PRUEBA No RECUENTO DE AEROBIOS MESOFILOS EN AGUA POTABLE. (FLORA HETEROTROFICA) 1.

INTRODUCCION El recuento total de organismos es utilizado como un anlisis auxiliar en el control de la potabilidad del agua, control de agua de piscinas y control de las condiciones higinicas de las diversas etapas en la planta de tratamiento. Para el control de agua de consumo en reservorios y en la red de distribucin se recomienda un mximo de 500 colonias promedio por mes. Para asegurar alta precisin en los resultados se recomienda utilizar placas triplicadas de cada dilucin de la muestra. Sin embargo, en el anlisis de rutina es aceptable utilizar placas duplicadas para recuento total por cada dilucin y cada temperatura de incubacin. 2. OBJETIVO Al finalizar la prctica el estudiante estar en capacidad de determinar la calidad microbiolgica de muestras de agua potable mediante el recuento de la flora aerobia mesoflica. 3. MATERIALES 1 muestra de agua: Ya sea del grifo o de alguna otra fuente . 8 cajas de petri vacas estriles 100 mls de agar Plate count en erlenmeyer de 250 ml 1 mechero con alcohol 1 frasco con 99 ml de agua estril 5 pipetas de 2 ml estriles 1 pera de caucho 1 micropipeta con volumen de 100 microlitros Puntas de pipeta amarillas 1 jarra para descartar pipetas Incubadora a 35 0.5 C Estufa

4. PROCEDIMIENTO: Homogenizar la muestra agitando varias veces. Haga diluciones 10 , 10 , 10 , 10 , o ms si la muestra lo requiere. Dilucin 10 : Agregue 1 ml de la muestra total a una caja de petri vaca, y de este modo se 0 obtiene la primera dilucin 10 . -1 Dilucin 10 : Agregue 0.1 ml ( 100 microlitros ) de la muestra total a una segunda caja de petri. -2 Dilucin 10 : Agregue al frasco de dilucin con 99 ml de agua destilada estril 1 ml de la muestra total, y una vez homogenizado, sembrar 1ml en una tercera caja de petri para -2 obtener la dilucin 10 . -3 Dilucin 10 : Del frasco anterior, siembre 0.1 ml ( 100 microlitros ) en una cuarta caja de -3 petri, obtenindose la dilucin 10 . Agregue a cada caja de petri 15 a 20 ml de Agar Plate Count fundido y a 44 C. Mezcle bien rotando las cajas sobre la mesa.
0 0 -1 -2 -3

Deje solidificar, invierta e incube a 35 0.5 C por 24 a 48 horas. Cuente todos las cajas que presenten entre 30 - 300 colonias por caja. Si el nmero total de colonias desarrolladas a partir de 1 ml de la muestra es menor, no tenga en cuenta la regla anterior. Calcule el nmero de bacterias y exprselo en UFC/ml

RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES NUMERO MS PROBABLE (NMP) En este mtodo preparamos diluciones del alimento igual que el recuento en placa, sin embargo por ser un mtodo estadstico los resultados son generalmente mas elevados que el recuento en placa. Este mtodo ofrece las siguientes ventajas: Es relativamente sencillo. Los resultados son coincidentes con los de otros laboratorios. Se pueden determinar el nmero de microorganismos especficos variando el medio. Es el mtodo de eleccin para determinar la densidad de coliformes fecales. en la determinacin de la densidad de

El NMP es una tcnica ampliamente utilizada

microorganismos viables en una muestra. El mtodo del NMP es un procedimiento indirecto y estimado en contraste con la tcnica en placa, este es un mtodo mas eficaz en muestras de baja poblacin microbiana, menos de 10 clulas por mL. Es una prueba que se aplica a la investigacin de coliformes, pero variando el medio de cultivo se emplea para recuento de Stafilococcus, Streptococcus, Vibrio, Salmonella, Bacillus cereus etc. La metodologa se basa en la siembra de volmenes secuenciales de base 10(10, 1, 0.1, 0.01) de la muestra sin diluir o de diluciones secuenciales, estas diluciones dependen del grado de contaminacin de la muestra y de los estndares microbiolgicos del producto. Cuando el grado de contaminacin es desconocido se sugiere preparar de 4-5 diluciones. De cada dilucin se transfieren alcuotas de 1 ml a varios tubos de (3-5) con medio de cultivo. La relacin volumen de muestra medio de cultivo es de 1/10.

5.1 MATERIALES. -Muestra a analizar. -Balanza. -Frascos y tubos con diluyente. -Pipetas de 10, 5 y 1 mL. -Diluciones de la muestra. -Incubadora. -Gradilla.

-Pipetas de 1 ml -9 tubos de 150 x 16 mm conteniendo fermentacin. 10 ml de caldo bilis verde brillante con tubos de

5.2 PROCEDIMIENTO _ Inocular de cada una de las diluciones 10

-1

10

-2

10

-3 o

1 ml a cada uno de tres tubos

conteniendo caldo bilis verde brillante, incubar los tubos a 35 C durante 24 o 48 horas, observar los tubos que presenten produccin de gas y turbidez, comparar en la tabla de NMP e informar como coliformes por gr. o ml. CRITERIOS DE LECTURA: La lectura del NMP depende del medio de cultivo utilizado y del microorganismo investigado. 1. Turbidez: Su presencia es indicadora de crecimiento bacteriano, si la muestra genera turbidez en el medio es necesario emplear otro parmetro de lectura o utilizar pruebas complementarias. 2. Productos metablicos finales: La produccin de gas por los microorganismos son capturados y observados colocando tubos de Durham en el medio antes de la

esterilizacin. Una reaccin positiva se evidencia por la presencia de burbujas en el interior del tubo. 3. Deteccin de cidos o bases: Determinando despus de la incubacin el pH 0 acidez titulable en cada tubo o usando un colorante indicador de pH. Entre las pruebas complementarias se pueden utilizar examen microscpico directo, subcultivo a medios lquidos o slidos.