GUILHERME DUTRA MUNIZ DE OLIVEIRA

ALUNO DO CURSO DE PRODUO E REPRODUO DE BOVINOS-UCB

FISIOLOGIA DA REPROUO BOVINA E MTODOS DE CONTROLE DO

CICLO ESTRAL

Trabalho de concluso do curso de especializao Lato sensu em Reproduo e Produo de Bovinos - UCB

RIO DE JANEIRO , OUT.2006

UNIVERSIDADE CASTELO BRANCO CURSO DE ESPECIALIZAO LATO SENSU EM PRODUO E REPRODUO DE BOVINOS

FISIOLOGIA DA REPROUO BOVINA E MTODOS DE CONTROLE DO

CICLO ESTRAL

GUILHERME DUTRA MUNIZ DE OLIVEIRA

RIO DE JANEIRO, OUT.2006

FISIOLOGIA DA REPROUO BOVINA E MTODOS DE CONTROLE DO

CICLO ESTRAL

ELABORADO POR GUILHERME DUTRA MUNIZ DE OLIVEIRA ALUNO DO CURSO DE PRODUO E REPRODUO DE BOVINOS

FOI ANALISADO E APROVADO COM GRAU: ................................

RIO DE JANEIRO, .................DE...............................DE 2006.

...................................................................................................... MEMBRO

....................................................................................................... MEMBRO

...................................................................................................... MEMBRO

...................................................................................................... PROFESSOR ORIENTADOR JOS RIBAMAR DE SOUZA TORRES JNIOR

RIO DE JANEIRO, OUT.2006 II

LISTA DE ILUSTRAES pgina Fig. 01 Ciclo sexual da vaca............................................................ 03 Fig. 02 Perfil endcrino do ciclo estral na vaca ............................. 07 Fig. 03 Etapas da foliculognese..................................................... 10 Fig. 04.Padres de desenvolvimento folicular em diferentes 11 espcies de mamferos..................................................................... Fig. 05 Crescimento folicular............................................................. 12 Fig. 06 Padro de secreo de FSH durante o ciclo estral em 13 novilhas com duas ondas de crescimento folicular.............................................................................................. Fig. 07 Sumrio dos principais eventos que ocorrem durante uma onda de desenvolvimento folicular....................................... 14 Fig.08. Esquema proposto para o retorno da atividade ovariana no 15 ps-parto..............................................................................

SUMRIO pgina 01 01 01 03 03 04 04 04 04 04 05 05 05 05 06 07 07 08 09 12 14 16 16 17

1. INTRODUO.............................................................................. 2. REVISO DE LITERARURA........................................................ 2.1. Caracterizao do ciclo estral em bovinos............................ 2.2.Hormnios relacionados reproduo................................... 2.2.1GnRH (Hormnio Liberador de Gonadotrofinas)................... 2.2.2.FSH (Hormnio Folculo Estimulante.).................................

2.2.3. LH (Hormnio Luteinizante)................................................ 2.2.4.Liberao de LH e FSH........................................................ 2.3. Hormnios com atividade FSH e LH...................................... 2.3.1. Gonadotrofina Corinica Eqina.(eCG).............................. 2.3.2.Gonadotrofina Corinica Humana (hCG)............................. 2.4. Hormnios ovarianos............................................................. 2.4.1. Estrgenos.......................................................................... 2.4.2. Ao dos Estrgenos.......................................................... 2.5.Progestgenos........................................................................ 2.6. Prostaglandinas...................................................................... 2.6.1. Ao da Prostaglandina...................................................... 3. Controle Endcrino do Ciclo Estral........................................... 4. Foliculognese.......................................................................... 5. Padres de Ondas Foliculares.................................................. 6. Desenvolvimento Folicular no perodo ps-parto...................... 7.Tratamentos com Prostaglandina F2....................................... 8.Tratamentos com GnRH associado a Prostaglandina F2........ 9. Tratamentos com Progestgenos/Progesterona associado a steres de estradiol........................................................................... 10. Concluses.............................................................................. 20 11.Referncia Bibliogrfica........................................................... 21

1.Introduo

A adaptao do gado Bos indicus a ambientes tropicais e subtropicais levou esses animais a serem amplamente distribudos por todo o mundo. Embora o gado Zebu seja geralmente considerado como tendo uma menor eficincia reprodutiva do que o gado taurino em climas temperados, a situao oposta tambm ocorre quando eles so comparados em ambientes tropicais. A situao econmica mundial leva necessidade de se utilizar prticas de manejo eficientes para se aumentar a rentabilidade dos sistemas de produo de bovinos. Uma tima eficincia reprodutiva crucial para se aumentar o retorno da atividade. Com a evoluo e o estabelecimento da tcnica de inseminao artificial (IA), alguns fatores como taxa de servio e necessidade de otimizao da mo-de-obra conduziram busca de tcnicas de controle exgeno do ciclo estral para sincronizao do estro e da ovulao, visando se obter elevados ndices reprodutivos com o uso da IA. Os protocolos para sincronizao do estro e da ovulao oferecem a vantagem de serem de simples aplicao e de poderem ser utilizados em momento mais adequado aos produtores e tcnicos, no havendo a necessidade de deteco do estro. Este trabalho tem por objetivo rever a fisiologia da reproduo bovina e revisar os principais mtodos utilizados atualmente para controlar o ciclo estral e a ovulao.

