UNIVERSIDAD TECNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIASN AGROPECUARIAS ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

EXTRACCIN DE ADN
GERARDO MORALES RAMBAY
QUINTO AO MEDICINA VETERINARIA 21/01/2013

Extraccin de ADN INTRODUCCIN

ADN es la abreviatura del cido desoxirribonucleico (en ingls, DNA). Constituye el material gentico de los organismos. Es el componente qumico primario de los cromosomas y el material del que los genes estn formados. La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.
Por eso que en este informe de laboratorio mostramos, su definicin y algunos conceptos y conocimientos que debemos tener y estn relacionados a este tema; y tambin contiene la prctica de laboratorio que realizamos y los clculos correspondientes.

MARCO TERICO
CIDOS NUCLEDOS
Son molculas constituidas por C, H, O, N y P. Relacionados con la conservacin, constituye el material gentico de los organismos. Es el componente qumico primario de los cromosomas y el material del que los genes estn formados. Se componen de un pequeo grupo de unidades monomericas denominadas nucletidos, unidos mediante enlaces covalentes fosfodiester. Tenemos: ARN ADN El ADN: Esta formado por dos cadenas de polinucleotidos complementarios y dispuestos en doble hlices sus bases nitrogenadas son adenina, timina, citosina, guanina; carecen de uracilo. La complementacin de bases se debe a la formacin de enlaces tipo puente de hidrogeno. La extraccin de ADN de una muestra celular:

Se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula.

Para esto tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol..

MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES Y REACTIVOS: Para la siguiente determinacin se utilizo lo siguiente:

3.1 Materiales
Gradilla Colador o Centrfuga Rallador mortero

3.2 Muestra
Tomate

3.3 Material de vidrio

Tubos de ensayo Varillas de vidrio Vasos de precipitado de 150 250 ml (12 unidades) Pipetas

3. 4 Reactivos
Agua (destilada o mineral) Sal de mesa Bicarbonato sdico champ Detergente lquido o

Alcohol isoamlico a 0C.

3.5 Equipos
Nevera Balanza analtica

METODOLOGA:

La extraccin de ADN requiere una serie de mtodos bsicos. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

DESCRIPCIN DE LA PRCTICA
Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sdico. 5 ml de detergente lquido o champ.

AGUA DESTILADA:

120ml

SAL DE MESA:

1,5g

BICARBONATO DE SODIO:

5g

CHAMPU:

5ml

La solucin TAMPON

Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

Tomate Triturar la muestra con un mortero. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente.

Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante.

Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. ALCOHOL ISOAMLICO:

Se aade 10ml de alcohol isoamlico a 0C a cada caldo molecular

TOMATE:

Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a

poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado. Tomate

RESULTADOS Y DISCUSIONES
Describir lo encontrado en la experiencia realizada 1. Tubo de ensayo (Tomate): la coloracin presenta rojiza, fragmentos de ADN en la parte Central. .

Resultados finales de la Practica de la Extraccin de ADN CONCLUSIONES

A modo de conclusin podemos decir que este informe ha dado a conocer aspectos de la vida natural perceptible como imperceptible a muestras sentidos, es decir, explica aquello que podemos ver a simple vista como lo que no lo podemos ver tan fcilmente. El mtodo utilizado para la extraccin de DNA, permite purificar en un grado relativamente alto (porque depende con la precisin de la toma de muestras y de procedimiento su xito) y pudimos determinar que es factible utilizarlo en posteriores ocasiones ya que es muy fcil de utilizar y se presta para varias aplicaciones.