Licenciatura En Qumica Industrial

Semestre: Sexto

Bioqumica General Dr. David Betancur Ancona

Prctica No. 5 Identificacin de Aminocidos

Integrantes. Calzada Panti Isis Amairani Llanes Eun Nicte-H Asuncin Lpez Snchez Evie Guadalupe

Fecha de entrega: 14 de Marzo de 2013

Prctica No. 5 Identificacin de Aminocidos Objetivo. Determinar la presencia de aminocidos de una muestra de clara de huevo. Introduccin. Los aminocidos son sustancias que tienen como caractersticas, tener en su molcula un grupo amino y un acido carboxlico, de los cuales se conocen ms de 140 que se encuentran en distintos tejidos de origen animal y vegetal, as como en microorganismos. De todos estos, solo 20 funcionan como monmeros o constituyentes bsicos de las protenas y se caracterizan por tener -aminocidos (el amino y el carboxilo se localizan en el carbono de la molcula). Tambin existen los -aminocidos (el amino est en posicin en relacin con el carboxilo) que no intervienen en la sntesis de protenas. En la mayora de los -aminocidos, presentan una estructura que contiene un carboxilo y un grupo amino primario, son la prolina y la hidroxiprolina, que son en realidad iminocidos por tener un amino secundario. Los aminocidos se clasifican segn su naturaleza qumica y las propiedades de su grupo R. cada radical tienen caractersticas definidas y diferentes que se reflejan en las del aminocido, como puede ser la solubilidad, la reactividad, la ionizacin, la polaridad. Con base en esto, dichos compuestos se han dividido en hidrfilos e hidrfobos de acuerdo con su solubilidad en el agua; en acidos, bsicos y neutros segn su ionizacin, y en indispensables y dispensables, segn la necesidad que tiene el hombre de ellos. Existen numerosas pruebas colorimtricas para la identificacin de los aminocidos, se describen a continuacin: Reaccin de Biuret La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces. Da positiva esta reaccin en todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas, quedando en el fondo del tubo una

tonalidad azul cielo (reaccin positiva) y una coloracin amarilla (reaccin negativa) al no haber presencia de protenas. Reaccin Xantoprotica Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos reaccionan con cido ntrico concentrado formando nitro-derivados de color amarillo o anaranjado por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptfano. Reaccin de Millon La reaccin de Millon es especfica para el aminocido tirosina, que contiene un anillo de benceno al que se une un grupo hidrxido. Un color rojo brillante indica la presencia de tirosina. Reaccin de Sakaguchi El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con soluciones de -naftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos. Reaccin de Hopkins-Cole El anillo indlico presente en la cadena lateral de los alfaaminocidos libres o haciendo parte de pptidos y protenas se puede reconocer mediante reaccin con el cido glioxlico a pH cido, puesto que forma complejos de coloracin violeta o amarillo violeta, permitiendo as identificar al triptfano. Reaccin de coagulacin por calor. La albumina se transforma por accin al calor en un slido blanco, este fenmeno se conoce como coagulacin. El proceso de coagulacin, es un proceso irreversible por el cual se modifica qumicamente la albmina. Se dice que se ha desnaturalizado. Reaccin con acetato de Plomo alcalino Los Aminocidos azufrados como Metionina, Cisteina y Cistina se reconocen por la formacin de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.

Materiales.

Cantidad 8

Material Tubos de ensaye de 13 x100 mm

Cantidad 3

Material Vaso de precipitado (250 mL) Gradilla

Cantidad 1

Material Varilla de vidrio

Pipetas graduadas de 10 mL Agitador magntico

Pipetores de 10 mL

Pinza para tubo de ensaye Piseta

Esptula

Parrilla de de agitacin y calentamiento Vaso de ppt de 250 mL

Escobilln para tubo de ensayo

Reactivos. Sulfato cprico al 10 %, NaOH al 10%, NaOH al 40%, NaOH 2 M, HNO3 al 25%, Etanol, Acido Actico, Acido sulfrico QP., Reactivo de Millions, Acetato de Plomo saturado, alfanaftol en etanol al 1%, hipoclorito de sodio. Muestra. Clara de huevo c.b.p. 100 mL

Preparacin de Reactivos Solucin proteica Se disuelven 50 mL de la clara de huevo en 50 mL de agua destilada.

