Toma y Envio de Muestras-Iso Final1

DIRECCION DE SANIDAD VEGETAL
Subdireccin de Anlisis de Riesgo y Vigilancia Fitosanitaria ITR-SARVF-02 Revisin: 00 Pgina: 1 de 43
INSTRUCTIVO: TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA IDENTIFICACION
Elaborado por: Percy Mamani Snchez Coordinador del proyecto Firma Fecha
Revisado por: Johny Naccha Oyola Director SARVF
Aprobado por: Jorge Barrenechea C. Director Sanidad Vegetal
Jorge Tanaka Director UCDSV Firma Fecha
TABLA DE CONTENIDO 1. Objetivo 2. Alcance 3. Referencias 4. Definiciones 5. Responsabilidades 6. Descripcin 7. Registros 8. Anexos 9. Control de Cambios
1. OBJETIVO Garantizar la ejecucin de una eficiente toma y envo de muestras vegetales con daos o enfermedades; y especmenes de plagas, desde el campo hacia los laboratorios de la Unidad de Centros de Diagnstico de Sanidad Vegetal del SENASA (UCDSV) para su diagnstico. 2. ALCANCE Aplica a todos las Direcciones Ejecutivas del SENASA para todos los cultivos en general, con nfasis en los cultivos de granadilla, maracuy, mango, palto, zapallo, esprrago, pia, chirimoya y banano priorizados para el 2010 y otros 18 cultivos seleccionados para el perodo 2011-2013, en el marco del Proyecto de Fortalecimiento del Sistema de Vigilancia Fitosanitaria y del Programa Desarrollo de la Sanidad Agraria e Inocuidad Agro-Alimentaria - PRODESA. 3. REFERENCIAS 3.1. Proyecto: Fortalecimiento del Sistema de Vigilancia Fitosanitaria, Contrato de Prstamo N 2045/OC-PE suscrito entre la Repblica del Per y el Banco Interamericano de Desarrollo. 3.2. ITR-SARVF-01: Instructivo: Prospeccin fitosanitaria a nivel nacional. 3.3. PRO-UCDSV-001: Toma y envo de muestras para el diagnstico de plagas. 3.4. ITR-UCDSV-Ent-001: Toma y envo de insectos caros y moluscos con fines identificacin. 3.5. ITR-UCDSV-Mal-002: Toma y envo de muestras para su identificacin malezologica. 3.6. ITR-UCDSV-Mic-006: Toma y envo de muestras para diagnostico de hongos fitopatogenos. 3.7. ITR-UCDSV-Mic-006: Toma y envo de muestras para diagnostico de hongos fitopatogenos. 3.8. ITR-UCDSV-Nem-001: Toma y envo muestras para diagnostico nematodos fitoparasitos. 3.9. ITR-UCDSV-Vir-002: Toma y envo de muestras para deteccin de virus fitopatogenos. 3.10. ITR-UCDSV-Bac-002: Toma y envo de muestras para el diagnostico de bacterias fitopatogenas. 4. DEFINICIONES 4.1 Coleccin: Conjunto de ejemplares botnicos por lo general de una misma clase y reunidas por su especial inters o valor. 4.2 Cuadrado de inventario: rea de muestreo que puede ser de diferente forma y tamao, usado para las evaluaciones de poblaciones de malezas en cultivos. 4.3 Cultivo priorizado: Cultivo que ha sido seleccionado y ser prospectado durante la ejecucin del proyecto.
4.4 Espcimen: Muestra o ejemplar con las caractersticas de su especie bien definidas. 4.5 Fitoplasmas: Organismos procariticos, unicelulares que carecen de pared celular, algo ms pequeos que las bacterias y parecen ser biolgicamente similares a los micoplasmas que infectan animales. En el pasado fueron conocidos con el nombre de "organismos similares a micoplasmas" o MLOs. 1. Hbito de crecimiento: Forma o aspecto de crecimiento de una planta (erguido, postrado, rastrero, etc.). 2. Hbitat: Lugar donde se crece la maleza (ejemplo: borde de acequia, caminos, campo de cultivo, etc.). 3. Hiperplsicas: Se caracteriza por la presencia de tumores o agallas, o la formacin de rganos adicionales (races o brotes), a partir de yemas adventicias o dormidas. En estos casos, el exceso de actividad celular se manifiesta exteriormente con la aparicin de esas malformaciones . 4. Hojas palmati-compuestas: Hoja compuesta cuyos foliolos surgen todos del pice del pecolo comn. 5. Hojas pinnati-compuestas: Hoja simplemente compuesta cuyos foliolos se disponen a ambos flancos del raquis. 6. Malezas: Plantas perjudiciales que interfieren con el normal desarrollo de las plantas cultivadas, compiten directamente con ellas por factores fundamentales para el crecimiento como: agua, nutrientes minerales, luz, anhdrido carbnico y espacio vital, disminuyendo significativamente la calidad y cantidad de las cosechas. 7. Mollicutes: Los Fitoplasmas son tambin llamados Mollicutes. 8. Muestra: Parte o porcin extrada de un conjunto por mtodos que permiten considerarla como representativa de l (Real Academia de la Lengua Espaola). Material biolgico como plantas, partes de plantas (hojas, tallos, ramas, semillas, frutos, races y flores), especmenes de insectos y caros y sustratos como turbe que van a ser analizados. 9. Muestra nematologica: Porcin de suelo tomada despus de mezclar y homogenizar las submuestras. 10. Parenquimticas: La bacteria invade los tejidos suculentos en primer lugar y luego avanza hacia los tejidos vasculares adyacentes. Las enfermedades de este tipo presentan como sntomas, necrosis, manchas, atizonamiento y a veces, podredumbre total de los rganos atacados. 11. Plaga: Cualquier especie, raza o biotipo vegetal o animal o agente patgeno daino para las plantas o productos vegetales (FAO, 2005). 12. Planta madre: Individuo botnico o planta adulta de la cual se obtiene material de multiplicacin. 13. Saprofito: Organismo que obtiene sus nutrientes a partir de la materia orgnica muerta (Agrios, 1996). 14. SINAVIF: Sistema Nacional de Vigilancia Fitosanitaria. 15. Signo: Patgeno o sus partes o productos que se observan sobre una planta hospedante (Agrios, 1996). 16. Sntoma: Reacciones o alteraciones internas y externas que sufre una planta como resultado de su enfermedad (Agrios, 1996). 17. Submuestras: Porcin de suelo tomada en cada punto de muestreo. 18. Tcnicas Moleculares: Procedimientos basados en ensayos con cidos nuclecos aplicados al diagnstico, caracterizacin, mejoramiento gentico,
evolucin, anlisis poblacional, entre otros. En el presente instructivo hacen referencia a PCR. 19. Viroides: partculas infecciosas diminutas que causan enfermedades en plantas superiores. Su tamao es diez veces menor que el de los virus ms pequeos, no poseen protenas ni lpidos y su estructura es una cadena cclica corta de ARN desnudo. Las plantas infectadas muestran un desarrollo deficiente y decoloracin y pueden llegar a morir. 5. 5.1 RESPONSABILIDADES
