridad y la validez de los resultados de la desconocida muestras analizadas en un lote individual. Desconocido: Una muestra biolgica que es el objeto del anlisis. Selectividad: La capacidad del mtodo de bioanlisis para medir y diferenciar los analitos en la presencia de componentes que se pueden esperar a estar presente. Estos podran incluir metabolitos, impurezas, productos de degradacin, o componentes de la matriz. Estabilidad: La estabilidad qumica de un analito en una matriz dada bajo condiciones especficas de tiempo dado intervalos. Curva estndar: La relacin entre el valor de la respuesta experimental y analtica de la concentracin (tambin llamado una curva de calibracin). Aptitud del sistema: Determinacin de rendimiento del instrumento (por ejemplo, sensibilidad y cromatogrficos retencin) por el anlisis de un estndar de referencia antes de ejecutar el lote analtico. Lmite superior de cuantificacin (ULOQ): La cantidad ms alta de un analito en una muestra que puede ser determinarse cuantitativamente con precisin y exactitud. Validacin: Lleno de validacin: Establecimiento de los parmetros de validacin para aplicar al anlisis de la muestra para la mtodo bioanaltico para cada analito. Parcial de validacin: La modificacin de mtodos validados bioanalticos que no requieren necesariamente para la revalidacin completa. Cross-validacin: validacin de parmetros de comparacin de dos mtodos bioanalticos.