Pesquisa e Identificao de Anticorpos

Regina Cardoso rcardoso@uol.com.br Ps Graduao em Hemoterapia SENAC - 2012

Deteco de anticorpos
Sricos:
Pesquisa de anticorpos irregulares Prova cruzada Tipagem reversa

Ligados membrana eritrocitria

Teste de antiglobulina direto Auto-controle Controle de Rh

Reviso dos Anticorpos!!!

Imunes ou Naturais Completos/aglutinantes ou Incompletos/ no aglutinantes Regulares ou Irregulares

Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) ou Teste Indireto da Antiglobulina

Soro do paciente/ doador Hemcias comerciais (kits com duas ou trs hemcias) Sem adicionar Potencializadores (Meio de Fora Inica Normal) Com adio de Potencializadores (PEG, LISS, Polibreno e outros)
Tempo de incubao varia conforme o potencializador utilizado Deteco de Anticorpos livres no soro

Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) em gel teste

Pesquisa de Autoanticorpos
Soro do paciente Hemcias do paciente Mesma tcnica escolhida para PAI

Verificar anticorpos hemcias. hemcias .

se

paciente as

tem

contra

prprias

Prova Cruzada ou Provas de Compatibilidade

Soro do paciente Hemcias do doador (segmento da unidade de glbulos) Mesma tcnica escolhida para PAI

Verificar a compatibilidade entre o soro do receptor e as hemcias do doador

Pacientes com PAI positiva, alm da Prova de Compatibilidade, necessrio fenotipar a unidade para o antgeno correspondente ao anticorpo.

Fya K D S K

Jka D Fya

Anti-Jka

Crditos: Dr. Claudio Brando, HEMOBA

Tipagem Reversa Detecta anticorpos naturais

Soro do paciente/ doador Hemcias comerciais A e B Verificar a presena de anticorpos naturais anti anti-A e Anti Anti-B
Tipagem Direta
Tipagem Reversa

Tipagem Reversa (Detecta anticorpos naturais) Utilizao do soro do paciente e/ou doador x hemcias A e B

Pesquisa de Anticorpos Irregulares (Detecta anticorpos irregulares) Utilizao do soro do paciente e/ou doador x hemcias O

Teste Direto da Antiglobulina

Hemcias do paciente Antiglobulina humana (AGH) No necessita incubao

Deteco

de

Anticorpos

ligados nas hemcias

Perguntas!!!!!
Qual a importncia da utilizao do Controle Rh nas tipagens do antgeno D?

O que significa quando o Controle Rh apresenta reatividade?

Qual a relao de reatividade no Controle Rh e presena de TAD e/ou autocontrole positivos?

Identificao de Anticorpos Irregulares ou Painel de Hemcias

Soro do paciente/ doador Hemcias comerciais (kits com onze ou mais hemcias) Sem adicionar Potencializadores (Meio de Fora Inica Normal) Com adio de Potencilaizadores (PEG, LISS, Polibreno e outros)
Tempo de incubao varia conforme o potencializador utilizado Identificao de Anticorpos livres no soro

Identificao de Anticorpos Irregulares

Mais Perguntas!!!!!
Por que so formados os anticorpos

irregulares?

Qual a importncia em detectdetect-los?

O que acontece se no forem detectados?

Identificao de Anticorpos Irregulares

A identificao de anticorpos no soro de pacientes/ doadores depende do painel de clulas que est sendo utilizado. A especificidade do anticorpo deve ser determinada: Duas hemcias reagentes que tenham o antgeno. No reativo com pelo menos duas hemcias sem o antgeno. Aps definir a especificidade do anticorpo deve ser afastada a presena de anticorpos adicionais: Selecionar clulas antgeno negativo para a especificidade j identificada e antgeno positiva para os outros antgenos cuja presena dos anticorpos ainda no foi afastada.

Exemplo 1: Identificao de Acs no Soro

Rh-Hr Cels I II Donor R1R1 R2R2 D + + C + o c o + E o + e + o C
w

Kell o o K + o

Duffy Kidd Lewis P a b a b a b k Fy Fy Jk Jk Le Le P1 M + + o + o o + + + + + + + + + o + + Duffy Kidd Lutheran P a b Fy Fy Jk a Jk b Lua Lub P1 M + o + + o + + + o + + + o + + + o + o + + o + + o o + o + o + + o + o + o + + o o + o o + o + o + o o o o + o + + o + + + o o + + + + + + + o o + + + + o + o + o o o o o o o o + + o o + o + + + + + o o o o o o o + o + + + + + + + + o + + o + + o + + + + +

