MINISTRIO DA EDUCAO UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE PR-REITORIA DE PS-GRADUAO E PESQUISA NCLEO DE PS-GRADUAO E ESTUDOS EM RECURSOS NATURAIS

CARACTERIZAO E COMPORTAMENTO DE ACESSOS DE ALECRIM-PIMENTA (Lippia sidoides Cham.) MANTIDOS EM BANCO ATIVO DE GERMOPLASMA EM SO CRISTVO SE

TEREZA CRISTINA DE OLIVEIRA

2008

MINISTRIO DA EDUCAO UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE PR-REITORIA DE PS-GRADUAO E PESQUISA NCLEO DE PS-GRADUAO E ESTUDOS EM RECURSOS NATURAIS

TEREZA CRISTINA DE OLIVEIRA

CARACTERIZAO E COMPORTAMENTO DE ACESSOS DE ALECRIMPIMENTA (Lippia sidoides Cham.) MANTIDOS EM BANCO ATIVO DE GERMOPLASMA EM SO CRISTVO SE

Dissertao apresentada Universidade Federal de Sergipe, como parte das exigncias do Curso de Mestrado em Agroecossistemas, rea de concentrao Sustentabilidade em Agroecossistemas, para obteno do ttulo de Mestre.

Orientador Arie Fitzgerald Blank

SO CRISTVO SERGIPE - BRASIL 2008

FICHA CATALOGRFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

O48c

Oliveira, Tereza Cristina de Caracterizao e comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) mantidos em banco ativo de germoplasma em So Cristvo Se / Tereza Cristina de Oliveira. - So Cristvo, 2008. 94 f. : il. Dissertao (Mestrado em Agroecossistemas) Ncleo de PsGraduao e Estudos em Recursos Naturais, Pr-Reitoria de PsGraduao e Pesquisa, Universidade Federal de Sergipe, 2008. Orientador: Prof. Dr. Arie Fitzgerald Blank 1. Agroecossistemas Plantas nativas. 2. Plantas medicinais. 3. Plantas aromticas. 4. Lippia sidoides Cham. Gentipos. 5. Alecrim-pimenta leos essenciais . I. Ttulo. CDU 633.812:665.528

TEREZA CRISTINA DE OLIVEIRA

CARACTERIZAO E COMPORTAMENTO DE ACESSOS DE ALECRIMPIMENTA (Lippia sidoides Cham.) MANTIDOS EM BANCO ATIVO DE GERMOPLASMA EM SO CRISTVO SE

Dissertao apresentada Universidade Federal de Sergipe, como parte das exigncias do Curso de Mestrado em Agroecossistemas, rea de concentrao Sustentabilidade em Agroecossistemas, para obteno do ttulo de Mestre. APROVADA em 31 de julho de 2008.

Pesq. Dr. Francisco Elias Ribeiro Embrapa Tabuleiros Costeiros

Prof. Dr. Pricles Barreto Alves UFS

Prof. Dr. Arie Fitzgerald Blank UFS (Orientador)

SO CRISTVO SERGIPE BRASIL

DEDICO A Deus, que sempre nos conduz e guia, por caminhos muitas vezes desconhecidos. Qualquer que seja o caminho, no se sabe ao certo porque foi escolhido. Assim, estamos sempre caminhando em estradas cheias de incertezas. E, talvez, nunca saberemos ao certo, qual o nosso caminho. Por isso, a melhor opo seguir o caminho do corao.

OFEREO A minha querida me Pela confiana e incondicional torcida Aos meus queridos filhos Brbara, Bruna e Joo Victor, minha razo de viver e continuar lutando. A todas as pessoas que acreditam nos sonhos e no desistem nunca de realiz-los. Pois, nada impossvel.

MEU RECONHECIMENTO

Ao Professor orientador Dr. Arie Fitzgerald Blank e a co-orientadora Dra. Renata Mann pela felicidade e oportunidade dessa caminhada. Foi fundamental para o meu aprendizado. Obrigada pela confiana, orientao e constantes ensinamentos na execuo deste trabalho.

TAMBM MEU RECONHECIMENTO Ao Dr. Edmar Ramos de Siqueira, que enquanto Chefe Geral da Embrapa Tabuleiros Costeiros, proporcionou por meio do Programa de Elevao de Escolaridade a realizao do sonho de estudar de muitos empregados em todos os nveis e cargos ocupacionais, sem distino.

AGRADECIMENTOS

Sinceros agradecimentos a todos aqueles que contriburam para a realizao deste trabalho. Em particular: Universidade Federal de Sergipe (UFS), Universidade que pelo seu carter pblico tive a oportunidade de realizar minha graduao e, este, Curso de Mestrado. Ao Prof. Dr. Arie F. Blank pela oportunidade, confiana, pacincia e ajudar-me a aprender a aprender em todos os momentos, alm da sua valiosa amizade. As Prof. Dr.Renata Mann e Maria de Ftima Arriogoni-Blank pelas contribuies no processo de qualificao, ensinamentos prticos, confiana e otimismo. Ao Prof. Dr. Pricles Barreto Alves pela contribuio nas anlises dos constituintes do leo, incentivo e colaborao. A todos os Professores do Curso de Mestrado, pelos conhecimentos e experincias transmitidas. Em especial ao Professor Francisco Sandro de Holanda pelos ensinamentos e contatos com os novos conceitos debatidos em suas aulas. A Brbara, Bruna e Joo Victor por compreender minhas ausncias e, muitas vezes, minhas irritaes. Aos meus pais, irmos, cunhada e sobrinhos pelo carinho, estmulo e confiana. A minha querida amiga e irm Marta Cristina dos Santos pelas horas de conversa e estmulo, descontrao e carinho durante esses dois anos, pela pessoa maravilhosa que , e, sobretudo, pelo privilgio de compartilhar comigo minhas alegrias e tristezas ao longo desses 35 anos de amizade sincera, obrigada de corao. Aos Bolsistas Ricardo Barbosa e Itamara Bomfim Gois, pela ajuda fundamental durante todas as fases de execuo desse trabalho e, sobretudo, pela competncia, presteza e carinho de ambos. Vocs so maravilhosos. As amigas e colaboradoras Evanildes Menezes de Souza, Anglica Ramos e Maria Ester Gonalves pelo apoio, ensinamentos, carinho e disposio para ajudar em todas as etapas. A Maria de Lourdes da Silva Leal, Embrapa Tabuleiros Costeiros pela colaborao nas anlises. A todos os meus colegas da Embrapa em nome do Edmar, Edson Diogo, Edgard, Robson Dantas, Amaury, Pureza, Ester, Joo Quintino, Janana, Elias, Ana Ldo, Hlio Wilson, Lafayette, Daniel Vieira, Semramis e Nogueira, muito obrigada pela

torcida, carinho, colaborao e convivncia ao longo desses 20 anos, alguns mais recentes. Aos colegas do Curso em nome de Anglica Ramos que passaram a fazer parte da minha vida, pela amizade, brincadeiras, carinho, contribuies e companheirismo. A todos que de forma direta e indireta colaboraram, torceram e estimularam a realizao deste trabalho.

SUMRIO Pgina RESUMO........................................................................... i ABSTRACT...................................................................... iii CAPTULO 1.................................................................... 01 1.1. Introduo Geral........................................................ 01 1.2. Referencial Terico.................................................... 03 03 1.2.1. Recursos genticos e a sustentabilidade de agroecossistemas............................................................... 1.2.2. Origem, botnica, usos e leo essencial de 05 alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.)......................... 1.2.3. Conservao de germoplasma................................. 08 1.2.4. Caracterizao de germoplasma.............................. 12 1.2.4.1. Caracterizao morfolgica e agronmica de 13 germoplasma...................................................................... 1.2.4.2. Caracterizao qumica......................................... 15 1.3. Referncias Bibliogrficas.......................................... 17 CAPTULO 2: Caracterizao morfolgica e agronmica 22 de germoplasma de e alecrim-pimenta.......... Resumo.............................................................................. 22 Abstract.............................................................................. 23 2.1. Introduo................................................................... 24 2.2. Material e Mtodo...................................................... 25 2.3. Resultados e Discusso............................................... 27 2.4. Concluses.................................................................. 30 2.5. Referncias Bibliogrficas.......................................... 31 CAPTULO 3: Comportamento de acessos de alecrim33 pimenta (Lippia sidoides Cham.) durante dois anos de cultivo................................................................................ Resumo.............................................................................. 33 Abstract.............................................................................. 34 3.1. Introduo................................................................... 35 3.2. Material e Mtodo...................................................... 36 3.3. Resultados e Discusso............................................... 38 3.4. Concluses.................................................................. 45 3.5. Referncias Bibliogrficas 46

CAPTULO 4: Influncia das pocas seca e chuvosa no 50 comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.)................................................................. Resumo.............................................................................. 50 Abstract.............................................................................. 51 4.1. Introduo................................................................... 52 4.2. Material e Mtodo...................................................... 53 4.3. Resultados e Discusso............................................... 54 4.4. Concluses.................................................................. 60 4.5. Referncias Bibliogrficas.......................................... 61 CAPTULO 5: Influncia da secagem das folhas no leo 64 essencial de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.)..... Resumo.............................................................................. 64 Abstract.............................................................................. 65 5.1. Introduo................................................................... 66 5.2. Material e Mtodo...................................................... 67 5.3. Resultados e Discusso............................................... 69 5.4. Concluses.................................................................. 76 5.5. Referncias Bibliogrficas.......................................... 77 ANEXOS........................................................................... 80

RESUMO OLIVEIRA, Tereza Cristina. Caracterizao e comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em So Cristvo - SE. So Cristvo: UFS, 2008. 90 p. (Dissertao Mestrado em Agroecossistemas) Alecrim-pimenta (Lppia sidoides Cham.) uma planta medicinal e aromtica, nativa do Nordeste do Brasil, cujo leo essencial utilizado em virtude de suas propriedades bactericida, fungicida, moluscida e larvicida. Este trabalho visou caracterizar e avaliar o comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), de vrios Estados do Nordeste do Brasil, mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em So Cristvo. No primeiro captulo, apresentou-se a introduo geral do trabalho, o referencial terico sobre recursos genticos e sustentabilidade de agroecossistemas, a origem, os aspectos botnicos e de uso de alecrim-pimenta, a conservao de recursos genticos e a caracterizao de germoplasma (caracterizao morfolgica, agronmica e qumica). O segundo captulo consistiu da caracterizao morfolgica e agronmica de acessos de alecrim-pimenta cultivados em campo, utilizando-se delineamento experimental em blocos ao acaso com duas repeties. Foram avaliadas as variveis: altura de planta, massa fresca e seca de folha e caule, largura e comprimento de folha, cor de folha, formato de copa, teor e rendimento de leo essencial. Os resultados mostraram diferenas morfolgicas nos acessos para as variveis: cor de caule, formato de copa, altura de planta, comprimento e largura de folha e relao comprimento/largura de folha. Para as caractersticas agronmicas, foram evidenciadas diferenas significativas para teor e rendimento leo essencial, sendo o acesso LSID-005 o mais promissor e o acesso LSID-105 o menos promissor. No terceiro captulo estudou-se o comportamento de acessos de alecrim-pimenta em dois anos de cultivo, e foram avaliadas as variveis: altura de planta, massa fresca de caule e folha, teor, rendimento e teores dos constituintes qumicos do leo essencial. As maiores mdias encontradas para os caracteres teor e rendimento de leo essencial foram do acesso LSID-105, com 7,68 % no ano de 2005, e do acesso LSID-102, com 56,46 mL planta-1 no ano de 2006, respectivamente. As maiores mdias de timol e de carvacrol foram encontradas no acesso LSID-003, com 90,82 % e do acesso LSID-104, com 56,05 % respectivamente, ambos no ano de 2006. O acesso LSID-104, oriundo do Estado de Sergipe, apresentou como constituinte qumico majoritrio o carvacrol. Os demais acessos tm o timol como constituinte qumico majoritrio. Todos os acessos, nos dois anos de cultivo, apresentaram variabilidade fenotpica para todas as variveis analisadas, exceto para teor de terpil 4-ol. No quarto captulo, avaliou-se a influncia das pocas seca e chuvosa no comportamento de acessos de alecrim-pimenta, avaliandose as variveis: massa fresca e seca de folha, teor e rendimento do leo essencial e os teores dos constituintes qumicos do leo essencial. Observou-se que, para a maioria dos acessos de alecrim-pimenta estudados, o teor de timol maior na poca chuvosa do que na seca. O acesso LSID-102 apresentou alto rendimento de leo essencial, porm com teor de timol entre 47,97 % e 64,95 %. O acesso LSID-003 apresentou rendimento de leo essencial de 10,06 mL planta-1 e teor de timol de 90,02 % e, o acesso LSID-104 apresentou alto teor de carvacrol (mdia de 54,68 %) e baixo teor de timol (mdia de 7,88 %). No quinto captulo, estudou-se a influncia da secagem das folhas no leo essencial de acessos de alecrim-pimenta. Testou-se a influncia da secagem das folhas a
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40 C por cinco dias em 11 acessos de alecrim-pimenta, colhidas nas estaes seca e chuvosa. Avaliaram-se o teor de leo essencial e os teores dos constituintes qumicos no leo essencial. A secagem proporcionou reduo de teor de leo essencial de alecrimpimenta quando colhido na estao seca. Em geral, a secagem alterou os teores da maioria dos constituintes qumicos. Em relao aos constituintes qumicos majoritrios, a secagem alterou o teor de timol, mas no alterou o teor de carvacrol do leo essencial de acessos de alecrim-pimenta. Palavras-chaves: Lippia sidoides, planta medicinal e aromtica nativa, gentipos, leo essencial, constituintes qumicos. _____________
Comit Orientador: Arie Fitzgerald Blank UFS (Orientador), Renata Silva-Mann UFS (Co-orientadora).