El Director General de Sanidad Vegetal es responsable de aprobar el presente Instructivo. La Subdireccin de Anlisis de Riesgo y Vigilancia Fitosanitaria, de la Direccin de Sanidad Vegetal, a travs de su Director, el Responsable Tcnico del Proyecto y el Coordinador Tcnico del mismo son responsables de gestionar los requerimientos necesarios para realizar las actividades determinadas en el presente instructivo, as como supervisar in situ el desarrollo de la toma y envo de muestras a la UCDSV, en coordinacin con las Direcciones Ejecutivas del SENASA. Las Direcciones Ejecutivas del SENASA, estn conformadas por un Director Ejecutivo, un Jefe del rea de Sanidad Vegetal y personal profesional y tcnico. En las actividades de toma y envo de muestras la responsabilidad de los Directores y Jefes de Area de Sanidad Vegetal es la de supervisin in situ de la ejecucin de estas actividades y el cumplimiento de las metas fsicas programadas en el Plan Operativo. La SARVF es responsable de difundir y actualizar el presente Instructivo. DESCRIPCION Se ha elaborado este Instructivo con el fin de dar a conocer a los especialistas y tcnicos del SENASA de las regiones del pas, los mtodos y procedimientos para una eficiente colecta de muestras vegetales afectadas por plagas con fines de identificacin taxonmica en laboratorio. En este instructivo se presentan las formas correctas de colecta para los diversos grupos de plagas que se encuentran mayormente en los cultivos. Igualmente ilustra con numerosas fotografas, los sntomas, daos y grupos de plagas que se presentan con mayor frecuencia en los cultivos, as como los materiales e insumos que son necesarios para una buena colecta. De forma prctica, igualmente presenta la forma correcta de recorrer los campos para realizar la colecta de las muestras, lo que permitir de una manera eficiente, determinar y colectar las plagas que estn afectando a los cultivos.
5.2
5.3
5.4 6.
6.1. TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE INSECTOS Y ACAROS CON FINES DE IDENTIFICACION Materiales necesarios para la colecta de insectos: Pinzas entomolgicas de punta fina. Lupa de campo. Red entomolgica. Alcohol al 70% o 80%. Frasco para matar insectos. Frascos de diversas capacidades con tapa hermtica. Lpiz negro. Etiquetas. Bolsas de papel. Libreta de campo. GPS o PDA. Aguja histolgica 6.1.1. Recoleccin y envo de queresas o cochinillas de las familias Diaspididae, Coccidae, Pseudococcidae y afidos de la familia Aphididae Recoleccin Estos insectos suelen preferir lugares protegidos de las plantas, as por ejemplo, en las partes areas hay que observar los brotes jvenes, el envs de las hojas, junto a las nervaduras, las axilas de las hojas, el pednculo de las flores y frutos. Aquellas que afectan gramneas, se ubican en la base de la vaina, por lo que conviene desprender las hojas con mucho cuidado. Algunas se encuentran en el tronco y suelen ubicarse en depresiones o heridas de la corteza o debajo de ella. Las que llevan una vida subterrnea se encuentran preferiblemente en el cuello de la raz; su coloracin rosada o griscea las confunde con los granos de arena o tierra, por lo que pueden pasar inadvertidas. Un elemento que nos ayudar a ubicar a estos insectos es la presencia de hormigas, ya que las cochinillas son muy visitadas por ellas por que se alimentan de su melado o excreciones azucaradas, de donde obtienen aminocidos y minerales para su dieta. Tambin la presencia de hongos del tipo de la fumagina, que se forman a expensas del melado, nos ayuda a la deteccin de estos insectos.
Es conveniente disponer de una mochila o bolsa (que nos deje las manos libres), provista de bolsas de papel o polietileno, un frasco con tubos de vidrio con tapones de goma, un frasco con alcohol 70 - 80%, tijera de podar, palita de jardinera, aguja histolgica, pincel suave y fino, etiquetas, cuaderno o libreta de campo, lpiz y una carpeta y papeles para formar un herbario. Una vez encontrado el material es conveniente buscar un lugar apropiado, sentarse (cmodo) y con el Ceroplastes floridensis pincel o aguja, recoger las cochinillas y sumergirlas en el tubo con alcohol. Si el material es escaso y teme que al tratar de introducirlas en el tubo se desprendan del pincel o se deterioren con el manipuleo, corte el trozo de raz u hoja donde se encuentra la cochinilla y guarde ambos en el tubo con alcohol. Si el material es abundante, puede conservarlo junto con la planta hospedera, en bolsas de plstico o papel y separar luego los ejemplares en la oficina o gabinete, aunque de esta forma corre el riesgo de perder parte del material porque se caen en la bolsa o se aplastan en el traslado. Estos insectos son fitfagos y el hospedero es importante. Si no conoce la planta husped, herborizarla y hacerla identificar; para ello es necesario tratar en lo posible de encontrar plantas con flores. Identifique su muestra de herbario y el tubo con cochinillas con una letra o nmero que las relacione. En la libreta de campo anote todo aquello que le haya llamado la atencin, como por ejemplo, la presencia de hormigas, orugas u otros insectos que pueda estar relacionado con las cochinillas y si es posible, colectarlas tambin, ya que puede tratarse de predadores y no olvide poner el nmero de muestra que corresponde. Macrosiphum euphorbiae Especmenes de Coccidae como las especies del Gnero Saisseteia, Parassaisetia , Parthenolecanium, debern contener aquellos que recin han mudado y tienen una coloracin plomiza dorsalmente. En Ceroplastes, tendr que observarse que la parte ventral de los especmenes tengan una coloracin algo rosada. Envo Se deben remitir en alcohol al 70 - 80%, los especmenes deben ser adultos jvenes, con un nmero alto de individuos ya que muchos pueden estar parasitados. Especmenes secos generalmente estn hongeados, por lo que estn cubiertos con estructuras microscpicas que impiden la identificacin. En el caso de afidos, se deben remitir individuos pteros y alados, ya que estos ltimos tienen mejores caractersticas para la identificacin. Enviar igualmente un nmero alto de individuos debido a que muchos pueden ser inmaduros o estar parasitados.
6.1.2. Recoleccin y envo de Heteroptera y Auchenorhyncha Este grupo de insectos pueden se recolectados con red entomolgica o con aspiradores manuales. Preferible, deben ser enviados en sobres entomolgicos o acondicionados en cajas pequeas y duras entre capas de papel toalla. Luego las cajas pequeas dentro de otra de mayor tamao conteniendo material de embalaje a fin de protegerla de los golpes. En Cicadellidae se requieren machos para la identificacin de la especie.
