Cdigo: I-FQUI-LAC-04 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de coproanlisis

Fecha de emisin: 5/enero/2009

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1.- OBJETIVO
Conocer las tcnicas utilizadas en el rea de coproanlisis as como la manera de reportar los resultados obtenidos.

2.- ALCANCE
Aplica a toda muestra destinada al rea de coproanlisis para su estudio

3.- DESCRIPCIN DE LA OPERACIN

POLITICAS PARA EL PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS

Toda muestra que tenga un cultivo ser procesada primero en el rea de microbiologa. Para los anlisis coproparasitoscpicos, se aceptaran muestras frescas o conservadas en refrigeracin de no ms de 2 das. No se aceptaran ms de 2 muestras por paciente en el da. En caso de que la muestra presente otros estudios adems del copranlisis (como citologa y sangre oculta) se realizaran primero estas pruebas y luego se realizar el coproanlisis. En el formato de la hoja de trabajo, los resultados se reportan indicando el nmero de orden, el nmero de muestra correspondiente y el nombre del paciente. Posteriormente, los resultados se capturan en el sistema LABS. El rea participar en el programa externo PACAL. Para el procesamiento de la muestra, el qumico deber portar su bata de laboratorio y guantes para proteccin. Las muestras se procesan en la campana de extraccin. Una vez terminado el anlisis de la muestra, se cierran los frascos y se desechan en las bolsas rojas de RPBI. Todo material que entre en contacto con la muestra debe ser tratado como riesgoso y ser desechado tras su uso. Una vez finalizado el trabajo del da, se entregaran las hojas de trabajo firmadas por el responsable de rea a la de recepcin para su verificacin por parte del responsable sanitario y posterior resguardo en el rea de coproanlisis.

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AMIBA EN FRESCO

El diagnostico de la amibiasis se realiza observando la presencia de trofozotos o quistes de Entamoeba histolytica. En el caso de la amibiasis intestinal aguda, se deber buscar a los trofozotos en una serie de al menos 3 muestras sucesivas de materia fecal mediante el examen directo. Toma directa Cuando se trata de lactantes (menores de 2 aos) el qumico realiza la toma directa. Se introducen una cucharilla rectal o hisopo estril en el recto del lactante (aprox. 5 cm), se har girar suavemente para obtener la muestra de materia fecal, se saca y se deposita en un tubo de ensaye que contenga aproximadamente 2 mil de solucin salina 0.85% (el volumen deber ser suficiente para cubrir la muestra recolectada). No es conveniente obtener la muestra del paal, porque con frecuencia ya se habrn destruido los trofozotos. Luego de realizar la toma directa de la muestra, se centrfuga durante 5 min. a 1000 rev/min. Posteriormente se decanta el sobrenadante y observar el sedimento con el objetivo de 10x y 40x. En caso de que el sobrenadante presente mucha turbidez, se mezcla para homogenizar y se toma una gota para la observacin microscpica. Si existen dudas se puede observar con lugol o con tincin AMA (Azul de metileno amortiguado). Muestra fresca. Dentro de la campana de extraccin, se destapa el frasco con la muestra y se macera con solucin salina 0.85% o agua destilada. Posteriormente, se deja reposar durante 5 min. Se toma una gota del sobrenadante y se coloca en el portaobjetos. Luego se coloca un cubre y se lee en objetivo de 10x y 40x. Si existen dudas se puede observar con lugol o con tincin AMA. Resultado Se reporta en el formato bsqueda de parsitos (F-FQUI-LAC-015) como negativo si no se encontr ningn parsito. En caso de encontrarse alguno parasito se informa como Trofozotos de ... en caso de encontrarse tales o quistes de ... indicando el gnero y la especie del parsito observado.

TCNICA DE GRAHAM PARA BUSQUEDA DE OXIUROS (Enterobius vermicularis).

Consiste en el estudio de del mucus anal, recogido en forma seriada. El qumico debe adherir a la zona marginal del ano a parte adhesiva de una cinta de scotch transparente y pegarlo luego en un portaobjeto. Esto debe realizarse de preferencia por la maana antes de las deposiciones. Posterior a la toma de muestra se procede a la observacin de las placas obtenidas mediante el objetivo de 10x y 40x. Esta tcnica se recomienda para el reconocimiento de los huevos de oxiuros.

