You are on page 1of 6

IV Seminrio de Iniciao Cientfica

www.ueg.br www.prp.ueg.br

PROPAGAO IN VITRO DE CATTLEYA WALKERIANA E SHOMBURGKIA CRISPA Gislene Crrea Sousa , Maria Rita de Cssia Campos2,4, Pollyanna Loureno Clemente3,4 1. 2. 3. 4. Bolsista PBIC/UEG Pesquisadora Orientadora Voluntrio Iniciao Cientfica PVIC/UEG Curso de Cincias Biolgicas, Unidade Universitria de Morrinhos, UEG
1,4

RESUMO Este trabalho teve como objetivo adequar um protocolo para germinao in vitro das espcies de Cattleya walkeriana e Shomburgkia crispa. Foram coletadas cpsulas de onde se retiraram as sement es, estas passaram por um processo de desinfestao em lcool 70% e hipoclorito 30% aps, foram enxaguadas sucessivas vezes em gua destilada autoclavada. Em seguida, as sementes foram inoculadas em meio de cultura para semeadura e mantidas por sete dias no escuro. Aos 15 dias de cultivo foram observadas estruturas globulares verdes em ambas espcies. No entanto, as espcies apresentaram respostas distintas quanto ao nmero de protocormos e plntulas. Foi obtida uma mdia de 7,6 e 1,8 plntulas por unidade experimental para C. walkeriana e S. crispa, respectivamente. O protocolo utilizado para propagao in vitro apresentou-se eficiente para C. walkeriana havendo necessidade de otimizao para S. crispa na converso do estdio de protocormos em plntulas. Palavras-chave: Semeadura in vitro, orqudeas, protocormos Introduo A famlia Orchidaceae est entre uma das maiores representantes das famlias florferas, englobando quase um stimo das existentes no planeta (Suttleworth et.al., 1997). Esta famlia composta por aproximadamente 725 gneros, aproximadamente 35000 espcies e vrios hbridos distribudos em diversos hbitats (Cronquist, 1981, Dressler, 1993, Braga, 1977; Ribeiro et al., 1999). De acordo com Raven (2001) a maioria das espcies ocorrem em ambientes tropicais sendo que 140 espcies so nativas do Canad e EUA. O Brasil dispe de grande biodiversidade dessa espcie, principalmente das epfitas. No entanto, muitas espcies esto correndo o risco de extino, devido a destruio de seu habitat e s coletas predatrias. Com a destruio do habitat, uso de produtos txicos e a explorao desordenada tm ocorrido o desaparecimento dos agentes polinizadores e as orqudeas remanescentes em matas 343

IV Seminrio de Iniciao Cientfica


www.ueg.br www.prp.ueg.br

preservadas, no mais se reproduzem, pois no ocorre a polinizao e a formao das cpsulas de sementes. Nas orqudeas as sementes esto protegidas dentro de uma cpsula, que no caso seria o fruto, esta quando se encontra em estado de maturao se rompe expondo as sementes aos diversos tipos de polinizadores, principalmente o vento. Em apenas um fruto de orqudea possvel encontrar mais de 800000 sementes (Pierik, 1997; Bach e Castro, 2004). Na natureza as orqudeas germinam e desenvolvem-se atravs da relao com fungos micorrzicos, os quais fornecem nutrientes necessrios s orqudeas (Ramunssen, 2002, Pereira et al., 2003). As orqudeas tambm se propagam vegetativamente. No entanto, mtodos convencionais de propagao de orqudeas so lentos e laboriosos elevando desta forma, o preo de orqudeas no mercado. A descoberta da cultura assimbitica contribuiu para minimizar o tempo e a porcentagem de germinao. O cultivo in vitro de matrizes selecionadas de orqudeas utilizado freqentemente pois permite a compatibilizao de demandas especficas do mercado com atributos importantes como, poca de florao, colorao, tamanho, forma das flores, tamanho e vigor das plantas (Kerbauy, 1997). A propagao in vitro alm de acelerar a taxa de germinao, permite a obteno de uma maior quantidade de mudas com maior aproveitamento de sementes, pois, evita o desperdcio que ocorre no ambiente quando as mesmas no conseguem germinar, ou devido ao seu desenvolvimento ser lento muitas no atingem seu estado de maturao (Martini et al, 2001). Alm disso, a propagao in vitro tem sido utilizada no Brasil para aumentar a produo de mudas de alta qualidade gentica e conseqentemente reduzir seu custo. Contribuindo assim, para salvar muitas espcies que se encontram ameaadas (Stancato et. al., 2001). As plantas cultivadas in vitro geralmente apresentam caractersticas morfolgicas diferentes quando comparadas quelas que cresceram diretamente no campo ou em casa de vegetao, fator responsvel pela sua baixa taxa de sobrevivncia ex vitro (Kerbauy, 1997). Possuem alto vigor fisiolgico, devido a sua nutrio balanceada nas fases iniciais de desenvolvimento, e isto traduz em rpido crescimento e maior tolerncia a condies adversas de meio ambiente, bem como ao ataque de doenas e pragas. Considerando que, por meio de experimentos realizados ao longo dos anos, dentro da famlia Orchidaceae, as condies de cultivo so especficas para os gneros e algumas vezes para espcies pertencentes ao mesmo gnero (Arditti & Ernest, 1993), tornando necessrio adequar protocolos para a propagao in vitro. As sementes de orqudeas so pequenas e, com grande variao de tamanho entre espcies, o que pode ser observado, por exemplo, entre a 344

