ACIDO URICO

Mtodo Enzimtico Punto Final Solo para uso diagnostico In vitro

SIGNIFICADO CLINICO: 1-3 La cuantificacin de cido rico es comnmente usada en el diagnstico de gota. Niveles altos (hiperuricemia) se pueden presentar en leucemia, policitemia, arteriosclerosis, diabetes, hipotiroidismo y condiciones asociadas con una reduccin en la funcin renal; Niveles bajos estn presentes en pacientes con la enfermedad Wilsons. MTODO: El cido rico ha sido histricamente determinado por mtodos colorimtricos con variaciones de fosfotungstato 4,5 y reduccin de hierro 6,7. Metodologas recientes usan las enzimas uricasa y peroxidasa, y un cromgeno para producir un producto final colorimtrico, demostrando mayor especificidad para la determinacin de cido rico 8,9. El procedimiento de PAS DIAGNOSTICA usa uricasa, peroxidasa y el cromgeno TBHB para producir un producto final colorimtrico. El producto final colorimtrico producido en esta reaccin puede ser medido a 520 nm y es proporcional a la concentracin de cido rico en la muestra. PRINCIPIO: Uricasa Acido Urico + O2 + H2O Peroxidasa H2O2 + 4-AAP + TBHB Quinoneimina + H2O Alantona + CO2 + H2O2

PARMETROS: Temperatura Longitud de onda Tipo de Ensayo Direccin Relacin: Muestra/Reactivo Volumen de Muestra Volumen de Reactivo Tiempo de incubacin

37C 500 nm Punto final Creciente 1:50 0.003mL (3 L) 0.150 (150 L) 5 minutos

CALCULOS: Abs: Absorbancia Absmuestra x Concentracion del estndar (mg/dL) = C cido rico en mg/dL Absestndar Ejemplo de clculos: Abs. Muestra = 0.071 Abs. Estndar = 0.302 Concentracin del Estndar = 5.0 0.071 x 5.0 = 1.18 mg/dL cido rico 0.302 CALIBRACION: Esta prueba debe ser calibrada utilizando el Calibrador de Qumica de PAS DIAGNOSTICA (P/N: CAL1-5) o un estndar apropiado. CONTROL DE CALIDAD: La integridad de la reaccin debe ser evaluada usando un control de dos niveles con valores conocidos como el PAS DIAGNOSTICA Control de Qumica (P/N: CON1-5 y CON2-5). LIMITACIONES: Valores superiores a 25 mg/dL debe ser diluida la muestra 1:1 con solucin salina y evaluada nuevamente, multiplicando el resultado final por 2. VALORES DE REFERENCIA: 11 Nios: 2.0- 5.5 mg/dL Adulto Masculino: 3.5 7.2 mg/dL Adulto femenino: 2.6 6.0 mg/dL Se recomienda que cada laboratorio establezca su rango de normalidad7. DESEMPEO: Linealidad: Es linear de 0.2 a 25 mg/dL, cuando se evala de acuerdo a las recomendaciones del ensayo. Comparacin del Mtodo: Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados entre ste procedimiento y uno similar: Cromgeno Concepto TBHB DCHBS Nmero de pares de muestras 58 50 Rango de muestras 1.70 20.70 (mg/dL) 2.20 11.30 (mg/dL) Coeficiente de Correlacin 0.9792 0.9977 Pendiente 1.044 1.117 Intercepto 0.00 (mg/dL) -0.58 (mg/dL) Precisin: Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Promedio (mg/dL) 6.60 11.31 20.12 S.D. (mg/dL) 0.15 0.24 0.30 C.V. (%) 2.2 2.1 1.5 Entre Series: Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 S.D. (mg/dL) 0.27 0.47 0.51 C.V. (%) 4.1 4.1 2.5 Sensibilidad: Un factor de calibracin aproximado a 58.66 fue obtenido, lo cual es equivalente a una sensibilidad de 0.01704 Abs por mg/dL. NOTAS: Este ensayo requiere el uso de un Suero Estndar o Estndar apropiado. Los volmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos. Estudio realizado en Synchron CX. REFERENCIAS:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Searcy RL: Diagnostic Biochemistry. McGraw-Hill, New York, NY, (1969). Henry RJ, Common C, Winkelman JW (eds), Clinical Chemistry: Principles and Techniques. Harper & Row, Hagerstown, MD, (1974). Balls ME: Adv Clin Chem 18:213, (1976). Folin, D., Dennis, W., J. Biol. Chem. 13:469 (1913). Caraway, W.T., Clin. Chem. 4:239 (1963). Morin, L.G., J. Clin. Path. 60:691 (1973). Morin, L.G., Clin. Chem. 20:51 (1974). Klackar, H.M., J. Biol. Chem. 167:429 (1947). Praetorius, E., Pouldon, H., Scand. J. Clin. Invest 5:273 (1953). Young, D.S., et al. Clin. Chem. 21:1D (1975). nd Tietz Textbook of Clinical Chemistry, WB Saunders Co., Philadelphia PA, 2 Ed (1994).

