UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUO VEGETAL LUCAS CALAZANS SANTOS

CRESCIMENTO INICIAL DE LEGUMINOSAS FORRAGEIRAS TROPICAIS INOCULADAS COM BACTRIAS FIXADORAS DE NITROGNIO

ILHUS BAHIA - BRASIL Setembro de 2008

LUCAS CALAZANS SANTOS

CRESCIMENTO INICIAL DE LEGUMINOSAS FORRAGEIRAS TROPICAIS INOCULADAS COM BACTRIAS FIXADORAS DE NITROGNIO

Dissertao apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Produo Vegetal, da Universidade Estadual de Santa Cruz UESC, como parte dos requisitos para a obteno do ttulo de Mestre em Produo Vegetal. rea de Concentrao: Solos e nutrio de plantas em ambiente tropical mido. Orientador: Prof. Dr. Eduardo Gross. Co-orientadora: Profa. Dra. Agna Almeida Menezes.

ILHUS BAHIA - BRASIL Setembro de 2008

LUCAS CALAZANS SANTOS

CRESCIMENTO INICIAL DE LEGUMINOSAS FORRAGEIRAS TROPICAIS INOCULADAS COM BACTRIAS FIXADORAS DE NITROGNIO

Ilhus, BA, 12/09/2008.

Eduardo Gross - DS UESC/DCAA (Orientador)

Paulo Cesar Lima Marrocos - DS CEPLAC

Jos Marques Pereira - DS CEPLAC

DEDICATRIA

A todos agricultores que procuram na pesquisa um apoio para produzir com tcnicas sustentveis, sendo que seus descendentes assim possam tambm realiz-las, dedico.

AGRADECIMENTO A Deus, por nos permitir o dom da vida. Aos meus pais Cleomrio e Ana Lcia, irms Anaclea e Luciana, irmos Cladio, Cleumo, Clayton e famlia Albuquerque, por ensinar-me a amar e valorizar esta vida. A minha famlia, por estar presente em todos os momentos de minha vida. De modo especial, queria agradecer a uma pessoa que me acompanha nos ltimos oito anos de minha vida, pessoa que eu amo muito e que um elemento essencial na minha vitria. Amo voc Mayara. Ao meu amigo, orientador e professor Eduardo Gross, por dedicar-se e amar ao prximo como a si mesmo, qualidade que mais admiro numa pessoa. A tia Zene, tio Otvio e toda famlia Moreira de Santa Cruz da Vitria, por acolher-me como um filho. As minhas amigas e colegas de trabalho Caroline Pinheiro e Marcela Venturini, que deram o melhor de si para o xito deste trabalho, sobretudo foram e so amigas. Aos meus colegas do laboratrio da resenha e alegria Hellen, Daniel, James, Jocelino, Miguel, Raimundo, Thales e Valria, pela ajuda e por tornar nossos dias mais prazerosos. Aos meus amigos, irmos, companheiros de Braslia, Ilhus, Itabuna, Itaj do Colnia, Ituber, Juazeiro da Bahia, Salvador, Santa Cruz da Vitria e Wenceslau Guimares. Aos colegas da turma de 2006, de modo especial a Natlia Arantes, Renata Vital e Sandra Cardoso, pela amizade e companheirismo. Aos meus professores do mestrado, pela ajuda na construo de meu conhecimento, de modo especial o professor Srgio Oliveira que sempre se mostrou disposto a desembaraar os ns da estatstica. A Agna Menezes, pela co-orientao e apoio nesse trabalho. A Fundao de Amparo Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) e Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC) pelo apoio financeiro e estrutural.

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CRESCIMENTO INICIAL DE LEGUMINOSAS FORRAGEIRAS TROPICAIS INOCULADAS COM BACTRIAS FIXADORAS DE NITROGNIO RESUMO A famlia Leguminosae tem cerca de 670 gneros e mais de 17.500 espcies as quais incluem plantas de interesse agronmico como forrageiras e alimentares. So plantas capazes de estabelecer simbiose mutualstica com bactrias fixadoras de nitrognio (diazotrficas). Estes microrganismos so capazes de reduzir nitrognio atmosfrico (N2) amnia (NH3), contribuindo para melhoria nutricional da planta, a qual em contrapartida fornece fotossintatos s bactrias. O objetivo do presente trabalho foi o de avaliar a influncia de rizbios no crescimento inicial de trs leguminosas herbceas, Calopogonium mucunoides Desv. (calopognio), Desmodium heterocarpon (L.) DC subsp. ovalifolium (Prain) H. Ohashi cv. Itabela (desmdio) e Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth (cudzu tropical), utilizadas como forragens na regio sul baiana. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente ao acaso num esquema fatorial 3x3 (trs espcies e trs tratamentos), utilizando solo no autoclavado, representativo da regio cacaueira, Latossolo Vermelho-Amarelo (analisado previamente em suas condies fsicas e qumicas). Os tratamentos foram realizados com inoculao de rizbio, adubao nitrogenada e a testemunha para cada espcie. Aps a 8 semana de germinao foram analisados os parmetros de biomassa (matria seca da parte area), teor de nutrientes na parte area, nmero e peso seco de ndulos, grau de colonizao micorrzica e dimetro do colo. Foi constatado que a matria seca da parte area e o dimetro do colo foram maiores no cudzu tropical, seguido do desmdio e calopognio, respectivamente. O cudzu, entretanto, foi a espcie que apresentou menor biomassa no tratamento adubado com nitrognio mineral. O teor de nutrientes da parte area foi satisfatrio, no sendo observado visualmente algum tipo de deficincia. No tratamento com N-mineral do cudzu tropical houve um aumento no teor de Mn. O coeficiente de correlao linear indica que 79%, 58% e 56% da variao observada no nmero de ndulos do desmdio, cudzu e calopognio em funo da variao do peso seco e vice-versa. A colonizao micorrzica foi muito baixa, no ultrapassando 17% em todas as espcies e tratamentos, provavelmente devido a dose de P utilizada no experimento. Os rizbios inoculados e nativos do solo foram eficientes na fixao do nitrognio e na translocao de amnia para a planta suprindo as exigncias desse nutriente para todas as trs espcies no perodo avaliado. A correo do solo juntamente com a adubao de base foram fundamentais para o pleno crescimento e desenvolvimento das culturas. As trs espcies de leguminosas forrageiras apresentam bom potencial para produo de matria seca e de protena bruta. Palavras-chave: leguminosas herbceas; fixao biolgica de nitrognio; teor de nutrientes.

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INITIAL GROWTH OF TROPICAL FORAGE INICULATED WITH SYMBIONT NITROGEN FIXERS BACTERIA ABSTRACT The Leguminosae family comprises about 670 genera and more than 17.500 species, that includes agronomic interest plants as forage and food crops. They are capable to establish mutualistic symbiosis with nitrogen fixer bacteria (diazotrophs). These microorganisms reduce atmospheric nitrogen (N2) to ammonia (NH3), contributing to improving nutrition to the plant, which on counterpart supplies photosynthetic products to bacteria. The aim of present study was to evaluate the influency of rhizobia on initial growth of three leguminous herbs, Calopogonium mucunoides Desv. (calopo), Desmodium heterocarpon (L.) DC subsp. ovalifolium (Prain) H. Ohashi cv. Itabela (ea-ea) e Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth (kudzu), used as forage on south region of Bahia. The experiment was conduced on randomly factorial delineate at 3x3 (three plant species and three treatments), using a nonautoclaved soil representative of cacao region, Haplorthox (previously analyzed in its chemical and physical properties). Treatments were: rhizobia inoculation, with N fertilization and control to the each species. After eight weeks from seed germination were analyzed the parameters biomass (shoot dry mass), shoot nutrient content, number and dry mass of nodules, percentage of mycorrhizal colonization and collar diameter. We observed that dry mass production of shoot was higher in kudzu, followed by ea-ea and calopo, respectively. Kudzu however presented lower biomass on nitrogen-fertilized treatment. Shoot nutrient content was satisfactory and were not visualized any deficiency. In N fertilizing treatment of kudzu, Mn content was augmented. The linear coefficient correlation explains that 79%, 58% e 56% of variation of nodule number observed in ea-ea, kudzu and calopo is explained by dry mass of nodule and vice-versa. Mycorrhizal colonization was lower than 17% in all species and treatments, probably because P fertilization used in our experiment. Collar diameter was higher in kudzu than ea-ea and calopo. Inoculated and soil borne rhizobia were efficient in nitrogen fixation and ammonia translocation to the plant, supplying this nutrient exigency for all three species during experiment period. Soil liming concomitant with base fertilization were essential to the crops growing and developing. The three forage legume species presented high potential of dry mass and crude protein production. Keywords: Herbaceous legumes; nitrogen biological fixation; nutrient content.

