Facultad de Ciencias Agropecuarias Ctedra de Fisiologa Vegetal Ayuda didctica complementaria Unidad Temtica 2 Elaborada por el prof.

Titular Dr. Vctor H. Lallana Abril de 2008

Mtodos para medir fotosntesis

Todos los mtodos para medir fotosntesis se basan en la medicin del intercambio gaseoso (CO2 O2) que ocurre durante el proceso. La medicin se realiza sobre uno de los dos gases y los resultados siempre se expresan en tres dimensiones: mg (gas). rea (foliar cm2 o dm2). Tiempo (minutos, segundos, horas). En el caso que se mida fotosntesis en algas en vez de Area foliar se emplea la unidad de volumen (cm3 de agua). Existen equipos ms modernos y muy costosos, que pueden medir la fotosntesis en plantas basados en los principios de la porometra. Consisten en hacer pasar una corriente de aire, a travs de una seccin de hoja (1 cm2), y medir que equipamiento adecuado las caractersticas del aire de entrada y salida. El balance se expresa como ganancia neta de fotosntesis (CO2) por rea y por tiempo (generalmente 1 minuto). Este equipamiento permite realizar medidas instantneas de la fotosntesis en plantas. Clasificacin de los mtodos 1) POR PRODUCCIN DE OXIGENO 1.1. Mtodo manomtrico (microrespirmetro de Warburg) 1.2. Mtodo de las botellas (determinacin de Oxigeno por Winckler) 2) POR MEDICIN DEL CO2 ABSORVIDO 2.1. Mtodo de la campana por titulacin 2.2. Absorcin infrarroja de CO2 2.3. Absorcin de CO2 radioactivo 3) POR POROMETRIA 4) RECUENTO DE BURBUJAS (Demostrativo) 1.1. El microrrespirmetro de Warburg se puede utilizar para medir respiracin o bien fotosntesis. En la medicin se debe eliminar o capturar con un reactivo qumico uno de los gases, para poder medir el otro. La tcnica si bien es precisa en sus resultados es complicada en cuanto al equipamiento y calibracin de volmenes de cada equipo. Requiere mucha pericia de laboratorio y controles estrictos de tiempo, temperatura y mediciones de las alturas de desplazamiento de los lquidos (Solucin de brodie) en las columnas con microcapilares. Un detalle del equipo y de su funcionamiento puede consultarse en el libro de Sivori, Montaldi y Caso, 1980 pg. 85 y en el de Ritcher, 1972, pg. 46-47.

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Microrespirmetro de Warburg

1.2. El mtodo de las botellas se utiliza ampliamente para medir fotosntesis en ambientes acuticos (rios, lagunas, lagos, mares, ocanos). Es decir permite estimar la productividad primaria de los ambientes acuticos. El mtodo se basa en medir la produccin de oxgeno (Ver determinacin de oxigeno disuelto) en tres botellas especiales, de 300 cc de capacidad, con tapn esmerilado y debidamente rotuladas. En el sitio de muestreo se llenan con agua del lugar las tres botellas, a una se le agrega cloruro de manganeso y reactivo de Winkler (Ver determinacin oxigeno disuelto), se la tapa con cuidado y se la coloca en el medio acutico, colgada o suspendida con un dispositivo de flotacin. Otra botella, con agua del lugar, se tapa con cuidado y se coloca en el medio acutico a la misma profundidad que la anterior. La tercer botella, con agua del lugar, se tapa con cuidado y la envuelve en una bolsa de polietileno negra (para evitar la entrada de la luz solar), luego se cuelga del dispositivo de flotacin a la misma profundidad de las anteriores. Este dispositivo (las tres botellas a la misma profundidad) se deja por un tiempo de 2 o 3 horas, y luego se retiran. En laboratorio se sigue el procedimiento (Ver determinacin oxigeno disuelto) para todas las botellas y se estiman los mg de O2 que existen en cada una.

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Botella 1: Medimos el oxgeno inicial (Oi) Botella 2: Medimos el oxgeno producido (Op) por fotosntesis de las algas menos el oxigeno respirado por las algas (Or). Botella 3: Medimos el oxgeno respirado (Or) Botella 1 Oi Botella 2 Oi + Op - Or Botella 3 Oi - Or