2.Reviso de Literatura

2.1.Caracterizao do ciclo estral em bovinos

O ciclo estral o ritmo funcional dos rgos reprodutivos femininos que se estabelece a partir da puberdade. Compreende as modificaes cclicas na fisiologia e na morfologia dos rgos genitais e tambm no perfil dos hormnios relacionados. Didaticamente o ciclo pode ser dividido em 4 fases que so limitadas por eventos reprodutivos coordenados pela secreo de hormnios. As fases so: (1) Pr-estro: fase que antecede o estro ou cio. Esta fase marcada por um aumento gradativo circulante de estrgeno, devido ao incio do desenvolvimento folicular. Os achados principais so decorrentes desse perfil hormonal: ocorre um aumento gradativo na vascularizao e tnus muscular dos rgos genitais, edemaciao inicial da vulva, proliferao do epitlio vaginal e

relaxamento da crvix. Tem durao mdia de 2 a 3 dias, termina quando a fmea passa a aceitar a monta do macho. (2) Estro: caracteriza-se pela aceitao do macho. a fase de mais fcil definio. Nesta fase os nveis circulantes de estrgeno so elevados, os achados decorrem desta alta taxa. O tero e as tubas se encontram trgidos, a crvix relaxada, vagina e vulva com sinais de hiperemia e edema com corrimento de muco. Esta fase tem durao variada entre 10 a 18 horas na vaca, assim terminando quando a fmea deixa de aceitar o macho. Segundo alguns autores a durao do estro tende a ser mais curta em animais Bos indicus do que Bos taurus (Randel, 1976; Galina and Arthur, 1990), porm no se observou diferena significativa no intervalo de tempo entre o incio do estro at a ovulao, que de aproximadamente 27 horas em ambos. (Nebel et al., 2000). Alguns fatores relacionados ao ambiente (chuva, sol, ventos fortes/frios), relacionados ao manejo (movimentao entre piquetes ou manter os animais por longo tempo no curral) ou ainda fatores relacionados ao prprio temperamento do animal podem afetar expresso do estro e ovulao normal pois alteram a freqncia e amplitude da liberao de GnRH e pulsos de LH atrasando o pico de LH pr-ovulatrio. (Dobson e Smith, 2000 e Galina et al., 1996). A particularidade do temperamento de animais B. indicus e a tendncia de expressar o estro durante a noite afeta grandemente a eficincia de programas de IA que requerem a deteco de cio. (3) Metaestro: fase de mais difcil caracterizao. Aps a ovulao por estmulo do LH as clulas da teca e granulosa, sofrem uma diferenciao em clulas lutenicas que formaro o corpo lteo (CL). O CL secreta quantidades crescentes de progesterona at atingir sua produo mxima. A ovulao na vaca ocorre nesta fase. Com a produo inicial de progesterona, a genitlia tende a ficar com menor tnus, menos vascularizada e edemaciada. Em bovinos pode ocorrer uma pequena hemorragia caruncular, decorrente das alteraes hormonais. Dura em mdia 2 ou 4 dias e termina quando o corpo lteo atinge sua plena capacidade de produo de progesterona. (4) Diestro: fase de maior durao, que ocorre sob predomnio da progesterona. Devido presena deste esteride, o endomtrio fica mais espesso e com maior atividade glandular, a crvix se fecha, a musculatura do genital relaxa e ocorre uma diminuio da vascularizao e hipotrofia do epitlio vaginal. Dura cerca de 13 a 15 dias, terminando quando ocorre a regresso fisiolgica do corpo lteo, tendo incio outro ciclo (Figura 1).

FIGURA 1: Ciclo sexual da vaca (parcialmente adaptado de: Smidt & Ellendorff Fortpflanzungsbiologie landwirtschaftlicher Nutiztiere, 1969).

2.2.Hormnios relacionados reproduo

2.2.1.GnRH (Hormnio liberador de gonadotrofinas) O GnRH apresenta larga aplicao em programas de manipulao do ciclo estral, como diagnstico e teraputica das endocrinopatias, atuando nas disfunes endcrinas de causa perifrica hipofisria e hipotalmica; nos transtornos da fertilidade, tais como cistos foliculares, ovulao retardada, ciclos anovulatrios; na puberdade retardada e outras condies de

infertilidade. produzido no Hipotlamo e atua na Hipfise estimulando a liberao de FSH e LH.

2.2.2.FSH (Hormnio folculo estimulante) Estimula o crescimento dos folculos ovarianos, maturao dos ovcitos, secreo de estrgeno pela camada da granulosa do folculo ovariano, em ao sinrgica com o LH; atuam com estrgeno na formao de receptores para LH, nas clulas granulosas. O FSHp (FSH purificado obtido da hipfise de sunos) usado principalmente para estimular o desenvolvimento folicular (superovulao) para a transferncia de embries.

2.2.3.LH (Hormnio Luteinizante) Os nveis basais ou tnicos de LH agem juntamente com FSH para induzir a secreo de estrgenos no folculo ovariano; a onda pr-ovulatria de LH induz uma srie de alteraes estruturais no folculo, que culminam com a ruptura do folculo e expulso do vulo do seu interior (ovulao). O LH tem ao luteotrfica e estimula as clulas do corpo lteo a produzirem progesterona.

2.2.4.Liberao de LH e FSH O GnRH para estimular a liberao do LH e FSH secretado de forma tnica ou basal pelos ncleos hipotalmicos ventro-medial, arqueados e eminncia mdia e controlados pelo sistema de feed-back negativo por meio dos hormnios gonadais (estrgeno e progesterona). Os nveis tnicos sricos de LH sofrem oscilaes a cada hora e so mais elevados aps a castrao. O aumento do LH e FSH no animal castrado se deve falta de um mecanismo retrgrado negativo dos esterides gonadais sobre o centro de controle de liberao do LH tnico na eminncia mdia do hipotlamo. Nveis tnicos de FSH e LH agem juntos para induzir a secreo de estrgeno pelo folculo ovariano. A onda pr-ovulatria de LH e FSH responsvel pela ovulao e dura de 6-12 horas, na maioria dos animais. A onda se inicia devido ao aumento dos nveis de estrgeno circulante que tem um efeito positivo (feed-back positivo) sobre o hipotlamo atuando no cento de pico que termina por induzir uma maior liberao de GnRH e de LH e FSH pela hipfise (Figura 2). O estrgeno atua na rea hipotalmica anterior e nos ncleos pr-ptico e supraquiasmtico, aumentando a liberao de LH-RH (hormnio liberador de hormnio luteinizante) e na hipfise e aumentando a sua sensibilidade ao LH-RH.