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SUMRIO
Resumo ........................................................................................................ Abstract ........................................................................................................ 1 2 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 3 3.1 3.2 3.2.1 3.2.2 3.3 3.4 3.5 4 4.1 4.2 4.3 4.4 5 6 INTRODUO .............................................................................................. REVISO DE LITERATURA ........................................................................ Fixao biolgica de nitrognio ..................................................................... Assimilao de Nitrognio ............................................................................ Teor de Nutrientes ....................................................................................... Fungos Micorrzicos Arbusculares ................................................................ Leguminosas Tropicais ................................................................................. MATERIAL E MTODOS ............................................................................. Conduo do experimento ............................................................................ Sementes ...................................................................................................... Obteno ......................................................................................... Superao de dormncia e o ndice de velocidade de germinao (IVG) do desmdio ........................................................................... Solo .............................................................................................................. Inoculao dos rizbios Coleta, parmetros avaliados e anlises estatsticas ................................... RESULTADOS E DISCUSSO ..................................................................... desmdio ....................................................................................................... Nmero e peso seco dos ndulos ................................................................ colonizao micorrizica Teor de nutrientes da parte area e porcentagem de protena bruta ........... CONCLUSES ............................................................................................. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................................ 39 44 45 31 Matria seca da parte area (MSPA), dimetro do colo e porcentagem de 34 23 23 25 26 28 vi vii 9 11 11 12 15 17 18 22 22 22 22

Superao de dormncia e ndice de velocidade de germinao (IVG) do 28

1 INTRODUO

O estudo das leguminosas forrageiras no Brasil encontra-se relegado a um plano secundrio quando comparado ao das gramneas, sendo poucos ainda os programas de pesquisa visando o rendimento e adaptao dessas leguminosas consorciao, principalmente quando cultivadas em solos tropicais de baixa fertilidade (ANDRADE et al., 2004; MOREIRA et al., 2005). Entretanto, nos ltimos anos tem se intensificado os estudos sobre leguminosas tropicais visando principalmente a melhoria na qualidade de forragens (p. ex. PERIN et al., 2004; VOLPE et al., 2008) que pode ser obtida atravs da consorciao entre leguminosas e gramneas, sendo as primeiras uma fonte econmica de protena para os rebanhos. Oliveira (1997) relata que a suplementao de animais a pasto uma forma vivel de proporcionar os nveis de nutrientes necessrios para o incremento na produo animal. Os estudos de consorciao entre gramneas (especialmente as africanas que apresentam alto rendimento) e leguminosas ganham atualmente maior importncia em virtude da degradao de pastagens que atinge cerca de 150 milhes de hectares no Brasil, apesar das tecnologias disponveis para evitar tal degradao (EMBRAPA, 2008). Outra aplicao das leguminosas herbceas seu uso como cobertura do solo e para controle da populao de plantas espontneas, prtica tradicional entre os agricultores (ALTIERI, 1998). Leguminosas so tambm preferencialmente utilizadas na chamada adubao verde, prtica sustentvel e de baixo custo, que permite a melhoria das caractersticas qumicas, fsicas e biolgicas do solo (GLIESSMAN, 2000). O uso de leguminosas como forrageiras, na cobertura do solo e na adubao verde so alternativas viveis aplicadas, muitas vezes empiricamente, por alguns agricultores. Desmodium heterocarpon subsp. ovalifolium cv. Itabela (desmdio), Calopogonium mucunoides Desv. (calopognio) e Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth. (cudzu tropical) so exemplos de leguminosas utilizadas como adubo verde e na consorciao com gramneas, inclusive na regio sul baiana. Nesta regio, algumas pesquisas com o desmdio j foram realizadas.

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Pereira et al. (1995), por exemplo, relata que para o estabelecimento em campo de Desmodium heterocarpon subsp. ovalifolium cv. Itabela necessria uma adubao de 50 kg de P2O5 e 30 Kg de K2O por hectare. A prtica da inoculao de rizbios em leguminosas uma tcnica simples, eficiente e que est totalmente inserida no contexto da produo agroecolgica para o fornecimento de compostos nitrogenados a essas plantas. Essa prtica pode gerar economia financeira para o produtor, devido ao menor gasto com fertilizantes, e auxiliar na conservao e melhoria dos atributos qumicos, fsicos e biolgicos do solo (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). O presente estudo visou avaliar o crescimento inicial de trs leguminosas forrageiras, Calopogonium mucunoides, Desmodium heterocarpon subsp. ovalifolium cv. Itabela e Pueraria phaseoloides, inoculadas com rizbios nativos.

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2 REVISO DE LITERATURA

2.1 Fixao biolgica de nitrognio A fixao biolgica de nitrognio (FBN) considerada como o segundo processo biolgico mais importante (sendo a fotossntese o primeiro) juntamente com a decomposio da matria orgnica (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Estes mesmos autores relatam que grande parte do nitrognio est na atmosfera, na forma gasosa (N2), ou seja, na forma no disponvel para a maioria dos organismos. Uma frao quase nfima est combinada na forma inorgnica e orgnica nos ecossistemas aquticos e terrestres. Considerado um dos quatro elementos essenciais mais abundantes nos organismos vivos sua obteno pode provir de trs processos: 1. Industrial, no qual o gasto de energia no renovvel (gs natural ou petrleo) alto; 2. Descargas eltricas na atmosfera, que no to eficiente quando comparado com o industrial ou com o biolgico; 3. Biolgico, que realizado somente por procariotos e dependente de ATP (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Dentre os diversos microrganismos (bactrias) que realizam a fixao biolgica de nitrognio, o grupo das proteobactrias se destaca pela sua capacidade em estabelecer simbiose com plantas da famlia Leguminosae (Fabaceae). Plantas dessa famlia, de maneira geral, apresentam maior teor de N em seus tecidos. Sua utilizao como forrageiras de grande importncia para a manuteno do nvel adequado de protena bruta (PB) na dieta animal, seja pelo efeito direto da ingesto da planta ou pelo efeito indireto do acrscimo no contedo de nitrognio (N) no solo da pastagem (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Essa maior eficincia na absoro do N pode se converter em economia de fertilizantes industriais para o produtor. No Brasil, cerca de 70% dos solos cultivados apresentam alguma limitao sria de fertilidade (PEREIRA et al., 1995). Os solos predominantes na regio sul e extremo sul da Bahia so em sua maioria de baixa fertilidade natural, conseqentemente baixa CTC, e apresentam pequeno teor de matria orgnica

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(PEREIRA et al., 1995), isso em decorrncia dos processos pedolgicos, os quais ocorrem com maior intensidade em regies tropicais, sendo agravado pelo manejo inadequado dos solo. As bactrias diazotrficas, em sua maioria do gnero Rhizobium, Bradyrhizobium e Azorhizobium, colonizam as razes das plantas formando ndulos, esse resultado da interao simbitica entre bactria fixadoras de N, comumente chamadas de rizbio, e de algumas plantas que possuem genes que possibilitam essa simbiose. Na regio Neotropical essas plantas pertencem em sua grande maioria Famlia Leguminosae. Nesse mutualismo a planta fornece fotossintatos bactria, que por sua vez disponibiliza amnia ao vegetal. A participao da fixao biolgica de nitrognio (FBN) no ciclo biogeoqumico deste nutriente importante uma vez que a atividade das bactrias diazotrficas representa cerca de 60% do nitrognio anualmente fixado na Terra (KIM; REES, 1994). Durante a reao de reduo do N2, a nitrogenase, enzima ferro-molibdnio dependente, auxiliada por uma terceira molcula transportadora de eltrons, a ferridoxina (SPRENT, 2001). 2.2 Assimilao de nitrognio O nitrognio (N) considerado elemento essencial para as plantas, pois est presente na composio das mais importantes biomolculas, tais como ATP, NADH, NADPH, clorofila, cidos nuclicos, protenas e inmeras enzimas (MIFLIN; LEA, 1976; HARPER, 1994). Para suprir a planta desse elemento, dentre outros fatores, necessria certa eficincia na utilizao do nitrognio adicionado ao solo, considerando que perdas ocorrem. Normalmente, menos de 50% do nitrognio aplicado sob a forma de fertilizante utilizado pelas culturas. As perdas no solo so devido aos inmeros processos aos quais o nitrognio est sujeito. O nitrognio perdido principalmente pela lixiviao de nitrato, volatilizao de amnia e emisso de N2, N2O e outros xidos de nitrognio (ANGHINONI, 1986). O nitrognio no solo est predominantemente na forma orgnica, as fraes inorgnicas so compostas principalmente por nitrato e amnio. O nitrognio absorvido nas razes sob a forma de NO3- ou NH4+, sendo ento incorporado em aminocidos na prpria raiz ou na parte area. A taxa e a quantidade de nitrognio absorvida e assimilada durante o ciclo da planta dependem da presena de carregadores especficos na membrana plasmtica, da atividade das enzimas