Fotosntesis Neta (FN) = Fotosntesis Bruta (FB) Respiracin (R) FN = Oi + Op Or (Oi Or) = Oi + Op Or Oi + Or = Op R = Oi (Oi Or) = Oi - Oi + Or = Or FB = FN + R = Op + Or Determinacin del oxgeno disuelto por el Mtodo de Winkler Inmediatamente despus de que se haya tomado la muestra de agua, se aade 2 cm3 de cloruro de manganeso al 50 por 100 en solucin y 2 cm3 de reactivo Winkler (100 g de hidrxido potsico y 60 g de yoduro potsico en 200 cm3 de agua) usando pipetas* que lleguen bastante debajo de la superficie. Esto puede hacer que se derrame algo de agua de la parte de arriba. Volver a colocar la tapa, quitando el aire, y mezclar completamente invirtiendo y girando la botella con fuerza. Se forma un precipitado de hidrxido manganoso, pero el oxgeno del agua puede transformar parte de ste en una cantidad equivalente de hidrxido mangnico. Al volver al laboratorio, dejar reposar el precipitado. A continuacin introducir* cuidadosamente 2 cm3 de cido sulfrico concentrado, reponiendo el tapn rpidamente y evitando la introduccin de aire o la prdida de precipitado. Mezclar completamente por rotacin hasta que se disuelva el precipitado; el hidrxido mangnico oxida el yoduro potsico en una cantidad equivalente a la de yodo libre. Puede hacerse una estimacin aproximada a partir del color del yodo. La comparacin con cristales standard en un comparador B.D.H o la titulacin darn una determinacin ms precisa. Titulacin: girar para mezclar; a continuacin, usando una pipeta, llevar 100 cm3 de la botella de muestra a un recipiente cnico. Titular inmediatamente con solucin N/80 normalizada de tiosulfato sdico hasta que solamente quede un dbil color amarillo; agregar unas pocas gotas de solucin de almidn recin preparadas, y a continuacin aadir ms tiosulfato gota a gota justamente hasta que desaparezca el color azul. Cada cm3 de tiosulfato utilizado es equivalente a 1 mg de oxgeno por litro; as, x cm3 de tiosulfato implican una concentracin de oxgeno de x mg por litro.
*Precaucin: Estos agentes no deben aspirarse con la boca; usar pipetas provistas de perillas o que puedan sumergirse.

Bibliografa: BENNETT, D.P. y HUMPHRIES, D.A. 1978. Introduccin a la Ecologa de Campo. Blume, Madrid, 326 p. Ayuda Didctica complementaria U.T. 2 Medicin de Fotosntesis FV FCA UNER Pg. 3

2.1. El mtodo de la campana

por titulacin, consiste en hacer circular aire de

concentracin conocida de CO2 por un circuito cerrado (Ver esquema del dispositivo), dentro del cual se coloca una planta. Se hacen dos corridas, una en blanco para conocer la concentracin de CO2 del aire y otra con planta, durante un tiempo (minutos u horas), y luego se titulan los recipientes que contienen el Ba(OH)2. El Ba(OH)2 reacciona con el CO2 y forma CO3Ba2. Este se titula con una solucin cida. Esquema del dispositivo Entrada Aire

Para medir la fotosntesis por este mtodo se emplea la siguiente frmula: F= T.N. PM CO2 A. H. dnde, A: es el rea foliar de la planta; H. tiempo en horas, T, es la diferencia entre las titulaciones de los dos circuitos (Blanco y con planta); N la normalidad de la solucin y PM el peso molecular del CO2. El resultado final se expresa en mg CO2 dm-2 h-1

2.2. Absorcin infrarroja del CO2. El CO2 tiene la propiedad de absorber longitudes de onda del rojo - rojo lejano. Un dispositivo apropiado (Ver figura) con dos tubos de vidrios en sistema cerrado (uno con aire y el otro con la planta a investigar o medir la fotosntesis), permite evaluar en el tubo de la derecha la disminucin de la concentracin del CO2 por efecto de la fotosntesis de la planta. Esa disminucin, implica menor nmero de molculas de CO2 en el dispositivo de la derecha, y por lo tanto la luz (infrarroja) colocada encima de cada tubo de vidrio, pasar en mayor cantidad hacia el dispositivo inferior. En este dispositivo caja cerrada con un diafragma sensible a las variaciones de presin- el compartimento de la derecha se calentar ms que el de la izquierda y ello provocar un desplazamiento del diafragma. Esta seal se amplifica y grafica adecuadamente por un dispositivo externo. De manera que se pueden comparar las concentraciones de gas conocidas (al inicio del experimento, con un blanco sin planta) y las finales (con plantas, al cabo de un tiempo). El mtodo es sensible a la cuarta cifra decimal 0,0001, por lo cual es muy preciso. Los resultados se expresan en las tres dimensiones: mg CO2 cm-2 h-1. Ayuda Didctica complementaria U.T. 2 Medicin de Fotosntesis FV FCA UNER Pg. 4

Dispositivo experimental para medicin de fotosntesis por absorcin infrarroja del CO2

3) Los mtodos basados en la porometra, son los ms modernos y rpidos para medir fotosntesis y transpiracin a campo, con control de temperatura, CO2, H20 y radiacin PAR. Todos estos equipos son porttiles y cuentan con DataLog, lo cual permite el almacenamiento de informacin y posterior descarga a una PC. En la pgina siguiente se pueden apreciar dos modelos de equipos disponibles en el mercado, y de uno un detalle del censor (cubette) que apreta un disco de un cm de hoja donde realiza la medicin. En el mismo se pueden visualizar las flechas de circulacin del aire que atraviesa la hoja. Las medidas directas que arrojan estos equipos y sus unidades son las siguientes: Medidas Directas Resistencia estomtica Transpiracin Humedad relativa Temperatura de la hoja Temperatura de la cmara Flujo de aire PAR Unidades sec cm-1 g cm-2 s-1 % C C cm-3 sec-1 E s-1 m-2 Margen de error 10 % 6% 3% 0,35 C 0,25 C 5% 5%

Esquemas y fotos extradas de catlogos de equipos Li-Cor y ADC Pag. Siguiente

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