2.3.HORMNIOS COM ATIVIDADE FSH E LH

2.3.1.Gonadotrofina corinica eqina (eCG) A eCG, antigamente chamada de PMSG (pregnant mare serum gonadotrophin), uma glicoprotena, com duas subunidades, alfa e beta, semelhantes ao FSH e LH, com maior

contedo de carboidrato (cido silico), de efeitos biolgicos prolongados (at 7 dias) devido a uma meia-vida longa. A eCG estimula o desenvolvimento folicular ovariano e tem ao de FSH e LH, sendo essencialmente estimulante. isolada do soro da gua gestante entre 50 e 150 dias de gestao. O alto contedo de cido silico protege o hormnio da rpida degradao enzimtica, prolongando sua vida mdia circulatria mais do que a FSH purificado (FSHp). utilizada em programas de manipulao do ciclo estral e em programas de superestimulao folicular para transferncia de embries.

2.3.2.Gonadotrofina corinica humana (hCG) A hCG uma glicoprotena, com duas subunidades alfa e beta, com cadeias de aminocidos e cadeias de carboidratos sintetizadas nas clulas sinciciotrofoblsticas da placenta (vilosidades do crion) nos primatas e nas mulheres. obtida na urina e no soro sanguneo da mulher gestante. detectada por radioimunoensaio, na urina, 8 dias aps a concepo na mulher (o que corresponde a um dia aps a implantao). Observa-se um pico 62 dias aps a ltima menstruao, declinando rapidamente aps 150 dias. Possui funes semelhantes do LH, sendo indicada no tratamento de ovrios csticos, induo da ovulao e no estudo de receptores de LH. A hCG, substitui o LH pituitrio, por seu alto custo de purificao para induzir ovulao em vacas com ovrios csticos, em programas de sincronizao da ovulao e superovulao.

2.4.HORMNIOS OVARIANOS

2.4.1.Estrgenos Definio So substncias derivadas do colesterol e seus precursores imediatos so a androstenediona e testosterona. Pelo menos oito estrgenos so secretados pelos ovrios dos mamferos: 17 estradiol, estrona, estriol e outras substncias. O LH estimula as clulas tecais do folculo para secretar testosterona, a qual convertida (aromatizao) em estradiol nas clulas da granulosa por ao do FSH. Os estrgenos so secretados pelas clulas da granulosa, no folculo maduro e no corpo lteo (clulas lutenicas), placenta, testculos e crtex adrenal (quantidades reduzidas). Como os demais esterides, os estrgenos no so armazenados na glndula, mas rapidamente utilizados, degradados no fgado, conjugados com sulfatos inorgnicos ou com cido glicurnico e eliminados pela urina. B A 2.4.2.Ao dos estrgenos 1. Promovem o desenvolvimento dos rgos e caracteres sexuais secundrios da fmea.

2. Estimulam o crescimento do endomtrio (proliferao e espessamento da mucosa, aumento das glndulas, do fluxo sanguneo, edema, glndulas espiraladas e pregueadas, secreo ativa). 3. Aumentam a contratilidade uterina. 4. Tornam o tero mais sensvel ao da progesterona. 5. Hipertrofiam o endomtrio em doses crnicas. 6. Estimulam o crescimento e a atividade muscular dos ovidutos. 7. Atuam sobre o conduto cervical (secreo de muco abundante, fluido, elstico e colo uterino relaxado). 8. Promovem o crescimento e desenvolvimento dos dutos mamrios. 9. Agem sobre o sistema nervoso central para induzir o estro ou cio na fmea (receptividade sexual). 10. Potencializam os efeitos da ocitocina e prostaglandina F2 nas contraes uterinas. 11. Produzem relaxamento da snfise pbica e do ligamento interpbico. 12. Produzem efeitos sobre rgos endcrinos (inibem o FSH, estimulam o LH, PRL e ACTH) no controle do feed-back negativo e positivo sobre os centros tnico e pr-ovulatrio do hipotlamo.

2.5.Progestgenos Definio A progesterona o progestgeno natural mais importante secretado pelas clulas lutenicas (hormnio lutenico). Assim como os estrgenos, derivada do colesterol sendo tambm secretada pela placenta, testculos e crtex adrenal (pequenas quantidades). Grande nmero de progestgenos sintticos tem sido obtido na prtica: MAP (acetato de medroxiprogesterona); CAP (acetato de clormadinona); MGA (acetato de melengestrol) e FGA (acetato de flurogesterona = clonolone). Estas substncias so altamente potentes, efetivas por via oral, sendo aplicadas como sincronizadores de estro e aumento de peso em novilhos. O MGA inibe a ovulao, mas permite o crescimento de folculos ovarianos.

Ao da progesterona 1. Induz formao de um endomtrio secretor previamente sensibilizado pelos estrgenos (mucosa espessa, glndulas tortuosas, edema e presena de glicognio). 2. Inibe a motilidade uterina espontnea e a resposta do miomtrio ocitocina. 3. Promove o crescimento do deciduoma (diferenciao da poro materna da placenta). 4. Promove o crescimento e desenvolvimento do sistema lbulo alveolar da glndula mamria em sinergismo com os estrgenos. 5. Mantm a prenhez. 6. Age sinergicamente com os estrgenos para induzir o cio na fmea (vaca e ovelha). 7. Inibe o estro e a onda pr-ovulatria do LH, se em altos nveis.

2.6.PROSTAGLANDINAS Definio So substncias orgnicas, biologicamente ativas, com efeitos fisiolgicos e farmacolgicos no organismo, extremamente potentes. Ocorrem naturalmente em muitos tecidos e situaes biolgicas. Inicialmente encontradas na prstata (Von Euler, 1934), da o nome de prostaglandina, depois em outros rgos. A maior parte das prostaglandinas seminais se origina das vesculas seminais e no da prstata, mas o nome primitivo permanece. Do ponto de vista qumico, as prostaglandinas so derivadas do cido araquidnico, cido graxo hidroxilado, no saturado, com 20 carbonos e um anel ciclopentano (lipdios). Do ponto de vista estrutural e funcional, as prostaglandinas se dividem em quatro grandes grupos, A, B, E e F, sendo E e F as mais bem descritas por suas relaes com reproduo. A sntese da PGF2 a partir de cidos graxos precursores tem sido possvel e vrios anlogos sintticos so atualmente comercializados. Os nveis sanguneos dessas substncias so geralmente muito baixos, elevando-se na poca do parto. So rapidamente metabolizadas, degradadas e excretadas. A PGF2 e seus anlogos sintticos so utilizados na sincronizao do ciclo estral nos animais domsticos devido sua ao luteoltica.