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ABSTRACT OLIVEIRA, Tereza Cristina. Characterization and behavior of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions maintained in Active Germplasm Bank at So Cristvo country, Sergipe State. Brazil. So Cristvo: UFS, 2008. 90 p. (Thesis Master of Science in Agroecosystems - Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo-SE, Brazil) Pepper-Rosmarin (Lippia sidoides Cham.) is a medicinal and aromatic plant, native Northeast Region of Brazil, which has an essential oil widely used for its properties as bactericide, fungicide, molluscicide, and larvicide. This paper aimed to characterize and evaluate the performance of accessions of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) native to various States of the Northeast Region, kept in Germplasm Bank at So Cristvo, Sergipe, Brazil. The first chapter presents the general introduction, the literature review on genetic resources and sustainability of agroecosystems, origin, ethnobotany, and germplasm characterization (morphological, agronomic and chemical). The second chapter presents and discusses the data on the morphological and agronomic characterization of accessions of pepper-rosmarin cultivated in field with seedlings from stem cuttings, using a randomized complete block design with two replications. The evaluated variables were: plant height, fresh and dry matter from leaves and stem, width and length of leaves, color of leaves and stem, crown shape, and content and yield of essential oil. Results showed morphological differences among accessions for color of stem, crown shape, plant height, width and length of leaves and ratio length/width of leaves. For agronomic variables, there were significant differences for content and yield of essential oil with the best and worst performance for accessions LSID-005 and LSID-105, respectively. Third chapter presents the data on performance evaluation of pepper-rosmarin, during two years of field cultivation, for the variables: plant height, fresh and dry matter of stem and leaves, content and yield of essential oil, and the content of chemical components of the essential oil. The higher averages found for content (7,68 %) and yield (56,46 mL plant1 ) essential oil were produced by the accession LSID-105, in 2005, and by LSID-102, in 2006, respectively. The higher averages for content of thymol (90,82 %) and carvacrol (56,05 %) were obtained from the accessions LSID-003 and LSID-104, respectively, both in 2006. The accession LSID-104, native to Sergipe State, presented carvacrol as major chemical component. All the other accessions presented thymol as major chemical component. All the accessions, in both years, presented phenotypical variability for all the evaluated variables, except for content of terpil 4-ol. Fourth chapter presents the evaluation of influence of dry and rainy seasons on the performance of accessions of pepper-rosmarin, using the variables: plant height, dry matter of leaves, content and yield of essential oil and content of chemical components of the essential oil. For the majority of the studied accessions, the thymol content was higher during the rainy season. LSID-102 accession presented high yield of essential oil (56,46 mL plant1 ) and thymol content between 47,97 % and 64,95 %. LSID-003 accession yielded 10,06 mL plant-1 of essential oil amd thymol content of 90,02 %. LSID-104 accession presented high content of carvacrol (54,68%) and low content of thymol (7,88 %). Fifth chapter presents the evaluation of the influence of leaves dehydration (at 40 C for 5 days) on the content of essential oil and its chemical components of 11 accessions of pepper-rosmarin harvested during dry and rainy season. Generally, drying of leaves
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modified the content of most of the chemical constituents. In relation of the major chemical constituents, drying modified thymol content, but did not modified the carvacrol content of the essential oil of the pepper-rosmarin accessions. Keywords: Lippia sidoides, germplasm, native plants medicinal and aromatic plant, post harvest, harvest season, thymol, carvacrol. _____________
Guidance Committee: Arie Fitzgerald Blank UFS (Orientador), Renata Silva-Mann UFS (Co-orientadora).

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CAPTULO 1 1.1. INTRODUO GERAL Com o aumento da populao mundial, as fronteiras agrcolas e urbanas se expandem, ocupando o habitat natural de numerosas espcies de plantas e animais (STUSHNOFF & SEUFFERHELD, 1995). Este fenmeno vem causando rpida e profunda eroso da diversidade gentica de espcies de plantas nativas ou mesmo provocando a sua extino (VILLALOBOS et al., 1991). Eroso gentica tem ocorrido tambm devido substituio de cultivares domsticas e raas locais (landraces), selecionadas por agricultores e povos indgenas devido a seu valor nutricional, alta produtividade ou resistncia a doenas e estresses ambientais e, por cultivares melhorados que possuem diversidade gentica mais restrita (VILLALOBOS et al., 1991). Diante da eroso gentica intensa que est afetando tanto as plantas cultivadas como as plantas selvagens, a Organizao das Naes Unidas para a Agricultura e Alimentao (FAO) esboou, em nvel mundial, nas trs ltimas dcadas, uma srie de estratgias de conservao de recursos genticos de plantas, inclusive, estabelecendo em 1971, o sistema CGIAR (Grupo Consultivo em Pesquisa Agrcola Internacional) e em 1974 o IBPGR (Instituto Internacional de Recursos Genticos de Plantas), depois denominado IPGRI-Internacional de Recursos Genticos de Plantas) e atualmente, denominado. Bioversity International. Essas instituies coordenam mais de 40 bancos de genes no mundo e esto associadas a organizaes internacionais de conservao de sementes de diferentes culturas. Alm disto, alguns pases, a exemplo do Brasil, tm seus prprios sistemas de recursos genticos. Outra estratgia da FAO a promoo, junto a governos de vrios pases, de conferncias, das quais resultam vrios documentos, que enfatizam a importncia e delineiam os princpios gerais de aes para a conservao da diversidade biolgica (FAO, 1996). Em setembro de 2001, por iniciativa do Instituto Brasileiro de Meio-Ambiente (IBAMA) e da Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia, foi realizada a 1 Reunio Tcnica sobre Estratgias para a Conservao e Manejo de Recursos Genticos de Plantas Medicinais e Aromticas (EMBRAPA & IBAMA, 2002). Participaram pesquisadores de todo o Brasil, que apontaram espcies medicinais prioritrias para investigao em conservao e manejo, nos diversos biomas brasileiros. Na referida reunio foram definidas sete plantas medicinais e aromticas nativas da caatinga, com 1

alta prioridade de conservao, dentre essas espcies est o alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). As aes com nvel de prioridade alta so: coleta de germoplasma, estudo sobre sistema reprodutivo, diversidade gentica e dinmica de populaes, mercado potencial, caracterizao agronmica e farmacolgica, conservao a campo (ex situ), in vitro e in situ, manejo sustentvel e melhoramento gentico (EMBRAPA & IBAMA, 2002). O alecrim-pimenta uma espcie que foi domesticada pela Universidade Federal do Cear, sendo explorado comercialmente pela utilizao do seu leo essencial rico em timol e carvacrol, substncias que se constituem em matria prima de grande importncia e uso industrial, principalmente na farmacologia, cosmticos e, recentemente, na agricultura (MATOS et al., 1999). Devido facilidade com que os recursos genticos das plantas so perdidos, antes mesmo de haver um estudo de suas caractersticas, propriedades e utilidades, que se tm desenvolvido trabalhos que favoream sua multiplicao e conservao. Como at o momento, no h relato da existncia de sementes de alecrim-pimenta disponveis e como o interesse econmico por esta espcie est aumentando, h uma grande necessidade de se conservar o mximo de genes para evitar problemas no futuro (INNECCO, 2000). Para se obter material gentico de excelente qualidade, resistente a pragas, doenas e estresses ambientais fundamental caracterizar para conhecer e preservar a variabilidade gentica, avaliar o comportamento desses acessos, identificar e selecionar materiais com qualidades superiores, que por meio de programas de melhoramento gentico podero ser obtidos cultivares adaptadas determinada regio, com alto rendimento e teor de leo essencial, rico em timol e carvacrol. Assim, as informaes geradas neste estudo podero colaborar com a otimizao de Bancos Ativos de Germoplasma, eliminando duplicidade de acessos e diminuindo custos de manuteno. Ainda, a caracterizao se constitui numa das fases mais importantes de programas de melhoramento gentico visto que, a seleo de gentipos com caractersticas desejadas e o conhecimento do germoplasma disponvel so essenciais para a conservao e melhoramento das espcies. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi realizar a caracterizao e avaliar o comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) coletados em vrios Estados do Nordeste do Brasil, mantidos em Banco Ativo de Germoplasma da UFS, em So Cristvo SE. 2

1.2. REFERENCIAL TERICO 1.2.1. Recursos genticos e a sustentabilidade de agroecossistemas A sustentabilidade foi definida por Altieri (1999), como a habilidade de um agroecossistema em manter a produo ao longo do tempo, em face de distrbios ecolgicos e presses socioeconmicas em longo prazo. A sustentabilidade tambm pode ser entendida como a habilidade de um sistema em manter a sua produtividade, mesmo quando seja submetida a estresses ou perturbaes (CONWAY, 2003). Para Gliessmann (2001a), a sustentabilidade deve ter uma base ecolgica, representando a condio de ser capaz de perpetuamente colher biomassa de um sistema porque sua capacidade de se renovar ou ser renovado no comprometida. Os desafios do desenvolvimento sustentvel implicam na necessidade de formar capacidades para orientar um desenvolvimento fundado em bases ecolgicas de eqidade social, diversidade cultural e democracia participativa. Isto estabelece o direito educao, capacitao e formao ambiental que permitem a cada pessoa e cada sociedade produzir e apropriar-se de saberes tcnicos e conhecimentos para participar na gesto de seus processos de produo, decidir sobre suas condies de existncia e definir sua qualidade de vida. O crescente aumento da eroso dos recursos genticos vegetais, devido ao antrpica, uniformidade de materiais, explorao agressiva dos recursos naturais, guerras, catstrofes climticas, instalao de hidreltrica, alta densidade demogrfica, entre outros provocam preocupao por parte dos tcnicos, pesquisadores, comunidade cientfica de todo o mundo. Principalmente, pela diminuio e/ou perda da variabilidade gentica de espcies cultivadas e seus parentes silvestres, bem como de variedades locais, que vem gerando o estreitamento da base gentica, afetando drasticamente a biodiversidade do planeta (QUEIROZ, 2001). Do ponto de vista da sustentabilidade, a direo dos esforos de melhoramento de plantas cultivadas tem provocado profundas inquietaes. A base gentica da agricultura vem sofrendo drstica reduo, estreitando-se at um ponto perigoso, na medida em que as sociedades humanas ficaram cada vez mais dependentes de umas poucas espcies de organismos cultivados e de um pequeno nmero de genes e combinaes genticas encontradas (NASS, 2001). No decorrer do tempo, a seleo natural criou a diversidade gentica encontrada na natureza, a matria prima a partir do qual os seres humanos trabalham na 3

domesticao de plantas e animais e na formao de agroecossistemas (NASS et al., 2001). Os processos evolucionrios que provocam o desenvolvimento de ecotipos e direcionam a formao de espcies esto constantemente diversificando a base gentica da biota da terra. Embora espcies sejam extintas, novas esto sempre evoluindo, e os genomas de muitas espcies existentes esto ficando mais variados com o tempo. Um dos grandes receios de muitos pesquisadores que a atividade humana, incluindo a agricultura, altere fundamentalmente esse processo. A destruio, alterao e simplificao de muitos habitats naturais esto aumentando enormemente as taxas de extino e eliminando ecotipos, corroendo assim, a diversidade gentica natural e o potencial para sua renovao (WILSON, 1997). Uma espcie domesticada depende da interveno humana, e a espcie humana est agora dependente das plantas e animais domesticados. Em termos ecolgicos, esta interdependncia pode ser considerada como um mutualismo obrigatrio. Ela aconteceu por meio de um processo de transformao mtua: as culturas humanas, tanto causaram modificaes na constituio gentica de certas espcies teis, quanto transformaram a si prprias como resultados daquelas modificaes. Em decorrncia dessas transformaes fundamentais na base gentica de sua fisiologia e morfologia, muitas espcies e variedades domesticadas exigem condies timas em termos de umidade de solo, disponibilidade de nutrientes, temperatura, luz do sol e ausncia de pragas, para terem um bom desempenho e expressarem as caractersticas de alto rendimento para as quais foram selecionadas (GLIESSMAN, 2001b). A seleo dirigida na agricultura vem trazendo algumas reflexes sobre os tipos de prticas, modelos e princpios utilizados com a perspectiva, apenas, de cada vez mais aumentar a produo desconsiderando a sustentabilidade de todos os aspectos ecolgicos que envolvem um agroecossistema. A perda da diversidade gentica na agricultura representa a perda de informaes potencialmente valiosas, com valores comprovados e potenciais. A diversidade gentica a garantia de matria-prima para o melhoramento de plantas, permitem o conhecimento, caracterizao e preservao de espcies adaptadas s condies para resistncia ambiental, atuando no sentido de prevenir contra perda total ante as doenas, ataque de herbvoros ou variaes incomuns das condies ambientais. Garante tambm a combinao de genes que conferem resistncias a condies e ou eventos futuros, uma