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Resultado Se reporta en el formato bsqueda de Parsitos (F-FQUI-LAC-015) como negativo en el caso de no observarse ningn parsito. En caso de encontrase alguno se informar como huevecillos de Enterobius vermicularis en caso de encontrase tales formas o Larvas de Enterobius vermicularis. AZUCARES REDUCTORES

La muestra ideal para este estudio debe ser de reciente emisin. Se le adiciona a la muestra agua destilada o solucin salina 0.85% y se macera. Con una pipeta Pasteur, se toma de 3 a 5 ml de la muestra macerada y se coloca en un tubo de vidrio de 15 x 1.5 cm. En un tubo de vidrio, se procede a realizar la prueba como se indica en el instructivo de las tabletas Clinitest para determinacin de glucosa en orina. El tubo debe ser lo suficientemente grande debido a que se produce una fermentacin. Resultado Se reporta en el formato de Coproanlisis (F-FQUI-LAC-014). El color de la reaccin, se coteja con el bloque de color proporcionado por el fabricante. Tomando en consideracin el color de la reaccin que mas se acerque al bloque de colores, se anota el resultado sustituyendo el valor numrico con el de cruces de acuerdo a los siguientes datos: Negativa % % % 1% 2% Negativo Huellas Positivo + Positivo ++ Positivo +++ Positivo ++++

SANGRE OCULTA EN HECES FECALES

Se realiza siguiendo las instrucciones proporcionadas en el instructivo de la prueba de Hematest para sangre oculta en heces fecales. Esta prueba se realiza por duplicado en las tarjetas. Resultado Se reporta en el formato Coproanlisis (F-FQUI-LAC-014) de acuerdo a la intensidad visual del color azul observado en el intervalo de los 2 min posteriores a la realizacin de la prueba y va desde positiva + hasta positiva +++

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PH DE LAS HECES FECALES

La apreciacin de la reaccin de las heces se hace con papel tornasol o con papeles indicadores de pH. Es neutra por lo general, o a veces ligeramente cida o alcalina. El pH vara de 6.9 a 7.2. A papel tornasol, las heces generalmente se manifiestan neutras o algo alcalinas. Procedimiento Posterior a la maceracin con solucin salina 0.85% o agua destilada se sumerge la tira indicadora de pH (Universalindikator de Merck) y se compara con la escala proporcionada por el fabricante. El resultado se anota en el formato de Coproanlisis (F-FQUI-LAC-014)

CITOLOGA EN MOCO FECAL Y LEUCOCITOS EN MOCO FECAL.

En condiciones normales, las heces no suelen contener clulas epiteliales, ni leucocitos, ni eritrocitos. Es fcil apreciar la presencia de leucocitos. En la deposicin mucosa de los que sufren alergia intestinal se observa un exceso de eosinfilos. La presencia de clulas epiteliales es un indicador de irritacin gastrointestinal. La observacin microscpica del moco fecal en fresco con azul de metileno tiene utilidad para evaluar la celularidad de la muestra y la posible presencia de parsitos. Aunque la positividad de la citologa de moco fecal es relativamente baja en la mayora de las diarreas agudas que son de etiologa viral, al igual que el bajo porcentaje del aislamiento en coprocultivos Procedimiento Se realiza mediante la tincin del Azul de metileno amortiguado (AMA). Se toma una pequea porcin de la muestra (de preferencia del moco presente en la muestra) y se realiza un extendido en un portaobjeto. A este extendido se le adiciona una gota del colorante AMA y se cubre con el cubreobjeto. Se deja reposar de 2 a 5 min y se observa a microscopio con aumento de 40x. En caso de duda se puede repetir la tincin tomando el moco de otra parte de la muestra. Esta tcnica se debe realizar antes de la maceracin con agua destilada o solucin salina. Resultado Se realiza un conteo de 100 clulas y se informa el porcentaje de clulas observadas en el formato de citologa (F-FQUI-LAC-021). En caso de no encontrarse leucocitos en la muestra se informar como No se observo clularidad. En caso de encontrarse un numero mnimo de leucocitos polimorfonucleares en la muestra se informa como Escasos polimorfonucleares o Escasos mononucleares dependiendo de la celularidad observada. En casos de encontrase las clulas necesarias para realizar el conteo, reporta de la siguiente manera: polimorfonucleares ________ % Mononucleares ___________ % Si existe duda sobre la presencia de Eosinfilos en la muestra, se realiza un extendido del moco fecal (que no debe de haber entrado en contacto con agua), se deja secar y se realiza la tincin de Hansen