Hortensia similis (Hemiptera: Cicadellidae)
Dysdercus mimus (Hemptera: Pyrrhocoridae)
Confeccin de sobres entomolgicos
6.1.3 Recoleccin y envo de Thysanoptera Se tomaran brotes, hojas flores y frutos que presenten dao y los estados de desarrollo como larvas, prepupas pupas y adultos se conservaran en alcohol al 70%. Recuerde que es preferible remitir los insectos muertos. 6.1.4 Recoleccin y envo de coleptera La recoleccin puede ser manual o con red entomolgica. Tambin se tomaran como muestras rganos de la planta afectados y con presencia de este grupo en alcohol al 70%. Se debe tener en cuenta que algunas especies se alimentan de noche y en el da se ubican debajo de la hojarasca o terrones del campo. Ejemplo: Tenebrionidae del gnero Paraepitragus, que se alimentan de flores de frutales. 6.1.5 Recoleccin y envo de muestra de Dptera Se toman rganos de la planta con dao y larvas, luego se acondicionan para recuperar adultos. Para la identificacin de Agromyzidae como en Cecidomyiidae, se requiere especmenes machos, en tanto que en Tephritidae es necesario de hembras. El material biolgico debe contener un nmero mnimo de 06 individuos (entre hembras y machos), dentro de viales con alcohol al 70%.
6.1.6 Recoleccin y envo de lepidptera Los especmenes adultos deben ser acondicionados en sobres entomolgicos, evitando que no se encuentren descamados; por lo que cuando se recuperan de una crianza estos ni bien han extendido sus alas y a tomado la coloracin definitiva deben ser muertos. Evitar que vuelen, y se daen. Esto es aplicable para muchos insectos. Nota: Se recomienda examinar alrededor y cerca de la planta teniendo en cuenta que muchas especies se refugian en el da y salen de noche a alimentarse subiendo para ello a la copa de los rboles como en algunas especies de Arctiidae, gusanos de tierra.
Oiketycus kyrbii (Lepidptera: Psychidae)
Spodoptera frugiperda, hembra (izquierda), macho (centro), larva (derecha). (Lepidoptera: Noctuidae)
6.1.7 Recoleccin y envo de hymenoptera En alcohol al 70% o en sobres entomolgicos. Hay microavispas que son fitfagas y pueden estar alimentndose de semillas de los frutos o formando agallas (Las larvas de algunas especies de la familia Tanaostigmatidae, Eurytomidae, Cynipidae, entre otras). En estos casos se recolectaran y acondicionaran los rganos infestados para la recuperacin de los adultos.
6.1.8 Forma de remisin de las muestras Los siguientes rdenes de insectos: Isoptera, Psocoptera, Thysanoptera, Aphididae, Aleyrodidae, Diapididae, Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Pthiraptera, Syphonaptera; los caros y moluscos, deben ser muertos y remitidos al Laboratorio de Entomologa de la UCDSV, en alcohol al 70%, en viales o frascos de polietileno. Partes de las plantas conteniendo plagas tambin pueden ser remitidas de esta forma. En Lepidptera adultos, stos deben ser muertos en cmaras letales y enviados de esta forma en sobres, los cuales debern estar contenidos en envases ms resistentes, como cajas de cartn. 6.1.9 Etiquetado de la muestra Se recomienda realizar una pequea etiqueta de cartn o de papel adherida al frasco, la cual debe contener datos escritos con lpiz o tinta china: como el cdigo, el nombre cientfico del hospedante, nombre comn o local entre comillas, localidad, fecha, de coleccin y nombre del colector. A las muestra debe acompaar la solicitud para el diagnostico de plagas.
6.1.10 Embalaje o acondicionamiento del material biolgico para la remisin de muestras colectadas en campo Preferentemente se usarn frascos de polietileno de 100 ml de capacidad conteniendo el material biolgico en alcohol. Estos frascos (o viales), se acondicionarn en envases resistentes que pueden ser un taper, otro frasco de plstico significativamente ms grande, o cualquier caja conteniendo suficiente material de amortiguacin: chizitos de tecnopor, papel, etc.
Proceso ideal de embalaje de una muestra entomolgica
6.1.11 Embalaje o acondicionamiento de insectos vivos en hojas o frutos Estos envos sern excepcionales, o previa coordinacin con personal del laboratorio a fin de prever y evitar la introduccin de plagas de otras localidades. Las hojas o frutos, se deben acondicionar entre hojas de papel para absorber, luego colocarlas dentro de una bolsa de papel kraff, y finalmente esta ltima dentro de una caja dura o de tecnopor si se quieren adicionar geles refrigerantes.
6.1.12 Embalaje de insectos montados en alfiler Los insectos son colocados en pequeas cajitas cuyo fondo est revestido de corcho (no use tecnopor) a fin de asegurar bien los especmenes. En los espacios libres coloque ms alfileres (sin especmenes) a fin que de ms apoyo a una falsa tapa; entre la falsa tapa y la tapa de la caja se llena el espacio con papel para evitar que los especmenes puedan moverse con los golpes durante el viaje. Asegurada la tapa con cinta de embalaje, se coloca sta dentro de una caja ms grande dura conteniendo material de relleno.
6.1.13 Como no se debe embalar Colocar tubos de vidrio, como los tubos de ensayo envueltos en papel o plsticos, en una caja de cartn blando. Muchas de estas muestras llegan con los tubos rotos y con el alto riesgo de escape de plagas de importancia cuarentenaria si los envan vivos.
Nota: Coccidae, Aleyrodidae o Diaspididae, se pueden enviar parte de rganos.
Informacin que debe acompaar a la muestra Deber adjuntar la solicitud para el diagnostico de plagas.
6.2. TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO DE HONGOS Y BACTERIAS CON FINES DE IDENTIFICACION
A) Eleccin de la muestra: Para seleccionar el material afectado debe de considerarse lo siguiente: a) Tomar las muestras antes de la aplicacin de plaguicidas, de lo contrario la recuperacin de los patgenos puede ser limitada. b) Cantidad: Obtener material fresco en cantidades razonables que incluyan varios ejemplares de los sntomas caractersticos. Enve un mnimo de doce ejemplares con los sntomas caractersticos. c) Claridad o calidad: Se debe obtener material vegetal que muestre sntomas muy claros, en diferentes estados de ataque, preferentemente de inicio a intermedio. - Inicio de la infeccin (sntomas iniciales como pequeas manchas foliares, pstulas, clorosis, etc.) - Desarrollo Intermedio de la infeccin (sntomas intermedios como: numerosas manchas foliares, inicio de necrosis, etc.) Los tejidos muertos son una fuente de microorganismos saprofitos consecuentemente el aislamiento del patgeno es imposible. d) Aadir muestras sanas para fines comparativos. C) Sobre el muestreo en campo: a) Para determinar el nivel de incidencia de un hongo o una bacteria en un cultivo determinado, es necesario realizar una evaluacin, muestreo o contada. Los diferentes mtodos de muestreo se refieren a la inspeccin de 100 plantas o el mismo nmero de sus rganos (hojas, brotes, botones florales, flores, frutos, tallos, races y plantas completas) en un campo no mayor de 5 hectreas. La incidencia es el porcentaje de plantas afectadas por una plaga determinada. b) Para determinar la incidencia, se puede dividir el campo en cinco zonas o sectores (Figura 1a) y en cada una de ellas realizar veinte contadas; otra forma es cruzar el campo en zig-zag (Figura 1b) o bien en diagonal (Figura 1c) efectuando el muestreo.
c)
En el caso de no completar el nmero de muestras, reingresar al campo pero en sentido contrario; tomar en cuenta que el primer punto de muestreo deber estar aproximadamente a diez metros del borde del campo.