2.6.1.Ao da prostaglandina 1. Contrao da musculatura lisa (motilidade uterina e tubrica). 2. Regresso morfolgica e fisiolgica de corpo lteo (lutelise). 3. Induo do parto (efeito ocitcico). 4. Transporte dos gametas (vulo e espermatozides). 5. Participa nos eventos ligados ovulao.

FIGURA 2: Perfil endcrino do ciclo estral na vaca (parcialmente adaptado de: MacDonalds & Pineda, Veterinary Endocrinology and Reproduction, 1989).

3.Controle endcrino do ciclo estral O GnRH secretado pelo hipotlamo, atravs do sistema porta-hipotalmico-hipofisrio, atinge esta glndula e estimula a liberao das gonadotrofinas, FSH e LH. Existem dois locais de secreo e produo de GnRH no hipotlamo: os centros controladores de secreo tnica, que secretam GnRH de uma forma relativamente contnua, e os centros controladores da onda pr-ovulatria que secretam grandes quantidades de GnRH de uma s vez. As gonadotrofinas, alm de se distriburem no organismo via circulao sistmica, atingem o hipotlamo, pelo vaso de fluxo retrgrado, onde causam um bloqueio parcial na liberao de GnRH ( mecanismo conhecido como feed-back negativo). Via circulao, as gonadotrofinas chegam aos ovrios, especificamente aos folculos, onde o FSH principalmente, estimula o desenvolvimento dos mesmos. Com isto, os folculos iniciam a produo de estrgeno, que via circulao sistmica atingem o hipotlamo causando um efeito positivo, estimulando os centros controladores da onda pr-ovulatria, alm de um efeito positivo na secreo de gonadotrofinas na hipfise. Quando a quantidade de estrgeno na circulao alcana determinado nvel ou limiar (devido a produo crescente/cumulativa pelos folculos em desenvolvimento) este sensibiliza reas superiores do sistema nervoso central, fazendo com que a fmea manifeste sinais de aceitao de cortejo e monta (estro) e age tambm nos centros controladores da onda pr-ovularria de GnRH, fazendo com que uma grande quantidade deste hormnio seja liberada na circulao. Na etapa final de seu desenvolvimento, os folculos secretam outro hormnio, a inibina, que via sistmica tem a funo de bloquear seletivamente a sntese de FSH na hipfise. Por este motivo, acompanhando o pico de liberao de GnRH (onda pr-ovulatria) teremos um pico maior de LH, j que a produo de FSH encontra-se parcialmente bloqueada. Este pico de LH responsvel pela ovulao dos folculos presentes nos ovrios que tem desenvolvimento compatvel. As clulas remanescentes do folculo ovulatrio sofrem uma transformao chamada luteinizao, se diferenciando em clulas lutenicas secretoras de progesterona que daro origem ao corpo lteo. Estes eventos tambm so coordenados pelo LH. A produo de progesterona alcana seu limite mximo e estabiliza-se por volta de cinco a sete dias aps a formao do corpo lteo, e enquanto permanecer em nveis elevados na circulao responsvel por bloquear a liberao de GnRH e das gonadotrofinas hipofisrias, ou seja, o animal no apresenta estro novamente enquanto estiver com concentraes circulantes elevadas de progesterona devido inibio do aumento da freqncia e pico de LH necessrios fase final de crescimento e ovulao, considerando que a fmea no tenha ficado gestante no estro anterior, o corpo lteo, cerca de 10 a 15 dias aps a formao, iniciar a produo de ocitocina, que no endomtrio estimular a produo de prostaglandina, responsvel pela regresso do corpo lteo, processo conhecido como lutelise. Com isso, a

concentrao plasmtica de progesterona diminui, possibilitando aumentos gradativos na secreo de GnRH, FSH e LH, iniciando um novo ciclo. Caso a fmea fique gestante, o corpo lteo no sofrer regresso, pois a principal fonte produtora de progesterona no incio da gestao em todas as espcies domsticas. O embrio bovino sinaliza sua presena intra-uterina e inibe a sntese de PGF2 secretando intergerontau, o bloqueio da lutelise, provavelmente, depende da quantidade total de interferon-tau secretada e da rea do lmen uterino ocupada pelo concepto (Mann et al.,1999). Em geral, as caractersticas de crescimento folicular e dominncia so similares entre Bos indicus e Bos taurus, exceto o fato de que o Bos indicus parece ter um dimetro mximo de folculo dominante, menor que o observado em Bos taurus, (10-12mm versus 14-20mm, respectivamente) e tambm corpo lteo (17-21mm versus 20-30mm, respectivamente; B et al., 1993b; Ginter et al., 1989; Kastelic et al., 1990). Estas diferenas tm aplicaes prticas importantes, porque o CL mais difcil de ser identificado palpao retal no gado Bos indicus.

4.Foliculognese

Em diversas espcies, evidncias experimentais mostram que os estgios iniciais do crescimento folicular ocorrem vagarosamente. Nos mamferos, os ovrios apresentam um conjunto ou pool de folculos primordiais, pr-antrais, tendo apenas uma camada de clulas da granulosa e contendo um ovcito quiescente, cuja diviso meitica foi interrompida na fase de prfase I. O desenvolvimento destes folculos pode iniciar-se no perodo fetal, tal como ocorre nos ruminantes, ou dar-se no perodo neonatal, como ocorre em roedores e no coelho, por exemplo. Aps a formao do antro, o crescimento folicular passa a ser mais rpido. Na espcie bovina, o nmero de folculos primordiais presentes ao nascimento de aproximadamente 150.000, quantidade que drasticamente reduzida para cerca de 3000, por volta dos 15 a 20 anos de idade da vaca, e tero ocorrido, neste perodo, em torno de 300 ovulaes. Aps o incio da atividade ovariana, os folculos primordiais iniciam seu desenvolvimento. Desde que o crescimento de um folculo individual tenha comeado, ele contnuo e seqencial, e o folculo terminar por ovular ou entrar em atresia (Figura 3). Na vaca, aparentemente, o tempo para que um folculo primordial ativado cresa at o tamanho ovulatrio de cerca de 60 dias (Findlay,1994).