MNS N o + S + + s + +

PAI GEL Resultados LISS 2+ 0 PAP 2+ 0

Rh-Hr Cels 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Donor RzR1 R1wR1 R2R2 Ror rr r"r rr rr R1R1 R2R2 R2r r'r' rr r''r rr rr Auto D + + + + o o o o + + + o o o o o C + + o o + o o o + o o + o o o o c o o + + + + + + o + + o + + + + E + o + o o + o o o + + o o + o o e + + o + + + + + + o + + + + + + C
w

Kell o + o o o o o o o o o o o o o o K o o o o o o + o + o o o o o o o k + + + + + + + + + + + + + + + +

MNS N + o + + + o o + + o + + + + o + S o o o + o + + + o o o o o o o o s + + + o + + + + + + + o + + + + LISS 0 0 0 0 0 0 2+ 0 2+ 0 0 0 0 0 0 0 0 PAP 0 0 0 0 0 0 2+ 0 2+ 0 0 0 0 0 0 0 0

Resultado Painel: Anti-K

Identificao de Anticorpos Irregulares

No painel anterior, a especificidade do anticorpo foi determinada com trs clulas positivas (K+) e vrias negativas. Como no painel h vrias clulas no reativas (K-), possvel afastar a presena da maioria dos outros anticorpos. O prximo passo a confirmao do aloanticorpo, utilizando a fenotipagem do paciente. Como ele desenvolveu anti-K, esperado que as hemcias dele no apresentem o antgeno K (KEL1). Provvel fentipo K-.

Cuidados na seleo de glbulos para pacientes com Anticorpos Irregulares Incidncia do antgeno Seleo ao acaso para antgenos isolados Ex. Paciente com anti-K com solicitao de 3 unidades de glbulos. Incidncia do antgeno K1 (9%). 4 unidades ao acaso ABO compatvel forneceria as 3 unidades necessrias

Exemplo 2: Identificao de Acs no Soro

Rh-Hr Cels I II Donor R1R1 R2R2 D + + C + o c o + E o + e + o C
w

Kell o o K + o

Duffy Kidd a b a b k Fy Fy Jk Jk + + o + o + + + + + Duffy Kidd a b a b k Fy Fy Jk Jk + + o + + + o + + + + o + o + + o o + o o + o + o + + o o + o o + o + o + o o o o + o + + o + + + o o + + + + + + + o o + + + + o + o +

Lewis P Lea Leb P1 M o + + + + o + +

Lutheran P

MNS N o + S + + s + +

PAI GEL Resultados LISS 2+ 2+ PAP 2+ 2+

Rh-Hr Cels 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Donor RzR1 R1wR1 R2R2 Ror rr r"r rr rr R1R1 R2R2 R2r r'r' rr r''r rr rr Auto D + + + + o o o o + + + o o o o o C + + o o + o o o + o o + o o o o c o o + + + + + + o + + o + + + + E + o + o o + o o o + + o o + o o e + + o + + + + + + o + + + + + + C
w

Kell o + o o o o o o o o o o o o o o K o o o o o o + o + o o o o o o o

MNS N + o + + + o o + + o + + + + o + S o o o + o + + + o o o o o o o o s + + + o + + + + + + + o + + + + LISS 2+ 2+ 0 2+ 2+ 0 2+ 2+ 2+ 0 0 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 0 PAP 2+ 2+ 0 2+ 2+ 0 2+ 2+ 2+ 0 0 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 0

Lu Lu o o + + o o o o o o o o + + o o + + o o + o + + + + + o o o o o

P1 M + + + + + + + + o o + o + + + + + + + + o + + o + + o + + + + +

+ + + + + + + + + + + +

Resultado Painel: Anti-Jka

Cuidados na seleo de glbulos para pacientes com Anticorpos Irregulares Incidncia do antgeno Seleo ao acaso para antgenos isolados Ex. Paciente com anti-Jka com solicitao de 3 unidades de glbulos. Incidncia do antgeno Jka (77%). 10 unidades ao acaso ABO compatvel forneceria as 3 unidades necessrias

Anticorpos Mltiplos
(frequncia combinada para realizar o clculo)

Paciente com antiK Jka Fya

Incidncia Antgeno 0,09 (ou 9%)

Doadores Compatveis 1-0,09= 0,91 (91%)

0,77 (ou 77%) 1-0,77= 0,23 (23%) 0,66 (ou 66%) 1-0,66= 0,34 (34%)

Considerando ABO do paciente (A Rh+) 0,4 x 0,85 x 0,91 x 0,23 x 0,34 = 0,024 (ou 2%) = 1 em aproximadamente 50 doadores