Figura 1. Diferentes mtodos de muestreo de campos de cultivo. a) Divisin del campo en cinco sectores. b) Recorrido del campo en zig-zag. c) Recorrido del campo en diagonal. 6.2.1 Consideraciones para la eleccin y remisin de muestras para el diagnstico de bacterias fitopatgenas Generalmente el informe del Laboratorio de Bacteriologa slo puede indicar los hallazgos obtenidos por ensayos microscpicos, siembra en medios de cultivo o serologa, de esta manera se confirma o no, un diagnstico etiolgico. Sin embargo, en algunas ocasiones no es posible el aislamiento e identificacin del agente etiolgico aun emplendose la metodologa especifica, siendo la causa originaria una seleccin inapropiada de la muestra, cantidad de ella o por deficiencias en el transporte a la que es sometida. Al respecto, a continuacin se presentan consideraciones generales acerca de la recoleccin de muestras para cultivo, aislamiento bacteriolgico o identificacin serolgica. a. Procedimiento de colecta de muestras con patgenos especficos a.1. Para la identificacin de Phytomonas en palma aceitera El primer paso en la colecta de muestras en una plantacin que se sospeche estar afectada por Phytomonas es establecer la presencia de la enfermedad mediante la observacin de los sntomas areos caractersticos como el amarillamiento de las hojas y la necrosis apical de color rojizo oscura que avanza hacia arriba, (este sntoma podra confundirse con deficiencia de magnesio), adicionalmente se percibe un olor a fermentado. Para el diagnstico colecte muestras de: races sanas de aproximadamente 20 a 25 centmetros de largo y 2 cm de dimetro, un grupo de 10 races, acondicione las races con papel peridico y colquelas dentro de una caja de tecnopor con cojn de gel refrigerante, cuide que la muestra no entre en contacto directo con el cojn congelado. Enve al laboratorio inmediatamente despus de su colecta, debido a que el flagelado sobrevive poco tiempo en las races.
a.2 Para la identificacin de Phytoplasmas Colecte hojas decoloradas o con mucha coloracin, ramas con sntomas de sobrebrotamientos, perdida de vigor, u otra anomala del desarrollo que pudiera establecer comparaciones entre las plantas enfermas y las plantas sanas. Obtenga dos muestras una de la planta enferma (6 a 8 hojas, o una rama procedente del sobrebrotamiento) y otra de la sana para poder establecer diferencias. Estas muestras deben llegar frescas al laboratorio para realizar ensayos de serologa o PCR. b. Procedimiento de colecta de muestras para identificaciones bacterianas por sus sntomas
a. Podredumbres blandas: Generalmente es causado por Pectobacterium que ingresa a la planta por heridas, viven dentro y se reproducen entre los espacios intercelulares segregando varias enzimas que destruyen la lamina media de las clulas, las muestras colectadas en estos casos son muy hmedas, por lo que se recomienda acondicionarlas en bolsa de papel y luego en bolsas de plstico previamente identificadas. Colectar dos muestras uno con avance y otra en fase intermedia de la enfermedad. b. Manchas foliares: Cuando la bacteria penetra directamente por los estomas, se desarrolla en los espacios subestomticos, invadiendo los espacios intercelulares del tejido parenquimtico aun vivo. La reaccin de la planta es una necrosis localizada. Generalmente lo primero que se observa es una mancha acuosa, traslucida, de color verde ms claro que el resto del tejido. Colectar aproximadamente de 8 a 10 hojas con sntomas iniciales e intermedios y algunas sanas, formar grupos de acuerdo a los avances de los sntomas y acondicionarlas por separado en bolsas de papel y luego en bolsas de plstico previamente identificadas. c. Tizones: El sntoma ms frecuente es el ennegrecimiento rpido de los rganos atacados que aparecen como si hubiera sido quemado, en el caso de quemazn del tabaco (Pseudomonas tabaci), colectar plantas, dos plantas completas con inicio y avance de sntomas y acondicionarlas.
d. Marchitamientos: El sntoma es muy fcil de reconocer, la bacteria ingresa por heridas y se ubica en los vasos xilemticos, sus elementos se llenan rpidamente por el desarrollo bacteriano y el agua no puede traslocarse hasta las hojas, las que se marchitan. Colectar dos plantas sin races con inicio y avance de sntomas y acondicionarlas.
e. Tumores o agallas: El patgeno penetra por heridas, una vez dentro de la planta, estimula una divisin anrquica, incontrolada e indefinida de las clulas, (hipertrofia e hiperplasia). Es lo que ocurre en la agalla del cuello (Rhizobium radiobacter); Tuberculosis del olivo (Pseudomonas savastonoi). Colectar, de cuatro a seis tallos, hojas, ramillas, donde se observe los tumores mas pequeitos de color crema (formacin reciente de las agallas).
f. Cancros: Lesiones ubicadas en hojas, frutos y ramitas estn constituidas por capas de tejido suberoso formando una pequea elevacin en forma de creta y con centro algo deprimido. Seleccionar, hojas, frutos y ramitas con cancros tiernos donde no hay mucha formacin de tejido suberoso, colectar 5 muestras por cada rgano de la planta.
c. Procedimiento de colecta de muestras para la identificacin de hongos. a. Mancha foliar: (Royas, oidiosis, mildius, sarnas, antracnosis, tizones etc.); Colecte hojas que muestren estados iniciales y tardos de la infeccin. Anote si hubo alguna aplicacin de plaguicidas. Plantas con hojas pequeas cortar ramas con hoja intactas. Las hojas muy suculentas recibirn tratamiento detallado para frutos frescos. b. Quemaduras en puntas y mrgenes de la hoja: Colecte la planta completa con raz y suelo. Anote las aplicaciones de plaguicidas, fertilizantes y otras labores culturales efectuadas. Si es posible indicar pH de suelo.
c. Deformacin de hojas: Colecte muestras representativas de todos los sntomas. Anote las labores culturales efectuadas.
d. Defoliacin: Colecte toda la planta si es posible. Si no, enve races y ramas con hojas en forma separada, pero en la misma muestra. Anote los tratamientos aplicados al cultivo.
e. Amarillamiento: Si es posible, colecte toda la planta, con raz y suelo, sino, proceda como en el caso anterior.
f. Marchitez, deformaciones, pudriciones radiculares y muerte regresiva: Colecte toda la planta, con raz y suelo (herbceas), en caso de plantas perennes colecte una buena cantidad de raicillas, incluya adems races gruesas que presenten pudricin, tambin colectar ramas o ramillas con follaje mostrando los sntomas. Si sospecha de Phytophthora, colecte raicillas, colquelas sobre papel hmedo y bolsa de plstico ya que necesitan mucha humedad para llegar al laboratorio.
g.