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envolvidas no seu ciclo, da disponibilidade de energia necessria para os processos de absoro e assimilao e do estdio de desenvolvimento da planta (MILLER; CRAMER, 2004). Bredemeier e Mundstock (2000) fizeram uma reviso bibliogrfica da regulao da absoro e assimilao do nitrognio nas plantas salientando pontos limitantes do metabolismo deste elemento na planta. Os limitadores tm sido relacionados com: 1) a afinidade dos carregadores pelo nitrato e amnio; 2) o suprimento de carboidratos s razes; 3) o nvel de aminocidos no floema radicular; 4) a atividade das enzimas redutase do nitrato (RN), sintetase da glutamina (GS) e sintase do glutamato (GOGAT); 5) a fonte de N suprida s plantas (NO3- ou NH4+); 6) o local de assimilao do N (raiz ou parte area). A passagem de nitrato (NO3-) e amnio (NH4+) atravs da membrana plasmtica das clulas da epiderme e do crtex da raiz ocorre atravs de transportadores especficos para essas formas de nitrognio (LARSSON, INGEMARSSON, 1989). A figura 1 mostra que, aps a sua entrada na clula, o nitrato pode ser reduzido a nitrito (NO2-) no citosol, atravs da enzima redutase do nitrato (RN) e, logo a seguir, convertido a amnio (NH4+) no plastdio, atravs da enzima redutase do nitrito (RNi). O amnio incorporado em aminocidos pelas enzimas sintetase da glutamina (GS) e sintase do glutamato (GOGAT), formando glutamina (GLN), glutamato (GLU) e outros aminocidos e seus metablitos (CRAWFORD, 1995). Alternativamente, o NO3- e o NH4+ podem ser transportados por carregadores especficos atravs do tonoplasto e armazenados no vacolo, para posteriormente serem reduzidos no citosol da mesma clula ou serem translocados inalterados para a parte area da planta (Figura 1). Nos colmos e folhas (Figura 1a), o nitrato reduzido a nitrito pela ao da enzima RN, e o amnio, atravs da enzima RNi. O amnio finalmente incorporado em aminocidos pelas enzimas GS e GOGAT. Estes elementos tambm so armazenados no vacolo das clulas para posterior reduo e utilizao (KING et al., 1993; CRAWFORD, 1995).

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Figura 1 - Representao esquemtica da rota de assimilao do nitrognio nas razes e folhas de plantas. (NO3-: nitrato; NO2-: nitrito; NH4+: amnio; GLN: glutamina; GLU: glutamato; RN: redutase do nitrato; RNi: redutase do nitrito; GS: sintetase da glutamina; GOGAT: sintetase do glutamato; T: transportador). Extrado de Bredemeier e Mundstock (2000).

A multi-regulao do metabolismo do N torna complexa a identificao de pontos metablicos especficos que sejam mais limitantes para o incremento da produtividade. A fonte de N e o local de assimilao podem ser importantes, especialmente em condies de crescimento nas quais a disponibilidade de energia limitante (BREDEMEIER; MUNDSTOCK, 2000).

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2.3 Teor de Nutrientes As plantas so constitudas de vrios elementos, porm dezessete so considerados essenciais, uma vez que mesmo sendo autotrficas, elas precisam destes elementos para seu crescimento e desenvolvimento. Segundo Novais et al., (2007) um elemento considerado essencial quando preenche os seguintes requisitos: a) quando sua deficincia impede que a planta complete seu ciclo vital; b) o elemento no pode ser substitudo por outro elemento com propriedades similares; c) este elemento deve participar diretamente no metabolismo da planta e promover seu benefcio no s com o objetivo de melhorar as caractersticas do solo, por meio do crescimento da microflora, mas tambm de possibilitar outro efeito benfico a planta. Alguns elementos no so considerados essenciais, mas apenas benficos para algumas plantas, como o caso do sdio, do silcio, do selnio e do cobalto. Um ponto relevante saber como as plantas adquirem esses nutrientes essenciais ou benficos. O carbono, oxignio e hidrognio so adquiridos a partir do CO2 atmosfrico e da gua presente no solo. Depois de adquiridos, eles so incorporados s plantas pelo processo de fotossntese. Como conseqncia da fotossntese, esses trs nutrientes fazem parte de praticamente todas as molculas orgnicas dos vegetais e so responsveis por cerca de 94-97% do peso seco de uma planta. Os demais nutrientes (6-3 % restantes) fazem parte dos minerais presentes no solo. Uma conseqncia da essencialidade por igual dos nutrientes a chamada "Lei do mnimo" de Liebig, essa lei estabelece que a produtividade de uma cultura limitada pelo elemento que est presente em menor quantidade, sabendo que se aumentarmos a concentrao dos demais nutrientes, no haver um aumento da produtividade, logo preciso uma preocupao no fornecimento de todos os nutrientes nas concentraes indicadas para cada cultura (NOVAIS et al., 2007). Tambm deve-se levar em considerao que h um mximo para a utilizao de um nutriente, ou seja, doses elevadas podem gerar toxidez e inibir o crescimento e desenvolvimento da planta. Uma explicao para os macronutrientes serem requeridos em quantidades elevadas o fato deles constiturem parte de molculas essenciais para o vegetal, ou seja, possuem uma funo estrutural, alm da escassez nos solos. J os micronutrientes esto mais relacionados ativao de

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certas enzimas, desempenhando esse uma funo regulatria (ESPTEIN; BLOOM, 2005). O nitrognio e o fsforo possuem forte ligao estrutural fazendo parte dos nucleotdeos, os quais formam os cidos nuclicos (DNA e RNA). Alm disso, o nitrognio est presente nos aminocidos que formam as protenas e na prpria molcula de clorofila. Dois dos aminocidos considerados essenciais (metionina e cistena) so formados por enxofre. O potssio apesar de ser um macronutriente no um componente estrutural. Contudo ele est presente em altas concentraes no suco celular regulando o potencial osmtico e o balano inico. Esse nutriente tambm est envolvido no controle do movimento estomtico. O clcio possui uma funo estrutural (est presente nos pectatos de clcio que compem a lamela mdia) e um grande papel na regulao do metabolismo da planta. Ele normalmente atua como mensageiro secundrio ativando uma protena chamada calmodulina, a qual, por sua vez, ativa uma srie de enzimas. O magnsio est presente na molcula da clorofila, juntamente com o nitrognio. O magnsio tambm faz parte de muitas metaloenzimas, ou seja, as enzimas que possuem um metal em sua estrutura. Os micronutrientes possuem uma funo mais regulatria que estrutural. Desse modo, o ferro faz parte de enzimas relacionadas com os processos de oxidao e reduo e das enzimas responsveis pela sntese da clorofila. O molibdnio, apesar da pequena quantidade desse nutriente absorvida pela planta, considerado essencial por fazer parte de duas enzimas, a redutase do nitrato e a nitrogenase. A redutase do nitrato promove a reduo do nitrognio absorvido na forma ntrica, para posteriormente ser incorporado em compostos orgnicos e a nitrogenase catalisa a reao de fixao do nitrognio atmosfrico por microrganismos do solo. O zinco tambm faz parte de vrias enzimas e inclusive daquelas relacionadas com a sntese do aminocido triptofano. O boro importante para os processos de diviso e alongamento celular. Acredita-se que ele influencie estes processos alterando o nvel de um hormnio vegetal, a auxina, atravs da ativao de enzimas que oxidam esse hormnio. Por fim, os outros micronutrientes como o mangans, o cobre, o cloro e o nquel tambm esto envolvidos na regulao da atividade de vrias enzimas (TAIZ; ZEIGER, 2004). O transporte desses nutrientes via razes, representados na Figura 2, pode ser realizado por trs processos: 1) fluxo de massa, o qual uma conseqncia da

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existncia de um potencial de gua no solo maior do que aquele junto a raiz. Essa diferena de potencial que causa um movimento de massa da gua em direo raiz, arrastando nela os ons que se encontram em soluo, causada pela transpirao da planta, assim o fluxo de massa segue o fluxo transpiracional da planta. 2 ) difuso o segundo mecanismo de transporte de nutrientes pela raiz, este ocorre quando a absoro superior a chegada do elemento superfcie da raiz, criando-se assim, um gradiente de concentrao que proporciona o movimento desse nutriente do local mais concentrado para o de menor concentrao prximo raiz. 3) o outro transporte o da interceptao radicular, o qual se faz pelo crescimento da raiz que ao longo de sua trajetria entra em contato com os nutrientes que podem ser absorvidos. De modo geral, considera-se pequena a contribuio da interceptao de razes comparada aos mecanismos de fluxo de massa e difuso (NOVAIS et al., 2007).

Figura 2 - Transporte de nutrientes via simplasto e apoplasto. O nutriente chega at raiz (plo radicular) por difuso, interceptao radicular ou fluxo de massa.