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(ver manual del rea de hematologa). Se realiza nuevamente el conteo, indicando el porcentaje de Eosinfilos observados a la cuenta anteriormente realizada. COPROANALISIS

El examen de las heces comprende dos grandes captulos de la investigacin analtica clnica: la coprologa qumico-funcional y la coproparasitologa. El examen en fresco (la muestra es diluida con solucin salina 0.85%) es til para la bsqueda de trofozotos con movilidad. La tcnica directa (la muestra es diluida en Lugol) es til en poblaciones con alta densidad de parsitos Procedimiento 1.- Se observa las caractersticas fsicas de la muestra: consistencia, color, moco (en caso de presentarlo) y pus, adems de la presencia de sangre macroscpica. 2.- Se procede a la realizacin de la prueba de sangre oculta. 3.- Se macera la muestra con agua destilada o solucin salina fisiolgica hasta obtener un sobrenadante homogneo y se deja reposar 5 min para la observacin microscpica. Este proceso de la muestra puede realizarse en el frasco que contenga la muestra recolectada o en tubos de ensayo de 13 x 100 o 13 x 75 mm. 4.- Se realiza la medicin del pH. 5.- Se montan dos preparaciones del sobrenadante la muestra: una en fresco (sin colorante)y otra mezclando el sobrenadante con Lugol para coproanlisis. 6.- Se realiza el examen microscpico observando con el objetivo de 10x y 40x. 7.- Si existe duda acerca de la morfologa del parsito observado se puede realizar la tincin AMA. Resultados En el formato de Examen coprolgico (F-FQUI-LAC-007) se reporta los resultados indicando si la muestra es nica o si pertenece a un anlisis seriado indicando el nmero de anlisis (primera, segunda o tercera muestra), el nombre del paciente y su nmero de orden de trabajo. Los resultados se reportan de acuerdo a las siguientes escalas: Caractersticas fsicas Consistencia: puede ser Dura, pastosa, blanda, lquida o Semislida. Color: el color que se observe y puede ir desde heces pardas, cafs, negras, verdes o incoloras. Moco: normalmente no se encuentra en las heces y se reporta como No contiene, Ligero, Si contiene +, Si contiene ++ y Si contiene +++. Pus: se reporta como No contiene o Si contiene +. pH: puede ir desde 5 hasta 8 y se indica si es cida, neutra o alcalina y el valor obtenido. Examen microscpico. Se reportan las estructuras en el formato de acuerdo a lo observado siguiendo la escala de menor a mayor numero (Escasas, Algunas, Moderadas o Numerosas). En caso de no encontrase las estructuras se reporta como No Contiene.

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Para el reporte de los parsitos observados se indica la fase observada (quiste, trofozotos, huevecillos o larvas) y el gnero y la especie del parasito observado. Solamente en el caso del parasito Blastocystis hominis se indica como escasos, moderados o abundantes segn la cantidad observada. En caso de no encontrase parsitos en la muestra, se reporta No se encontraron parsitos. Si la muestra presenta levaduras se reporta como algunas o abundantes y se puede indicar si estn en gemacin o si se presentan como fragmentos miceliares. Se puede indicar, adems, la presencia de otras sustancias observadas (cristales de colesterol, cristales de oxalato de calcio, etc) si se presentan en cantidades abundantes. CONTEO DE HUEVOS

