Tema 11.

Procesos Fermentativos
1. Introduccin 2. Diseo y funcionamiento del fermentador 3. Tipos de fermentaciones I. Fermentacin discontinua II. Fermentacin alimentada III. Fermentacin continua IV. Reactores de enzimas o clulas inmovilizadas 4. Factores fsico-qumicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales I. Oxgeno II. Temperatura III. pH 5. Agitacin y mezclado

1. Introduccin
Procedimientos de fermentacin Desarrollo de inculos Preparacin de los medios Regulacin del metabolismo Fermentacin Control de los factores fsico-qumicos Recuperacin del producto Extraccin Purificacin

200 ml 10.000 l

300 w 15 Mw

Fases de un proceso fermentativo

2. Diseo y funcionamiento del fermentador

1. Tanque asptico 2. Sistema de aireacin 3. Bajo consumo de energa 4. Control del pH 5. Toma de muestras 6. Control de la temperatura 7. Evitar evaporacin 8. Mnimas operaciones 9. Verstil 10. Superficies internas lisas 11. Geometra idntica 12. Materiales baratos 13. Servicio de repuestos

DISEO Y FUNCIONAMIENTO DEL FERMENTADOR Objetivo: Explotacin industrial de los microorganismos

Control de la contaminacin: Qumica (Materiales)

Inocuidad total (no txico) Inerte qumicamente (no reaccionar con el medio) Superficie lisa y resistente (choque, rayado) Resistente a las soluciones de lavado, productos desinfectantes etc

Control de la contaminacin Qumica Microbiolgica Control del proceso de fermentacin Escalado Control del coste

Control de la contaminacin: Microbiolgica

El tanque debe disearse para que funcione aspticamente durante numerosos das, as como para las operaciones de ms larga duracin. No conexiones directas entre partes estriles y no estriles del sistema (usar soldadura) Reducir al mnimo las conexiones con elementos mviles Sello de vapor en las conexiones mviles con el exterior Vlvulas y llaves con sistema de no retorno Eliminar los espacios muertos en el interior del fermentador Esterilizacin por partes del sistema de fermentacin Presin positiva en el fermentador

Control del proceso de fermentacin

Sistema de aireacin Sistema de agitacin Sistema de control del pH Sistema de control de la temperatura Sistema de control de la espuma Sistema de toma de muestras Otros sistemas de control

Escalado
El diseo del fermentador debe ser similar en todos los tanques: Escala laboratorio = Planta semipiloto = Planta piloto = Planta industrial

Control del coste

El tanque debe ser verstil para la aplicacin en diversas modalidades de procesos El diseo del tanque debe ser tal que las operaciones laborales durante el funcionamiento, recoleccin, limpieza y mantenimiento sean mnimas. El consumo de energa debe ser tan bajo como sea posible. Deben emplearse los materiales ms baratos que proporcionen resultados satisfactorios. Debe existir un servicio adecuado de repuestos para el fermentador.

3. Tipos de Fermentaciones

3. Tipos de Fermentaciones
DISCONTINUA (batch)

1.- Fermentacin discontinua (batch)

2.- Fermentacin alimentada (fed-batch)

3.- Fermentacin continua

4.- Reactores de enzimas o clulas inmovilizadas

1.- Fermentacin discontinua (batch)

Una fermentacin discontinua (en batch) es un "sistema cerrado". Al inicio de la operacin se aade la solucin esterilizada de nutrientes y se inocula con el microorganismo, permitiendo que se lleve a cabo la incubacin en condiciones ptimas de fermentacin. En los procesos comerciales la fermentacin se interrumpe al final de la fase logartmica (metabolitos primarios) o antes de que comience la fase de muerte (metabolitos secundarios). Positivo. Es un mtodo clsico. Bien conocido. Instalaciones simples Negativo. Mala utilizacin de los medios materiales y humanos

3. Tipos de Fermentaciones
ALIMENTADA (fed-batch)

2.- Fermentacin alimentada (fed-batch)

3. Tipos de Fermentaciones
CONTINUA

Igual que el anterior, pero algunos sustratos (F. de carbono, F. de nitrgeno) se aaden escalonadamente a lo largo de la fermentacin. Positivo. Es un mtodo clsico. Bien conocido. Instalaciones simples, mejora la produccin (metabolitos secundarios) Negativo. Mala utilizacin de los medios materiales y humanos

3.- Fermentacin continua

3.- Fermentacin continua

Problemas en el mantenimiento de la estabilidad del sistema. Esterilidad a.- Muchos sistemas de laboratorio operan continuamente durante solamente 20 a 200 horas; para que sea de utilidad industrial el sistema debe ser estable durante al menos 500 a 1.000 horas. b.- Mantener las condiciones estriles a escala industrial a lo largo de un largo perodo de tiempo es difcil. c.- La composicin de los sustratos debe ser constante a fin de obtener una produccin mxima. La composicin de las soluciones de nutrientes industriales son variables (lquido de maceracin del maiz, peptona, etc.) lo que puede originar cambios en la fisiologa de la clula y disminuir la productividad. d.- Cuando se utilizan cepas de alto rendimiento se producen mutantes degenerados, los cuales pueden crecer en cultivo continuo ms deprisa que las cepas de produccin por lo que el rendimiento disminuye con el tiempo ya que cada vez son menos clulas las que sintetizan el producto de inters.