2.4 Fungos micorrzicos arbusculares A baixa disponibilidade de fsforo (P), nitrognio (N) e a alta saturao de alumnio (Al) so os fatores qumicos que limitam com mais intensidade a produo

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forrageira nos solos tropicais, dificultando, assim, uma explorao racional e econmica. A importncia das associaes micorrzicas no crescimento, desenvolvimento e nutrio das plantas tem sido enfatizada em vrias revises (MARONEK et al., 1981; LOPES et al., 1983; MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). O fungo micorrzico forma uma rede de hifas na rizosfera que aumenta a superfcie de absoro das razes e permite explorar, absorvendo e translocando, nutrientes de microagregados do solo inacessveis planta devido ao dimetro de sua raiz e plo radicular. Dentre os nutrientes mais estudados nessa simbiose est o P, que no solo pode sofrer ataque de fosfatases fngicas e ser solubilizado e translocado para a planta (SMITH; READ, 1997). O fsforo apresenta pouca mobilidade no solo e chega at as razes pelo processo de difuso. Os fungos micorrzicos arbusculares (FMAs) facilitam este processo transportando o nutriente pelas suas hifas asseptadas, permitindo o crescimento e desenvolvimento das plantas em solos relativamente pobres e, ou deficientes. Os FMAs apresentam efeito sinergstico com a nodulao, uma vez que a fixao biolgica de nitrognio depende de grande aporte de energia (ATP) e portanto grande demanda de P, principal nutriente absorvido pelas hifas (CRUSH, 1974). Vrios trabalhos tm demonstrado a resposta positiva da inoculao de rizbios juntamente com FMAs no crescimento de leguminosas (para reviso ver Moreira e Siqueira, 2006), grau de nodulao, fixao de nitrognio (SIVAPRASAD et al., 1983; BONETI, 1984; COSTA et al., 1990). 2.5 Leguminosas tropicais Dentre as leguminosas forrageiras tropicais com boa produo de matria seca e com caractersticas de bom desenvolvimento na regio sul e extremo sul da Bahia, o Desmodium heterocarpon (L.) DC subsp. Ovalifolium (Prain) H. Ohashi CIAT 350 cultivar itabela apresenta bom potencial. uma leguminosa cujo centro de origem a sia, distribuindo-se pela China continental, ndia, Sri Lanka, Tailndia, Malsia, Ilhas do Pacfico e Austrlia (PEREIRA et al., 1995). A cultivar Itabela corresponde introduo Desmodium heterocarpon (L.) DC subsp. Ovalifolium (Prain) H. Ohashi CIAT 350, registro CENARGEN BRA-001996, recebendo este nome em homenagem ao principal centro de avaliao na regio cacaueira. A planta um subarbusto perene que atinge at um metro de altura. O caule se apresenta praticamente livre de plos, exceto nas suas extremidades. Os ns inferiores do

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caule, quando em contato com o solo, enrazam-se facilmente. As folhas so trifoliares, com fololos ovais e as flores so prpuras ou rosa-escuro, tornando-se azuladas aps a completa abertura. As vagens so pequenas, com artculos quadrados de 2,5 a 3 mm de comprimento, com uma semente cada (USDA, 2008). A cv. Itabela apresenta boa adaptao s condies ambientais predominantes na regio sul da Bahia, em solos de baixa fertilidade capaz de atingir 80% da produo mxima sob 86% de saturao de Al e 2,6 mg.Kg-1 de fsforo. Resultados parciais encontrados na regio evidenciam que a fertilizao fosfatada e potssica nos nveis de 50 Kg de P2O5 e 30 Kg de K2O/ha satisfatria para o seu estabelecimento, fixando 80 a 90 Kg de nitrognio/ha/ano (PEREIRA et al., 1995). Apesar de seu desenvolvimento ser inicialmente lento, uma vez estabelecida apresenta vigor e alta produtividade tornando-se muito competitiva, (PEREIRA et al., 1995). Estudo realizado em Itabela, de 1985 a 1990, com consorciao B. humidicola X D. ovalifolium cv. Itabela, constatou ganhos de 515, 503 e 417 g/an/dia para as cargas de 2, 3 e 4 animais/ha respectivamente, sendo que estudos recentes j demonstram uma melhor consorciao com o Brachiaria dictioneura (PEREIRA et al., 1995). Segundo Pereira (1995) a cultivar possui 14% de protena bruta na matria seca e 45 % de digestibilidade. Avaliaes de pastagem degradada de capim gordura com introduo de gramneas consorciadas com leguminosas realizadas por Moreira et al. (2005) demonstraram teores mais elevados de protena bruta e menores teores de fibra em detergente neutro(FDN), quando comparadas com forrageiras tropicas adubadas com nitrognio e sem consorciamento. Calopogonium mucunoides Desv. uma leguminosa forrageira nativa do trpico brasileiro, tendo como caractersticas a capacidade de vegetar satisfatoriamente em condies de acidez elevada e baixa fertilidade natural, alm de apresentar alta tolerncia ao Al (CARVALHO, 1985). reconhecida ainda por apresentar potencial de uso na adubao verde. Segundo Pizzaro et al. (1996) pode produzir mais de 5 t/ha por ano de matria seca (MS), aproximadamente 25 toneladas massa verde/ha/ano, possui de 16 a 18% de protena bruta na matria seca, tem alta resistncia ao sombreamento consorciando-se bem com Brachiaria decumbens, boa palatabilidade no perodo seco, mantendo percentuais aceitveis de folhas verdes at meados do perodo seco e, tambm, apresenta alta produo de sementes. utilizada na adubao verde, como forrageira e fenao, sendo indicada como um potencial em fixar nitrognio.

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Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth. conhecida como cudzu tropical. Originria do Sudeste da sia, Malsia e Indonsia. Adapta-se a solos argilosos, mas no excessivamente argilosos, porm pode se desenvolver em solos francoarenosos. Apresenta tolerncia a solos cidos, a sombreamento e a condies de muita umidade por perodos longos. Resistente seca, desde que no seja prolongada ou severa; bastante palatvel. Suporta o pastejo, porm no deve ser submetida a altas taxas de lotao. Recomendada tambm para controle da eroso, corte, fenao e adubao verde. O principal atributo desta espcie est relacionado com sua capacidade de consorciar-se com gramneas de porte alto como o capim elefante. uma planta perene, herbcea, com talos rasteiros, estolonfera, flores violetas, folhas trifoliadas com fololos inteiros e com trs lbulos distintos, verdes na superfcie superior e prateadas e pilosas na inferior. Essa planta possui hbito trepador com vegetao densa e vigorosa a qual cultivada em pases tropicais como adubao verde e forrageira; tem boa produo de matria seca (Tabela 1); sistema radicular bastante aprofundado, o que a beneficia nas secas de curta durao. O cudzu tropical melhor do que o cudzu comum, cujo rendimento inferior, tarda a se estabelecer e produz uma forragem de pior qualidade.
Tabela 1 Produo de matria seca de acessos de diferentes leguminosas utilizadas para cobertura de solo (dois meses depois da semeadura) Acessos Produo de matria seca (t / ha) P. phaseoloides CIAT 8042 P. phaseoloides CIAT 9900 C. brasiliensis CIAT 17009 P. phaseoloides CIAT 7182 C. ensiformis CIAT 715 D. ovalifolium CIAT 13651 (cv. Maquenque) D. ovalifolium CIAT 13105 M. pruriens CIAT 9349 A. pintoi CIAT18744 A. pintoi CIAT 17434 Fonte: Convnio MADR-CIAT, 2001. 2,08 2,08 1.97 1,69 1,54 1,50 1,41 0,59 0,59 0,29

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O estudo do efeito dos rizbios nas leguminosas forrageiras desmdio, clopognio e cudzu tropical, tem relevncia devido utilizao dessas na regio sul e extremo-sul da Bahia, onde so cultivadas em solos que tm, em sua maioria, acidez elevada e baixa fertilidade natural.

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3 MATERIAL E MTODOS

3.1 Conduo do experimento O experimento foi montado em casa de vegetao num delineamento inteiramente ao acaso desbalanceado num esquema fatorial 3x3, sendo trs espcies Desmodium heterocarpon subsp. ovalifolium cv. Itabela (desmdio), Calopogonium mucunoides Desv. (calopognio) e Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth. (cudzu tropical) e trs tratamentos. Cada tratamento foi constitudo de 10 repeties com exceo do cudzu tropical, a qual cada tratamento foi composto de 6 repeties. As plantas foram conduzidas em vasos sem furos com capacidade para aproximadamente 4,5 dm3 sendo preenchidos por 4 dm3 de solo. Foram plantadas 10 sementes por vaso e aps 10 dias da semeadura foi realizado desbaste deixando duas plantas por vaso, seguido por ltimo desbaste aos 20 dias, resultando em uma planta por vaso. Esses desbastes consideraram a altura da planta e nmero de folhas verdadeiras. A irrigao foi realizada manualmente duas vezes ao dia ao longo de todo experimento, utilizando-se gua deionizada. 3.2 Sementes 3.2.1 Obteno As sementes de Desmodium heterocarpon (L.) DC subsp. Ovalifolium (Prain) H. Ohashi - Cultivar Itabela (desmdio) foram obtidas junto Comisso Executiva do Plano da Lavoura Cacaueira (CEPLAC), as sementes de Calopogonium mucunoides Desv. (calopognio) e as de Pueraria phaseoloides (Roxb) Benth (cudzu tropical) foram adquiridas da empresa Pira Sementes (Piracicaba, SP).