Estas tcnicas cuantitivas para el recuento de parsitos permiten el recuento en los casos de que sospeche un parasitosis significativa. La produccin de huevecillos estar en relacin directa con el nmero de hembras fecundadas que deponen huevos. MTODO DIRECTO O FROTE DE HECES. Este mtodo es una simplificacin del mtodo estndar de Beaver. La simplificacin deriva del conocimiento que las preparaciones directas que se utilizan en la rutina para el examen de heces contienen entre 1.5 mg y 2.5 mg. Procedimiento Colocar 1-2 gotas de solucin salina en cada extremo del portaobjeto. Con un aplicador de madera, tomar una proporcin de heces y emulsificar en cada una de las gotas de la solucin salina. Cubrir cada preparacin con cubreobjetos. Contar de forma individual los huevos de scaris, Trichuris y/o uncinaria presentes en cada preparacin. Sacar la media. Informar en el formato F-FQUI-LAC-07 como: # de huevos/frote de heces o bien multiplicar este resultado por 500 y multiplicar por 500 e informar como # de huevos/gramo de heces. TCNICA DE STOLL-HAUSHEER 1. Se llena una probeta graduada de 100 ml con 56 ml de hidrxido de sodio 0.1 N. 2. Con un palillo aplicador se agrega las heces hasta elevar el nivel del lquido a 60 ml. 3. Se aaden diez cuentas de vidrio, se tapa con firmeza y se agita hasta que las heces se desmoronen por completo. Si es necesario, las heces duras se dejan reposar en NaOH 0.1 N en el refrigerador para que se ablanden. 4. Cuando las heces estn disueltas por completo, se agita el tubo un minuto y de inmediato se toman 0.075 ml de la suspensin y se colocan en un portaobjetos. 5. Se coloca cubreobjeto y se lee con aumento de 40X contando los huevos presentes en toda la placa. 6. Se cuentan cuidadosamente los huevos que se encuentran en la preparacin, comenzando en el ngulo superior izquierdo siguiendo la lnea recta al extremo opuesto (rectngulo derecho), bajando un campo y as sucesivamente hasta recorrer la preparacin. 7. Se realizan dos lecturas con alcuotas de 0.075 ml de la suspensin (total= 0.15ml).

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Reporte de Resultados. Se informa en el formato de anlisis coprolgico F-FQUI-LAC-07. El nmero de huevos encontrado multiplicado por 100 para obtener el total de huevos encontrados por gramo de heces. El resultado debe de multiplicarse por un factor de acuerdo con la consistencia de las heces: X 1.5 las pastosas; X 2 las semiblandas; X 3 las blandas y X 4 las lquidas.

ANTGENO DE Helicobacter pylori EN HECES Para el anlisis del antgeno de Helicobacter pylori en heces fecales, se seguirn las polticas establecidas en este instructivo. En la realizacin de ste, se llevarn a cabo los pasos sealados en el inserto del kit de la casa comercial.

ANEXOS PARA LA PREPARACIN DE REACTIVOS

Solucin fisiolgica (8.5 %) Cloruro de sodio Agua destilada 0.85 g 100 mL

Mezclar hasta la disolucin completa de los cristales. Guardar en frasco rotulado. Para uso diario mantener en frasco de gotero rotulado Azul de metileno amortiguado (AMA) Solucin A (solucin de cido actico 0.2 M) cido actico glacial Agua destilada 11.55 mL 1000 mL

Depositar el agua en un matraz, aadir el cido actico y mezclar. Guardar bien tapado. Solucin B (solucin de acetato sdico). Acetato sdico Si se usa acetato sdico cristalino Agua destilada 16.4 g 27.2 g 1000 mL

Disolver el acetato sdico en el agua destilada, mezclar y guardar en frasco bien tapado. Solucin de trabajo para la tincin.

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Solucin A Solucin B Colorante azul de metileno Agua destilada (diluir hasta)

46.3 mL 3.7 mL 0.6 g 1000 mL

Colocar el agua destilada en un matraz y aadir las soluciones A y B mezclar perfectamente, posteriormente agregar el azul de metileno y agitar hasta que se disuelva. Guardar en frasco mbar. NaOH 0.1 N Se pesan 4 g. de NaOH y se disuelven en 1,000 mL de agua destilada. Roturar y Guardar. INSTRUCCIONES PARA EL USO DE LA CAMPANA DE EXTRACCION Las campanas de extraccin en el laboratorio brindan seguridad y proteccin al personal de laboratorio en la preparacin de reactivos, evaporaciones, destilaciones y digestiones en dnde se generen vapores txicos, corrosivos o molestos. En el laboratorio de anlisis clnicos de la Facultad de Qumica, cuenta con una campana de extraccin, formando parte del rea de coproanlisis. Al comenzar el da, el qumico que se encuentra trabajando en el rea, realiza una limpieza y desinfeccin con una solucin diluida de cloro con agua destilada. Se enciende la campana y se colocan las muestras dentro de ella. Se debe observar y escuchar que el ventilador de extraccin este funcionando. Al finalizar, las muestras se eliminan en los botes con bolsa roja para RPBI Se limpia la campana de extraccin con una solucin de cloro diluido en agua destilada y se apaga.