Pstulas: Colecte muestras representativas de todos los estados de la enfermedad.
h.
Carbones: Colecte muestras representativas de todos los estados de la enfermedad.
i. Cada de flores y frutos: Colecte flores y frutos con pednculos y ramas.
j. Pudriciones de frutos y otros tejidos frescos o suculentos: Colecte las muestras en estados tempranos de infeccin o dao.
1.2.2 Condiciones del embalaje y remisin para anlisis bacteriolgico y micolgico Plantas que muestren marchitamiento, amarillamiento o decaimiento general: siempre se debe enviar la planta completa, incluyendo las races y el material de soporte. No mezcle diferentes componentes de la muestra en la misma bolsa de envo (ejemplo: en plantas completas separar races con material de soporte de la parte area). a. Para parte area de la planta a excepcin de los frutos Se debe enviar la muestra dentro de una bolsa de papel o cubierta con papel y luego introducirla en una bolsa plstica para evitar prdida de humedad, colocando la identificacin entre las bolsas. Partes de plantas que muestren cancros: es preferible seleccionar en lo posible infecciones recientes, se enva la porcin cancrosa completa, con algo de madera sana por encima y debajo del cancro. El tamao de muestra no debe ser menor a 10 unidades. Nunca debe enviarse ramas muertas. La muestra se enva de la misma forma que la descrita en la parte superior. Partes de plantas que muestren manchas foliares o pstulas: Se colecta hojas que en lo posible muestren estadios tempranos y tardos de infeccin. Es preferible no enviar aquellas hojas que muestren quemaduras marginales, pues este sntoma se puede deber a condiciones abiticas, enfermedades radiculares o productos qumicos. Un mnimo de 20 hojas deben remitirse colocndolas extendidas entre papel toalla, la misma que debe introducirse en una bolsa de papel y luego en una bolsa plstica, colocando la identificacin entre las bolsas.
b. Para frutos Frutos frescos (carnosos): la podredumbre de frutos frescos y verduras deben ser tratados de forma especial. Nunca se debe enviar estos en avanzado proceso de descomposicin. Es preferible colectar frutos con sntomas recientes de infeccin. El tamao de muestra enviada al laboratorio no debe ser menor a 10 unidades. Los frutos jugosos y otros tejidos frescos suculentos deben limpiarse del exceso de humedad y envolverlos individualmente en doble papel toalla seco los mismos que deben introducirse en una bolsa de papel y luego en una bolsa plstica, colocando la identificacin entre las bolsas.
6.3. TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO DE VIRUS FITOPATOGENOS CON FINES DE IDENTIFICACION 6.3.1 Consideraciones Generales Un gran nmero de sntomas producidos por infecciones virales dependen de la interrelacin entre el genotipo de la planta, el virus y sus variantes, y las condiciones ambientales donde interactan. En este sentido deben tomarse en cuenta las siguientes consideraciones: Los sntomas pueden ser distinguidos como: a) Locales: son los primeros en presentarse en la planta. Las hojas presentan lesiones clorticas o necrticas de tamao y tipo diferente, que dependen del husped. Algunas plantas indicadoras ayudan a caracterizar un virus. b) Sistmicos: resultan de la translocacin y acumulacin del virus en la planta, por ello se presentan lejos de las zonas de la planta por donde el virus fue inoculado. Ejemplo: casos de necrosis en los tubrculos de papa. Las infecciones virales frecuentemente causan alteraciones macroscpicas en las hojas relacionadas a desviaciones de color: Mosaicos o Moteados: son reas clorticas en las hojas, producidos por la destruccin de cloroplastos y reduccin en la produccin de clorofila. Aclaramiento de las venas: el color es ms claro que el normal. Es un sntoma transitorio y comnmente precede a los mosaicos.
Amarillamiento: pueden ser anillos, lneas o manchas pequeas que contrasta con el color verde de la lmina foliar.
Pigmentacin anormal: produccin excesiva de algunas sustancias y su translocacin irregular. Ejemplo: hojas con antocianina muestran coloraciones prpura, rojo o azul (Antocianescencia). Hojas con melanina muestran color marrn o negro (Bronceamiento).
Otros sntomas pueden ser desviaciones de forma, tamao y textura de hojas: Enrollamiento: foliolos enrollados hacia arriba, causados por Potato leafroll virus, puede tambin ser causado por Rhizoctonia en cultivos de Papa.
Encrespamiento: los mrgenes foliares con apariencia ondulada, asociada con mosaicos.
Deformacin: presentan ensanchada o alongada.
la
lamina
foliar
Rugosidad: crecimiento desproporcionado de las venas y lminas foliares.
Hojas coriceas: hay acumulacin de almidn en las clulas, asociadas al enrollamiento.
Enacin: sobrecrecimiento de tejido a nivel de la vena principal de la hoja. Existen otras desviaciones del aspecto general de la planta, tales como: Enanismo: plantas que emergen tardamente y son ms pequeas que las sanas, pueden mostrar adems un grado de deformacin en tallos y hojas.
Arrosetamiento: hojas pequeas y encrespadas en parte apical de la planta.
Escoba de brujas: proliferacin de ramas axilares en los tallos principales, asociado con enanismo y clorosis foliar.
6.3.2 Consideraciones previas a la toma de muestras en campo En el caso de virus, se deben tomar las mismas consideraciones indicadas en la parte de hongos y bacterias.
6.4. TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO DE VIRUS, VIROIDES Y FITOPLASMAS MEDIANTE TECNICAS MOLECULARES CON FINES DE IDENTIFICACION 6.4.1 Consideraciones generales Un gran nmero de sntomas producidos por infecciones causadas por virus, viroides y fitoplasmas, dependen de la interrelacin entre el genotipo de la planta, el genotipo del patgeno y sus variantes, as como las condiciones ambientales donde interactan (Cuadro N 1). Los sntomas pueden ser distinguidos como: a) Locales: Son sntomas primarios que se desarrollan en el sitio de entrada del patgeno en las hojas, a menudo forman reas tpicas de clulas enfermas denominadas lesiones locales que varan en forma y color, las ms comunes son pequeas zonas de tejido clortico producido por la prdida de clorofila. b) Sistmicos: resultan de la translocacin y acumulacin del patgeno en la planta, por ello se presentan lejos de las zonas de la planta por donde fue inoculado. 6.4.2 Muestreo en Campo Considerar las pautas dadas en los casos de virus, bacterias y hongos. En el caso de la cantidad de muestras a tomar, considerar el Cuadro N 2. 6.4.3 Procedimiento de muestreo en campo Tener las mismas consideraciones que en los casos anteriores. En el caso de diagnostico de fitoplasma solo se descarta la presencia o ausencia de los mismos. El diagnostico por grupo de fitoplasma se establecer de acuerdo a la disponibilidad del desarrollo de la tcnica especifica.