nova doena, ataques de pragas, permitindo ainda, a flexibilidade de um sistema, a habilidade de se ajustar e adaptar-se a mudanas climticas. Para muitos autores a diversidade dos recursos genticos o tema chave para a sustentabilidade de agroecossistemas, porm requer uma mudana fundamental na forma como se maneja, manipula e se observam esses recursos (GLIESSMAN, 2001a; CAPORAL & COSTABEBER, 2004). A disponibilizao de informaes sobre as caractersticas dos recursos genticos passa necessariamente por conhecimentos fitotcnicos, fitopatolgicos, entomolgicos, qumicos e bioqumicos, entre outros dos acessos existentes e registrados nos bancos de germoplasma (VALOIS et al., 2001). Muitos trabalhos tm sido feitos no sentido de solucionar a escassez de recursos genticos descritos e disponibilizar estes recursos, de forma a aumentar a base gentica dos programas de melhoramento. Em setembro de 2001, por iniciativa do Instituto Brasileiro de Meio Ambiente (IBAMA) e da Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia (CENARGEN), na 1 Reunio Tcnica sobre Estratgias para a Conservao e Manejo de Recursos Genticos de Plantas Medicinais e Aromticas, pesquisadores indicaram espcies medicinais prioritrias para investigao em conservao e manejo, nos diversos biomas brasileiros. Entre as sete plantas medicinais e aromticas de maior prioridade a serem conservadas entre as espcies nativas da caatinga, est o alecrim-pimenta. Dentre as aes priorizadas esto: coleta de germoplasma, estudo sobre sistema reprodutivo, diversidade gentica e dinmica de populaes, mercado potencial, caracterizao agronmica e farmacolgica, conservao ex situ, in vitro e in situ, manejo sustentvel e melhoramento gentico (EMBRAPA & IBAMA, 2002). 1.2.2. Origem, botnica, usos e leo essencial de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). O alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), pertencente famlia Verbenaceae e popularmente chamado de alecrim-pimenta, alecrim-do-nordeste, estrepa-cavalo e alecrim-bravo, um arbusto caduciflio, ereto, muito ramificado e quebradio, de 2-3 m de altura, prprio da vegetao do semi-rido nordestino do Brasil. As folhas so muito aromticas e picantes, simples, pecioladas, de 2-3 cm de comprimento. As flores so pequenas, esbranquiadas, reunidas em espigas de eixo curto nas axilas das folhas. Pode ser multiplicado por estaquia usando-se, de preferncia, os ramos mais finos (LORENZI & MATOS, 2002). 5

Nas folhas do alecrim-pimenta, que a parte medicinal, encontra-se at 4,5% de leo essencial rico em timol (73,5%), que seu princpio ativo majoritrio e o responsvel pelo seu cheiro caracterstico (MATOS, 2002). O leo essencial apresenta forte ao antifngica, antimicrobiana, contra Staphylococcus aureus que causa infeces na pele e na garganta, Streptococcus mutans responsvel pela crie dentria, Corynebacterium xerosis que causa mau cheiro nas axilas e nos ps, Candida albicans ou Monilia, espcie encontrada nas aftas e corrimento vaginal, Trichophytum rubrum e T. interdigitale que causam micoses na pele, ao moluscida contra o caramujo hospedeiro da esquistossomose Biomphalaria glabra, e ao larvicida contra o mosquito transmissor da dengue Aedes aegypti (LEMOS et al., 1990; LACOSTE et al., 1996; MATOS, 2000; LORENZI & MATOS, 2002). um importante agente no controle de enfermidades orais. O alecrim-pimenta controlou gengivites marginais em ces e observou-se uma atividade antiinflamatria (GIRO et al., 2001); tambm eficiente no tratamento da acne, sarna infectada, panos brancos, impigem, caspa e do mau-cheiro nos ps, axilas e virilhas (MATOS, 2002). CARVALHO et al. (2003) e CAVALCANTI et al. (2004) comprovaram atividade larvicida do leo essencial de alecrim-pimenta, em pesquisa realizada com as larvas do Aedes aegypti L., onde a mortalidade foi de 100% . Radnz et al. (2001a) avaliando a influncia da temperatura do ar no tempo de secagem em camada delgada de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), mostrou que o aumento da temperatura do ar de secagem proporcionou uma reduo significativa no tempo gasto na secagem, no apresentando, porm, diferenas significativas no teor de leo essencial, exceto para a amostra seca temperatura ambiente. Assim, concluiu que o processo de secagem pode ser otimizado com o aumento da temperatura do ar de secagem, sem que isso implique em prejuzo quantitativo no teor de leo essencial de alecrim pimenta. Em trabalho Radnz et al. (2001a), constataram um percentual mdio de 2,93% de leo essencial nas folhas de alecrim-pimenta e a depender da temperatura e do local de secagem este valor alterado. O leo essencial obtido das folhas de alecrim-pimenta um dos produtos naturais que possui uma ampla diversidade qumica, tem como principal constituinte o timol, cujo teor tem variado entre 34,2 a 95,1% em vrias determinaes e carvacrol. Outros constituintes encontrados so o p-cimeno, o-terpineno e o-cariofileno (LEAL et al., 2003).

O estudo qumico de extratos de alecrim-pimenta levou ao isolamento e identificao de compostos fixos, incluindo dois dmeros naftoquinnicos (lapachenolisocatalponol e tectol), steres metlicos naturais, graxos de C16 a C24, cido vanlico, 2-metil-5-isopropilfenol e a 5-4-dihidroxi-6,7-dimetoxi-flavona7,8,9 (COSTA et al, 2002). O ensaio toxicolgico agudo pr-clnico demonstrou a baixa toxicidade dos constituintes hidrossolveis arrastados por vapor d'gua durante a extrao de leo essencial das folhas de alecrim-pimenta. Alm disso, o teste de reao por contato, feito com a aplicao de leo essencial a 1% na pele dos animais, no causou alergia. O espectro de atividade antibacteriana e antifngica do leo essencial se relacionam a microrganismos como Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter sp, Streptococcus mutans, Corynebacterium xerosis, Candida albicans, Trichophytum rubrum e Trichophytum interdigitale, dentre outros (LEAL et al., 2003). Tambm, seu leo essencial, rico em timol e carvacrol, apresentou propriedades bactericida e fungicida, enquanto o hidrolato revelou atividade moluscida e larvicida. O estudo fitoqumico de L. sidoides, tem resultado no isolamento de vrios constituintes qumicos: acetato do cido oleanlico, metil-3,4-diidroxibenzoato, lapachenol, tecomaquinona, tectoquinona, tectol, tectol acetilado, quercetina, luteolina, glucoluteolina e lippisidoquinona. Este composto trata-se de uma naftoquinona dimrica prenilada. Este trabalho tambm registrou o isolamento de um flavonide e uma lignana, identificados como taxifolina e isolariciresinol (COSTA et al., 2002, NUNES et al., 2005). A elucidao das estruturas de todas as substncias foi realizada por meio de detalhada anlise espectroscpica, principalmente RMN de hidrognio e carbono- 13, incluindo tcnicas como COSY, HMQC, HMBC, NOESY. (COSTA et al., 2002). Trabalho realizado mostrou o efeito analgsico do leo essencial de alecrim-pimenta onde mostrou a presena de 46 componentes sendo que os mais abundantes foram: pcimeno (26,79%), timol (21,97%) e mirceno (12,85%). A anlise do leo voltil das folhas de alecrim-pimenta utilizando CG/EM mostrou-se constitudo principalmente de monoterpenos. O leo essencial apresentou efeito analgsico e os resultados obtidos esto de acordo com o uso popular da planta no combate dor (ALVES et al, 2004). Outros trabalhos demonstraram que o leo essencial de alecrim-pimenta apresenta a seguinte composio qumica: monoterpernos (carvacrol, p-cimeno, timol, -felandreno), sesquiterpeno (-cariofileno, -copaeno, -humuleno), flavanides (6,77

dimethoxy, 5,5-dihidroxiflavona) outros componentes do extrato de leos de alecrimpimenta encontrados foram: Naftoquinoides: lapachenol, isocatalponol, e 6-oxo-3,4, 4,5-tetra-hidro-3-hidroxi-2,2-dimetilnafito-1,2-pirano (MACAMBIRA et al., 1986; LEMOS et al., 1990; TERBLANCH & KORNELIUS, 1996). Radnz et al. (2001a) observaram que o processo de secagem das folhas desta espcie pode ser otimizado com o aumento da temperatura, sem que o mesmo implique em prejuzo quantitativo no teor do leo essencial. O leo essencial de alecrim-pimenta, quando analisado por cromatografia gasosa (GC MS), apresentou 73,1% de timol como principal componente (MATOS et al., 1999). Os resultados de pesquisa vm demonstrando que essa planta representa um grande potencial para a Regio do Nordeste do Brasil, merecendo destaque entre as plantas medicinais e aromticas a serem preservadas. Tambm, evidencia-se a necessidade de novas oportunidades de pesquisas envolvendo trabalhos sobre sistemas de produo de plantas medicinais que sejam mais ecolgicos e se caracterizem num diferencial para o mercado desses produtos (MATOS, 2002). 1.2.3. Conservao de germoplasma A conservao e recuperao da base de recursos naturais, independentemente, de quais as estratgias adotadas para a interveno extremamente estratgica para a sustentabilidade de todos os elementos dos agroecossistemas que venham a ser impactados pela ao humana (CAPORAL & COSTABEBER, 2004). O desenvolvimento de aes para a conservao e uso dos recursos genticos vegetais nativos alm de estratgico, deve estar fundamentado em bases slidas de planejamento com perspectivas de execuo em longo prazo. Desta forma, programas nacionais de conservao so criados para dar suporte a um conjunto de aes de pesquisa, apoio e desenvolvimento de recursos genticos, sendo de fundamental importncia a identificao de espcies e atividades prioritrias na busca por tecnologias eficientes para a conservao e uso do germoplasma, em bases sustentveis (NASS et al., 2001). A conservao de germoplasma como uma atividade cientfica foi proposta nos anos 70 para preveno da eroso gentica e para o melhoramento da produtividade agrcola (HIDALGO, 2003). A conservao de germoplasma de raas locais, cultivares domsticos e parentes silvestres de espcies agronmicas tem sido uma das mais importantes reas de pesquisa. Seu principal objetivo o desenvolvimento de tcnicas 8

para a conservao longo prazo da variabilidade gentica de espcies vegetais com a mxima integridade gentica e biolgica possvel (BAJAJ, 1995; SANTOS, 2001). Existem duas estratgias bsicas de conservao: conservao in situ e ex situ (HIDALGO, 2003). Conservao in situ refere-se manuteno das espcies selecionadas no seu habitat natural em parques, reservas biolgicas ou reservas ecolgicas. Conservao ex situ a conservao de espcies vegetais fora do seu ambiente natural, atravs de colees de plantas no campo de sementes em bancos de sementes, ou de colees de plntulas em bancos in vitro. A conservao ex situ refere-se conservao de genes ou de gentipos de plantas fora do seu ambiente de ocorrncia natural, para uso atual ou futuro que pertence ao importante conjunto de atividades que compem a gesto dos recursos fitogenticos. (Hoyt 1988). Considera-se complementar da conservao in situ j que no possvel conservar ex situ todas as espcies. A conservao ex situ atinge um amplo espectro taxonmico. Protege espcies silvestres como tambm s espcies cultivadas. Quando aplicada s espcies domesticadas, a conservao ex situ procura conservar fora do seu centro de origem ou diversidade tanto as espcies como a variabilidade gerada durante o processo evolutivo de domesticao. Este tipo de conservao utilizou-se amplamente durante as ltimas dcadas (JARAMILLO & BAENA, 2000). Espcies com substncias qumicas de uso reconhecido na medicina devem ser trabalhadas visando sua produo em nveis sustentveis e maiores. Uma busca por acessos com caractersticas qumicas e de cultivo mais favorveis, explorando a variabilidade intraespecfica. seria outro aspecto interessante para estas espcies. Tais estudos devem incluir tambm o conhecimento mais detalhado de suas caractersticas morfolgicas e ambientais. Estratgias de conservao ex situ so as mais recomendadas para estes casos (JARAMILLO & BAENA, 2000). Espcies de uso popular, com algumas informaes sobre suas caractersticas qumicas e que sejam regularmente comercializadas devem receber um incremento na pesquisa qumica e farmacolgica, associada busca de informaes sobre suas caractersticas ambientais (MATOS, 2000). Para a conservao ex situ necessrio uma maior representatividade das espcies de interesse. Conforme mencionada anteriormente, a maioria das espcies mantidas em bancos de germoplasma, contam com um a cinco acessos. Elas esto representadas, em sua maioria, por colees de campo, o que as tornam extremamente 9