El cido rico es oxidado a alantona por la accin de la uricasa con la produccin de H2O2. El peroxido reacciona con la 4-aminoantipirina (4-AAP) y THBH en la presencia de peroxidasa para formar un colorante de quinoneimina. El producto resultante en la absorbancia a 520nm (500-550nm) es proporcional a la concentracion de acido urico en la muestra. CONTENIDO Y COMPOSICIN: Reactivo: 4-Aminoantipirina 0.5 mM, TBHB 1.75mM, Uricasa >32 U/L, Peroxidasa (rbano) >1300U/L, Estabilizadores y aditivos no reactivos, pH (7.8 8.2). Estndar: Acido rico 5mg/dL. Evite ingerir el reactivo, la toxicidad no ha sido determinada. Contiene cida de sodio (0.05%) como preservativo y puede reaccionar con la tubera de plomo o cobre. Enjuague las tuberas de drenaje con abundante agua. PREPARACIN DEL REACTIVO: El monoreactivo y el estndar estn listos para su uso. ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO: Conservado de 2-8C el reactivo es estable hasta la fecha indicada en la etiqueta. DETERIORO DEL REACTIVO: No utilice este reactivo si: 1. El reactivo reconstituido tiene una absorbancia del blanco mayor de 0.5 a 500 nm. 2. El reactivo esta turbio. 3. El reactivo no cumple con los controles establecidos. RECOLECCIN Y CONSERVACIN DE LA MUESTRA: Suero libre de hemolisis, el cido rico en suero es estable por 3 das a 2-8C y hasta 6 meses a -20C.2 INTERFERENCIA: Los siguientes resultados fueron obtenidos en estudios para determinar el nivel de interferencia de hemoglobina, bilirrubina, y lipemias. Hemoglobina: No interferencia (10%) hasta 200 mg/L. Bilirrubina: No interferencia (10%) hasta 20.9 mg/dL. Lipemias: No interferencia (10%) hasta 1020 mg/dL. Un nmero de drogas y substancias afectan la determinacin de Acido rico. 10 EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO: 1. Analizador de qumica clnica con longitud de onda de 500 nm y temperatura de 37C y sus consumibles. 2. Material control (suministrados por PAS DIAGNOSTICA). PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO: Procedimiento para uso manual. 1) Atemperar el reactivo a temperatura ambiente. 2) Dispensar 1000 L del reactivo en cada tubo (Estndar, Controles y muestra) e incubar a 37C. 3) Agregar 20 L de Estndar, muestra problema y/o suero control al tubo correspondiente. Mezclar, e incubar a 37C durante 10 minutos 4) Ajustar a cero el espectrofotmetro con blanco de reactivo a 500 nm. 5) Leer la absorbancia exactamente a los 10 minutos despus de la adicin del estndar, controles y muestras. Procedimiento automatizado: Para este procedimiento siga las instrucciones contenidas en el manual de operacin del analizador y las aplicaciones de los reactivos PAS DIAGNOSTICA para los analizadores ms comunes.

PI: URI2P.JS02
PAS DIAGNOSTICA CRA 49C No. 76 224 BARRANQUILLA-COLOMBIA Tel: (57-5) 3018686 Fax: (57-5) 3580170 www.pasdiagnostica.com

REV: 04/14/09

URIC ACID
Enzymatic method End Point
Only for in vitro diagnostic use

CLINICAL SIGNIFICANCE1-3 Uric Acid measurements are most commonly used in the diagnosis of gout. Increased levels (hyperuricaemia) may be observed in leukemia, polycythaemia, atherosclerosis, diabetes, hypothroidism, and conditions associated with decreased renal funtion. Decreased levels are present in patients with Wilsons disease. METHODOLOGY Uric Acid has historically been determined by variations of colorimetric phosphotungstate 4, 5 and iron reduction 6, 7 methods. Recent methodologies use the enzymes uricase and hydrogen peroxidase, along with a chromogen to yield a colorimetric end product. These methods demonstrate better specificity for uric acid, 8, 9. The PAS procedure uses uricase, peroxidase and he chromogen TBHB to yield a colorimetric end product. The colorimetric end product produced in this reaction can be measured at 520nm and is proportional to the uric acid concentration in the sample. PRINCIPLE Uricase Uric Acid + O2 + H2O H2O2 +4-Aminoantipyrine+TBHB Allantoin + CO2 + H2O2 Peroxidase Quinoneimine + H2O