Cuadro N 1. Sntomas causados por virus, viroides y fitoplasmas

Patgeno Cultivo o espcimen Sntomas caractersticos Inicial Ligera deformacin de las hojas Ligeras manchas amarillentas longitudinales en la corteza de las ramas Frutos con ligeras manchas amarillentas. Avanzado Hendiduras amarillentas y alargadas en la corteza de las ramas Manchas amarillas o rojas con hendidura en los Frutos Hojas y frutos deformes Corteza de tronco con piel de cocodrilo Tubrculos de forma alargada (fusiformes) Agrietamiento de tubrculos Raquitismo de los rboles Amarillamiento de la copa de los rboles Decaimiento general Hundimiento agujereado de la madera Clorosis de los rboles Raquitismo de los rboles Agujereado grave de la madera Clorosis grave Enanismo y muerte
Viroide del Manchado solar del palto (ASBVd)
Palto
Viroide del Tubrculo Ahusado de la Papa (PSTVd)
Ligera disminucin en el tamao de las hojas y de la planta Papa Ligera distorsin de los foliolos y rugosidad de la superficie de la hoja Epinastia foliar
Viroide de Exocortis de los Ctricos (CEVd)
Ctricos
Agrietado de la corteza Descortezado de la madera Decoloracin de la corteza Gomosis de la corteza Agrietado de la corteza Goma asociada con finos orificios Aclaracin de venas Decaimiento de los rboles
Viroide de Cachexia de los Ctricos (CCaVd) Virus de la Tristeza de los Ctricos (CTV)
Ctricos
Ctricos
Fitoplasma
Zanahoria
Coloracin prpura, Amarillamiento de las hojas , proliferacin de races, malformacin de las races y Necrosis , proliferacin de brotes en un solo punto escoba de brujas Clorosis de los foliolos , enanismo , disminucin del espacio internodal , proliferacin de brotes en un solo punto escoba de brujas , enrollamiento de los foliolos , produccin de tubrculos pequeos y flcidos Deformacin de las hojas, arrocetamiento Coloracin prpura , Incremento de la coloracin prpura Disminucin del tamao , incremento de la coloracin , disminucin del espacio internodal
Fitoplasma
Papa
Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma
Haba Avena Maz
Patgeno Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma
Cultivo o espcimen Alfalfa Col Culantro Perejil Nabo
Sntomas caractersticos Amarillamiento y reduccin del tamao Coloracin prpura Coloracin prpura Clorosis, mosaico, enanismo Coloracin prpura, malformacin de las races, proliferacin de races, y Necrosis interna Amarillamiento de las hojas , disminucin del espacio internodal , enanismo, mosaico , proliferacin de brotes en un solo punto
Fitoplasma
Lechuga
Cuadro 2. Requisitos de las muestras para diagnstico mediante tcnicas moleculares

Muestra Cantidad de muestra. Dirigido a descarte por muestra (6.2.2.2) 2 tallos de aprox. 50 a 60 cm de long. de la misma planta 4 hojas de la misma planta 10 hojas de la misma planta 10 hojas de la misma planta 10 hojas de la misma planta 6 plantas 4 plantas 4 plantas 4 plantas Cantidad por punto de muestreo. Dirigido a descarte por campo (6.2.2.1) 1 tallo de aprox. 50 a 60 cm de longitud 2 hojas 1 hoja 1 hoja 1 hoja 1 planta 1 planta 1 planta 1 planta
Patgeno
Cultivo o espcimen
Calidad
Viroide del Manchado solar del palto ASBVd Viroide del Tubrculo Ahusado de la Papa PSTVd Viroide de Exocortis de los Ctricos CEVd Viroide de Cachexia de los Ctricos CCaVd Virus de la Tristeza de los Ctricos CTV Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma
Palto
Tallos o ramas jvenes con hojas Hojas jvenes de la parte superior Hojas jvenes Hojas jvenes Hojas jvenes Planta completa (incluyendo la raz) Planta de cualquier edad sin raz. Planta de cualquier edad sin raz. Planta de cualquier edad sin raz. Hojas jvenes e incluir mazorca afectadas, cuando sea el caso. Planta de cualquier edad sin raz. Planta de cualquier edad sin raz. Planta de cualquier edad sin raz. Planta de cualquier edad sin raz. Planta completa (incluyendo la raz) Insectos adultos identificados previamente por entomologa de UCDSV
Papa Ctricos Ctricos Ctricos Zanahoria Papa Haba Avena
Fitoplasma
Maz
4 plantas
1 planta
Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma Fitoplasma
Alfalfa Col Culantro Perejil Nabo Insecto picador chupador
4 plantas 4 plantas 4 plantas 4 plantas 4 plantas Mnimo 5 especmenes por gnero identificado
1 planta 1 planta 1 planta 1 planta 1 planta
Fitoplasma
No aplica
6.4.4 Muestreo de materiales de propagacin a) Cantidad y calidad del material de propagacin Considerando el alcance de las tcnicas moleculares desarrolladas, aplican los siguientes materiales de propagacin: estacas yemeras y plantones. En el Cuadro N 3, se presenta la calidad y cantidad de muestra requerida.
