Clulas Citotxicas Naturales

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C E L U L A S C I T O T O X I C A S N AT U R A L E S
Universidad Nacional del Nordeste

Facultad de Medicina Ctedra de Bioqumica Brandan, Nora Profesora Titular. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE. Aquino Esperanza, Jos Ayudante Alumno por Concurso. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE. Aispuru, Gualberto Ayudante Alumno Interino. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE.

R ol de las clu las NK e n e l S ist e m a In m un e . C ara cte r sti cas d e l as c lul as N K Ex pr e si n Fe n ot pic a de la s cl ula s N K C ito to x ici dad m e diad a p or cl ulas de pe n die nte de an tic ue r po s ( AD C C) R e con oci m ie nto M e ca nism os e fe cto re s C lul as c ito t x ica s act iv adas por l inf oq uin as ( LA K) Pa pe l de las cl ulas N K e n la I nm u nid ad No rm al C lul as N K e n la in m un idad f re nte a Tu m or e s B ibl iog raf a

Introduccin
Vivimos en un mundo potencialmente hostil, repleto de una asombrosa coleccin de agentes nocivos (infecciosos o no) de forma, tamao, composicin y caractersticas agresivas diversas que pueden

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llevar al desarrollo de una entidad patolgica. El hombre y otros seres vivos han desarrollado para esto una serie de mecanismos de defensa que aseguran proteccin e integridad. Son estos mecanismos los que establecen un estado de inmunidad (del latn, libre de obligaciones) contra las noxas. El desequilibrio, la falencia o falla de la inmunidad puede determinar un estado patolgico. Las clulas y molculas responsables de la inmunidad constituyen el sistema inmunitario (SI) y la respuesta global y coordinada tras la introduccin de un elemento extrao al organismo es la respuesta inmunitaria . Los individuos sanos se encuentran protegidos de los agentes patgenos por medio de diferentes mecanismos. Alguno de estos mecanismos incluye la inmunidad innata ( natural o nativa ). Esta representa la primera lnea de defensa, cuyas caractersticas se limitan a poder discriminar un microorganismo y a su naturaleza moderadamente estereotpica, siendo su accionar muy parecido frente a la mayora de los agentes nocivos. Los elementos esenciales de la inmunidad natural corresponde a las barreras epiteliales, mecanismos humorales y celulares. A diferencia de la inmunidad innata, existen mecanismos de defensa mucho ms evolucionados que son estimulados tras la exposicin a agentes infecciosos, y cuya intensidad y capacidad de defensa aumenta despus de la ulterior exposicin a un determinado microorganismo. Puesto que esta forma de inmunidad se desarrolla como respuesta a la infeccin, se le denomina inmunidad adaptativa . Quien posee la capacidad para discriminar entre diferentes microorganismos. Los componentes bsicos de este tipo de inmunidad son los linfocitos y sus productos. La inmunidad innata posee distintos mecanismos para estimular a la inmunidad adaptativa con el fin de ampliar la respuesta frente a la noxa. Del mismo modo, la inmunidad especifica utiliza recursos de la inmunidad innata, adems de los propios, para llevar adelante sus funciones. L as interacciones entre inmunidad innata y especfica son bidireccionales .
R ol de las clu las NK e n e l S ist e m a In m un e C ara cte r sti cas d e l as c lul as N K

Las clulas citotoxicas naturales o natural killer ( NK ) representan una subpoblacin de linfocitos que se encuentra en la sangre (5-10%) y en los tejidos linfoides, especialmente el bazo, adems de encontrase en gran cantidad en el hgado. stas clulas derivan de la medula sea y son linfocitos grandes (10-15 m m) con numerosos grnulos citoplasmticos (Figura 1), razn por lo cual se los denomina linfocitos granulares grandes ( LGL ), aunque en realidad toman esta apariencia slo despus de activarse. Los grnulos de las clulas NK, al igual que los de los CTL, contienen: perforinas granzimas , factor de necrosis tumoral tipo b (TNF- b ) y proteoglucanos (condroitn sulfato A).

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Tras la exocitosis dirigida de los grnulos, las clulas NK pueden producir la lisis osmtica de las clulas dianas e inducir, adems, la muerte celular apoptotica a travs de la va perforina-granzima B. Es ms acertado, tal vez, considerar a las clulas NK como CTL filogenticamente primitivos que carecen de receptor de clulas T (TCR) especfico para el reconocimiento de antgenos.