CALCULATIONS: Abs = Absorbance Abs (patient) x Concentration of standard = Uric Acid Abs (standard) (mg/dL) (mg/dL) Example: Abs patient = 0.071 Abs standard = 0.302 Concentration of standard = 5.0 mg/dL. 0.071 x 12.1 = 1.18 mg/dL Uric Acid 0.302 CALIBRATION A calibrator such as PAS DIAGNOSTICA Chemistry Calibrator (P/N: CAL1-5), or an appropriate aqueous standard should be used to calibrate this test. QUALITY CONTROL The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with known values such as PAS DIAGNOSTICA Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and CON2-5). LIMITATIONS Values above 25 mg / dL should be diluted sample 1:1 with saline and tested again, multiplying the result by 2. EXPECTED VALUES 12 Child: 2.0 5.5 mg/dL Adult Male: 3.5 - 7.2 mg/dL Adult Female: 2.6 6.0 mg/dL It is recommended that each laboratory establish its range of normalidad7. PERFORMANCE Linearity: When run as recommended the assay is linear from 0.2 to 25.0 mg/dL. Method Comparison: Studies performed between this procedure and similar methodologies yielded the following results: Concept Number of samples pairs Range of samples Correlation Coefficient Slope Intercept Precision: Within Run Mean (mg/dL) S.D. (mg/dL) C.V. (%) Total S.D. (mg/dL) C.V. (%) Chromogen TBHB DCHBS 58 50 1.70 20.70 (mg/dL) 2.20 11.30 (mg/dL) 0.9792 0.9977 1.044 1.117 0.00 (mg/dL) -0.58 (mg/dL)

Uric Acid is oxidized by Uricase to allantoin and hydrogen peroxide. TBHB + 4aminoantipyrine + hydrogen peroxide, in the presence of peroxidase, produce a quinoneimine dye that is measured at 520nm (500-550). The color intensity at 520nm is proportional to the concentration of Uric Acid in the sample. COMPOSITION AND CONTENT Reagent: 4-Aminoantipyrine 0.5 mM, TBHB 1.75 mM, Uricase (Bacillus Sp.) >32 U/L, Peroxidase (Horseradish) >1300 U/L, Non-reactive stabilizers and fillers, pH (7.8 8.2). Standard: Urid Acid 5mg/dL. Avoid eating the reagent, the toxicity has not been determined.Reagent contains Sodium Azide (0.05%) as preservative. In a dry state may react with copper or lead plumbing to form explosive metal azides. Upon disposal, flush with large amounts of water to prevent azide build up. REAGENT PREPARATION The monoreactivo and standard are ready for use. STABILITY AND STORAGE Conserved 2-8 C, the reagent is stable until the date indicated on the label. REAGENT DETERIORATION Do not use the reagent if: 1. The reagent is turbid. 2. The reagent blank has an absorbance of 0.50 or greater at 500nm. 3. The working reagent does not meet stated performance parameters. SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE Haemolysis-free serum, the serum uric acid is stable for 3 days at 2-8 C and up to 6 months at -20 C.2 INTERFERENCE Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin and lipemia were carried out, the following results were obtained: Hemoglobin:No significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 200 mg/dL. Bilirubin:No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 20.9 mg/dL. Lipemia:No significant interference ( 10%) from lipemia up to 1020 mg/dL measured as triglycerides. A number of drugs and substances affect the determination of uric acid. ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED 1. Clinical chemistry analyzer with a wavelength of 500 nm and 37 C and its consumables. 2. Control material (supplied by PAS DIAGNOSTICA). ASSAY PROCEDURE For this procedure follow the instructions in the manual operation of the analyzer and reagents applications of PAS DIAGNOSTICA Analyzer most common. PARAMETERS Temperature Wavelength Assay type Direction Sample / rgt ratio Sample vol Reagent vol Incubation time 37C 500 nm End point Increase 1: 50 0.003mL. (3 L) 0.150 mL (150 L) 5 min
10

Level 1 6.60 0.15 2.2 Level 1 0.27 4.1

Level 2 11.31 0.24 2.1 Level 2 0.47 4.1

Level 3 20.12 0.30 1.5 Level 3 0.51 2.5

Sensitivity: A calibration factor of approximately 58.66 was obtained, which is equivalent to a sensitivity of 0.01704 Abs per mg/dL. NOTES This test requires the use of a Standard or Standard Serum appropriate. The volumes of sample and reagent can be modified proportionately to fit the requirements of different instruments. Study conducted in Synchron CX.
REFERENCES 1. Searcy RL: Diagnostic Biochemistry. McGraw-Hill, New York, NY, (1969). 2. Henry RJ, Common C, Winkelman JW (eds), Clinical Chemistry: Principles and Techniques. Harper & Row, Hagerstown, MD, (1974). 3. Balls ME: Adv Clin Chem 18:213, (1976). 4. Folin, D., Dennis, W., J. Biol. Chem. 13:469 (1913). 5. Caraway, W.T., Clin. Chem. 4:239 (1963). 6. Morin, L.G., J. Clin. Path. 60:691 (1973). 7. Morin, L.G., Clin. Chem. 20:51 (1974). 8. Klackar, H.M., J. Biol. Chem. 167:429 (1947). 9. Praetorius, E., Pouldon, H., Scand. J. Clin. Invest 5:273 (1953). 10. Young, D.S., et al. Clin. Chem. 21:1D (1975). 11. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, WB Saunders Co., Philadelphia PA, 2nd Ed (1994).

PI: URI2P.JS01

REV: 04/14/09

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