En la fermentacin continua se establece un sistema abierto. La solucin nutritiva estril se aade continuamente al biorreactor y una cantidad equivalente del cultivo, con los microorganismos, se saca simultneamente del sistema. Positivo. Proceso continuo que permite una buena utilizacin de los medios materiales y humanos Negativo. Problemas en el mantenimiento de la estabilidad del sistema. Esterilidad

REACTORES DE ENZIMAS O CLULAS INMOVILIZADAS

4.- Reactores de enzimas o clulas inmovilizadas

1. Adsorcin: resinas de intercambio inico. 2. Covalente: glutaraldehido, tolueno, iodoacetilcelulosa, di-isocianato. 3. Atrapamiento: colgeno, gelatina, agar, alginatos, poliacrilamida, poliestireno.

Sistema de produccin continua. Consiste en pasar el medio fresco a travs de un biorreactor en el que hemos inmovilizado clulas (o enzimas). Positivo. Con este sistema se eliminan los problemas de desequilibrio (estabilidad del sistema). Tambin se eliminan los problemas de estabilidad gentica del sistema continuo clsico y adems el producto resultante est libre de clulas. Negativo. Presenta el inconveniente de que no todos los microorganismos pueden inmovilizarse.

4. Factores Fsicos y Qumicos que afectan el Rendimiento de las Fermentaciones Industriales 1.- Oxgeno 2.- Temperatura 3.- pH

Oxgeno
Oxgeno (O2): sustrato gaseoso ms importante para el metabolismo microbiano. Anhdrido Carbnico (CO2): producto metablico ms importante. Solubilidad del Oxgeno del Aire en Agua: 9 mg/l Ley de Henry
C: concentracin de O2 de la solucin de nutrientes a saturacin. Po: presin parcial del gas en la fase gaseosa. H: constante de Henry.

Oxgeno
Solubilidad del Oxgeno en Agua depende de:

Solutos disueltos: agua del mar [O2] -20% peptona 1% [O2] -40% Temperatura: [O2] disuelto baja al aumentar la temperatura

C=

Po H

Solubilidad del Oxgeno puro en Agua: 43 mg/l

AIREACIN

Barreras a la Transferencia de Oxgeno

Bacterias

O2

Hongos Filamentosos

Mejorar la Transferencia de Oxgeno

1.-Aumentar el rea interfacial 2.-Aumentar el tiempo de contacto 3.-Disminuir la resistencia a la difusin entre la burbuja y la clula 4.- Molculas tipo hemoglobina

Levaduras

Temperatura

Temperatura
Temperatura inferior a la ptima: Retardo en el crecimiento Reduccin de la produccin celular Temperatura superior a la ptima: Choque trmico Induccin a una respuesta de estrs Produccin de proteasas celulares Reduccin de los productos proteicos

Las fermentaciones deben llevarse a cabo en un estrecho margen de temperatura y a ser posible constante.

Temperatura - Produccin
Las fermentaciones deben llevarse a cabo en un estrecho margen de temperatura y a ser posible constante.

Temperatura
Produccin de calor: Agitacin Actividad metablica Prdidas de calor: Evaporacin

Produccin de etanol: 25 C 20 C 15 C 9 % etanol 11 % etanol 12,5 % etanol

REFRIGERACIN

Camisa de Agua

pH Bacterias crecen a pH neutro Hongos crecen a pH cido

pH - Produccin

Lactobacillus:

pH cido: A. lctico pH bsico: A. actico y frmico pH cido: etanol pH bsico: glicerol pH 3-7: melanina constante pH 7-7,9: melanina (x 30)

La mayor parte de los microorganismos crecen ptimamente entre pH 5,5 y 8,5

Levaduras:

Durante el crecimiento en un fermentador, los metabolitos celulares son liberados al medio lo que puede originar un cambio del pH del medio de cultivo

Aspergillus:

5.- Agitacin y Mezclado

La agitacin es la operacin que crea o que acelera el contacto entre dos o varias fases. Una fermentacin microbiana puede ser considerada como un sistema de tres fases: 1. Fase Lquida: sales disueltas, sustratos y metabolitos 2. Fase Slida: clulas individuales, agregados celulares sustratos insolubles o productos del metabolismo que precipitan 3. Fase Gaseosa: proporciona un reservorio para el suministro de oxgeno, para la eliminacin del CO2 o para el ajuste del pH con amonio gaseoso

Efectos de la Agitacin en la Fermentacin

Tipos de Agitacin
Agitadores Rotativos Columnas de Burbujas Sistema Aero-elevado

1. Dispersin del aire en la solucin de nutrientes 2. Homogeneizacin de la temperatura, pH y concentracin de nutrientes en el fermentador 3. Suspensin de los microorganismos y de los nutrientes slidos 4. Dispersin de los lquidos inmiscibles

10