vulnerveis. Em primeiro lugar, necessrio garantir a conservao dos acessos j coletados de forma correta, mantendo-se as informaes bsicas sobre a origem. A seguir, necessrio fazer uma avaliao das inmeras colees de plantas regionais, visando determinar seu valor em termos de representatividade das espcies mantidas e da importncia regional das mesmas. Aps a obteno destas informaes deve-se estimular o trabalho integrado de grupos de pesquisa de produtos naturais, visando estabelecer diretrizes para uma avaliao fitoqumica e farmacolgica dos acessos, para que se possa chegar etapa seguinte desenvolvimento de tecnologia de produo de matria-prima (JARAMILLO & BAENA, 2000). Nas colees ex situ, possvel obter informaes preliminares importantes sobre o comportamento das espcies com relao a seu desenvolvimento quando cultivadas. (MATOS, 2000) o que traz conseqncias para a definio da estratgia de conservao e cultivo desta espcie e pode ter influncias sobre sua composio fitoqumica, devendo ser investigado. Tambm, conveniente lembrar que a conservao ex situ deve ser realizada prioritariamente nas regies de ocorrncia natural da espcie e, s depois, investigada a sua adaptao em outras regies produtoras potenciais. Isto divide o trabalho e as responsabilidades de cada banco de germoplasma (JARAMILLO & BAENA, 2000). Os bancos de germoplasma j existentes devem equipar-se ou associar-se a bancos de germoplasma regionais que j possuem os equipamentos necessrios para a conservao de sementes, pois a manuteno de germoplasma em colees de campo bastante arriscada, alm de ser muito cara, sendo geralmente restritas tambm as reas disponveis para estas colees. Aps a avaliao das colees regionais, aquelas que apresentam caractersticas satisfatrias, no sentido de representatividade das espcies que mantm, devem ser integradas rede de conservao de germoplasma de plantas medicinais (HIDALGO, 2003). As sementes so a forma mais comum de conservao ex situ, j que esta a unidade de propagao natural para a maioria das espcies de plantas superiores. Muitas espcies produzem sementes ortodoxas, isto , sementes que podem ser desidratadas para aproximadamente 5% do teor de umidade inicial e armazenadas a aproximadamente 18 C (ROBERTS, 1973; SANTOS, 2001). Nestas condies a longevidade das sementes pode ser prolongada por muitas dcadas de forma previsvel e, por esta razo, estas condies de armazenamento so adotadas pela maioria dos bancos de sementes. Em contraste, sementes de numerosas espcies arbreas e 10

arbustivas, nativas de regies tropicais e sub-tropicais, e mesmo muitas espcies cultivadas de importncia econmica tais como dend (Elaeis oleifera [Kunth.] Cortes), coco da Bahia (Cocos nucifera L.), borracha (Hevea brasiliensis M. Arg.) e cacau (Theobroma cacao L.) que tm sementes recalcitrantes, so danificadas e perdem a viabilidade quando armazenadas nas mesmas condies (ROBERTS, 1973; ROBERTS & ELLIS, 1984; SANTOS, 2001). Vrias outras espcies de plantas necessitam de procedimentos de conservao alternativos. Este o caso de espcies que se propagam exclusivamente por propagao vegetativa, pois elas, no produzem sementes viveis, que o caso de alecrim-pimenta. No caso destas espcies mais apropriado conservar outro propgulo que no a semente. Estas espcies problema tm sido mantidas em bancos no campo ou em bancos de germoplasma in vitro. No primeiro caso, as plantas so mantidas como plantaes no campo. Este um tipo de conservao eficiente para a manuteno de colees por curto e mdio prazo. Entretanto, esta metodologia requer grandes extenses de terra e envolve altos custos de manuteno. Igualmente preocupante o fato de que plantas conservadas no campo esto vulnerveis ao ataque de pragas e doenas e a desastres climticos, os quais podem subitamente dizimar toda a coleo (ENGELMANN, 1997). A conservao de germoplasma in vitro se baseia no cultivo de colees em laboratrios, a partir de tcnicas de cultura de tecidos (GEORGE, 1996). A manuteno dos recursos fitogenticos se executa quando so feitas mudanas no ambiente de cultivo para desacelerar ou suprimir totalmente o crescimento das clulas e dos tecidos (ROCA & MROGINSKI, 1991). Para a conservao de germoplasma ex situ define-se colees de plantas vivas no campo e a implantao de Bancos Ativos de Germoplasmas (BAGs). Geralmente, procura-se representar o pool gentico de um acesso, por meio de uma amostra que varivel em funo do sistema reprodutivo da espcie em questo. Elas podem ser propagadas sexuada e assexuadamente. Geralmente, elas so de propagao vegetativa, mais propriamente de forma clonal. Nesse caso, um nmero mnimo de indivduos suficiente para representar o gentipo de um acesso, uma vez que dentro do mesmo clone no h variao gentica. Na maioria dos casos, utiliza-se de 3 a 10 por acesso, isso ir depender da espcie (FERREIRA, 1999). Para o caso de espcies propagadas sexuadamente o nmero total de indivduos por acesso deve ser maior, varivel e depende dos estudos de biologia floral, do ecossistema, do porte da planta, do hbito de crescimento, entre outros. A principal 11

limitao da conservao in vivo a grande quantidade de espao requerido, alm de que esse tipo de conservao deve ser realizado em reas agroecolgicas muito similares ao habitat natural de cada tipo de germoplasma (FERREIRA, 1999). Segundo Chomchalow (1985 apud FERREIRA, 1999) enfatiza que a conservao em campo apresenta desvantagens como: manejo deficiente devido ao grande nmero de plantas, falha na diversidade, informaes inadequadas do germoplasma, perigos de catstrofes naturais, alto custo de manuteno e da interveno do homem. A conservao ex situ desse germoplasma vegetal requer o uso de metodologias tcnico-cientficas como base para atividades de rotina e pesquisa, no s para permitir a prtica de uma conservao bem manejada, como tambm para promover e induzir ao uso do germoplasma armazenado (NASS et al., 2001). A maioria dos bancos de germoplasma est integrada ao principal programa de conservao ex situ em desenvolvimento no Pas, que o de Conservao e Uso de Recursos Genticos, pertencente Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria (Embrapa), implantada no mbito do Sistema Nacional de Pesquisa Agropecuria (SNPA) coordenado pela Empresa. O programa tem como objetivo o enriquecimento, a conservao e a documentao dos recursos genticos autctones e exticos, de importncia socioeconmica atual e potencial para o pas, promovendo e aumentando, por meio da caracterizao e avaliao, a utilizao desses recursos em programas de melhoramento ou diretamente pelo agricultor, para o desenvolvimento de uma agricultura sustentvel (GOEDERT & WETZEL, 1999). 1.2.4. Caracterizao de germoplasma A agricultura depende muito da diversidade gentica de plantas cultivadas e domesticadas, dos organismos pertencentes aos ecossistemas naturais que circundam os agroecossistemas, especialmente os parentes silvestres das plantas cultivadas, culturas de importncia menor, organismos benficos no agrcolas. importante observar diversidade gentica total dos agroecossistemas como um todo. Um cultivo e sistema de produo que funcionem plenamente preservam todos os processos genticos, ecolgicos e culturais responsveis pela produo da diversidade. Informaes a respeito de controle biolgico, defesas de plantas entre outros, so extremamente importantes para o conhecimento dos agroecossistemas. A sustentabilidade de agroecossistemas requer uma mudana fundamental na forma como manejamos e manipulamos os recursos genticos (NASS, 2001). 12

Considerando que o germoplasma esteja disponvel, seja por aes de coleta ou de introduo e intercmbio, a seqncia dos trabalhos exige procedimentos no sentido de sua caracterizao e avaliao. As atividades relacionadas de forma subseqentes e correlatas referentes ao conhecimento e a disponibilizao de germoplasma para fins de uso e conservao so: introduo e intercmbio, prospeco, coleta, caracterizao e avaliao, documentao, conservao e utilizao (NASS et al., 2001). Para a caracterizao de recursos genticos vegetais, as etapas previstas so: identificao botnica, fundamental para o conhecimento e separao das espcies; elaborao de cadastro de acessos por espcie, onde se registram todas as informaes sobre os acessos; a caracterizao dos aspectos morfolgicos, agronmicos, qumicos, genticos, entre outros, estabelecendo-se os descritores a serem estudados. importante fazer uma avaliao preliminar dos dados obtidos e uma avaliao complementar correlacionando os diversos caracteres com o objetivo de identificar as divergncias dentro e entre as plantas (NASS, 2001). Os descritores selecionados para a caracterizao de acessos devem ser comuns a todos os bancos de germoplasmas existentes e sua finalidade ter medidas comuns de comparao e distino de espcies e entre espcies. Os descritores podem ser definidos como os atributos ou caractersticas inerentes aos acessos de um banco de germoplasma, possibilitando a diferenciao entre acessos de uma mesma cultura (HOWES, 1981). O uso dos descritores na caracterizao e avaliao de germoplasma, deve necessariamente resultar de um consenso entre curadores e melhoristas (GIACOMETTI, 1988). Esses so sugeridos e publicados pelo Instituto Internacional de Recursos Genticos Vegetais (IPGRI), a fim de facilitar e uniformizar as atividades da caracterizao e avaliao. Existem muito poucos descritores oficiais para plantas medicinais e aromticas. No caso do alecrim-pimenta, ainda no existem descritores selecionados para sua caracterizao e avaliao. Assim, devido sua crescente importncia econmica e social, esse estudo poder contribuir para o estabelecimento de descritores dos grupos morfolgicos, agronmicos e qumicos dessa espcie. 1.2.4.1. Caracterizao morfolgica e agronmica de germoplasma A disponibilizao dos recursos genticos para os melhoristas passa necessariamente pela caracterizao agronmica, fitopatolgica, entomolgica, bioqumica entre outras dos acessos registrados nos bancos de germoplasma. Entretanto, 13

menos de 8% dos recursos constantes em bancos de germoplasma so efetivamente utilizados pelos melhoristas (VALOIS et al., 2001). Dentre os principais fatores que concorrem para a pequena utilizao de genitores nos programas de melhoramento esto o desconhecimento por parte do melhoristas dos recursos genticos disponveis nos bancos de germoplasma (VALLS, 1999), assim como, o pequeno nmero de trabalhos realizados no sentido de disponibilizar estes dados. A caracterizao morfolgica e agronmica busca descrever os diversos acessos de uma coleo de germoplasma utilizando como descritores, caractersticas de interesses tais como: a cor do caule, folhas, nervuras foliares, spalas e ptalas das flores, incio de florao, altura de planta, largura e formato da copa, comprimento e largura das lminas foliares, relao comprimento/largura, produo de frutos/planta, produo de plantas/ha, produo de leo/ha, entre outros Essa caracterizao em alguns casos pode no ser interessante para se diferenciar alguns tipos de germoplasmas, pois os caracteres fenotpicos podem no representar as divergncias genticas sofrem influncia das condies edafoclimticas que o material est submetido. Em muitos casos, somente com a caracterizao gentica e molecular complementar, isso possvel (NASS, 2001). Na caracterizao agronmica alguns trabalhos mostram a influncia da relao massa fresca e seca no teor e rendimento de leo essencial, o efeito da temperatura de secagem na quantidade e qualidade do leo essencial. Radnz et al. (2001b) avaliando a influncia da temperatura do ar no tempo de secagem em camada delgada de alecrimpimenta (Lippia sidoides Cham.) mostraram que o aumento da temperatura do ar de secagem proporcionou uma reduo significativa no tempo gasto na secagem, no apresentando, porm, diferenas significativas no teor de leo essencial, exceto para a amostra seca temperatura ambiente. Assim, concluiu que o processo de secagem pode ser otimizado com o aumento da temperatura do ar de secagem, sem que isso implique em prejuzo quantitativo no teor de leo essencial de alecrim-pimenta. Em outro trabalho, Radnz et al. (2001a), constataram um percentual mdio de 2,93% de leo essencial nas folhas de alecrim-pimenta e a depender da temperatura e do local de secagem este valor alterado. No estudo de caracterizao morfolgica e agronmica de acessos de manjerico alfavaca visando a seleo de gentipos com alto rendimento de leo essencial rico em linalol, observaram-se grande diversidade entre os gentipos para todas as variveis avaliadas. Destaca-se a grande amplitude entre os acessos quanto ao teor de leo 14

essencial, variando de 0,202 a 2,536 mL/100g e para o rendimento de leo essencial, de 1,103 a 21,817 l/ha. Levando-se em conta essas duas variveis foram selecionados os gentipos NSL6421, PI197442, PI358464, PI414194, PI531396 e Fino Verde para o programa de melhoramento gentico (BLANK et al., 2004). Tambm, no trabalho de caracterizao morfolgica e agronmica de seis gentipos de sambacait (Hyptis pectinata), observou-se uma diferena significativa entre os acessos. Na primeira colheita, para a varivel massa seca de folhas foram encontrados os valores entre 3,02 a 20,43 g planta1. O acesso SAM006, originado de Propri SE, mostrou-se mais promissor em relao aos demais (ARRIGONI-BLANK et al., 2005). 1.2.4.2. Caracterizao qumica Na ltima dcada, a maneira de se pesquisar novos compostos biologicamente ativos sofreu grandes mudanas, principalmente devido aos avanos tecnolgicos. A indstria farmacutica tem um papel importante no desenvolvimento de novos mtodos, os quais podem propiciar de forma mais rpida, o surgimento de novos medicamentos no mercado. Um dos mais importantes fatores para o sucesso no descobrimento de um frmaco novo a diversidade qumica dos compostos a serem selecionados, cujas fontes podem ser compostos sintticos, produtos naturais ou a qumica combinatria. Entre estas possibilidades, os produtos naturais so considerados como uma das maiores fontes de diversidade qumica (CRAVEIRO et al., 1981; VERLET, 1993; CAMPOS, 2004). Os leos essenciais ou tambm chamados de leos etreos ou volteis so misturas complexas de substncias lquidas, volteis, lipoflicas e quase sempre odorferas. Uma de suas caractersticas ser solvel em compostos orgnicos apolares e apresentar alta volatilidade. Os mtodos de extrao variam conforme a localizao do leo essencial na planta e a sua utilizao. Os mtodos mais empregados so: por arraste a vapor dgua, solventes orgnicos, prensagem, extrao por dixido de carbono supercrtico e hidrodestilao (GUENTHER, 1972; SIMES & SPITZER, 2004). A composio qumica do leo essencial de plantas pode sofrer influncia do componente gentico da prpria planta (KAMADA et al., 1999) de fatores ambientais como umidade relativa, temperaturas, poca do ano, estresse submetido planta em funo do estdio de desenvolvimento e nutrio, secagem do material, entre outros (CASTRO et al.,

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2002; SILVA et al., 2003; BLANK et al., CASTRO et al., 2004; CARVALHO FILHO et al., 2006). Do ponto de vista qumico, os leos essenciais so constitudos de fenil propanides e/ou de terpenides. Os constituintes terpnicos so mais predominantes, dentre deles destaca-se os monoterpenides (em torno de 90% dos leos essenciais) e os sesquiterpenides (SIMES & SPITZER, 2004). O leo essencial obtido das folhas de alecrim-pimenta um dos produtos naturais que possui uma ampla diversidade qumica, tem como principal constituinte o timol, cujo teor tem variado entre 34,2 a 95,1 % em vrias determinaes e/ou o carvacrol. Outros constituintes encontrados so o p-cimeno, o-terpineno e -cariofileno (LEAL et al., 2003).