FIGURA 3: Etapas da foliculognese, mostrando o desenvolvimento folicular, usando-se como modelo biolgico a ovelha. Observar a assimetria das taxas de atresia folicular e as diferentes fases de modulao e dependncia do estmulo das gonadotrofinas. (Adaptado de FINDLAY, 1994).

Aparentemente, existem dois padres de desenvolvimento de grandes folculos antrais nos mamferos: em um primeiro padro, que ocorre em primatas, camundongos e sunos, o desenvolvimento folicular at o tamanho ovulatrio s ocorre na fase folicular do ciclo, sendo suprimido na fase luteal. No segundo padro, onde se incluem as espcies bovina, ovina e eqina, este desenvolvimento se d tanto na fase luteal como na folicular, ocorrendo, portanto, ao longo de todo o ciclo estral (Figura 4).

FIGURA 4: Padres de desenvolvimento folicular em diferentes espcies de mamferos. Observar que na vaca, ovelha e gua existe crescimento folicular tanto na fase lutenica como folicular do ciclo estral. J em primatas, na porca e camundonga, a divergncia e dominncia s so observadas na fase folicular, sendo inibidas na lutenica. Asteriscos representam a ovulao; (Adaptado de FORTUNE, 1994).

O nmero de folculos que chegar ovulao espcie-especfico, podendo variar tambm com a raa, dentro de uma mesma espcie. O processo de crescimento diferencial do folculo dominante conhecido como divergncia (Figura 5).

FIGURA 5: Crescimento folicular, divergncia do folculo dominante e ovulao durante o ciclo estral em novilha com duas ondas de desenvolvimento folicular. Normalmente, o folculo dominante da primeira onda anovulatrio; Adaptado de WILTBANK, 1998.

5.Padres de ondas foliculares So estabelecidos padres de duas ondas foliculares, onde a primeira tem incio no dia zero (dia da ovulao) e a segunda no dia 10 e padro de trs ondas, onde a emergncia destas ocorre entre os dias 0, 9 e 16 do ciclo estral, sendo as duas primeiras anovulatrias. O mecanismo que regula a dinmica folicular est baseado nas diferentes respostas ao FSH e LH, os aumentos peridicos de concentraes de FSH circulante so responsveis pela emergncia das ondas foliculares, portanto vaca com duas ondas tem dois aumentos (Figura 6) e vacas com trs ondas tem trs aumentos de FSH. A supresso peridica do FSH circulante pelo mecanismo de feed-back negativo favorece a reserva do ovrio, prevenindo o recrutamento contnuo de folculos antrais, j que 99% destes iro sofrer atresia. O aumento de FSH permite o crescimento folicular suficiente para que alguns, e no todos os folculos, adquiram a capacidade de responder ao LH, ao mesmo tempo em que permite o crescimento do folculo dominante, os subordinados comeam a diferenciar-se (momento da seleo) o FSH tem um declnio rpido por volta do segundo dia de emergncia da onda (Baruselli,2000). (Figura 6).

O folculo destinado a ser dominante aparentemente tem mais receptores para LH, estabelecendo assim uma vantagem competitiva sobre os outros folculos destinados a serem subordinados (Figura 7). Existem diversos fatores que afetam o desenvolvimento folicular tais como: nvel nutricional, estresse calrico e anestro lactacional, que podem modificar o padro de desenvolvimento. Um nvel nutricional baixo estaria associado a uma proporo mais alta de ciclos de trs ondas foliculares, estes fatores tm sido muito discutidos e aparentemente a fertilidade das vacas no demonstra diferena entre animais com duas ou trs ondas de desenvolvimento folicular (Baruselli, 2000). Os folculos subordinados podem converter-se em folculo dominante se este for removido. A capacidade de um folculo subordinado em tornar-se dominante observada em animais superestimulados com FSH, estes folculos alcanam um dimetro mximo menor comparado ao de um folculo originalmente dominante.

FIGURA 6: Padro de secreo de hormnio folculo estimulante (FSH) durante o ciclo estral em novilhas com duas ondas de crescimento folicular. Observar que h um aumento nas concentraes de FSH quando ocorre o recrutamento e que, aps a divergncia, s o folculo dominante capaz de crescer, quando a concentrao deste hormnio baixa. Adaptado de WILTBANK, 1998.

FIGURA 7: Sumrio dos principais eventos que ocorrem durante uma onda de desenvolvimento folicular, mostrando o recrutamento, seleo, fase de dominncia e ovulao. Adaptado de DRIANCOURT, 2000.