Ex pr e si n Fe n ot pic a de la s cl ula s N K

Si se considera su fenotipo de superficie y el linaje, las clulas NK no son clulas T ni B (clulas cero). Estas clulas no sufren maduracin en el timo. Tampoco sufren reordenamiento gentico de Ig o del TCR, y no expresan molculas CD3, marcador especfico de clulas T. Las clulas NK expresan ciertas molculas de adhesin como CD2, LFA-1 y la molcula de adhesin de clulas nerviosas NCAM o CD56. Adems de esto, las NK expresan un receptor de baja afinidad para la porcin Fc de la IgG, llamado Fc g RIIIA ( CD16 ). En estas clulas, tanto CD2 como Fc g RIIIA se asocian a subunidades de sealizacin, a saber homodmeros y heterodmeros que implican la cadena z del complejo TCR o a la cadena g del receptor de Fc (FcR), cada una de las cuales contiene los motivos de activacin del receptor va tirosina (ITAM). Las molculas de adhesin de las NK reconocen estructuras glucoproteicas de alto peso molecular que aparecen en la superficie de clulas infectadas por virus, diferencindolas de las clulas normales. Estas molculas de adhesin son consideradas como receptores de tipo lectina (que se unen a carbohidratos), lo que permite enfrentar estrechamente la clula diana con su destructor. Por otro lado, las clulas NK expresan las subunidades b y g c de transduccin de seales del receptor IL-2, pero no la subunidad a , por lo que pueden ser inducidas a proliferacin con altas concentraciones de IL-2. sin embargo, las clulas NK, si expresan la subunidad a del receptor de IL-15 y pueden proliferar a concentraciones muy bajas de esta citoquina. Adems, las NK expresan receptores para IFN de tipo I, INF- g e IL-12, que actan sobre estas clulas para aumentar sus capacidades citolticas.

C ito to x ici dad m e diad a p or cl ulas de pe n die nte de an tic ue r po s ( AD C C)

La interaccin del Fc g RIIIA con las porciones Fc de IgG1 IgG3 que se hallan unidas a la superficie de las clulas dianas para lograr la activacin de la clula NK y que esta despliegue su accin efectora, es un ejemplo caracterstico de citotoxicidad mediada por clulas dependiente de anticuerpos ( ADCC , del

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ingls antibody dependent cell-mediated cytotoxicity ), es decir, lisis de una clula diana por encontrase sta recubierta de anticuerpos. Las clulas NK constituyen las principales clulas efectoras de la ADCC dirigida por IgG.

R e con oci m ie nto

Las clulas NK expresan miembros de una familia de protenas de la superficie celular que contienen dos o tres dominios Ig en sus regiones extracelular. Las clulas NK expresan una o ms de estas protenas con capacidad receptora, de hecho, las NK dependen de estos receptores para reconocer una clula infectada de una normal. Esta habilidad de distinguir a clulas potencialmente peligrosas de clulas saludables depende de la expresin e interaccin entre los receptores inhibidores y activadores. Los primeros reconocen una forma allica especifica de las molculas de clase I del MHC (complejo mayor de histocompatibilidad) que se expresa de modo constitutivo en todas las clulas normales. En cambio, los receptores activadores reconocen protenas que se expresan tanto en las cedulas normales como patolgicas. Bajo estos conceptos cabe preguntarse si los receptores activadores no son especficos para clulas normales, a que se debe que las NK no se encuentren permanentemente activadas, inclusive contra las clulas sanas? Esto es posible gracias a que normalmente las clulas NK se encuentran bajo el efecto inhibidor. Actualmente han sido identificados numerosos receptores inhibidores, los cuales poseen motivos inhibidores de tirosina de receptores (ITIMs) en sus residuos citoplasmaticos. Cuando estos motivos son activados, reclutan tirosin-fosfatasas citoplasmaticas (SHP-1, SHP-2), que desfosforilan y por ende inactivan las cascadas de seales generadas por los receptores activadores (Fig. 2).

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Los receptores que activana los NK incluyen grupos de molculas estructuralmente distintas, pero que comparten un grupo de molculas sealizadoras que contienen motivos activadores de tirosinas de receptores (ITAMs). Estos receptores al ser inducidos, generan una cascada de foforilaciones, que finalmente activan a las NK. Esta funcin solo ser posible si el receptor inhibidor no ha sido activado. Por consiguiente, la activacin de la clula NK ocurre cuando una clula diana es incapaz de ocupar este receptor inhibidor. De ah que las clulas NK reconozcan la ausencia de unos determinados pptidos propios presentados por las formas allicas propias de las molculas MHC clase I.

M e ca nism os e fe cto re s

Luego de la activacin de la clula NK, los grnulos se polarizan entre el ncleo y la membrana que contacta con la clula diana, en pocos minutos el contenido de estos se libera hacia el espacio extracelular entre las dos clulas. Tal vez el componente ms importante de los grnulos sean las perforinas o citolisinas que poseen una cierta homologa estructural con el C9 del complemento. La interaccin de estas protenas con la membrana de la clula diana se establece a travs de los fosfolipidos que contengan fosfatidilcolina, estos son los ligandos ms potentes de las perforinas. El resultado de esto es la formacin de una amplio canal en la membrana (poro), que es por si mismo suficiente para la muerte celular, llevando a las celulas dianas a una necrosis generada por la osmolisis. Adems, este poro provee una puerta de entrada a otras molculas efectoras. Las clulas NK no solo utilizan este mecanismo, tambin destruyen por activacin de la apoptosis . Este otro mecanismo ltico es posible gracias a las granzimas , particularmente el subtipo granzima B . Estas son protenas que se encuentran dentro de los granulos de las NK y que son capaces de inducir la apoptosis a travs de la activacion de las caspasas, especialmente la capasa 3 . Actualmente se ha demostrado que la granzima B puede ingresar a las clulas dianas en ausencia de las perforinas, pero en este caso quedan capturadas dentro de vesculas endociticas sin poder ejercer su efecto apoptotico. Este particular hecho nos demuestra que la actividad apoptotica de la granzima B solo es posible si se encuentra libre en el citoplasma, he aqu la importancia de las perforinas, quienes les proveen la puerta de entrada. Adems de perforinas y granzimas, los grnulos contienen TNF- b y condroitn sulfato A, un proteoglucano cargado negativamente que resiste a la accin de la proteasas, que tiene la aparente funcin de proteger la clula NK de la autlisis por sus propios agentes letales.