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CAPTULO 2 CARACTERIZAO MORFOLGICA E AGRONMICA DE GERMOPLASMA DE ALECRIM-PIMENTA OLIVEIRA, Tereza Cristina. Caracterizao morfolgica e agronmica de germoplasma de alecrim-pimenta. In: Caracterizao e comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em So Cristvo - SE. 2008. Cap. II. Dissertao de Mestrado em Agroecossistemas Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. RESUMO O alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) uma planta medicinal e aromtica nativa do nordeste brasileiro pertencente famlia Verbenaceae. At o momento no h estudos sobre a variao existente no germoplasma desta espcie, cujo leo essencial exportado. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi realizar a caracterizao morfolgica e agronmica de acessos do Banco Ativo de Germoplasma (BAG) de alecrim-pimenta da UFS. Foi instalado um BAG na Fazenda Experimental Campus Rural da UFS, localizada no municpio de So Cristvo-SE. Foram plantados 10 acessos, usando espaamento de 1,0 m x 1,0 m, em delineamento experimental de blocos ao acaso, com duas repeties, sendo a parcela constituda por trs plantas. Notaram-se diferenas entre os acessos de alecrim-pimenta do Banco Ativo de Germoplasma da UFS para as variveis: cor de caule, formato de copa, altura de planta, comprimento e largura de folha e relao comprimento/largura de folha. O acesso LSID-005 se mostrou o mais promissor para rendimento de folha e leo essencial e o acesso LSID-105 o menos promissor. Palavras-chaves: Lippia sidoides, planta medicinal e aromtica nativa, banco ativo de germoplasma, leo essencial.

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MORPHOLOGIC AND AGRONOMIC CHARACTERIZATION OF PEPPER-ROSMARIN GERMPLASM OLIVEIRA, Tereza Cristina. Morphologic and agronomic characterization of pepper-rosmarin germplasm. In: Characterization and behavior of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions maintained in Active Germplasm Bank in the So Cristvo county, Sergipe State. 2008. Chap. II. Thesis - Master of Science in Agroecosystems - Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. ABSTRACT Pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) is a native medicinal and aromatic plant from the northeast of Brazil and belong to the Verbenaceae family. Till this moment there are no studies about variation at the germplasm of these species, which essential oil is exported. The aim of this work was to realize the morphologic and agronomic characterization of the accessions from the pepper-rosmarin Active Germplasm Bank (AGB) of the Federal University of Sergipe. A ABG was installed at the Research Farm "Campus Rural da UFS", located at the So Cristvo county, Sergipe State, Brazil. We planted 10 accessions, spacing the plants 1.0 x 1.0 m, using a randomized block design with two replications. Each plot was constituted of three plants. We noted differences between pepper-rosmarin accessions from the Active Germplasm Bank (AGB) of the Federal University of Sergipe for the following variables: stem color, canopy form, plant height, length (L) and wide (W) of leaves, and relation L/W of leaves. We observed that LSID-005 was the most promising accession for leaf and essential oil yield and the accession LSID-105 was the minor promising. Key words: Lippia sidoides, native medicinal and aromatic plant, active germplasm bank, essential oil.

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2.1. INTRODUO Por meio dos estudos efetuados, e intensificados pela indstria farmacutica, sobre as propriedades fitoterpicas dos vegetais, as plantas medicinais e aromticas passaram a figurar com grande destaque no cenrio do agronegcio nacional. Essas plantas, por meio de seu metabolismo secundrio, sintetizam, entre outros produtos, leos essenciais ricos em substncias qumicas de natureza diversa e, dependendo da espcie e do rgo vegetal do qual foi extrado, podem apresentar composio qumica, caractersticas fsico-qumica e aroma distintos (SIMES et al., 2004). Os ecossistemas naturais esto, nesses ltimos anos, sendo rapidamente degradados, em virtude do crescimento das cidades, da especulao imobiliria e do avano da ocupao territorial promovida principalmente pelo setor agrcola com a expanso de suas fronteiras, levando ao desaparecimento de espcies animal e/ou vegetal conhecida ou no resultando em perdas de recursos genticos. A conservao dos recursos genticos e da agrobiodiversidade como um todo, so estratgias fundamentais para garantir a sobrevivncia das espcies e suas respectivas cadeias produtivas, tornando-se um valor bitico estratgico de segurana nacional (VILELAMORALES & VALOIS, 2000). Diante de tal situao, governos de diversos pases, em cooperao mtua entre si e em parcerias com instituies de pesquisa, vm tentando desenvolver protocolos para barrar essa verdadeira eroso gentica para preservar a diversidade biolgica das espcies. A comunidade cientfica, preocupada com a perda dos recursos genticos de plantas medicinais e aromticas nativas, realizou em 2001 a 1 REUNIO TCNICA SOBRE ESTRATGIAS PARA CONSERVAO E MANEJO DE RECURSOS GENTICOS DE PLANTAS MEDICINAIS E AROMTICAS e entre as sete plantas medicinais e aromticas de maior prioridade a serem conservadas entre as espcies nativas da Caatinga encontra-se a alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). A espcie possui mercado externo, interno e regional. A espcie j vem sendo cultivada e a presso antrpica considerada mdia. As aes com nvel de prioridade alta so coleta de germoplasma, estudo sobre sistema reprodutivo, diversidade gentica e dinmica de populaes, mercado potencial, caracterizao agronmica e farmacolgica, conservao ex situ, in vitro e in situ, manejo sustentvel e melhoramento gentico (EMBRAPA & IBAMA, 2002). Lippia sidoides Cham., pertencente famlia Verbenaceae e popularmente chamado de alecrim-pimenta, alecrim-do-nordeste, estrepa-cavalo e alecrim-bravo, 24

um arbusto caduciflio, ereto, muito ramificado e quebradio, de 2-3 m de altura, prprio da vegetao do semi-rido nordestino do Brasil. As folhas so muito aromticas e picantes, simples, pecioladas, de 2-3 cm de comprimento. As flores so pequenas, esbranquiadas, reunidas em espigas de eixo curto nas axilas das folhas. Pode ser multiplicada por estaquia usando-se, de preferncia, os ramos mais finos (LORENZI & MATOS, 2002). A anlise fitoqumica das folhas registrou at 4% de leo essencial por arraste a vapor, que contm mais de 60% de timol ou uma mistura de timol e carvacrol, dois terpenos fenlicos dotados de fortssima atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus, que causa infeces na pele e na garganta, Streptococcus mutans responsvel pela crie dentria, Corynebacterium xerosis causador do mau cheiro nas axilas e nos ps, Candida albicans ou Monilia encontrada nas aftas e no corrimento vaginal; tambm funciona contra os agentes causadores de micoses na pele Trichophytum rubrum e T. interdigitale (LACOSTE et al., 1996; MATOS, 2000; LEMOS et al., 2002; LORENZI & MATOS, 2002). Uma vez que, num programa de melhoramento gentico, uma das fases mais importantes a seleo de gentipos superiores que sero empregados nos cruzamentos, essencial o conhecimento do germoplasma disponvel. Assim j foram realizados estudos quanto caracterizao morfolgica e agronmica de Ocimum sp. (BLANK et al., 2004) e Hyptis pectinata (ARRIGONI-BLANK et al., 2005), e foram identificados os acessos mais promissores. Dessa forma o presente trabalho objetivou realizar a caracterizao morfolgica e agronmica de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) do Banco Ativo de Germoplasma (BAG) da Universidade Federal de Sergipe (UFS). 2.2. MATERIAL E MTODOS Foi instalado um Banco Ativo de Germoplasma (BAG) no Horto de Plantas Medicinais da Fazenda Experimental Campus Rural da UFS, localizada no municpio de So Cristvo-SE, num Argissolo Vermelho-Amarelo distrfico. Os acessos foram obtidos a partir de coletas realizadas nos Estados de Cear, Rio Grande do Norte e Sergipe. As mudas foram produzidas a partir de estacas utilizando-se ramos herbceos com aproximadamente 15 cm de comprimento, mantendo-se um par de folhas, tendo como substrato para o enraizamento a mistura de p da casca de coco lavado e areia lavada (2:1), acrescida de 20 g L-1 de biofertilizante organomineral Biosafra (3-12-6) 25

(COSTA et al., 2005). As estacas foram dispostas em bandejas de isopropileno expandido com 72 clulas em ambiente protegido com tela sombrite de 70 % e nebulizao intermitente e as mudas foram levadas a campo com cerca de 20 cm de altura. Foram plantados 10 acessos (Tabela 1), usando espaamento de 1,0 m x 1,0 m, em delineamento experimental de blocos ao acaso, com duas repeties, sendo a parcela constituda por trs plantas. Realizou-se diariamente a irrigao por gotejamento.

TABELA 1. Acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) do Banco Ativo de Germoplasma da UFS, suas procedncias, coordenadas geogrficas e nmero no Herbrio da UFS. So Cristvo, UFS, 2008.
Acesso LSID-001 LSID-002 LSID-003 LSID-004 LSID-005 LSID-006 LSID-102 LSID-103 LSID-104 LSID-105 Procedncia Fortaleza-CE (UFC) Mossor-RN Mossor-RN Quixer-CE Limoeiro do Norte-CE Tabuleiro do Norte-CE Poo Redondo-SE Poo Redondo-SE Poo Redondo-SE Poo Redondo-SE Coordenadas geogrficas 03 44' 41,4'' S; 38 34' 29,4'' W 05 07' 26,7'' S; 37 24' 14,6'' W 05 08' 28,3'' S; 37 23' 58,0'' W 05 05' 03,5'' S; 37 58' 43,9'' W 05 09' 47,8'' S; 38 06' 31,0'' W 05 14' 05,4'' S; 38 11' 35,0'' W 09 58' 07,6'' S; 37 51' 49,2'' W 09 58' 08,6'' S; 37 51' 50,3'' W 09 58' 09,2'' S; 37 51' 50,3'' W 09 58' 12,9'' S; 37 51' 49,2'' W No no Herbrio da UFS 8218 8219 8220 8221 8222 8223 8224 8225 8226 8227