IV Seminrio de Iniciao Cientfica


www.ueg.br www.prp.ueg.br

semente de C. walkeriana que menor que a de S. crispa. Esta diferena em tamanho pode influenciar no resultado in vitro. Considerando a importncia da conservao de espcies de orqudeas e a possibilidade de um aumento da germinao este trabalho prope desenvolver um protocolo de propagao in vitro para as espcies C. walkeriana Gardner e S. crispa Lindl.

Material e mtodos Cpsulas maduras de C. walkeriana e S. crispa foram abertas para a retirada de sementes. As sementes passaram por um processo de desinfestao em lcool 70% e hipoclorito 30% aps, foram lavadas sucessivas vezes em gua destilada autoclavada. A seguir, as sementes foram inoculadas em tubos de ensaio 15 X 180mm, estes contendo meio para germinao Knudson C. (1922) modificado com acrscimo de 20% de sacarose (g/L) e 1g/L de carvo ativado. As sementes foram inoculadas em 64 tubos, sendo 32 para cada espcie. Aps, os tubos foram vedados com papel alumnio e papel filme e mantido em condies ambientais do laboratrio de Biologia da UEG/Morrinhos, no escuro por sete dias. Com o surgimento dos protocormos os mesmos foram trans feridos para frascos de 200 mL contendo meio Knudson C. modificado por Morel (1960), acrescidos de 20% de sacarose (g/L), 1,0% de carvo ativado (g/L) e 1000L de BAP. Cada tubo foi considerado uma unidade experimental. Foi considerada para anlise a porcentagem de germinao e posterior converso em protocormos e plntulas.

Resultados e discusso As respostas morfognicas encontradas diferiram entre as espcies. Um protocolo geral otimizado para propagao in vitro de ambas espcies pode ser verificado na Figura 1. Foi observado que em torno de quatro dias aps a transferncia do ambiente escuro para ambiente de luz, ou 15 dias da inoculao, as sementes germinaram e produziram estruturas globulares e verdes. No entanto, e stas estruturas globulares ou protocormos se tornaram visveis em torno de 20 dias (Figura 1B). Estes resultados esto de acordo com Miyoshi & Mii (1998) que verificaram a formao de protocormos aos 20 dias. Alm disso, pde-se observar que o estdio de protocormos aumentava em mdia um tero a cada 15 dias. Notouse que os protocormos apresentavam estdios de desenvolvimento variado. Alguns, pouco diferenciados, necrosaram. Outros apresentavam rizides. Nas unidades experimentais os estdios variavam entre sementes iniciando o processo de germinao, formao de protocormos e de plntulas. Os primeiros primrdios foliares 345

IV Seminrio de Iniciao Cientfica


www.ueg.br www.prp.ueg.br

foram observados aos 30 dias em protocormos ainda cultivados em meio sem adio de BAP, os quais foram transferidos para meio de alongamento (Figura 1 C). Em meio com adio de 1mg/L de BAP os protocormos converteram em plntulas aps 60 dias do cultivo (Figura 1 D). Vrios trabalhos foram desenvolvidos numa tentativa de otimizar a semeadura in vitro de orqudeas e a adio de BAP discutida entre autores. Efeitos positivos, como reduo no tempo de germinao, foram observados por PauW et al. (1995) em Cypripedium candidum. Verificou-se que na espcie C. walkeriana a resposta morfognica foi melhor uma vez que esta apresentou uma quantidade maior de protocormos e plntulas durante o processo de germinao (Tabela 1). No entanto, visualmente, a espcie S. crispa apresentou uma germinao mais rpida e, seus protocormos apresentaram uma cor verde mais intensa alm de suas plntulas mostrarem-se maiores havendo assim necessidade de otimizao do protocolo para esta espcie.