Exemplo 3: Identificao de Acs no Soro

Rh-Hr Cels I II Donor R1R1 R2R2 D + + C + o c o + E o + e C + o o o
w

Kell K + o

Duffy Kidd a b a b k Fy Fy Jk Jk + + o + o + + + + + Duffy Kidd a b a b k Fy Fy Jk Jk + + o + + + o + + + + o + o + + o o + o o + o + o + + o o + o o + o + o + o o o o + o + + o + + + o o + + + + + + + o o + + + + o + o +

Lewis P Lea Leb P1 M o + + + + o + +

Lutheran P

MNS N o + S + + s + +

PAI GEL Resultados LISS 2+ 2+ PAP 2+ 2+

Rh-Hr Cels 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Donor RzR1 R1wR1 R2R2 Ror rr r"r rr rr R1R1 R2R2 R2r r'r' rr r''r rr rr Auto D + + + + o o o o + + + o o o o o C + + o o + o o o + o o + o o o o c o o + + + + + + o + + o + + + + E + o + o o + o o o + + o o + o o e C + o + + o o + o + + + + + o + + + + + + o o o o o o o o o o o o
w

Kell K o o o o o o + o + o o o o o o o

MNS N + o + + + o o + + o + + + + o + S o o o + o + + + o o o o o o o o s + + + o + + + + + + + o + + + + LISS 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ PAP 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+

Lu Lu o o + o o o o o o o o o o o o o + + + + + + + + + + + + + + + +

P1 M + + + + + + + + o o + o + + + + + + + + o + + o + + o + + + + +

+ + + + + + + + + + + +

Provvel autoanticorpo

Exemplo 3: Identificao de Acs no Soro

Rh-Hr Cels I II Donor R1R1 R2R2 D + + C + o c o + E o + e + o C
w

Kell o o K + o

Duffy Kidd Lewis P a b a b a b k Fy Fy Jk Jk Le Le P1 M + + o + o o + + + + + + + + + o + + Duffy Kidd Lutheran P a b Fy Fy Jk a Jk b Lua Lub P1 M + o + + o + + + o + + + o + + + o + o + + + + + o o + o o + + + o + o + o + + o o + o o + o + o + o o o o + o + + o + + + o o + + + + + + + o o + + + + o + o + o o o o o o o o o o o o + + + + + + + + + + + + o o + o + + + + + + + + o + + o + + o + + + + +

MNS N o + S + + s + +

PAI GEL Resultados LISS 2+ 2+ PAP 2+ 2+

Rh-Hr Cels 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Donor RzR1 R1wR1 R2R2 Ror rr r"r rr rr R1R1 R2R2 R2r r'r' rr r''r rr rr Auto D + + + + o o o o + + + o o o o o C + + o o + o o o + o o + o o o o c o o + + + + + + o + + o + + + + E + o + o o + o o o + + o o + o o e + + o + + + + + + o + + + + + + C
w

Kell o + o o o o o o o o o o o o o o K o o o o o o + o + o o o o o o o k + + + + + + + + + + + + + + + +

MNS N + o + + + o o + + o + + + + o + S o o o + o + + + o o o o o o o o s + + + o + + + + + + + o + + + + LISS 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 0 PAP 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 0

Provvel anticorpo dirigido contra antgeno alta frequncia

Anticorpos dirigidos contra antgenos eritrocitrios de alta frequncia populacional (pblico)

Um antgeno presente na superfcie de clulas, usualmente em mais de 99% da populao humana. Reaes uniformes com todas as clulas do painel, uma vez que os antgenos esto presentes na maioria das clulas Autocontrole negativo AABB: Raro: < 1/5.000. Incomum: < 1/1.000

Anticorpos de Alta frequncia Auxlio de centros de referncia ou registro de doadores raros. Laboratrios de referncia Soros raros - anticorpos contra Ag alta frequncia Hemcias raras ausncia dos Ag alta frequncia

Importante: Membros familiares so importantes fontes de doadores raros

Doena hemoltica do recm nascido ou outros problemas relacionado a aloanticorpos em crianas: Me se ABO compatvel a melhor doadora Pacientes com dificuldade de encontrar doadores compatveis: Doao autloga deve ser considerada
Technical Manual ABBB 2005

Unidades raras (<1 em 5000) Unidades incomuns (<1 em 1000) Programa de Doadores Raros (E.U.A) SCARF

Vamos pensar!!!!!
Opes para atendimento de pacientes com anticorpos irregulares no soro, de acordo com o que j estudamos no curso de Hemoterapia. Hemoterapia .