As colheitas e as avaliaes foram realizadas no dia 18/05/2005, na estao chuvosa, durante o perodo da manh com as plantas em plena florao. O corte foi realizado a uma altura de 40 cm do solo. Para a caracterizao morfolgica, avaliaram-se as seguintes variveis: a) cor de caule, de folha e de nervuras foliares de acordo com observaes em campo; b) cor de spalas e ptalas das flores por ocasio da plena florao; c) formato da copa: as copas das plantas de cada parcela til foram classificadas em arredondado, forma de taa, irregular e cone; d) altura de planta: foi medida a altura das plantas de cada parcela til, com o auxlio de uma fita mtrica, utilizando-se a mdia para representar a parcela; e) dimetro da copa; com a fita mtrica mediu-se o maior dimetro da copa das plantas de cada parcela til, utilizando-se a mdia para representar a parcela; 26

f) comprimento e largura das lminas foliares; foram amostradas aleatoriamente duas folhas totalmente expandidas de cada planta das parcelas teis. Com o auxlio de uma fita mtrica foram medidas a largura e o comprimento dessas folhas. Foram utilizadas as mdias para representarem as parcelas; g) relao comprimento/largura (C/L) das lminas foliares; foi calculada dividindo-se o comprimento mdio pela largura mdia das folhas amostradas de cada parcela til; As variveis agronmicas analisadas foram: a) massa fresca de folha: as plantas foram cortadas a 40 cm do solo s 09:00 horas, levadas ao galpo, onde foram desfolhadas. Em balana eletrnica determinou-se a massa obtida das folhas da parcela til e expressou-se o resultado em g planta-1; b) Massa seca de folha: as folhas de cada parcela til foram secas em estufa de secagem com fluxo de ar forado a uma temperatura de 40C por cinco dias (CARVALHO FILHO et al., 2006); c) Massa seca de caule: os caules de cada parcela til foram secas em estufa de secagem com fluxo de ar forado a uma temperatura de 105C por 48 horas; d) teor de leo essencial; a hidrodestilao foi realizada com aparelho tipo Clevenger (GUENTHER, 1972), acoplado a um balo de vidro de fundo redondo de 3000 mL, tendo uma manta como fonte de calor. Foram usadas 100 g de folhas frescas e 2000 mL de gua destilada, sendo o tempo da hidrodestilao de 160 minutos (EHLERT et al., 2006). A hidrodestilao foi realizada no Laboratrio de Fitotecnia do Departamento de Engenharia Agronmica da UFS. O resultado foi expresso em % baseado em massa seca de folha; e) rendimento de leo essencial: foi obtido pela multiplicao do teor de leo essencial com a mdia da massa seca de folha por planta de cada parcela. O resultado foi expresso em mL planta-1; Os dados quantitativos foram submetidos a anlises de varincia com posterior comparao de mdias pelo Teste Tukey ao nvel de probabilidade de 5%, utilizando-se o Programa Computacional SISVAR verso 4.6. 2.3. RESULTADOS E DISCUSSO Os acessos LSID-001, LSID-002, LSID-003, LSID-004, LSID-005 e LSID-006 que so originrios dos Estados do Cear e Rio Grande do Norte, apresentaram caule de colorao marrom claro, enquanto os acessos LSID-102, LSID-103, LSID-104 e LSID105 de origem sergipana apresentaram colorao marrom (Tabela 2). Entretanto, as 27

variveis de cor de folhas, de nervuras foliares e de spalas todos os acessos apresentaram colorao verde e ptalas de colorao branca, no havendo variabilidade para esses caracteres. Quanto ao formato de copa, observou-se que os acessos LSID001, LSID-006 e LSID-103 apresentaram formato de copa, respectivamente, arredondado, taa e cone, enquanto se observou formato de copa irregular para os outros acessos (Tabela 2). Em estudo sobre a caracterizao morfolgica e agronmica de acessos de Ocimum sp., observou-se variaes morfolgicas entre acessos estudados (BLANK et al., 2004). TABELA 2. Cor de caule, folha, nervura, spala e ptala e formato de copa de acessos de alecrim-pimenta (L. sidoides) do Banco Ativo de Germoplasma da UFS. So Cristvo, UFS, 2008.
Acesso LSID-001 LSID-002 LSID-003 LSID-004 LSID-005 LSID-006 LSID-102 LSID-103 LSID-104 LSID-105 Cor Nervura Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Formato de copa Arredondado Irregular Irregular Irregular Irregular Taa Irregular Cone Irregular Irregular

Caule Marrom claro Marrom claro Marrom claro Marrom claro Marrom claro Marrom claro Marrom Marrom Marrom Marrom

Folha Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde

Spala Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde Verde

Ptala Branca Branca Branca Branca Branca Branca Branca Branca Branca Branca

As plantas do acesso LSID-005 foram mais altas que as do LSID-104 e estatisticamente a altura mdia foi igual a dos outros acessos (Tabela 3). Para dimetro de copa no houve diferena significativa entre os acessos (Tabela 3). Para comprimento e largura de folha observaram-se as maiores mdias para os acessos oriundos do Estado do Cear (Tabela 3). Os acessos LSID-003, LSID-004 e LSID-006 oriundos dos Estados do Cear e Rio Grande do Norte apresentaram uma relao Comprimento/Largura (C/L) de folha maior que dos acessos LSID-104 e LSID-105 do Estado de Sergipe, e em campo as folhas das plantas desses acessos aparentavam mais arredondadas (Tabela 3 e Figura 1A). Diferenas entre as variveis: altura de planta, dimetro de copa, comprimento e largura de folha e relao C/L de folha tambm foram observados em Ocimum sp. e Hyptis pectinata, confirmando a grande variabilidade que

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existe nas plantas medicinais e aromticas (BLANK et al., 2004; ARRIGONI-BLANK et al., 2005). TABELA 3. Valores mdios de altura de planta, dimero de copa, comprimento ( C) de folha, largura (L) de folha e relao C/L em acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) do BAG da UFS. So Cristvo SE, 2008.
Altura de Dimetro de Comprimento Largura de Relao C/L planta (cm) copa (cm) de folha (cm) folha (cm) LSID-001 113,75 ab 91,58 a 2,95 abc 1,82 ab 1,62 ab LSID-002 135,58 ab 116,58 a 4,03 ab 2,18 ab 1,85 ab LSID-003 139,58 ab 112,75 a 3,91 abc 2,01 ab 1,94 a LSID-004 138,87 b 115,12 a 4,58 a 2,36 a 1,93 a LSID-005 150,41 a 123,12 a 3,88 abc 2,40 a 1,64 ab LSID-006 128,58 ab 104,00 a 3,90 abc 1,96 ab 1,98 a LSID-102 134,17 ab 111,25 a 2,70 bc 1,63 ab 1,65 ab LSID-103 121,67 ab 82,21 a 2,33 bc 1,33 b 1,76 ab LSID-104 104,67 b 59,33 a 2,40 bc 1,60 ab 1,49 b LSID-105 116,91ab 74,62 a 2,15 c 1,42 b 1,51 b C.V. (%) 8,33 24,54 13,55 12,33 5,45 Mdias seguidas pela mesma letra, nas colunas, no diferem entre si pelo teste de Tukey (p<0,05). Acessos

O acesso LSID-105 apresentou as menores mdias para massa fresca (62,94 g planta ) e seca (23,30 g planta-1) de folha e rendimento de leo essencial (1,71 mL planta-1) embora no difere estatisticamente de outros acessos (Tabela 4). Para as mesmas variveis o acesso LSID-005 se destacou, por apresentar maiores valores podendo ser considerado interessante para futuros programas de melhoramento (Tabela 4). No observou-se diferenas significativas entre os acessos de alecrim-pimenta para massa seca de caule e teor de leo essencial (Tabela 4). Variabilidade entre acessos para produo de leo essencial tambm foi observada para Ocimum sp., H. pectinata e Ageratum conyzoides (BLANK et al., 2004; CASTRO et al., 2004; ARRIGONIBLANK et al., 2005).
-1

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TABELA 4. Valores mdios de massa fresca de folha (g planta-1), massa seca de folha (g planta-1), massa seca de caule (g planta-1) e teor (%) e rendimento (mL planta-1) de leo essencial em acessos de alecrim-pimenta do BAG da UFS. So Cristvo, UFS, 2008.
Acessos LSID-001 LSID-002 LSID-003 LSID-004 LSID-005 LSID-006 LSID-102 LSID-103 LSID-104 LSID-105 C.V. (%) Massa fresca de folha (g planta-1) 221,93 b 358,95 ab 264,41 ab 467,04 ab 649,38 a 265,50 ab 304,18 ab 115,90 b 114,98 b 62,94 b 36,79 Massa seca (g planta-1) Folha Caule 99,34 abc 69,47 a 134,04 abc 106,75 a 112,20 abc 88,67 a 190,18 ab 150,58 a 233,81 a 196,50 a 105,63 abc 97,36 a 109,94 abc 168,79 a 46,29 bc 80,46 a 38,47 bc 35,65 a 23,301 c 35,90 a 36,34 42,93 leo Essencial Rendimento (mL planta-1) 4,82 ab 5,84 ab 5,79 ab 7,60 ab 10,29 a 4,95 ab 7,34 ab 3,19 ab 2,83 ab 1,71 b 33,91

Teor (%) 5,11 a 4,35 a 5,17 a 4,19 a 4,39 a 4,64 a 6,77 a 7,00 a 6,56 a 7,68 a 20,41

Mdias seguidas pela mesma letra, nas colunas, no diferem entre si pelo teste de Tukey (p<0,05).

2.4. CONCLUSES Existem diferenas entre os acessos de alecrim-pimenta do Banco Ativo de Germoplasma da UFS para as variveis: cor de caule, formato de copa, altura de planta, comprimento e largura de folha e relao comprimento/largura de folha, massa seca e fresca e rendimento de leo essencial. O acesso LSID-005 se mostrou o mais promissor para rendimento de folha e leo essencial enquanto o acesso LSID-105 o menos promissor.

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2.5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ARRIGONI-BLANK, M. F, SILVA-MANN, R.; CAMPOS, D. A; SILVA, P. A.; ANTONIOLLI, A. R.; CAETANO, L. C; SANTANA, A. E. G.; BLANK, A. F. Morphological, agronomical and pharmacological characterization of Hyptis pectinata (L) Poit germolplasm. Revista Brasileira de Farmacognosia, v. 15, n. 4, p. 298-303, 2005. BLANK, A. F.; CARVALHO FILHO, J. L. S.; SANTOS NETO, A. L.; ALVES, P. B.; ARRIGONI-BLANK, M. F.; SILVA-MANN, R.; MENDONA, M. C. Caracterizao morfolgica e agronmica dos acessos de manjerico e alfavaca cravo. Horticultura Brasileira, v. 22, n. 1, p. 113-116, 2004. CARVALHO FILHO, J. L. S. BLANK, A. F.; ALVES, P. B.; EHLERT, P. A. D.; MELO, A. S.; CAVALCANTI, S. C. H.; ARRIGONI-BLANK, M. F.; SILVA-MANN, R. Influence of the haversting time, temperature and drying period on basil (Ocimum basilicum L.) essential oil. Revista Brasileira de Farmacognosia, v. 16, n. 1, p. 24-30, 2006. CASTRO, H. G. de; OLIVEIRA, L. O. de; BARBOSA, A. L. C. de; FERREIRA, F. A.; SILVA, D. J. H da; MOSQUIM, P. R.; NASCIMENTO, E. A. Teor e composio do leo essencial de cinco acessos de mentrasto. Qumica Nova, v. 27, n. 1, p. 55-57, 2004. COSTA, A. S.; BLANK, A. F.; PAULA, J. W. A.; EHLERT, P. A. D. Influncia de substratos na produo de mudas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). Horticultura Brasileira, v. 23, n. 2, Suplemento 2, 2005.1 CD-ROM. EHLERT, P. A. D.; BLANK, A. F.; ARRIGONI-BLANK, M. F.; PAULA, J. W. A.; CAMPOS, D. A.; ALVIANO, C. S. Tempo de hidrodestilao na extrao de leo essencial de sete espcies de plantas medicinais. Revista. Brasileira de Plantas Medicinais, v. 8, n. 2, p. 79-80, 2006. EMBRAPA; IBAMA. Estratgias para conservao e manejo de recursos genticos de plantas medicinais e aromticas: resultados da 1 Reunio Tcnica. Braslia: EMBRAPA /IBAMA, 2002. 184 p. GUENTHER, E. The essential oils: history, origin in plants, production, analysis. v. 1. Malabar: Krieger Publishing Company, 1972. 427 p. LACOSTE, E.; CHAUMONT, J. P.; MANDIN, D.; PLUMEL, M. M.; MATOS, F. J. A. Antiseptic properties of essential oil of Lippia sidoides Cham.; application to the cutaneous microflora. Annales Pharmaceutiques Franaises, v. 54, p. 228-230, 1996. LEMOS, T. L. G.; COSTA, S. M. O; PESSOA, O. D. L.; ASSUNO, J. C. C.; BRAZ-FILHO, R. Constituintes qumicos de Lippia sidoides (Cham.) Verbenaceae. Revista Brasileira de Farmacognosia, v. 12, suplemento, p. 66-67, 2002. LORENZI, H.; MATOS, F. J. A. Plantas medicinais no Brasil; nativas e exticas. Nova Odessa: Instituto Plantarum, 2002. 512 p.

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MATOS, F. J. A. Plantas medicinais; guia de seleo e emprego de plantas usadas em fitoterapia no nordeste do Brasil. Fortaleza: UFC, 2000. 344 p. NASS, L. L. Utilizao de recursos genticos vegetais no melhoramento. In: NASS, L. L.; VALOIS, A. C. C.; MELO, I. S.; VALADARES-INGLIS, M. C. Recursos genticos e melhoramento de plantas. Rondonpolis: Fundao MT, 2001. p. 124147. RADNZ, L. L.; MELO, E. C.; BERBERT, P. A, BARBOSA, L. C. A, ROCHA, R. P.; GRANDI, A. M. Efeitos da temperatura do ar de secagem sobre a qualidade do leo essencial de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). Revista Brasileira de Armazenamento, v. 27, n. 2, p. 9-12, 2002. SIMES, C. M. O.; SCHENKEL, E. P.; GOSMANN, G.; MELLO, J. C. P.; MENTZ, L. A.; PETROVICK, P. R. Farmacognosia: da planta ao medicamento. Porto Alegre: UFSC/UFRGS, 2004. 1102 p. VILELA-MORALES, E. S.; VALOIS, A. C. C. Recursos genticos vegetais autctones e seus usos no desenvolvimento sustentvel. Cadernos de Cincia & Tecnologia, v. 17, n. 2, p. 11-42, 2000.