C lul as c ito t x ica s act iv adas por l inf oq uin as ( LA K)

Se ha observado que las clulas NK responden a ciertas citoquinas como la IL-2. Esta es sintetizada y liberada por los linfocitos T CD4 que, de modo autocrino favorece la proliferacin de estas clulas. Pero adems posee un amplio efecto sobre las NK. El receptor de IL-2 (IL-2R) es un trimero compuesto por subunidades , , y . La IL-2 ejerce su efecto a travs del IL-2 R b g c promoviendo la diferenciacin a clulas citotxicas activadas por linfoquinas (del ingls limphokine-activated killer cells, LAK ).

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La subunidad IL-2 R b g c genera distintos mecanismos de sealizacin intracelular que determinan la proliferacin de las NK. Uno de ellos es a travs de las protenas JAK, quienes determinas la activacin de los factores de trascripcin STAT. Las protenas STAT, peculiarmente STAT5 promueve la activacin de 2 enhancers del gen de las perforinas (fig 3). Por otra parte determina la activacin del factor de trascripcin AP-1 y del factor nuclear kB (NF-kB) (Fig. 3). Adems promueve la expresin de los genes bcl-2 y c-myc.

Las clulas LAK exhiben una capacidad citoltica aumentada y una amplia especificidad de diana, lisando una gran variedad de clulas tumorales y tipos celulares normales no propias, entre las que se encuentran en primer lugar las clulas epiteliales (endotelio). Las clulas T activas producen IL-2 en gran cantidad pudiendo estimular la diferenciacin de clulas NK a clulas LAK. Adems de la IL-2, las NK responden a IL-12, IL-15 e INF-I.

Pa pe l de las cl ulas N K e n la I nm u nid ad No rm al

Las clulas NK lisan clulas infectadas por virus (Fig. 4) antes de que los CTL especficos de antgeno puedan diferenciarse a partir de pre-CTL, es decir, durante los primeros das de la infeccin viral. En las etapas tempranas de una infeccin viral, las clulas NK se expanden y son activadas por citoquinas de la inmunidad innata, como IL-15, IFN-1 e IL-12. Adems de lisar clulas diana que exhiben niveles reducidos de molculas MHC-I, las NK activadas secretan INF- g que activa a los macrfagos y, de forma autocrina, a si misma. Esta respuesta conjunta clula NK-macrfago puede contener ciertas infecciones in vitro durante varias semanas, lo que da tiempo a que la inmunidad especfica erradique la infeccin por medio de los CTL.

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C lul as N K e n la in m un idad f re nte a Tu m or e s

Las clulas NK desempean un papel importante en la lisis de clulas tumorales, sobre todo aquellas de origen hematopoytico, que escapan por diferentes mecanismos de la lisis mediada por CTL. El reconocimiento de las clulas NK de clulas infectadas por virus se produce cuando el microorganismo reduce la expresin de molculas MHC clase I, una estrategia que utilizan algunos virus para escapar de los CTL especficos, o al sustituir los pptidos propios por pptidos derivados de las protenas virales. La capacidad tumoricida de las NK se ve potenciada in vitro por ciertas interleuquinas en especial IL-2. La actividad in vivo de los NK aun no se conoce por completo, pero se ha observado que pacientes con recuento bajo de NK, son mas susceptibles a padecer ciertos tipos de tumores, por ejemplo ciertos tipos de linfomas. Actualmente se utiliza en seres humanos de la IL-2 como terapia frente a los tumores, en especial en cancer de rion.

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B ibl iog raf a

Abbas, Abul K. Lichtman, Andrew. Cellular and Molecular Immunology . 5 ed. Editorial Saunders Ivan Roitt, Meter Delves. Roitt's Essential Immunology. 10ma edicion, Editorial Blackwell Publishing. 2002. Interleukin 2 Receptor Signaling Regulates the Perforin Genes Trough Signal Transducer and Activator of Transcription (Stat5) Activation of Two Enhancers. J. Exp. Med. 109:1297-1307. 1999. Role of STAT Binding Site in the Regulation of the Human Perforin Gene. J. Immunol. 162:2785-2790. 1999. Entry and trafficking of Granzyme B in Target Cells During Granzyme B-Perforin-MediatedApoptosis. Blood. 92:1044-1054. 1998 A Role for NF-kB activation in Perforin Expresion Of NK Cells upon IL-2 Receptor Signaling. J. Immunol. 169:1319-1325. 2002.

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