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3.2.2 Superao de dormncia e o ndice de velocidade de germinao (IVG) do desmdio As sementes de calopognio no necessitam de escarificao para sua germinao e as sementes de cudzu tropical tm seu processo de escarificao j descrito (BRASIL, 1992), entretanto o mesmo no ocorre com as de desmdio, que foram alvo de estudo prvio para estabelecimento de um protocolo de superao da dormncia. Uma soluo a 1% de tetrazlio tamponado a pH 7,0 foi utilizada para avaliar a viabilidade de 200 sementes aleatoriamente escolhidas no lote. Aps o teste de tetrazlio, procedeu-se o experimento para superao. As sementes de desmdio foram previamente inspecionadas e selecionadas visualmente, pois o lote apresentava sementes fisiologicamente maduras, imaturas e senescentes. As sementes foram postas para germinar em caixas plsticas de 10x10cm do tipo ger-box devidamente desinfectadas com hipoclorito de sdio 1%, sobre papel mata-borro autoclavado. O umedecimento do papel foi realizado segundo as Regras para Anlise de Sementes (BRASIL, 1992). A cmara de germinao foi previamente desinfectada com hipoclorito de sdio 1%. O delineamento foi inteiramente casualizado, sendo os tratamentos: sem escarificao, imerso em gua quente a 84 C por 15 min, imerso em cido sulfrico concentrado por 3 e 5 minutos, todos com quatro repeties e 50 sementes por unidade experimental. As sementes, aps imergidas em cido sulfrico, foram lavadas em gua corrente por 30 min. O percentual de geminao e o ndice de velocidade de germinao (IVG) foram analisados entre o terceiro e o dcimo dia aps a semeadura. O IVG foi calculado segundo Maguire, (1962): IVG = G1/N1 + G2/N2 +...+ Gn/Nn. 3.3 Solo O solo foi coletado na Fazenda Jassy, localizada no municpio de Arataca (15015222 S, 3922832 O e 99 m acima do nvel do mar), sendo um solo considerado representativo para a regio sul da Bahia, caracterizado como Latossolo Vermelho - Amarelo. Uma amostra composta desse solo foi analisada qumica e fisicamente (EMBRAPA, 1997), como mostra as Tabelas 2 e 3

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respectivamente, no Laboratrio de Solos e Nutrio de Plantas da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical (Cruz das Almas, BA).

Tabela 2 - Caractersticas qumicas iniciais (antes do experimento) do Latossolo Vermelho-Amarelo solo coletado na Fazenda Jassy, localizada no municpio de Arataca-Ba Amostra pH M.O. P K Ca Mg Na Al H + Al SB CTC S V H2O g kg-1 mg dm-3 cmolc dm-3 %

Solo 5,3 23,87 0,8 0,18 2,4 1,4 0,07 0,2 5,83 3,98 9,88 4,05 41 inicial MO = matria orgnica; H + Al = acidez potencial; SB = soma de bases; CTC = capacidade de troca catinica; S = SMA das bases; V = saturao de bases; P = Mehlich 1.

TABELA 3 - Caractersticas fsicas do solo inicial (antes do experimento), retirado da Fazenda Jassy, localizada no municpio de Arataca-Ba Areia Areia muito Classificao Areia Areia Areia muito Areia fina total silte argila textural grossa grossa mdia fina Amostra g/kg disperso com NaOH Solo inicial 9 50 70 116 44 289 127 584 Argila

Foi realizada curva de incubao de calcrio para o solo coletado usando 6 doses de calcrio dolomtico com PRNT de 89,5 %, sendo as doses: 0; 1; 2; 3; 4 e 8 t/ha. Os resultados foram analisados por regresso para ajustar o pH em torno de 6,0 e a saturao por bases por volta de 60% (Figura 3). Depois de definida a dose do corretivo, esta foi aplicada a cada vaso, que foi regado (240 ml de H20 dm-3, considerando-se 30% de capacidade de campo) e deixado em repouso por 15 dias para ao do corretivo. Os solos contidos nos vasos foram ento fertilizados individualmente, com base na anlise de solo (Tabelas 2 e 3) e considerando-se a exigncia da cultura. A adubao de base correspondente foi: 400 mg.dm-3 de fsforo; 80 mg.dm-3 de potssio; 1,55 mg.dm-3 de ferro; 0,75 mg.dm-3 de boro; 1,33 mg.dm-3 de cobre; 0,15 mg.dm-3 de molibdnio; 4,0 mg.dm-3 de zinco e 4,0 mg.dm-3 de mangans. Para os vasos do tratamento com adubao nitrogenada foram adicionados ao solo 100 mg.dm-3 de nitrognio. Como fonte de N e P foram utilizados os fertilizantes sulfato de amnio e superfosfato triplo respectivamente. As fontes de potssio e micronutrientes foram sais de reagentes para anlise (P.A. A.C.S.). Os fertilizantes em grnulos foram incorporados ao solo, o qual foi deixado em repouso por 15 dias. O Fe - EDTA foi diludo separadamente dos outros micronutrientes para evitar sua precipitao e aplicado ao solo.

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7,00 6,50 6,00 5,50 5,00 4,50 4,00 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Doses de calcrio t/ha

pH (H2O)

y = -0,026x 2 + 0,420x + 4,945 R = 0,983

Figura 3 Curva de incubao de calcrio (PRNT=89,5) para o LATOSSOLO VERMELHOAMARELO com a equao de regresso. Aps a correo e fertilizao do solo uma amostra composta deste foi analisada (Tabela 4) para fins de fertilidade (MALAVOLTA, 1989) no Laboratrio de Cincias do Solo da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ-USP).

Tabela 4 Caractersticas qumicas do solo aps a correo e adubao T V m B Cu Fe Mn Zn Amostra pH MO P S K Ca Mg Al H+Al SB Identificao CaCl2 g dm-3 mg dm-3 cmolc dm-3 % mg dm-3 Solo adubado com N 5 37 260 127 0,6 5,5 2,2 0 3,8 8,3 12,1 69 0 0,27 1,7 93 5,6 3,7 Solo adubado sem N 5,4 40 238 49 0,86 5,5 2,6 0 3,1 8,96 12,06 74 0 0,65 2,9 113 8,3 7 -1 Metodologia para analises: pH - CaCl2 0,01 mol.l ; MO calorimetria; P, K, Ca e Mg resina trocadora de ons; S Turbidimetria (BaCl2 em p); Fe, Mn, Cu e Zn DTPA (absoro atmica); B - BaCl2.2H2O - Mtodo: microondas; H+ Al - pH SMP; Al trocvel - Titulometria (1 mol.l-1).

3.4 Inoculao dos rizbios Os rizbios foram isolados de ndulos de Desmodium heterocarpon subsp. Ovalifolium cv. Itabela coletados na Fazenda Luz do Vale (localizada no municpio de Itabuna, BA) e de ndulos de Calopogonium mucunoides coletados na Fazenda Bom Princpio (localizada no municpio de Uruuca, BA). Esses isolados foram provisoriamente registrados no Banco de Rizbios da UESC sob os nmeros Calop 01 e Desm 03. Os isolados de rizbios utilizados na inoculao foram repicados separadamente em meio de cultura 79 lquido (FRED; WAKSMAN, 1928) e

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crescidos at a obteno de suspenses bacterianas trbidas. A seguir foi preparada uma mistura resultante de igual volume de cada suspenso bacteriana, misturadas, homogeneizada e utilizada como inoculante. Foram adicionados cerca de 5 mL desta mistura em cada vaso dos tratamentos inoculados para cada espcie de leguminosa. Nos vasos dos tratamentos testemunha e com nitrognio mineral tambm foram adicionados 5 mL desta mistura, porm, previamente autoclavada a 1,5 atmosfera durante 30 min. A inoculao ocorreu concomitantemente ao plantio das sementes. 3.5 Coleta, parmetros avaliados e anlises estatsticas Decorridos 60 dias da semeadura, as plantas foram coletadas e avaliadas em sua biomassa (matria seca da parte area), teor de nutrientes da parte area, grau de colonizao micorrzica, nmero e peso seco de ndulos e dimetro do colo. A parte area das plantas foi seca em estufa de ventilao forada a 65C por 72 h, colocada por 1 h em dessecador, pesada em balana analtica digital BEL modelo Mark 210a para obteno da massa da matria seca e posteriormente trituradas em moinho Marconi modelo MA-340 no Laboratrio de Qumica e Fertilidade do Solo da UESC. Amostras processadas da parte area das plantas foram embaladas em sacos de papel e encaminhadas para o Laboratrio de Cincias do Solo da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ) para a anlise do teor de nutrientes segundo metodologia de Malavolta, 1989. Para se determinar a porcentagem de colonizao micorrzica nas plantas, as razes foram clarificadas com KOH a 10% em banho-maria a 90 C corando-as com azul de tripano (PHILLIPS; HAYMAN, 1970). A avaliao utilizou estereomicroscpio com aumento de 40X, empregando o mtodo de interseo em placa quadriculada (GIOVANNETTI; MOSSE, 1980). Os ndulos das razes das duas leguminosas forrageiras foram destacados da raiz com o auxlio de uma pina, contados e secos em estufa com ventilao forada a 65C por trs dias. Depois de secos foram colocados por 1 hora no dessecador, logo aps pesados em balana analtica digital BEL modelo Mark 210a para obteno do peso seco dos ndulos no Laboratrio de Qumica e Fertilidade do Solo da UESC.

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O dimetro do colo foi medido com paqumetro digital Starrett 727-6/150 no momento da coleta das plantas. As anlises estatsticas foram realizadas no STATISTICA verso 6 e no Microsoft Office Excel verso 2007. Foram feitas anlises de varincia, seguida do teste de Tukey e no experimento de superao de dormncia utilizou-se Duncan (5%). Os dados de percentagem de colonizao radicular foram submetidos transformao arco seno (x/100)1/2, onde x representa a percentagem obtida na quantificao.