4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA

Cdigo (cuando aplique)

Nombre del documento

Lugar de almacenamiento

MGC-CIPLADE-CC01 N/A N/A

Manual de Gestin de la Calidad NOM-007-SSA3-2011 Para la organizacin y funcionamiento de los laboratorios clnicos NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Proteccin ambiental- Salud ambiental Residuos Peligrosos biolgico-infecciosos Clasificacin y LACSC LACSC

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Cdigo (cuando aplique)

Nombre del documento

Lugar de almacenamiento

MGC-CIPLADE-CC01

Manual de Gestin de la Calidad especificaciones de manejo Gua para el cumplimiento de la Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Procedimiento para el anlisis de muestra

N/A P-FQUI-LAC-04

LACSC LACSC

5.- CONTROL DE REGISTROS

Identificacin (cdigo)

Nombre del registro Coproanlisis Examen coprolgico Bsqueda de parsitos Citologa Hoja estadstica de estudios

Lugar de almacenamiento rea de trabajo rea de trabajo rea de trabajo rea de trabajo rea de trabajo

Responsable de su proteccin Responsable de rea Responsable de rea Responsable de rea Responsable de rea Responsable de rea

Tiempo de retencin 1 ao 1 ao 1 ao 1 ao 1 ao

Disposicin de los registros Archivo muerto Archivo muerto Archivo muerto Archivo muerto Archivo muerto

F-FQUI-LAC-14 F-FQUI-LAC-07 F-FQUI-LAC-15 F-FQUI-LAC-21 F-FQUI-LAC-48

6.- GLOSARIO
6.1 .- SIGLAS UADY. Universidad Autnoma de Yucatn. LACSC. Laboratorio de Anlisis Clnicos de Servicio a la Comunidad. 6.2 .- DEFINICIONES Muestra biologica. Parte anatmica o fraccin rganos o tejido, excresiones o secresiones obtenidas de un ser humano o animal vivo o muerto para su anlisis.

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7.- CONTROL DE REVISIONES

NIVEL DE REVISIN SECCIN Y/O PGINA 6 DESCRIPCIN DE LA MODIFICACIN Y MEJORA FECHA DE MODIFICACIN

01

Revisin y modificacin de la ortografa Se elimin el primer prrafo de recoleccin de las muestras. En la parte de toma de directa, se especific la abreviatura AMA. Se cambio el subtema de bsqueda de oxiuros (tcnica de Graham por tcnica de Graham para bsqueda de oxiuros (Enterobius vermicularis). Se volvi a redactar el subtema de azucares reductores. Se volvi a redactar la tcnica de StollHausherr. Se cambio ortografa. Se anexo las instrucciones para el uso de a campana de extraccin. Modificacin del formato de instructivo Se hicieron modificaciones en las secciones pertenecientes a las descripciones de amiba en fresco, citologa en moco fecal y leucocitos en moco fecal y coproanlisis. Se adicion la prueba de antgeno de Helicobacter pylori en Heces

14 de octubre de 2009

02

4, 5, 6, 11, 14

26 de Abril de 2010

03

Todo el documento

4 de Noviembre 2012

Nota: La seccin 7 ser utilizada a partir de la primera modificacin a este documento. La revisin 00, se mantendr en blanco.

Elabor

Revis

Aprob

QFB. Giovanni J. Xool Castellanos Responsable del rea de Uroanlisis y Coproanlisis

QFB Roque Gamboa Llanes Responsable sanitario

Dr. Jos Antonio Manzanilla Cano Director de la Facultad de Qumica

Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que: elaboran el documento, revisan su adecuacin y aprueban para su implementacin dentro del Sistema de Gestin de la Calidad de la Universidad Autnoma de Yucatn.

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