Cuadro 3. Requisitos para la muestra procedente de viveros para su anlisis por tcnicas moleculares
Muestra Patgeno Material de propagacin Cantidad de muestra. Ensayo individual 2 estacas aproximadamente 20 cm de longitud procedente de la misma planta madre Cantidad por punto de muestreo. Dirigido a descarte por vivero No aplica
Viroide del Manchado solar del palto ASBVd
Estacas (tallo) y yemas de palto de plantas madre
1 rama. Plantn de palto 1 rama procedente del plantn Nmero total de puntos de muestreo: 10% de la poblacin No aplica 1 rama. Plantn de ctricos 1 rama procedente del plantn Nmero total de puntos de muestreo: 10% de la poblacin No aplica 1 rama. Plantn de ctricos 1 rama procedente del plantn Nmero total de puntos de muestreo: 10% de la poblacin No aplica 1 rama. Plantn de ctricos 1 rama procedente del plantn Nmero total de puntos de muestreo: 10% de la poblacin
Estacas de ctricos de plantas madre Viroide de Exocortis de los Ctricos CEVd
2 estacas aproximadamente 20 cm de longitud procedente de la misma planta madre
Estacas de ctricos de plantas madre Viroide de Cachexia de los Ctricos CCaVd
Estacas de ctricos de plantas madre Virus de la Tristeza de los Ctricos CTV
b) Procedimiento de muestreo en viveros En el caso que se requiera descartar la presencia de virus y viroides en un lote de plantones o estacas yemeras procedentes de paltos y ctricos, se seguirn las siguientes pautas: Estacas yemeras Cada muestra de estacas debe proceder de una planta madre debidamente identificada. Se remitir la cantidad indicada en la columna 3 del Cuadro N 2. Lote de plantones a) Cuando se trate de un campo o lote, se realiza un muestreo del 10% de la poblacin de plantas. b) Para obtener las muestras aleatoriamente dividir la poblacin de plantones en cinco grupos y en cada una tomar la misma cantidad de muestras. c) De cada punto de muestreo se tomar la cantidad y calidad indicada en el Cuadro 2, columna 2 y 4. 6.4.5 Procedimiento para el envo de muestras a) Para plantas vivas Para el envo de muestras se sigue lo establecido en el procedimiento para envo de muestras de los casos anteriores. b) Para frutos Para el envo de muestras se sigue lo establecido en el procedimiento para envo de muestras de los casos anteriores.
1.4.6. Sntomas ms frecuentes causados por virus, viroides y fitoplasmas a.- Sintomatologa causada por virus.- Las infecciones causan alteraciones en las hojas relacionadas con desviaciones de color, de forma, tamao y textura de hojas:
Mosaicos, Moteados y Aclaramiento de venas
Amarillamiento
Pigmentacin anormal
Rugosidad
Encrespamiento
b. Sntomas causados por viroides
Enrollamiento
Deformacin
Enanismo
Arrosetamiento
Virus de la tristeza de los ctricos (CTV): orificios alargados en la madera, enanismo, declinamiento de los tallos, aclaramiento de venas, clorosis, reduccin del tamao del fruto y colapso total del rbol.
e f
ASBVd: a) hoja sin sntomas, b) hojas con deformacin, c) hojas con encarrujamiento, y fuerte deformacin d) fruto con la mancha solar e) corteza de tronco con piel de lagarto y f) corteza de rama con mancha y hendidura longitudinales.
con PSTVd
Sanos
c. Sintomatologa causada por fitoplasmas

CCaVd: Protuberancias y depresiones en la corteza y madera con descoloracin gomosa en ambos tejidos. PSTVd: Tubrculos de papa ahusamiento y agrietamiento con
CEVd: Pequeas gotas de goma bajo la corteza; secado, agrietamiento y descascaramiento de la corteza. Arboles con retraso en el crecimiento.
c. Sintomatologa causada por fitoplasmas (continuacin)
Avena: disminucin en Haba: hojas con Maz: disminucin del espacio internodal, el tamao de la planta alteraciones morfolgicas reduccin en la produccin, manchado de las y manchas moradas. y manchado prpura del hojas inicialmente amarillas y luego prpuras. envs
Papa: amarillamiento de las hojas, reduccin del tamao de la planta y alteraciones en la morfologa de los tubrculos.
Lechugas: encarrujamiento de las hojas, amarillamiento de las hojas, mosaico, reduccin del tamao de la planta, proliferacin excesiva en la zona de crecimiento internodal y escoba de brujas
Zanahoria: coloracin prpura o amarilla de las hojas, incremento en el nmero de radculas, alteraciones en la morfologa de la raz y disminucin severa del espacio internodal.
Col: antocianosis en las hojas
Culantro: antocianosis, achaparra miento y deformacin de las hojas
Perejil: mosaico y disminucin del tamao
Nabo: antocianosis, enanismo, y deformacin de la raz
Alfalfa: Amarillamiento y achaparramiento
6.5. TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO DE NEMATODES CON FINES DE IDENTIFICACION En cualquier ambiente que los nematodos se encuentren, su distribucin es irregular. Debido a su poca movilidad, se encuentran localizados en ciertas zonas de un campo. Como no es posible examinar todo el ambiente en que los nematodos se encuentran y muchas veces no se sabe en qu zonas estn, es necesario hacer un muestreo. 6.5.1. Tipos de muestreo a. Con fines de diagnosis Se realiza cuando se observan los sntomas en el campo, a fin de relacionar la sintomatologa con la densidad poblacional de nematodos. Para este proyecto, se realizar este tipo de muestreo. a. Con fines de determinacin de la densidad media Se realiza para determinar la poblacin de nematodos presentes en el campo. Los resultados se utilizan para decidir las medidas de control a implementar. 6.5.2. Muestreo nematolgico Como se mencion en el punto anterior, para el proyecto se realizar el muestreo con fines de diagnstico, debiendo tenerse en cuenta si es en un cultivo anual o perenne. Muestreo de cultivos anuales Con un muestreador o una lampita se toman tres muestras por parche (fig. 2). La primera muestra (A) se toma dentro del parche; la segunda (B), en el lmite entre el parche y las plantas sanas; y la tercera (C), fuera del parche donde crecen plantas aparentemente sanas.
Figura N 2: Campo de cultivo afectado por nematodos Para realizar este muestreo, se recomienda lo siguiente: a. Se recomiendan tomar muestras de 30 puntos por hectrea, siguiendo el recorrido que se muestra en el grafico 1. Quitar la capa superficial del suelo con la ayuda de una lampita, luego se toma la submuestra hasta una profundidad entre 0 - 30 cm. las que se juntan en un balde. Homogenizar y extraer una muestra de aproximadamente 1 kg. El la siguiente Figura N 3, se detalla las formas de recorrer el campo para el trabajo de toma de muestras son los siguientes: A. Zigzag; B. Diagonal y C. General
X
X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
b.
c. d.
X X X X X X X X X X X X X X
X X X X X X X X X X X
X X X X X X X
Figura N 3: Tipos de recorrido para la toma de muestra nematolgico
X X
Muestreo de cultivos perennes (frutales) En rboles se deben tomar muestras alrededor del rbol, justo en la proyeccin de la copa, las que luego se mezclan. A veces es recomendable muestrear rboles con diferentes grados de la enfermedad. El procedimiento es el siguiente: a) Siguiendo el recorrido del Figura N 4, se toman muestras de 30 puntos por hectrea. b) Quitar la capa superficial del suelo con la ayuda de una lampita, luego se toma la submuestra hasta una profundidad entre 20 a 50 cm. c) Juntar en un balde, aproximadamente 1 kg. homogenizar y extraer una muestra de
Figura N 4 Recorrido para la toma de muestras en frutales 6.5.3. Como embalar la muestra e identificarla a) Llenar en bolsas de polietileno, de preferencia colocar dos bolsas. Amarrar o sellarlas bien. b) Identificar las muestras, la cual debe llenarse a lpiz para evitar que la humedad de la muestra borre los datos de identificacin. Se deben emplear dos etiquetas de identificacin, una en la bolsa con la muestra y la otra, en la parte externa.