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4 RESULTADOS E DISCUSSO

4.1 Superao de dormncia e ndice de velocidade de germinao (IVG) do desmdio O teste de tetrazlio demonstrou que o lote das sementes de Desmodium heterocarpon subsp. Ovalifolium cv Itabela apresentava 75% de viabilidade dos embries, o que significa um percentual de 15% de sementes viveis que no embeberam e no tiveram sua dormncia superada pelo uso de c. sulfrico concentrado por 3 min. As avaliaes demonstraram que a imerso em cido sulfrico concentrado por trs minutos foi o melhor mtodo para superao da dormncia de D. heterocarpon subsp. ovalifolium cv Itabela, apresentando 60% de sementes germinadas (Figura 4). Apesar da seleo visual previamente realizada no lote de sementes do experimento, a porcentagem de germinao foi baixa. Isso poderia ser explicado devido a origem das sementes que foram colhidas de cultivares pouco melhorados e no selecionados, e estaria refletido no maior grau de disperso dos valores em torno da mdia obtido no experimento de germinao desse cultivar (Figura 4).

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Figura 4. Mdia de plntulas de Desmodium heterocarpon var. ovalifolium cv. Itabela germinadas para cada tratamento. As mdias seguidas das mesmas letras, acima das barras, no diferem estatisticamente pelo teste de Duncan a 5 %.

As mdias de plntulas germinadas para os tratamentos com gua quente a 84C e c. sulfrico concentrado por 5 min no diferiram estatisticamente pelo teste Duncan a 5% (Figura 4), e ambas tiveram uma taxa de germinao menor que o tratamento com c. sulfrico por 3 min (Figura 4). O menor nmero de sementes duras foi observado no tratamento com cido sulfrico por 3 minutos (Figura 5). Um estudo realizado por Martins et al. (1997) constatou a importncia da gua quente no amolecimento dos tecidos acelerando as reaes fisiolgicas do tegumento, favorecendo a absoro de gua, trocas gasosas e a germinao. No experimento com sementes de D. heterocarpon var. ovalifoluim cv Itabela, entretanto, a imerso em gua quente no foi satisfatria apresentando uma taxa de sementes duras de 40% (Figura 5) contrastando com os tratamentos utilizando cido sulfrico que tiveram taxas mais baixas.

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Figura 5 Percentual de sementes duras da espcie Desmodium heterocarpon var. ovalifolium cv. Itabela ao final do teste.

Em um experimento com Desmodium incanum foram encontradas 58% de sementes duras no tratamento sem escarificao, 53 % no tratamento com gua a 70 C por 5min e 4% com cido sulfrico por 5min, estes resultados demonstram que o gnero Desmodium possui uma resistncia a absoro de gua e isto tem sido atribudo camada de clulas palidicas presentes na superfcie da semente (FRANKE; BASEGGIO, 1998). O tratamento com c. sulfrico 3 minutos foi tambm o que apresentou melhor ndice de velocidade de germinao (IVG), com 7 plantas por dia (Figura 6).

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Figura 6 ndice de velocidade (por dia) de germinao das sementes de Desmodium heterocarpon var. ovalifolium cv. Itabela nos diferentes tipos de escarificao utilizados.

4.2 Nmero e peso dos ndulos Apesar de no ter ocorrido correlao entre o nmero de ndulos e a produo da matria seca da parte area (MSPA), diversos trabalhos tm relacionado nmero de ndulos com fixao de nitrognio atmosfrico e biomassa da planta (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Na espcie Calopogonium mucunoides, os tratamentos no influenciaram significativamente (p 0,05) no nmero de ndulos por planta, sendo que a testemunha obteve maior mdia. O tratamento com menor desvio padro foi o inoculado seguido da testemunha e nitrogenado. Mesmo no sendo inoculado com os rizbios selecionados, o tratamento testemunha das espcies estudadas apresentaram ndulos demonstrando a presena de rizbios nativos no solo. No foi avaliada a reduo do acetileno, porm no houve deficincia de nitrognio na planta, conforme anlise do tecido vegetal mostrada na Tabela 8. Isso evidencia a eficincia dos rizbios nativos e inoculados na fixao do N2.

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O cudzu tropical tambm no apresentou diferena entre os tratamentos, porm a espcie apresentou menor nmero de ndulos no tratamento com nitrognio mineral, em mdia 53,33 ndulos por planta. Sabe-se que elevadas doses de nitrognio inibem a nodulao, pois a mesma ocorre em resposta s demandas nutricionais da planta (WATERER; VESSEY, 1993). Na presena de N-mineral tais demandas so reduzidas, no havendo o estmulo nodulao (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). O desmdio apresentou diferena estatstica no nmero de ndulos entre os seus tratamentos, sendo que o tratamento com nitrognio mineral obteve, em mdia, duas vezes menos ndulos que a testemunha e o desmdio inoculado, os quais entre si no diferiram estatisticamente. Quando comparado com as outras espcies o desmdio obteve, em mdia, nmero de ndulos duas vezes maior que o calopognio e quase trs vezes mais que o cudzu (Tabela 5). Patriarca et al. (2002) relatam que a adubao com fonte de NH4+ pode ativar sinais negativos junto as razes inibindo a diviso celular cortical inicial para formao do ndulo em leguminosas. Alm disso, o NH4+ inibe a deformao do pelo radicular, a qual necessria para entrada do rizbio na raiz e inativa o meristema apical dos ndulos j formados (Patriarca et al., 2002). Estes mesmos autores constatam que o NH4+ produzido dentro do ndulo pode ter um efeito positivo sobre a prpria nodulao, porm quando esse on absorvido diretamente do solo pela leguminosa tem um efeito sistmico negativo inibindo a formao dos ndulos. Isso parece ter ocorrido nos tratamentos com adubao nitrogenada (sulfato de amnio) do desmdio e cudzu tropical os quais apresentaram menores nmeros de ndulos do que os tratamentos inoculados e as testemunhas. Esta reduo conseqentemente tambm se refletiu no peso seco desses ndulos.

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Tabela 5: Nmero de ndulos (n nod.) e peso seco dos ndulos (psnod) em leguminosas cultivadas em solo com diferentes fontes de nitrognio (qumica e fixao biolgica) aos 60 dias aps emergncia
Espcies/tratamentos Calopognio testemunha inoculado nitrogenado Desmdio testemunha inoculado nitrogenado Cudzu tropical testemunha inoculado nitrogenado n nod. 101 b 84 b 94 b 278 a 308 a 135 b 114 b 85b 53 b psnod (g) 0,05 b 0,07 b 0,05 b 0,12 a 0,11 ab 0,04 b 0,29a 0,32 a 0,10 b

Mdias seguidas da mesma letra, dentro da coluna, no diferem entre si pelo teste de Tukey (p0,05).

Analisando a correlao entre o nmero e o peso seco dos ndulos, o Desmodium heterocarpon subsp. Ovalifolium cv Itabela obteve um coeficiente de correlao linear positiva (r2 0,79), assim como a Pueraria phaseoloides e o Calopogonium mucunoides que apresentaram correlao linear positiva com r2 de 0,58 e 0,56 respectivamente. Shockley et al. (2004) trabalhando com Desmodium paniculatum, obtiveram mdias de nodulao bastante inferiores aos apresentados pelo Desmodium heterocapon subsp. Ovalifolium (Prain). Alm de doses elevadas de nitrognio e teor de matria orgnica, o grau de nodulao tambm pode variar com a espcie em questo (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006).

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0,5

0,4 Peso seco dos ndulos (g)

0,3

0,2

0,1 tra test tra inoc tra nitro

0,0

Calop

Desm o Espcies

Puera

Figura 7. Mdia e desvio padro do peso seco dos ndulos nos iguais tratamentos (test = testemunha, inoc = inoculada com rizbios, nitro = adubada com nitrognio) nas diferentes espcies de leguminosas (Calop = calopognio, Desmo = desmdio, Puera = cudzu tropical).

O peso seco dos ndulos (Figura 7) uma varivel que tambm serve como parmetro, assim como o nmero de ndulos, para avaliao da eficincia do rizbio na nutrio nitrogenada da planta. O calopognio foi a nica espcie em que no houve diferena entre os tratamentos, diferindo do desmdio e do cudzu tropical, onde o peso seco dos ndulos foi menor nos tratamentos com nitrognio (Figura 7).