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CAPTULO 3 COMPORTAMENTO DE ACESSOS DE ALECRIM-PIMENTA (Lippia sidoides CHAM.) DURANTE DOIS ANOS DE CULTIVO OLIVEIRA, Tereza Cristina de. Comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) durante dois anos de cultivo. In: Caracterizao e comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em So Cristvo - SE. 2008. Cap. III. Dissertao de Mestrado em Agroecossistemas Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. RESUMO O objetivo do presente trabalho foi estudar o comportamento de acessos de alecrim-pimenta do Banco Ativo de Germoplasma da Universidade Federal de Sergipe, em So Cristvo-SE. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados em esquema de parcelas subdivididas no tempo. Testou-se dez acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) (LSID-001, LSID-002, LSID-003, LSID-004, LSID-005, LSID-006, LSID-102, LSID-103, LSID-104 e LSID-105) e realizou-se colheitas na poca chuvosa em 2005 e 2006. As variveis analisadas foram altura de planta (cm), massa fresca e seca de folha (g planta-1), teor (%) e rendimento de leo essencial (mL planta-1) e teor (%) dos constituintes qumicos do leo essencial. Observou-se que as maiores mdias de teor e rendimento de leo essencial foram do acesso LSID-105 com 7,68 % no ano de 2005 e do acesso LSID-102 com 56,46 mL planta-1 no ano de 2006. As maiores mdias de timol e carvacrol foram encontradas no acesso LSID-003 com 90,82 % e acesso LSID-104 com 56,05 % respectivamente, ambos no ano de 2006. O acesso LSID-104 oriundo do Estado de Sergipe, apresentou como constituinte qumico majoritrio o carvacrol. Os demais acessos evidenciaram o timol como constituinte qumico majoritrio. Os acessos, nos dois anos de cultivo, apresentaram variabilidade fenotpica para todas as variveis analisadas, exceto para teor de terpin 4-ol no leo essencial. Palavras-chaves: Lippia sidoides, planta medicinal e aromtica nativa, leo essencial, timol e carvacrol.

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BEHAVIOR OF PEPPER-ROSMARIN (Lippia sidoides Cham) ACCESSIONS DURING TWO YEARS OF CULTIVATION OLIVEIRA, Tereza Cristina. Behavior of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions during two years of cultivation. In: Characterization and behavior of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions maintained in Active Germplasm Bank in the So Cristvo county, Sergipe State. 2008. Chap. III. Thesis - Master of Science in Agroecosystems - Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. ABSTRACT The aim of this work was to study the behavior of pepper-rosmarin accessions of the Active Germplasm Bank of the Federal University of Sergipe, So Cristvo county, Sergipe State. The randomized block design was used in a split plot in time scheme. We tested ten pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions (LSID-001, LSID-002, LSID-003, LSID-004, LSID-005, LSID-006, LSID-102, LSID-103, LSID-104 e LSID105) and we realized harvests in the rainy seasons of 2005 and 2006. We analyzed the following variables: plant height (cm), fresh and dry weight of leaves (g plant-1), content (%) and yield (mL plant-1) of essential oil, and content (%) of the chemical constituents of the essential oil. We observed highest content and yield of essential oil for accession LSID-105 with 7.68% in 2005 and for accession LSID-102 with 56.46 mL plant-1 in 2006. The highest thymol and carvacrol means were found by accession LSID-003 with 90.82% and accession LSID-104 with 56.05%, respectively, both in 2006. The accession LSID-104 collected in the Sergipe State, presented carvacrol as its major chemical constituent. The other accessions had thymol as their major chemical constituent. In both years of cultivation the accessions presented phenotypic variability for all the analyzed variables, except for terpin-4-ol content in the essential oil. Key words: Lippia sidoides, native medicinal and aromatic plant, essential oil, thymol, carvacrol.

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3.1. INTRODUO O alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), pertencente famlia Verbenaceae, um arbusto caduciflio de 2-3 m de altura, prprio da vegetao do semi-rido nordestino do Brasil. As folhas so muito aromticas e picantes e as flores so pequenas e esbranquiadas. Pode ser multiplicado por estaquia usando-se, de preferncia, os ramos mais finos (LORENZI e MATOS, 2002). Nas folhas do alecrim-pimenta, que a parte medicinal, encontra-se at 4,5% de leo essencial rico em timol e carvacrol, que so seus princpios ativos majoritrios e responsveis pelo seu cheiro caracterstico (MATOS, 2002). O leo essencial apresenta forte ao antifngica, antimicrobiana, moluscida e larvicida. um importante agente no controle de enfermidades orais como: gengivites, infeces de garganta, amidalites entre outros (LEMOS et al., 1990; LACOSTE et al., 1996; MATOS, 2000; LORENZI e MATOS, 2002; COSTA et al., 2005). Estudos demonstram a influncia da adubao orgnica e mineral no cultivo (BLANK et al., 2005), da altura da planta (MIELI et al., 2001), do efeito da cobertura morta (LOUGHRIN e KASPERBAUER, 2001), do nmero de cortes (CRUZ et al., 2001), das pocas e dos horrios de colheita (SILVA et al., 2003), do ambiente de cultivo (FERNANDES et al., 2004), da temperatura e do tempo de secagem das folhas (CARVALHO FILHO et al., 2006) e do gentipo no teor, rendimento e composio de leos essenciais. (BLANK et al, 2004; CASTRO et al., 2004), A composio do leo essencial das plantas medicinais e aromticas um dos fatores que definem sua qualidade. Estudos mostram que acessos de alecrim-pimenta coletados no Nordeste do Brasil apresentam composio e rendimento de leos essenciais diferentes (LEMOS et al., 2002; ; COSTA et al., 2002; NUNES et al., 2005). Vieira et al. (2006), estudando os diferentes aromas em alfavacas, buscando selecionar espcies de interesse para a indstria de cosmticos e higiene, encontraram tipos qumicos ricos em determinados constituintes, sendo chamados conforme suas concentraes de linalol, metilchavicol, eugenol, citral. Trabalhos de comportamento de germoplasmas de plantas medicinais e aromticas vm sendo utilizados por diversos pesquisadores, com as mais variadas espcies, com diferentes objetivos, entre eles subsidiar os agricultores na seleo de materiais de melhor adaptao e com atributos agronmicos, qumicos e medicinais de interesse. Souza (2007), estudando o comportamento de gentipos de manjerico no Estado de Sergipe em dois anos de

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cultivo, observou diferenas significativas entre os acessos e anos para todos os caracteres avaliados. O objetivo do presente trabalho foi estudar o comportamento de acessos de alecrim-pimenta em dois anos do Banco Ativo de Germoplasma da Universidade Federal de Sergipe, em So Cristvo-SE, em dois anos de cultivo. 3.2. MATERIAL E MTODOS O experimento foi conduzido no Horto de Plantas Medicinais da Fazenda Experimental Campus Rural da UFS, localizada no municpio de So Cristvo-SE, latitude 1100 S e longitude 37 12 W. O plantio ocorreu em 18/11/2004. As mudas foram produzidas a partir de estacas utilizando-se ramos herbceos com aproximadamente 15 cm de comprimento, mantendo-se um par de folhas, tendo como substrato para o enraizamento uma mistura de p da casca de coco lavado e areia lavada (2:1), acrescida de 20 g L-1 de biofertilizante organomineral Biosafra (3-12-6) (COSTA et al., 2005). As estacas foram dispostas em bandejas de isopropileno expandido com 72 clulas em ambiente protegido com tela sombrite de 70 % e nebulizao intermitente e as mudas foram levadas a campo com cerca de 20 cm de altura. Foram plantados 10 acessos (Tabela 1), usando espaamento de 1,0 m x 1,0 m, em um Argissolo Vermelho-Amarelo distrfico. Realizou-se diariamente a irrigao por gotejamento. A adubao de fundao foi com 3 L m-2 de esterco bovino curtido. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados em esquema de parcelas subdivididas no tempo com dez tratamentos e duas repeties. Colocaram-se trs plantas/parcelas de acessos de alecrim-pimenta (Tabela 5) e nas sub-parcelas as colheitas realizadas em 18/05/2005 e 17/05/2006. As colheitas foram realizadas no perodo da manh com as plantas em plena florao. O corte foi realizado a uma altura de 40 cm do solo.

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TABELA 5. Acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) do Banco Ativo de Germoplasma da UFS, suas procedncias, coordenadas geogrficas e nmero no Herbrio da UFS. So Cristvo, UFS, 2008.
Acesso LSID-001 LSID-002 LSID-003 LSID-004 LSID-005 LSID-006 LSID-102 LSID-103 LSID-104 LSID-105 Procedncia Fortaleza-CE (UFC) Mossor-RN Mossor-RN Quixer-CE Limoeiro do Norte-CE Tabuleiro do Norte-CE Poo Redondo-SE Poo Redondo-SE Poo Redondo-SE Poo Redondo-SE Coordenadas Geogrficos 03 44' 41,4'' S; 38 34' 29,4'' W 05 07' 26,7'' S; 37 24' 14,6'' W 05 08' 28,3'' S; 37 23' 58,0'' W 05 05' 03,5'' S; 37 58' 43,9'' W 05 09' 47,8'' S; 38 06' 31,0'' W 05 14' 05,4'' S; 38 11' 35,0'' W 09 58' 07,6'' S; 37 51' 49,2'' W 09 58' 08,6'' S; 37 51' 50,3'' W 09 58' 09,2'' S; 37 51' 50,3'' W 09 58' 12,9'' S; 37 51' 49,2'' W No no Herbrio da UFS 8218 8219 8220 8221 8222 8223 8224 8225 8226 8227

Foram avaliadas as seguintes variveis: a) altura de planta: foi medida a altura das plantas de cada parcela til, com o auxlio de uma fita mtrica, utilizando-se a mdia para representar a parcela; b) massa fresca de folha: as plantas foram cortadas a 40 cm do solo s 09:00 horas, levadas ao galpo, onde foram desfolhadas. Em balana eletrnica determinou-se a massa obtida das folhas da parcela til e expressou-se o resultado em g planta-1; c) Massa seca de folha: as folhas de cada parcela til foram secas em estufa de secagem com fluxo de ar forado a uma temperatura de 40oC por cinco dias (CARVALHO FILHO et al., 2006); d) teor de leo essencial; a hidrodestilao foi realizada com aparelho tipo Clevenger (GUENTHER, 1972), acoplado a um balo de vidro de fundo redondo de 3000 mL, tendo uma manta como fonte de calor. Foram usadas 100 g de folhas frescas e 2000 mL de gua destilada, sendo o tempo da hidrodestilao de 160 minutos (EHLERT et al., 2006). A hidrodestilao foi realizada no Laboratrio de Fitotecnia do Departamento de Engenharia Agronmica da UFS. O resultado foi expresso em % baseado em massa seca de folha; e) rendimento de leo essencial: foi obtido pela multiplicao do teor de leo essencial com a mdia da massa seca de folha por planta de cada parcela. O resultado foi expresso em mL planta-1. Anlise e identificao dos constituintes qumicos:

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A composio qumica do leo essencial (%) foi analisada em cromatgrafo de fase gasoso, acoplado a um espectrmetro de massa (Shimadzu QP5050A-CG/EM), cujas condies operacionais utilizadas foram as seguintes: coluna capilar DB-5 (30m x 0,25mm x 0,25m) conectado em um detector operando em impacto eletrnico a 70 eV; gs de arraste Hlio (fluxo 1,2 mL/min) e programao: 50oC (2 min), seguido de um aumento de 4oC min-1 at atingir 200oC, depois de 15o C min-1 at atingir 300oC, mantendo constante esta temperatura por 15 minutos; temperatura do detector (ou interface) de 280oC; foi injetado um volume de 0,5 microlitros em acetato de etila; taxa de partio do volume injetado de 1:100. A anlise quantitativa dos constituintes foi realizada em um cromatrgrafo gasoso Shimadzu GC-17 A equipado com detector de ionizao de chamas (FID), sob as seguintes condies operacionais: coluna capilar de slica fundida ZB-5MS (5% dimetilpolisiloxane) com 30m x 0,25 mm i. d. x 0,25 m de filme, usando as mesmas condies do CG-EM. A quantificao de cada constituinte foi realizada pela normatizao da rea (%). As concentraes dos compostos foram calculadas pela rea e colocado em ordem de eluio do CG. As identificaes dos constituintes foram realizadas por comparao de seus espectros de massas com os espectros existentes na literatura (ADAMS, 2001) com espectros do banco de dados (NIST 107 e NIST 21) e, tambm, pela comparao dos ndices de reteno calculados com aqueles da literatura. Os ndices de reteno de Kovats (IK) foram determinados utilizando uma srie homloga de nalcanos (C8-C18) injetados nas mesmas condies cromatrogrficas das amostras, utilizando a equao de Van den Dool e Kratz (1963). O delineamento experimental usado foi parcelas subdividas no tempo, onde as parcelas foram os acessos de alecrim-pimenta e as sub parcelas o tempo das duas colheitas realizadas em 2005 e 2006. Os dados quantitativos foram submetidos a anlises de varincia com posterior comparao de mdias pelo Teste Tukey ao nvel de significncia de 5%, utilizando-se o Programa Computacional SISVAR verso 4.6. Foram utilizadas as transformaes de x+1 para as variveis massa de folha fresca e seca, rendimento de leo, timol metil anisol e xido de cariofileno que apresentaram coeficiente de variao acima de 40%. 3.3. RESULTADOS E DISCUSSO Observou-se, que nos acessos e anos estudados existe diversidade para massa seca de folha e teor de leo essencial, em 2005 e para altura de planta, massa fresca e 38

seca de folha e rendimento de leo essencial em 2006 (Tabela 6). Para a varivel altura da planta, no ano de 2006, observaram-se diferenas significativas entre os acessos estudados, destacando-se o acesso LSID-102 com valor de 237,30 cm embora no difere de outros acessos. Em 2005, no se observaram diferenas entre os acessos, porm em 2006 houve diferena demonstrando capacidade diferenciada de rebrota em 2006. Diferenas entre acessos, tambm foram encontradas no estudo de caracterizao morfolgica e agronmica de acessos de manjerico e alfavaca (BLANK et al., 2004).