6.5.4
Cuidados que deben tenerse con las muestras a) No maltratarlas o manipularlas demasiado. Algunas especies de nematodos son susceptibles al manipuleo. b) Evitar que se seque o se caliente demasiado. c) No dejarla expuesta a la accin del sol. d) Almacenarlas en lugares hmedos y fros, de 4 a 7 oC.
6.6. TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNOSTICO MALEZOLOGICO CON FINES DE IDENTIFICACION 6.6.1. Eleccin de la muestra Para seleccionar el material botnico a remitir debe considerarse lo siguiente: a) b) c) a) Las muestras deben ser lo ms completa posibles, es decir deben incluir raz (si fuera posible), tallo, hojas, flores y frutos. Cantidad: Colectar material en cantidad razonable, que incluyan varios ejemplares. Enviar como mnimo 3 ejemplares. Calidad: Debe elegirse ejemplares que no presenten daos de insectos o patgenos. Malezas terrestres: Cuando son pequeas, colectar la muestra en forma completa. En caso contrario tomar una muestra que tenga parte del tallo, hojas, flores y frutos. El mismo patrn debe seguirse para colectar malezas parsitas y hemiparsitas. Malezas acuticas: Introducir un papel peridico o cartulina suave debajo de la planta y levantarlo paulatinamente. No debe sacarse la planta del agua sin estar apoyada en el papel o cartulina de lo contrario pierde su forma natural. Malezas arbustivas: Tomar la muestra con una parte del tallo y ramas con flores y frutos. No debe tomarse ejemplares que solo tengan ramas estriles. Malezas arbreas: Tomar muestras de ramas conteniendo hojas, flores y frutos de tamao representativo. En caso de hojas de gran tamao tomar parte de la hoja con pecolo adherido a la rama.
De acuerdo a su hbitat debe considerarse lo siguiente:
b)
c) d)
6.6.2 Muestreo a) b) c) d) Para determinar el grado de incidencia de una maleza en un campo de cultivo, es necesario hacer una evaluacin o muestreo. Los mtodos de muestreo varan de acuerdo al tipo de cultivo, la poblacin de malezas y su distribucin en el mismo (al azar, uniforme o en rodales). El mtodo del cuadrado de inventario o censo, es el ms usado en las evaluaciones de malezas para determinar su grado de incidencia. Para la evaluacin se puede dividir el campo en cinco zonas o sectores (Figura N 5a) y en cada una de ellas evaluar 2 a 3 cuadrados; otra forma es cruzar el campo en zig-zag (Fig. 5b) o bien en diagonal (Fig. 5c).
1a
1b
1c
6.6.3 Condiciones de embalaje Las muestras colectadas deben ser embaladas adecuadamente a fin de protegerlas durante su traslado. En todo caso tener presente las siguientes consideraciones a) Cuando las muestras van a ser transportadas a corta distancia y pueden llegar al laboratorio el mismo da, extender el material fresco entre pliegos de papel peridico y cartones, estas a la vez dentro de bolsas de plstico o cajas de cartn, cuidando que no sufran la accin directa del sol o de altas temperaturas y trasladarlas inmediatamente. Colocar varios ejemplares en un solo papel, si la maleza es pequea Plantas herbceas no mayores de 60 cm de longitud incluyendo races, acomodarlas en papel peridico doblndolas en forma de V, M o N, cuidando de no quebrar los tallos o ramas al doblar. Si los especmenes tienen muchas hojas cortar algunas de ellas, dejando parte del pecolo adherido al tallo, con el fin de observar la disposicin que tienen las hojas en el tallo o en la rama. Esto mismo puede hacerse con las inflorescencias, dejando el pednculo sobre el cual se encuentran las flores. Arreglar la disposicin de las hojas de manera que unas queden por el haz y otras por el envs. Si las hojas son pinnati-compuestas o muy grandes, cortarlas y dejar solo una de muestra. Las hojas palmati-compuestas muy grandes partirlas por la mitad desecando una de las dos mitades, tambin puede doblarse en varias partes hasta que alcance en el papel peridico. Los especmenes colectados que contienen bulbos, tubrculos, rizomas o estolones, si son pequeos incluirlos en forma completa en la muestra, pero si son grandes y gruesos, en la muestra incluir solamente una parte de dicho rgano (corte transversal o longitudinal).
b) c)
d)
e) f)
g)
7. REGISTRO REG-SARVF/Pps-03: Informe para la supervisin in situ 8. ANEXOS Anexo 01: ndice del contenido Anexo 02: Flujograma que sigue una muestra desde la toma
9. CONTROL DE CAMBIOS PARRAFO DICE DEBE DECIR
REG-SARVF/Pps-03: Informe para la supervisin in situ Informe de supervisin in situ 1. N de informe 2. Objetivo 3. Actividades desarrolladas 4. Resultados 5. Recomendaciones y conclusiones
Anexo 01: ndice del contenido TABLA DE CONTENIDO 1. 2. 3. 4. 5. 6. OBJETIVO .... 2 ALCANCE ..... 2 REFERENCIAS ....... 2 DEFINICIONES .... 2 RESPONSABILIDAD ... 3 DESCRIPCION ..... 4
6.1
Toma y envo de muestras para el diagnostico de insectos y caros con fines de identificacin .. 4 6.2 Toma y envo de muestras para el diagnostico de hongos y bacterias con fines de identificacin . 12 6.3 Toma y envo de muestras para el diagnostico de virus fitopatgenos con fines de identificacin . 20 6.4 Toma y envo de muestras para el diagnostico de virus, viroides y fitoplasmas mediante tcnicas moleculares ..... 24 6.5 Toma y envo de muestras para el diagnstico de nematodos con fines de identificacin . 35 6.6 Toma y envo de muestras para el diagnstico malezolgico con fines de Identificacin ..... 37 7. REGISTRO . .... 38 8. ANEXO ..... 39 9. CONTROL DE CAMBIO .... 39
Anexo 02: Flujograma que sigue una muestra desde la toma

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Revisado por: Johny Naccha Oyola Director SARVF

Aprobado por: Jorge Barrenechea C. Director Sanidad Vegetal

Jorge Tanaka Director UCDSV Firma Fecha

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Hortensia similis (Hemiptera: Cicadellidae)

Dysdercus mimus (Hemptera: Pyrrhocoridae)

Confeccin de sobres entomolgicos

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Oiketycus kyrbii (Lepidptera: Psychidae)

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Proceso ideal de embalaje de una muestra entomolgica

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Nota: Coccidae, Aleyrodidae o Diaspididae, se pueden enviar parte de rganos.

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