4.3 Matria seca da parte area (MSPA), dimetro do colo e porcentagem de colonizao micorrzica Nos dois meses de cultivo, o desmdio e o calopognio no apresentaram diferenas estatsticas entre seus respectivos tratamentos com relao produo de biomassa da parte area (Tabela 6). No cudzu tropical, cuja produo de matria seca da parte area foi maior que nas outras duas espcies, houve diferenas

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estatsticas entre os tratamentos, sendo que as plantas adubadas com nitrognio apresentaram menor biomassa na parte area do que as plantas inoculadas com rizbio e do que as plantas testemunhas.
Tabela 6 - Mdia da produo de matria seca da parte area (MSPA) e teor de nitrognio (N) nas diferentes espcies e tratamentos Espcies/tratamento Calopognio Testemunha Inoculado Nitrogenado Desmdio Testemunha Inoculado Nitrogenado Cudzu tropical Testemunha Inoculado Nitrogenado 8,47 b 8,41 b 35,23 a 33,53 a 6,79 a 6,03 a 6,81 a 25,08 a 22,44 ab 18,84 b 3,33 a 3,14 a 3,24 a 32,55 a 33,98 a 29,58 a MSPA (g) N (g.kg-1)

3,32 a 30,10 a Mdias seguidas das mesmas letras, dentro da coluna, no diferem estatisticamente pelo teste de Tukey (p0,05) de probabilidade com desigualdade entre o nmero de repeties.

A produo de MSPA do desmdio foi aproximadamente cinco vezes maior do que quela observada por Shockley et al., (2004) em Desmodium paniculatum. Plazas et al., (2001) publicaram acessos de Desmodium ovalifolium (incluindo o acesso utilizado nesse trabalho), Arachis pintoi e Pueraria phaseoloiedes, descrevendo o percentual de cobertura de solo por estas plantas em cultivo de seringueira de palmeiras, em diferentes pocas. O desmdio apresentou bom percentual de cobertura de solo, principalmente na poca seca (Tabela 7).

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Tabela 7 Cobertura do solo(%) com diferentes leguminosas e formas de cultivo (com sombra e sem sombra) em plantaes de seringueira e palmeira, dois anos depois da semeadura na Colombia Acesso (n CIAT) Savanas Montanhas Plantao velha de seringueira poca seca C/sombra A .pintoi 17434 A .pintoi 18744 A. pintoi 18748 D.ovalifolium 350 20 65 32 90 93 87 25 S/sombra 15 37 23 93 88 90 55 poca mida S/sombra 50 83 75 30 17 43 30 C/sombra 47 70 68 83 75 95 57 35 63 47 68 68 87 37 Palmeira jovem poca seca poca mida

D. ovalifolium 13105 D. ovalifolium 13651 P. phaseoloides 9900

Fonte: Plazas et al., 2001 modificado.

O cudzu tropical apresentou maior biomassa da parte area nos tratamentos testemunha e com inoculao, quando comparados com o desmdio e o calopognio (Figura 8). A baixa quantidade de MSPA nas plantas de cudzu tropical adubadas com nitrognio pode ser explicada pelo fato de algumas espcies de leguminosas segundo Melloni et al. (2006) no tolerarem doses de nitrognio em torno da que foi aplicada (100 mg.dm-3de N) juntamente com o alto teor de matria orgnica (61 g.dm-3) encontrado no Latossolo do presente estudo. As plantas inoculadas e testemunhas do cudzu tropical apresentaram maior produo de biomassa area quando comparadas com as do desmdio e do calopognio. Num estudo de decomposio e liberao de nutrientes acumulados em leguminosas herbceas sem adubao com nitrognio mineral, Espindola et al., (2006) relataram que o cudzu tropical apresentou maior produo de matria seca, superando as espcies Arachis pintoi Krap. & Grerg. (amendoim forrageiro) e Macroptilium atropurpureum (OC.) Urb. (siratro).

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12 11 10 9 8 7 6 5 4 3

Matria seca (g)

Calop

Desmo

Puera

Calop

Desmo Tratamento inoculado

Puera

Tratamento testemunha 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 Calop Desmo Puera

Tratamento com nitrognio mineral

Figura 8. Mdia e desvio padro da MSPA das leguminosas forrageiras (Calop = calopognio, Desmo = desmdio, Puera = cudzu tropical) nos diferentes tratamentos.

Para a varivel dimetro do colo, os tratamentos dentro de cada espcie no diferiram estatisticamente pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade (Figura 9), exceto para o cudzu tropical que obteve mdias diferentes entre os tratamentos com adubao nitrogenada (3,6 mm) e testemunha (4,8 mm). Esta varivel um parmetro utilizado para acompanhamento do desenvolvimento da planta, porm no presente trabalho foi realizada apenas uma anlise pontual ao final dos 60 dias do experimento. O colo da espcie cudzu tropical no tratamento com fertilizante nitrogenado apresentou menor dimetro mdio do que no tratamento inoculado e na testemunha. Somando esse resultado aos baixos valores observados para MSPA, nmero de ndulos e peso seco dos ndulos, forma-se um conjunto de evidncias que denotam a incompatibilidade do cudzu tropical com a dose de nitrognio aplicada.

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5,0
aC

4,5

abC

Dimetro do colo (mm)

4,0
aB aA aB aA

bA

3,5

3,0

aA

aA

2,5

2,0

Calop

Desm o Espcies

Puera

tra test tra inoc tra nitro

Figura 9. Mdia e desvio padro do dimetro do colo das plantas (Calop = calopognio, Desmo = desmdio, Puera = cudzu tropical) nos diferentes tratamentos (test = testemunha, inoc = inoculada com rizbios, nitro = adubada com nitrognio). Acima das barras, letras minsculas iguais, dentro da mesma espcie, e letras maisculas iguais, dentro dos tratamentos, no diferem estatisticamente pelo teste de Tukey (p0,05).

A porcentagem de colonizao micorrzica no ultrapassou a mdia de 17 % em nenhuma das espcies estudadas (Figura 10). Tal resultado muito provavelmente explicado pela alta dose de P utilizada no experimento. Diversos estudos comprovam que doses elevadas de fsforo inibem a colonizao dos fungos micorrzicos arbusculares, pois uma vez que a planta encontra-se bem nutrida deste elemento no h sinalizao para iniciar tal colonizao (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Os valores mdios para a taxa de colonizao micorrzica tambm no apresentaram diferenas estatsticas entre os tratamentos e entre as espcies.

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Porcentagem de colonizao micorrizica

18,0 16,0 14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 test Calop inoc Calop nitro Calop test Desmo inoc Desmo nitro Desmo test Puera inoc Puera nitro Puera

Tratamentos/espcies

Figura 10 Taxa de colonizao micorrzica nas razes das plantas dos diferentes tratamentos (test = testemunha, inoc = inoculada com rizbio, nitro = adubada com nitrognio) nas diferentes espcies (Calop = calopognio, Desmo = demdio, Puera = cudzu tropical).

4.4 Teor de nutrientes da parte area e porcentagem de protena bruta No houve toxidez nem deficincia de nenhum dos nutrientes analisados (segundo NOVAIS et al., 2007), com exceo do boro (mdia de 60,55 mg.kg-1). A ausncia de sintomas de deficincia juntamente com anlise do tecido foliar do desmdio, calopognio e cudzu tropical indicaram que tanto os rizbios nativos, uma vez que o solo no foi esterilizado, quanto os inoculados supriram a necessidade de N s plantas. As trs espcies cujos tratamentos foram adubados com nitrognio apresentaram menor teor deste elemento na parte area quando comparadas com a testemunha e o tratamento inoculado com rizbios (Tabela 8). Nos testes de mdia para o teor de nitrognio e mangans do desmdio e para o teor de mangans do cudzu tropical houve diferenas estatsticas significativas (Tabela 8). Estudos realizados por Perin et al. (2004) relatam que o cudzu tropical apresentou melhor produo de matria seca e maiores acmulos de N e K numa densidade de 10 plantas m-2 e um espaamento de 25 cm entre fileiras, sendo avaliado 5 meses aps o plantio obtendo uma mdia de 25,97 g.kg-1 de N e 9,16 g.kg-1 de K. No presente experimento os valores de N e K para o cudzu tropical foram superiores (Tabela 8) aos encontrados por Perin et al. (2004), salientando que a avaliao foi realizada aos 2 meses de cultivo em vasos e que doses diferentes de fertilizantes e nutrientes minerais foram utilizadas. Esses resultados reforam a afirmao de que essa leguminosa devidamente adubada pode apresentar doses adequadas de nutrientes em sua biomassa sendo potencial fonte nutricional para a alimentao de ruminantes.

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No estudo realizado por Perin et al., (2004) o cudzu tropical se mostrou superior a Galactia striata quanto ao acmulo de nitrognio da parte area, fator importante do ponto de vista de valor nutricional da pastagem, pois quanto maior o contedo de N maior a porcentagem de protena bruta. Espindola (2001) verificou que 86 % do N presente no tecido vegetal do cudzu tropical foi derivado do processo de fixao biolgica de N2 (FBN). Essa leguminosa tambm confere maior agregao ao solo (Perin et al., 2002a) e atenua as oscilaes trmicas e hdricas do solo.