6.Desenvolvimento folicular no perodo ps-parto O reincio da dinmica folicular em vacas leiteiras e de corte ocorre no comeo do perodo psparto. Logo aps o parto, ocorre um dramtico aumento nos nveis de FSH que seguido pela emergncia da primeira onda de crescimento folicular (2-7 dias ps-parto; revisado em Wiltbank et al., 2002). Para que a ovulao ocorra, o folculo dominante deve estar exposto correta freqncia de pulsos de LH (aproximadamente um pulso por hora) para que este cresa e aumente a produo de estradiol, que poder resultar em um pico de LH e ovulao (revisado em Roche et al., 1992 e Wiltbank et al., 2002). A ocorrncia de ovulao do folculo dominante da primeira onda folicular foi observada em 74% de vacas Friesian bem alimentadas (Svio et al., 1990), e em 42% de vacas Holandesas de alta produo (Beam e Butler, 1997) e em apenas 11% das vacas de corte amamentando (Murphy et al., 1990). DOcchio e colaboradores (1990), estudando a concentrao de LH no ps-parto em vacas Bos taurus e Bos indicus, observou que os nveis deste hormnio so influenciados pela condio corporal e pelo manejo no perodo ps-parto, sugerindo que a nutrio um dos fatores mais importantes para o retorno da atividade reprodutiva no ps-parto no gado Bos taurus e Bos indicus. A m nutrio reconhecidamente a causa da fertilidade reduzida em rebanhos criados a pasto em regies subtropicais e tropicais. Uma dieta energtica restrita afeta adversamente a

funo ovariana em ambas as novilhas pr e ps pberes, reduzindo o dimetro mximo e a persistncia do folculo dominante, afeta tambm as vacas no ps-parto adiando o desenvolvimento de folculos ovarianos maiores (Rhodes et al., 1995b, 1996; Wiltbank et al., 2002). A amamentao tambm um importante fator que afeta a ciclicidade no ps-parto, pois inibe pulsos de GnRH e LH, reduzindo o desenvolvimento folicular (revisado em Williams et al., 1996). Assim, melhorar a nutrio das vacas e remover os bezerros temporariamente ou definitivamente so pontos importantes a serem considerados quando se deseja iniciar um programa de sincronizao de estro em vacas B. indicus amamentando.

FIGURA 8: Esquema proposto para o retorno da atividade ovariana e o aparecimento de folculos dominantes em vacas de leite e corte que no tenham sofrido estresse nutricional. A freqncia de pulsos de LH aquela que ocorre em um perodo de oito horas. As amostras de sangue foram colhidas em intervalos de 15 minutos. Adaptado de ROCHE et al., 1992.

A ablao mecnica do folculo dominante por aspirao guiada por ultra-som no quinto dia aps a ovulao em novilhas Nelore, resulta em uma emergncia sincrnica de uma nova onda de crescimento folicular em 1,90,1 dias e em uma ovulao sincrnica aps o tratamento com prostaglandina seis dias mais tarde (4,1 0,1 dias aps a PGF2) (Buratini Jr et al.,2000). Isso

ocorre devido remoo do folculo dominante, diminuio dos nveis de estrgeno e inibina por ele produzida, fazendo com que o maior folculo subordinado assuma a dominncia. Embora esta tcnica possa ser facilmente aplicada, a ablao folicular mais invasiva do que tratamento hormonal exgeno; por esta razo ela no largamente aplicada em programas de sincronizao de cio. Porm vem sendo usada com sucesso em programas de superovulao. (B et al.,2002).

7.Tratamentos com Prostaglandina F2 A prostaglandina F2 tem sido o hormnio mais utilizado para tratamento de sincronizao de cio em bovinos (revisado em Odde, 1990). No entanto, o aparecimento do cio fica distribudo por um perodo de aproximadamente seis dias (Macmillan e Henderson, 1984), isso influenciado no apenas pela responsividade do CL ao tratamento com PGF (Momont e Seguin, 1984), mas tambm pelo estgio de desenvolvimento do folculo dominante no momento do tratamento com PGF (Kastelic e Ginther, 1991). Esta variao no intervalo de tempo entre o tratamento, o estro e a ovulao dificulta o programa de inseminao artificial em tempo fixo (IATF), e requer uma boa deteco do estro para que se obtenham maiores taxas de prenhez. No Gado B. indicus, mesmo quando h presena de um CL no momento do tratamento, a resposta ao tratamento 30% menor quando comparada aos 90% relatados para o B.taurus (revisto em Galina e Arthur,1990). Estes resultados assincrnicos, levam a necessidade da busca por tratamentos que controlem tanto a fase lutenica como a fase folicular, para que se consigam melhores taxas de prenhez na IATF, sem necessidade da deteco do estro. Existem muitas alternativas para controlar o desenvolvimento folicular em B. taurus que tambm vem sendo aplicadas com sucesso em B. indicus. A emergncia da onda folicular pode ser alterada por procedimentos mecnicos ou por tratamentos hormonais.

8.Tratamentos com GnRH associado a prostaglandina F2. Combinao de tratamentos com GnRH e PGF vem sendo usada com sucesso em protocolos de sincronizao para inseminao em gado de corte e de leite. Um desses protocolos de tratamento GnRH-PGF conhecido como Protocolo Ovsynch (Pursley et al., 1995) e consiste em uma injeo de GnRH seguida por uma de PGF sete dias mais tarde, e uma segunda injeo de GnRH 48hs aps a aplicao de PGF; e IATF 16 horas mais tarde. O protocolo Ovsynch tambm vem sendo usado para controlar o desenvolvimento folicular e sincronizar a ovulao em B.indicus (Barros et al., 2000). Observou-se taxa de prenhez em B. taurus e B. indicus ao redor de 42 e 48% em animais em programa de IATF tratados pelo protocolo

Ovsynch (Fernandes et al., 2001; Willians et al., 2002). Como ocorre no gado B. taurus, a taxa de prenhez em novilhas B. indicus foi varivel, entre 21 e 43%, e em vacas em anestro foi significativamente menor (14,9%) do que vacas ciclando (46,3%). A razo para a pequena resposta em novilhas parece estar relacionada baixa incidncia de ovulaes do folculo dominante aps o primeiro GnRH, o que resulta em baixa taxa de sincronizao do estro aps a segunda aplicao de GnRH (Martinez et al.,1999). Barros e colaboradores sugeriram um protocolo de IATF de baixo custo, similar ao Ovsynch, mas, substituindo a segunda aplicao de GnRH por 1mg de benzoato de estradiol (BE) 24 h aps a PGF (dia 8). Este tratamento chamado GPE resultou em ovulao sincronizada (45,4 2,0h aps BE) em 7/10 vacas Nelore. As outras 3 vacas no ovularam em 3 dias aps o tratamento com BE. IATF (30-34h aps BE) resultou em 43.3% de gestao em 53 vacas Nelore em lactao (60-90 dias ps-parto), mas em apenas 14.7% em 68 vacas acclicas (Fernandes et al., 2001) e 33.3% de novilhas Nelore (Barros et al.,1998). Estes resultados podem enfatizar que o protocolo Ovsynch e semelhantes podem ser usados com sucesso apenas em vacas ciclando, no sendo indicado para B. indicus devido baixa taxa de ciclicidade, principalmente no incio da estao de monta e em condies extensivas em reas tropicais e subtropicais (Baruselli et al.,2001).