Procedimiento Reaccin de Biuret Esta reaccin es caracterstica del enlace peptdico. 1. 2. 3. 4. Se aaden a un tubo de ensayo 3 mL de la solucin proteica. Se aaden 5 gotas de sulfato cprico al 10% y se agita. Se aaden 2 mL de Hidrxido de sodio al 10 %. Se agita y se observa lo que pasa.

Reaccin Xantoproteica Esta reaccin es caracterstica de aminocidos heterocclicos, tales como fenilalanina, tirosina, triptfano, etc. 1. Se aaden a un tubo de ensayo 3 mL de la solucin proteica. 2. Se aade lentamente 1 mL de acido ntrico concentrado. 3. Se agrega cuidadosamente gota a gota. Solucin de Hidrxido de Potasio al 25 % hasta el cambio de coloracin. 4. Se agita para unificar el color obtenido. Reaccin de coagulacin por calor. 1. Se calienta por 5 mL de la solucin proteica durante 2 minutos. 2. Se agregan 10 mL de etanol. Reaccin de HOPKINS-COLE La formacin de un anillo color prpura entre la superficie de separacin de los lquidos indicar la presencia de Triptfano. 1. Se aade a un tubo de ensayo 1mL de la solucin proteica. 2. Se aade 2 mL de acido actico Q.P. y se agita. 3. Se aade por las paredes y sin agitar, 1 mL de acido sulfrico concentrado. 4. Se agrega cuidadosamente gota a gota, solucin de Hidrxido de Sodio al 25 % hasta el cambio de coloracin. 5. Se agita para uniformizar el color obtenido.

Reaccin de Millon La formacin de un color rojo indicara la presencia de aminocidos con anillo fenlico como la tirosina. 1. Se aade a un tubo de ensayo 1 mL de la solucin proteica. 2. Se aade 1 mL de reactivo de Millon 3. Se calientan para observar el cambio de coloracin a rojo. Reaccin de acetato de plomo en medio alcalino La formacin de un precipitado de color caf indicara la presencia de aminocidos azufrados. 1. 2. 3. 4. 5. Se aade a un tubo de ensayo 2 mL de la solucin proteica. Se aaden 2 gotas de NaOH al 40 %. Se hierve durante 2 minutos, agitando constantemente. Se aaden 6 gotas de Acetato de plomo saturado. Se observo la coloracin.

Reaccin de SAKAGUCHI La formacin de un anillo color brillante, indicara la presencia de Arginina. Es esencial correr una prueba de control. 1. Se aade a un tubo de ensayo 3 mL de la solucin proteica. 2. Se aaden 1 mL de NaOH 2 M. 3. Se aaden 2 gotas de de alfanaftol en etanol al 1 % y 8 gotas de solucin de hipoclorito de sodio Q.P. y se agita.

Resultados y discusiones Se utilizaron las siguientes pruebas; Biuret, Xantoproteica, Coagulacin por calor, HOPKINS-COLE, Millon, Acetato de plomo en medio alcalino y SAKAGUCHI, para su posterior identificacin de los diferentes aminocidos. Reaccin de Biuret Reaccin xantoproteica Reaccin de coagulacin por calor. Reaccin de HOPKINS-COLE Reaccin de Millon

Reaccin de acetato de plomo en medio alcalino Reaccin de SAKAGUCHI

Conclusiones

Bibliografa Salvador Badui Dergal. Qumica de los Alimentos. Editorial ALHAMBRA MEXICANA. Tercera Edicin. 1996. Pag 125-132 http://books.google.com.mx/books?id=xAdKn8HISr0C&pg=PA385&dq=Rea cci%C3%B3n+de+coagulaci%C3%B3n+por+calor.&hl=es&sa=X&ei=rcNAUfe 5F8aB2gWK8oDICw&ved=0CCsQ6AEwAA#v=onepage&q=Reacci%C3%B3 n%20de%20coagulaci%C3%B3n%20por%20calor.&f=false pag 385 http://books.google.com.mx/books?id=dAbMDrXcTHsC&pg=PA97&dq=Re acci%C3%B3n+con+acetato+de+Plomo+alcalino&hl=es&sa=X&ei=aMdAUY IlgpTZBa6RgbgF&ved=0CC4Q6AEwAA#v=onepage&q=Reacci%C3%B3n%2 0con%20acetato%20de%20Plomo%20alcalino&f=false pag 96 y 97