Tabela 8 - Teor de macro e micronutrientes da parte area de calopognio, desmdio e cudzu tropical das plantas testemunha e submetidas inoculao com rizbios e adubao com nitrognio
Espcies/Tra tamentos Calopognio Testemunha Inoculado Nitrogenado Desmdio Testemunha Inoculado Nitrogenado Cudzu Testemunha Inoculado Nitrogenado 32,55a 33,97a 29,58a 25,08a 22,44ab 18,84b 35,23a 33,53a 30,10a 2,86a 2,92a 2,99a 2,53a 2,60a 2,27a 2,88a 2,79a 2,78a 25,68a 27,05a 8,86a 9,31a 1,59a 1,67a 2,30a 2,10a 1,96a 2,64a 2,70a 2,28a 2,63a 1,74a 1,60a 1,84a 1,71a 1,69a 1,79a 1,63a 1,62a 1,45a 60,80a 61,78a 67,91a 54,50a 57,00a 58,22a 62,65a 61,94a 62,17a 7,38a 6,51a 5,21a 7,94a 7,56a 6,01a 10,31ab 10,97b 7,47a 603,22a 615,50a 1063,50a 219,46a 199,21a 299,21a 458,33a 651,67a 730,00a 33,69a 29,04a 58,92b 38,65a 31,81a 64,08b 53,61a 68,83a 146,23b 29,03a 32,49a 31,62a 28,67a 28,67a 27,22a 39,68a 33,42a 35,92a N P K g Kg
-1

Ca

Mg

Cu

Fe mg Kg
-1

Mn

Zn

23,74a 10,46a 18,64a 10,20a 19,20a 9,94a 19,10a 10,43a 20,10a 26,18a 22,82a 8,61a 7,68a 8,51a

Mdias seguidas da mesma letra, nas colunas, no diferem estatisticamente pelo teste de Tukey (p0,05), com desigualdade entre o nmero de repeties. Metodologia para analises: P: colorimetria (mtodo metavanadato de amnio); S: colorimetria (turbidimetria do sulfato de brio); K, Ca e Mg: espectrofotometria de absoro atmica; Cu, Fe, Mn e Zn: espectrofotometria de absoro atmica; Digesto Sulfrica para N-total; B: colorimetria (mtodo Azometina H).

A calagem realizada no incio do experimento pode ter auxiliado na absoro de N pelas plantas de desmdio, calopognio e cudzu tropical e na melhoria da fixao simbitica do N2 em decorrncia da formao de maior nmero de ndulos. Isso foi sugerido por Caires e Rosolem (2000) que relataram a influncia da calagem no aumento da absoro de nitrognio pelo amendoim forrageiro.

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Tabela 9 Caractersticas qumicas do solo aps a correo (AC), adubao (AA) e retirada das plantas (AR)
Amostra identificao AC e AA Solo adubado com N Solo adubado sem N AR Calopognio Testemunha Nitrogenado Inoculado Desmdio Testemunha Nitrogenado Inoculado Cudzu Testemunha Nitrogenado Inoculado pH CaCl2 MO g dm -3 P S mg dm-3 K Ca Mg Al H+Al cmolc dm-3 SB T V % m B Cu Fe Mn mg dm-3 Zn

5 5,4

37 40

260 238

127 49

0,6

5,5 2,2

0 0

3,8 3,1

8,3

12,1

69

0 0

0,27 1,7

93

5,6 3,7 7

0,86 5,5 2,6

8,96 12,06 74

0,65 2,9 113 8,3

5,1 4,8 5,1 5,1 4,9 5,1 5,0 4,9 5,4

34 37 38 63 60 58 63 61 57

130 131 126 168 132 143 144 165 165

61 0,52 5,6 2,3 0 139 0,52 5,5 2,2 0,1 62 0,52 5,3 1,9 0 55 0,61 4,8 2,8 116 0,58 4,0 2,4 39 0,56 4,1 2,5 52 0,45 5,0 3,0 121 0,60 4,1 2,4 37 0,43 4,1 2,5 0 1 0 0 1 0

3,1 4,2 3,1 2,8 6,2 3,2 3,2 5,2 2,1

8,42 11,52 73 8,22 12,42 66 7,75 10,85 71 8,21 12,01 68 6,98 12,18 57 7,16 11,36 63 8,45 12,65 67 7,10 11,30 63 7,03 10,13 69

0 1 0 0 1 0 0 1 0

0,12 2,2 0,29 2,1 0,29 2,2 0,86 1,8 0,68 1,7 0,64 1,7 0,78 1,6 0,82 1,6 0,70 1,8

96 93 95 58 56 59 65 72 70

4,7 4,7 4 5,4 4,5 4,9 5,9 4,8 4,5 4,3 4,9 4,2 4,4 4,3 6,6 4,7 5,5 4,1

Para protena bruta (P.B.), com base na matria seca, foi verificado efeito significativo (p0,05) somente entre os tratamentos testemunha e com nitrognio mineral da espcie Desmodium heterocarpon (Tabela 10). Nos sistemas de produo de bovinos, as contribuies das leguminosas podem se dar no mbito da produo e do consumo de forragem, bem como a utilizao ou converso dessa forragem em protena animal, ou seja, abrangendo todo o sistema solo-planta-animal. A porcentagem de protena bruta foi maior nas espcies calopognio e cudzu tropical, sendo menor no desmdio. No entanto, o tratamento com inoculao e a testemunha do desmdio apresentaram porcentagens de P.B. semelhantes aos encontrados por Pereira et al. (1995) para o desmdio em campo. Paciullo et al. (2003) realizaram um trabalho de avaliao de caractersticas produtivas e qualitativas de pastagem de braquiria em monocultivo e consorciada com estilosantes e constataram que a leguminosa contribui no aumento da quantidade e na melhoria da qualidade da forragem disponvel na pastagem, principalmente nos perodos secos. No mesmo estudo os autores relatam que o teor de protena bruta da leguminosa variou entre 16,3% e 12% no perodo chuvoso e seco respectivamente. Na poca da seca, o teor de protena bruta (P.B.) das gramneas situa-se bem abaixo do valor crtico para o crescimento dos

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microrganismos do rmen (6-8% de P.B. na matria seca). O consrcio de leguminosas com gramneas reduz esse dficit de protena na forragem, e conseqentemente o dficit energtico do animal, uma vez que as leguminosas tm uma menor amplitude no teor de nutrientes, principalmente o nitrognio, ao longo do ano. O consrcio gramnea - leguminosa pode, dentre outras vantagens, prolongar a vida til da pastagem, postergando o declnio na nutrio e produtividade animal.
Tabela 10 - Mdia da porcentagem de protena bruta (PB), com base na matria seca (MS) e teor de nitrognio (N) para cada espcie nos diferentes tratamentos Tratamentos/espcies Calopognio Test Inoc Nitro Desmdio Test Inoc Nitro Cudzu Tropical Test Inoc Nitro 22,02 a 20,95 a 18,81 a 35,23 a 33,53 a 30,10 a 15,68 b 14,02 ab 11,77 a 25,08 b 22,44 ab 18,84 a 20,34 a 21,23 a 18,48 a 32,55 a 33,98 a 29,58 a PB (%) N (g.kg-1)

Mdias seguidas da mesma letra, nas colunas, no diferem estatisticamente pelo teste de Tukey (p0,05), com desigualdade entre o nmero de repeties.

A anlise de varincia mostrou que houve diferenas estatsticas com relao a porcentagem de protena bruta (P.B.) entre os mesmos tratamentos nas diferentes espcies de leguminosas estudas (Figura 11), porm o presente estudo demonstrou valores considerveis para o teor de P.B. na parte area do desmdio, calopognio e cudzu tropical, indicando o potencial dessas leguminosas, quando bem nutridas, para melhoria das pastagens.

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26 24 A Protena bruta na matria seca (%) 22 20 18 16 14 12 10 8 tra test tra inoc tra nitro A A A A A

B B B

Calop

Desm o Espcies

Puera

Figura 11. Mdia de protena bruta por planta nos diferentes tratamentos (test = testemunha, inoc = inoculada com rizbios, nitro = adubada com nitrognio) nas diferentes espcies de leguminosas (Calop = calopognio, Desmo = desmdio, Puera = cudzu tropical). Letras iguais acima da barra, dentro de cada tratamento, no diferem estatisticamente entre si pelo teste de Tukey a 5 % com desigualdade entre o nmero de repeties.

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5 CONCLUSES

A partir desse estudo com leguminosas herbceas forrageiras tropicais foram obtidas algumas informaes sobre o comportamento nutricional e o crescimento das espcies, Desmodium heterocarpon subsp. ovalifolium cv. Itabela (desmdio), Calopogonium mucunoides Desv. (calopognio) e Pueraria phaseoloides (Roxb.) Benth. (cudzu tropical), no perodo de 8 semanas, utilizando um solo representativo da regio sul baiana. Algumas concluses sobre os resultados do presente estudo so: Os rizbios inoculados e os nativos do solo foram eficientes na fixao do N atmosfrico e suprimento de amnia para as leguminosas hospedeiras, as quais produziram percentual de matria seca semelhante ou superior ao tratamento com nitrognio mineral durante o perodo de crescimento avaliado. Os tratamentos adubados com nitrognio mineral apresentaram tendncia a reduo no teor de N, assim como no percentual de protena bruta, da parte area, principalmente no desmdio. Dentre as espcies estudadas o cudzu tropical foi a que apresentou menor produo de matria seca da parte area no tratamento com nitrognio mineral, indicando uma incompatibilidade na relao produo de biomassa desta espcie com a dose aplicada de N. A correo do solo juntamente com a adubao de base foram primordiais para o crescimento e desenvolvimento das leguminosas.

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