9.Tratamentos com progestgenos/progesterona associado a steres de estradiol. Por mais de 30 anos, estudos vm sendo realizados com o objetivo de se formular diferentes tratamentos para sincronizao de estro utilizando progestgenos e progesterona. O uso do estradiol em combinao com tratamentos progesterona/progestgeno, se iniciou quando se descobriu que o estradiol induz regresso luteal (Wiltbank et al.,1961). Durante os anos 90, se observou que o tratamento com estradiol suprime o crescimento do folculo antral (B et al.,1991). A administrao de 5mg de estradiol-17 (E-17) em implantes de progesterona, sincronizou a emergncia de uma nova onda folicular, em mdia, 4,30,2dias mais tarde (B et al.,1995). Outros trabalhos foram feitos para se comparar os efeitos de diferentes steres de estradiol no desenvolvimento folicular. O Valerato de Estradiol (VE) na dose de 5mg resulta em um tempo de surgimento de onda menos previsvel em novilhas de corte, no devendo ser usado nessas, pois, atrasa a emergncia e bloqueia o crescimento folicular principalmente em novilhas indicus, que so mais sensveis a estradiois de longa ao. Existem trs tipos de dispositivos de progesterona no mercado nacional, os implantes auriculares os dispositivos intra-vaginais de liberao de P4 e o MGA oral. O tratamento com norgestomet envolve a insero do implante contendo 6mg de norgestomet (Syncro-Mate-B, Merial) ou um implante de silicone contendo 3mg de norgestomet (Crestar, Intervet) que so colocados na regio subcutnea, sobre a cartilagem auricular. Uma aplicao IM com 5mg de VE e 3mg de norgestomet (N) feita no momento da aplicao do implante, o implante permanece por 9 ou 10 dias. Aps a remoo do implante, vacas e

novilhas so inseminadas 12hs aps a observao de cio ou feita IATF 48hs (novilhas) ou 56hs (vacas) aps a remoo (revisado em Mc Gowan, 1999). Resultados satisfatrios foram obtidos em gado B.indicus adulto, mas o resultado em novilhas se apresentou bastante varivel (revisado McGowan,1999). Altas concentraes de estradiol por perodos prolongados podem resultar em supresso prolongada de crescimento folicular (B et al.,1993a). Outros trabalhos mostraram altas taxas de prenhez aps o tratamento com VE e N em novilhas B.taurus (Odde,1990). concebvel que os nveis de estradiol induzidos pelo tratamento com VE e N so significativamente maiores em novilhas B.indicus leves mantidas a pasto em regies tropicais e subtropicais do que novilhas B.taurus mais pesadas mantidas em pastagens temperadas de alta qualidade ou que ainda recebem suplementao de concentrado, como ocorre na Amrica do Norte e Europa. Uma alternativa para aumentar a taxa de prenhez em novilhas nelore tratadas com VE e N a aplicao de 400UI de eCG no momento da remoo do implante para estimular o crescimento folicular (Cavalieri et al.,1997); este programa vem sendo extensivamente utilizado em vacas no ps-parto (Mulvehill e Screenan,1977;Humblot et al.,1996;B et al.,2002b) e resulta em taxas de prenhez aceitveis aps IATF em novilhas (Kerr et al.,1991;Mc Gowan et al.,1992). No entanto, existem trabalhos que relatam efeito negativo de elevadas concentraes de estradiol encontradas em animais tratados com N e VE (Wherman et al.,1993; Cavalieri et al.,1997), principalmente em novilhas B. indicus. Verificou-se atraso e disperso no incio da onda de crescimento folicular quando novilhas Nelore foram tratadas com VE do que com BE (S Filho et al.,2006). Assim pode-se supor que novilhas B. indicus tratadas com 5 mg de VE podem estar apresentando comprometimento no protocolo de sincronizao da ovulao. A eCG um frmaco de meia vida longa (at 3 dias), produzido nos clices endometriais da gua prenhe (40 a 130 dias; Murphy e Martinuk, 1991) e que se liga aos receptores foliculares de FSH e de LH a aos receptores de LH do corpo lteo (Stewart e Allen,1981). A eCG cria condies de crescimento folicular e de ovulao e seu uso tem-se mostrado compensador em rebanhos com baixa taxa de ciclicidade, em fmeas recm paridas (perodo ps parto inferior a dois meses) e em animais com condio corporal comprometida (Baruselli et al.,2004). Cavalieri e colaboradores (1997) mostraram que a sincronizao do estro, a ovulao, e a onda de LH pr-ovulatria foram melhores em vacas B.indicus no lactantes tratadas com eCG do que naquelas no tratadas com eCG quando se removeu o implante (com intervalos desde a remoo do implante at a ovulao de 61-83h versus 66-114h, respectivamente). As taxas de concepo aps uma ou duas IATF usando este protocolo de tratamento ficaram em torno de 37 a 54% (Kerr et al.,1991; Mc Gowan et al., 1992; Cavalieri and Fitzpatrick 1995,b). Outros tratamentos como utilizando uma aplicao de 1mg de BE 24hs aps a remoo do implante ou GnRH 30-36h aps a remoo do implante tambm foram utilizados para sincronizar a ovulao e aumentar as taxas de prenhez em vacas B.indicus (B et al., 2002b).

