METODOLOGAS DE EXTRACCIN.

En trminos generales, los objetivos de la preparacin de muestra son por un lado la eliminacin de los componentes de la matriz que no interesan para el anlisis (interferencias) y por otro concentrar los analitos de inters para permitir su deteccin. El tipo de preparacin depender de la matriz y del instrumento de anlisis. Dentro de las metodologas de extraccin tenemos dos tipos fundamentales: extraccin en fase lquida y extraccin en fase slida. La extraccin lquido-lquido (ELL) es una de las operaciones bsicas ms importantes en la separacin de mezclas homogneas lquidas y se define como el proceso de separacin en el cual un soluto se reparte o distribuye entre dos fases diferentes puestas en contacto. En control de dopaje se aplica para aislar los compuestos de inters o analitos de la matriz urinaria. La extraccin lquido-lquido se basa en la diferente solubilidad de uno o ms componentes en dos fases lquidas no miscibles o parcialmente miscibles que se orina + orina ELL ponen en contacto. Generalmente, se agentes aplica para aislar componentes de dopantes disoluciones acuosas en un disolvente orgnico. Al poner las dos fases en Disolvente orgnico + contacto se establece un equilibrio o agentes dopantes reparto de los solutos entre las dos fases en funcin de la solubilidad relativa de dichos solutos en las fases acuosa y orgnica. En el equilibrio, el potencial qumico del soluto es el mismo en ambas fases y la relacin de actividades en cada fase nos da la constante de equilibrio o constante de distribucin (K). En la prctica, la constante de distribucin se aproxima a una relacin de concentraciones del soluto entre las fases acuosa y orgnica que es independiente de la cantidad total de soluto y que viene dada por la expresin:
Disolvente orgnico

aorg K(T)= aaq

[S]org [S]aq

Si el soluto no participa en ningn otro equilibrio secundario (como por ejemplo un equilibrio cido-base) el rendimiento del proceso de extraccin puede obtenerse a partir de la constante de distribucin (K).

En la extraccin lquido-lquido la preparacin de la muestra es simple y rpida y permite procesar un nmero elevado de muestras de forma simultnea por el operador, si bien tambin admite la automatizacin del proceso. La extraccin en fase slida (EFS) se basa en la participacin selectiva de uno o ms componentes en dos fases, una de las cuales es un slido adsorbente. La segunda fase es generalmente un lquido. El slido adsorbente suele estar contenido en tubos desechables con forma de jeringa que estn disponibles comercialmente en muchos tamaos distintos llamados cartuchos. No obstante, en el mercado existen otros formatos, (como por ejemplo, el de pocillos).
Reservorio de cristal o polipropileno (Capacidad variable)

Filtro de polietileno, acero inoxidable o Tefln (Poros de 20m)

Resina SPE

Punta Luer estndar

En este tipo de extraccin es fundamental la seleccin de la fase slida, en funcin de la fase slida podemos clasificar la extraccin EFS en diferentes tipos:

Fase reversa: la extraccin EFS en fase reversa se caracteriza porque la fase lquida es polar y la fase slida es apolar, de modo que los analitos no-polares o de polaridad media son retenidos en la fase slida. La fase slida es una base slica: c18, c8, c4, Fenil, CN o base carbono o polmeros (estireno-divinilbenceno) como alternativa a la slica. El tipo de interacciones que se dan entre los analitos y la fase slida son de tipo hidrofbicas: apolar-apolar, Wan der Vals o de dispersin de fuerzas y tipo puente de hidrgeno (SiOH) e intercambio catinico (SiO- a pH>4) como interacciones secundarias en la base slica. La interaccin hidrofbica es rota por un disolvente (generalmente acetonitrilo o metanol) producindose la elucin de los analitos. Las interacciones secundarias de slica se rompen con la adicin de metanol o bien mediante el ajuste del pH del eluyente para las interacciones de tipo puente de hidrgeno e intercambio catinico respectivamente. Fase normal: la extraccin EFS en fase normal se caracteriza porque la fase lquida es apolar o de polaridad media (acetona, hexano, disolventes clorados) y la fase slida es polar, de modo que son los analitos polares lo que quedan retenidos en la fase slida. El tipo de interacciones que se dan entre los analitos y la fase slida son de tipo hidroflicas: polar-polar, puente de hidrgeno, interacciones p-p, dipolodipolo y dipolo-dipolo inducido. La interaccin hidroflica es rota por un

disolvente, donde el volumen de fase mvil necesario para la elucin del analito es inversamente proporcional a la polaridad del disolvente. Intercambio inico: la extraccin EFS de tipo intercambio inico se caracteriza porque la fase slida contiene grupos cargados. La fase lquida generalmente es acuosa, si bien puede ser tambin orgnica. En funcin de la naturaleza de la fase slida se distingue entre intercambio aninico: SAX, MAX (aminas cuaternarias), WAX (NH2), e intercambio catinico: SCX, MCX (cidos sulfnicos), WCX (COOH). El tipo de interacciones que se dan entre los analitos y la fase slida son interacciones de tipo electrosttico. Los grupos cargados del analito se anclan a grupos con carga opuesta en la fase slida. El analito debe estar cargado en la disolucin, por lo que el pH de la muestra debe ser ajustado antes de hacerla pasar por la resina. El intercambio aninico permite aislar compuestos cidos, mientras que el intercambio catinico se aplica para compuestos bsicos. La elucin de los analitos tiene lugar cuando se interrumpe la interaccin electrosttica, bien por modificacin del pH del eluyente o bien incrementando la concentracin de sal (>0.1M). En la extraccin en fase slida la preparacin de muestra es simple, fcilmente automatizable, requiere poco volumen de disolventes, es reproducible y presenta mayor especificidad y selectividad que la extraccin lquido-lquido ya que permite utilizar diferentes mecanismos de anclaje a la fase slida. Adems permite la extraccin simultnea de compuestos con pKas muy diferente entre s lo cual la convierte en una metodologa ms universal que la extraccin lquido-lquido.