Figura 1. Protocolo de propagao in vitro para C. walkeriana e S. crispa. A) Sementes (aumento 40X), B) Protocormos aos 20 dias em meio sem adio de BAP, C) Primrdios foliares aos 30 dias de cultivo em meio com adio de BAP e D) Plntula aos 60 dias.

346

IV Seminrio de Iniciao Cientfica


www.ueg.br www.prp.ueg.br

Tabela 1. Dados da propagao in vitro de S. crispa e C. walkeriana Espcie No de protocormos No de plntulas Mdia de plntulas por unidade experimental 7,6 1,8

Cattleya walkeriana Shomburgkia crispa

257 109

38 9

Concluses Os resultados deste trabalho indicam que, a propagao in vitro pode ser utilizada para propagao em grande escala de C. walkeriana uma vez que, h reduo no tempo de germinao alm de no haver necessidade do uso de fungos micorrzicos. No entanto, o protocolo deve ser otimizado para S. crispa quando da converso de protocormos em plntulas. A estratgia de semeadura in vitro oferece uma oportunidade de uso em escala comercial bem como para conservao destas espcies.

Referncias bibliogrficas ARDITHI, J.; Ernest, R. Micropropagation of orchids . New York: J. Wiley, 1993. 682p. BACH, E. E., CASTRO, O. L. Germinao de sementes de Cattleya sp (Orchidaceae) em cultura de tecido visando produo de mudas. Arq. Inst. Biol. So Paulo, v. 71 (supl.), p. 1749, 2004. BHADRA, S. H.; HOSSAIN, M. M. In vitro germination and micropropagation of Geodorum densiflorum (Lam.) Schltr., an endangered orchid species. Plant Tissue Cult., v. 13, n. 2, p. 165-171, 2003. BRAGA, P. I. Aspectos biolgicos das Orquidaceae de uma campina da Amaznia Central. Acta Amaznica, v.7, n.2, 89p. 1977. suplemento. CAMPOS, D. M. Orqudeas: micropropagao e quimioterapia de meristemas. 1a ed. Rio de Janeiro: Editora Expresso e Cultura, 2002. CRONQUIST, A. An integrated system of classification of flowring plants . New York, Columbia University Press, 1981. 1262p. DRESSLER, R. L. Phylogeny and classification of the orchid family. Cambridge University Press. Cambridge. 1993. KERBAUY, G. B.. Clonagem de plantas in vitro. Biotecnologia Cincia e Desenvolvimento, v. 1, n. 1, p. 30-33, 1997. 347

IV Seminrio de Iniciao Cientfica


www.ueg.br www.prp.ueg.br

KNUDSON, L. Nonsymbiotic germination of orchid seeds. Botanical Gazette , Chicago, v. 73, n.1, p.1-25, 1922. MIYOSHI, K. MII, M. Stimulatory effects of sodium and calcium hypochlorite, prechilling and cytokines on the germination of Cypripedium macranthos seed in vitro. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v. 102, p. 481-486, 1998. PAUW, M. A.; REMPHREY, W. R.; PALMER, C. E. The cytokinin preference for in vitro germination and growth of Cypripedium candidum. Annals of Botany , v. 75, p. 267-275, 1995. PEREIRA, O. L., KASUYA, M. C. M., ROLLEMBERG, C. L., CHAER, G. M. Isolamento e identificao de fungos micorrzicos rizoctoniides associados a trs espcies de orqudeas epfitas neotropicais no Brasil. R. Bras. Ci. Solo, v. 29, p.191-197, 2005 PIERIK, R. L. M. In vitro culture of higher plants . 1a ed. The Nrtherlands: Kluwer Academic Publishers, 1997. STANCATO, G. C. Produo de mudas de orqudeas a partir de sementes in vitro e sua

viabilidade econmica: estudo de caso. Revista Brasileira de Horticultura Ornamental, v. 7, n. 1, p. 25-33, 2001. SUTTLEWORTH, F. S. Orqudeas: guia dos orquidfilos. 7.ed. Rio de Janeiro: Expresso e cultura, 1997. 158p. RASMUSSEN, H. N. Recent developments in the study of orchid mycorrhiza. Plant soil, v. 244, p.149-163, 2002. RAVEN, P.H.; EVERT, R.F.; EICHHORN, S.E. Biologia Vegetal. 6a ed. Guanabara Koogan R.J. 2001 RIBEIRO, J. E. S.; HOPKINS, G. M. G.; VICENTINI, A. C. Flora da reserva Ducke : guia de identificao das plantas vasculares de uma floresta da Amaznia Central. Manaus: INPADFID, 1999.

348

You might also like