Dispositivos vaginais de progesterona associados ao benzoato de estradiol so atualmente um dos mais populares tratamentos para IATF ao redor do mundo para gado de leite e de corte (Macmillan and Burke, 1996; B et al., 2002,c). O tratamento mais comum usado em B.indicus similar ao usado em B.taurus e consiste na administrao de uma dose de BE intramuscular (2mg de BE em vacas e novilhas, B et al.,2002,c ou 1mg de BE em novilhas, Martinez et al.,2000,2002b; Cavalieri et al.,2002) no momento da insero do dispositivo (Dia 0), o tratamento com PGF feito quando se retira o dispositivo (dias 7 ou 8), e feito 1mg de BE i.m. 24hs mais tarde. A IATF feita entre 52 e 56hs aps a remoo do dispositivo (B et al.,2002c). Inicialmente, o BE era administrado em forma de uma cpsula de gelatina disposta juntamente com o dispositivo intravaginal. Porm trabalhos subseqentes mostraram que a administrao de BE atravs de injeo i.m. resulta em uma emergncia de onda mais sincrnica e consistente (B et al.,1996). Todavia, uma segunda aplicao de BE (1mg de BE i.m.) feita 24hs aps a remoo do dispositivo essencial, pois resulta em um estro e ovulao mais sincrnica e uma taxa de prenhez mais alta do que quando o BE no aplicado aps a remoo do dispositivo intravaginal. Devido a sua capacidade de induzir indiretamente o pico pr-ovulatrio de LH e a ovulao. Yelich (2002) conseguiu melhores taxas de prenhez em vacas tratadas com CIDR-B que receberam BE no momento da insero do dispositivo, do que nas que no receberam o BE no momento da insero. Assim o uso do BE no momento da insero do dispositivo de P4 essencial para a induo da atresia dos folculos presentes e emergncia sincrnica de uma nova onda folicular, pois a elevao da concentrao srica de estrgeno aps a aplicao de BE ir causar feed-back negativo para liberao de FSH impedindo o desenvolvimento folicular, levando a sua regresso, evitando os efeitos adversos de um folculo dominante persistente nas taxas de prenhez. Um relato recente de taxa de prenhez em 5743 IATF foi de 51.3%, variando de 28.7% em vacas amamentando com escore corporal mdio 2, na escala de 1 a 5, at 66.9% em vacas amamentando com escore corporal mdio de 3,5 (B et al.,2002c), em vacas e novilhas tratadas com dispositivos de P4 e com BE submetidas IATF 50-56h aps a remoo do dispositivo (26-32h aps a segunda aplicao de BE). Inmeros trabalhos vem sendo realizados com o objetivo de se avaliar a viabilidade reutilizao dos dispositivos intravaginais de progesterona, como B e colaboradores 2002 e Cutaia e colaboradores 2001b, os resultados demonstraram que os dispositivos liberadores de P4 podem ser reutilizados e as taxas de prenhez so comparveis, podendo ser ainda maiores quelas obtidas quando da utilizao de um dispositivo novo. O resultado desses estudos, tem importantes implicaes econmicas, pois o custo por uso dos dispositivos para IATF sero consideravelmente reduzidos, favorecendo sua utilizao por parte dos produtores.(Cutaia et al.,2001,b; Whittaker et al.,2002). O sucesso da aplicao da IA no gado B.taurus e B.indicus, no est relacionado apenas ao problema de deteco do estro, mas tambm relacionado ao problema nutricional

principalmente em regies tropicais e subtropicais e tambm est relacionado ao anestro induzido pela mamada. Uma alternativa para aumentar a taxa de prenhez em programas de IATF, principalmente no gado B.indicus em anestro a utilizao de 300-500UI de eCG no momento da remoo do dispositivo de P4. Tratamento com eCG vem sendo utilizados para aumentar a ciclicidade e taxa de prenhez em vacas com estresse nutricional. Cutaia e colaboradores (2003) estudando a utilizao de eCG em protocolos de sincronizao, utilizaram 181 vacas Braford amamentando, com condio corporal de 1.5-2.5 (escala de 1-5), esses animais foram tratados com dispositivo de progesterona e 2mg de BE no dia 0. No dia 8, os dispositivos foram removidos e todas as vacas receberam uma dose de PGF. Apartir da foram divididas ao acaso, sendo que o primeiro grupo recebeu 400UI de eCG no dia 8 (grupo eCG), o segundo grupo recebeu 1mg de BE i.m. no dia 9 (grupo BE) e o outro recebeu eCG no dia 8 e BE no dia 9 (grupo eCG+BE). Foi realizada IATF em todas as vacas 52-56h aps a remoo do dispositivo. A taxa de prenhez geral foi significativamente maior no grupo eCG+BE do que no grupo eCG (35,5% versus 17,4%). Em vacas que tinham folculos pequenos no incio do experimento, o grupo eCG+BE teve uma taxa de prenhez melhor que o grupo BE. As diferenas porm, no foram significativas entre esses grupos nas vacas com CL ou nas que apresentavam folculos de mdio a grande no incio do experimento. A combinao eCG+BE parece aumentar a taxa de prenhez, e em condies de anestro, esse efeito mais pronunciado (vacas com folculos pequenos) (B et al., 2003).

10.Concluses O conhecimento das particularidades da fisiologia reprodutiva das subespcies B. taurus e B.indicus de grande importncia, pois permite interferir de forma consciente objetivando a maximizao da eficincia da tcnica de inseminao artificial, principalmente em grandes rebanhos. A dinmica folicular ovariana no gado B.indicus caracterizada pela ocorrncia de duas, trs ou s vezes quatro ondas de crescimento folicular. Enquanto a dominncia folicular similar a do gado B.taurus, o dimetro mximo do folculo dominante e do CL geralmente menor em B.indicus do que no relatado em B.taurus. A durao do estro de aproximadamente 10hs e o intervalo do estro at a ovulao de 27hs. A particularidade do temperamento do gado B. indicus e a tendncia de expressar o estro durante a noite afeta grandemente eficincia de programas de IA que requerem a deteco de cio. Assim sendo, a incorporao de tcnicas que controlem a dinmica das ondas de crescimento folicular, como as colocadas na presente reviso, podem reduzir o problema da deteco de cio e favorecer a aplicao da IATF.

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