TABELA 6. Mdias das variveis: altura de planta, massa de folha fresca e seca, teor e rendimento de leo essencial das folhas de acessos de alecrim-pimenta, colhidos em 2005 e 2006. UFS, So Cristvo-SE, 2008.
Massa de folha (g planta-1) Fresca Seca leo Essencial Teor (%) Rend. (mL. Planta-1)

Acessos

Altura da planta (cm) 113,75 a A 135,59 a B 139,59 a B 138,88 a B 150,42 a B 128,59 a B 134,17 a B 121,67 a B 104,67 a B 116,92 a B

2005 221,93 a A 99,34 ab A 5,11 ab A 4,83 a A 358,95 a B 134,04 ab B 4,35 b A 5,84 a B 264,41 a A 112,20 ab B 5,17 ab A 5,78 a A 467,04 a B 190,18 ab B 4,19 b A 7,60 a B 649,38 a A 233,81 a A 4,39 b A 10,29 a B 265,50 a B 105,63 ab B 4,65 b A 4,95 a B 304,18 a B 109,94 ab B 6,77 ab A 7,34 a B 115,90 a B 46,29 ab B 7,00 ab A 3,19 a B 114,98 a B 38,47 ab B 6,56 ab A 2,83 a B 62,94 a A 23,30 b A 7,68 a A 1,71 a A 2006 LSID-001 140,25 c A 381,13 ab A 88,06 bc A 2,78 a B 10,38 b A LSID-002 218,15 ab A 1172,29 a A 310,75 ab A 2,20 a B 25,68 ab A LSID-003 191,80 abc A 820,88 ab A 257,71 abc A 2,20 a B 18,06 ab A LSID-004 214,65 ab A 1376,31 a A 352,80 abA 2,18 a A 30,43 ab A LSID-005 222,30 ab A 1430,56 a A 399,70 a A 2,23 a B 32,95 ab A LSID-006 216,80 ab A 1193,73 a A 332,91 ab A 2,53 a B 31,04 ab A LSID-102 237,30 a A 1546,93 a A 420,06 a A 3,65 a B 56,46 a A LSID-103 171,65 bc A 836,11 ab A 196,85 abc A 3,05 a B 27,74 ab A LSID-104 200,30 abc A 707,51 ab A 205,75 abc A 3,38 a B 23,86 ab A LSID-105 200,00 abc A 185,35 b A 51,56 c A 2,90 a B 5,38 b A CV a (%) 11,86 26,91 25,82 17,72 26,95 CV b (%) 9,51 24,68 16,51 21,97 27,01 Mdias seguidas das mesmas letras minsculas, nas colunas, e maisculas nas linhas, no diferem entre si, pelo teste de Tukey ( p 0,05). LSID-001 LSID-002 LSID-003 LSID-004 LSID-005 LSID-006 LSID-102 LSID-103 LSID-104 LSID-105

No trabalho de caracterizao morfolgica, agronmica e farmacolgica de Hyptis pectinata L. foram observados diferenas significativas entre os acessos nas trs colheitas. Na primeira colheita, o acesso SAM-006 apresentou plantas mais altas; na 39

segunda colheita, os acessos SAM-006 e SAM-003 apresentaram maior altura e, na terceira colheita, observou-se s plantas mais altas nos acessos SAM-005 e SAM-006 (ARRIGONI-BLANK et al., 2005). Para a massa fresca e seca de folha, observaram-se os melhores resultados no ano de 2006, exceto para o acesso LSID-005 embora no difere estatisticamente de outros acessos para massa fresca de folha (MFF) e para o acesso LSID-105 para massa seca de folha (MSF). Os acessos LSID-002, LSID-004, LSID-005, LSID-006 e LSID-102 apresentaram as maiores mdias de massa fresca de folha, em 2006, com 1.172,3; 1.376,3; 1.430,5; 1.193,7; e de 1.546,9 g planta-1 respectivamente embora sendo superior apenas ao acesso LSID-105. O acesso LSID-105 apresentou massa fresca de folha muito baixa diferindo significativamente dos acessos LSID-002, LSID-004, LSID005, LSID-006 e LSID-102. Para massa seca de folha (MSF) as maiores mdias em 2006, foram registradas em dois acessos: LSID-102 com 420,06 g planta-1, e LSID-005 de 399,70 g planta-1, e em 2005 observou-se que o LSID- 005 produziu 233,81 g planta-1 embora sendo superior apenas ao LSID-105. Variaes entre acessos tambm foram encontradas no estudo de caracterizao morfolgica, agronmica e farmacolgica de Hyptis pectinata L., observando-se que as maiores mdias foram encontradas nos mesmos acessos para a varivel massa fresca e seca de folha, nas trs colheitas avaliadas (ARRIGONI-BLANK et al., 2005). Para teor de leo essencial observou-se que as melhores mdias foram observadas no ano de 2005, onde acesso LSID-105 apresentou 7,68 %, LSID-103, LSID-102, LSID-104, LSID003 e LSID-001 com mdias variando entre 7,00 e 5,11 % de leo essencial. Em manjerico tambm se observaram variabilidade entre acessos, variando entre 0,202 e 2,536 % de leo essencial (BLANK et al., 2004). Verificou-se que os teores de leo essencial encontrados nos acessos de alecrimpimenta no ano de 2005 so mais altos que o mnimo exigido pela Farmacopia Brasileira (4 % de massa fresca) para comercializao (CORRA JNIOR, 1995). Para rendimento de leo essencial, as melhores mdias foram encontradas no ano de 2006 no acesso LSID-102 com mdia de 56,46 mL planta-1, produziu mais do que os acessos LSID-001 e LSID-105 e estatisticamente igual aos demais acessos que produziram entre 32,95 e 18,06 mL planta-1. Para todas as variveis, exceto para teor de leo essencial, houve diferena entre acessos no segundo ano de cultivo, sugerindo que esse tipo de avaliao seja realizado a partir do segundo ano. Variabilidades entre gentipos de manjerico e alfavaca foram encontrados para rendimento de leo 40

essencial e observou-se valores variando de 1,103 a 21,817 L ha-1 (BLANK et al., 2004). No trabalho desenvolvido por Suchorska e Osinsk (2001), realizado com cinco acessos de manjerico foi observada a variao de 0,1 a 0,55% de leo essencial. Em estudo de comportamento de manjerico em dois anos de cultivo, todas as linhagens produziram maior massa seca de folha + inflorescncia no ano de 2004/2005, no apresentando, porm, diferenas significativas para as variveis teor e rendimento de leos essenciais (SOUZA, 2007). Tambm, nesse trabalho constatou-se que todas as linhagens produziram maior massa seca de folha+inflorescncia no ano de 2004/2005, no apresentando diferenas significativas entre elas, assim, sugere-se que as diferenas na composio do leo essencial se relacionam a fatores ambientais ou a variao gentica infra-especfica (SOUZA, 2007). Kamada et al. (1999), avaliando acessos de manjerico branco, roxo e basilico, tambm observaram que para o teor de leo essencial os efeitos ambientais foram significativos no comportamento dos acessos estudados, principalmente, no manjerico branco e basilico, demonstrando a plasticidade fenotpica dos acessos que variaram de 1,2 a 2,1 % no manjerico branco e 0,7 % a 1,2 % para o basilico. No estudo de caracterizao da Lippia sidoides Cham. como matria-prima vegetal para uso em produtos farmacuticos, notou-se que o teor de leo essencial encontrado no vegetal fresco foi de 3,8 % e em material seco foi de 5,3% (NUNES et al., 2005).

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TABELA 7. Mdias dos seguintes constituintes qumicos: tricicleno, beta mirceno, alfa terpineno, para cimeno, gamaterpineno, terpin-4-ol, timol metil anisol, timol, carvacrol, beta cariofileno e xido de cariofileno no leo essencial das folhas frescas de alecrim-pimenta colhidos em maio de 2005 e 2006. So Cristvo-SE, 2008.

Acessos LSID 001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 CV(a) CV(b)

Constituintes Qumicos tricicleno 1,11 bc A 0,94 bc A 1,06 bc A 0,88 bc A 0,77 c A 0,93 bc A 1,39 bA 0,73 c A 2,24 a A 1,15 bc A 0,15 b B 0,11 b B 0,00 b B 0,07 b B 0,20 b B 0,14 b B 0,36 b B 0,18 b B 1,12 a B 0,26 b B 24,41 20,36 mirceno 4,77 a A 1,75 c A 1,85 c A 1,59 c A 1,49 c A 1,78 c A 3,99 b A 3,70 b A 4,09 b A 3,99 b A 1,63 b B 0,45 c B 0,11 c B 0,25 c B 0,55 c B 0,58 c B 2,16 ab B 1,54 b B 2,78 a B 1,79 b B 10,22 7,53 terpineno 1,03 c A 0,90 c A 0,90 c A 0,81 c A 0,88 c A 0,95 c A 1,80 b A 0,72 c A 2,86 a A 0,72 c A 0,10 c B 0,10 c B 0,00 c B 0,08 c B 0,20 c B 0,15 c B 0,63 b B 0,15 c B 2,08 a B 0,15 c B 16,18 15,74 para cimeno 13,45 b A 8,50 bc A 4,96 c A 8,06 bc A 7,21 bc A 8,23 bc A 21,48 a A 8,93 bc A 13,79 ab A 8,13 bc,A 6,71 b B 6,15 b A 2,95 b A 6,89 b A 5,74 b A 7,11 b A 18,18 a A 6,57 b A 15,06 a A 7,06 b A 17,96 27,78 terpineno 2005 3,50 c A 2,88 c A 2,99 c A 1,29 c A 3,02 c A 3,00 c A 6,77 b A 2,18 c A 14,52 a A 2,26 c A 2006 0,02 c B 0,06 ab B 0,00 c B 0,12 ab A 0,15 ab B 0,00 c B 2,29 b B 0,08 ab B 9,87 a B 0,16 ab B 23,47 22,52 terpin 4-ol 0,80 a A 0,84 a A 0,84 a A 0,74 a A 0,91 a A 1,09 a A 1,21 a A 1,02 a A 0,92 a A 0,75 a A 1,09 a A 0,57 a A 0,94 a A 0,29 a B 0,78 a A 1,01 a A 0,42 a B 0,84 a A 0,75 a A 0,73 a A 37,89 18,35 timol metil Anisol 2,37 b A 0,89 b A 0,95 b A 0,78 b A 0,96 b A 1,28 b A 9,73 a A 1,95 b A 4,17 ab A 4,21 ab B 0,85 bc A 0,52 bc A 0,18 c A 0,20 c A 0,55 bc A 0,72 bc A 9,18 a A 0,87 bc A 4,93 ab A 8,33 a A 19,95 19,99 timol 68,80 a B 72,72 a B 70,87 a B 75,26 a B 71,99 a B 66,43 a B 47,64 b B 72,12 a B 7,51 c A 69,59 a B 83,74 ab A 86,18 ab A 90,82 a A 85,80 ab A 83,42 ab A 81,06 ab A 64,95 c A 86,11 ab A 8,21 d A 79,27 b A 4,08 4,06 carvacrol 0,07 b A 0,33 b A 0,24 b A 0,13 b A 0,28 b A 0,44 b A 0,28 b A 0,35 b A 45,27 a B 0,21 b A 0,24 b A 0,15 b A 0,00 b A 0,29 b A 0,34 b A 0,33 b A 0,12 b A 0,23 b A 56,05 a A 0,19 b A 5,92 5,62 cariofileno 1,95 abc A 4,03 ab A 4,68 a A 2,19 abc A 5,03 a A 4,79 a A 0,68 bc A 0,57 bc A 0,09 c A 0,39 bc A 2,45 abc A 3,14 abc A 3,76 ab A 1,75 abc A 3,40 abc A 4,44 a A 0,25 bc A 0,27 bc A 0,10 c A 0,25 bc A 12,89 23,29 xido de cariofileno 0,18 bc B 0,80 abc A 0,90 ab A 0,59 abc A 0,81 abc A 1,47 a A 0,15 bc A 0,34 bc A 0,00 c A 0,12 bc A 1,56 a A 1,19 abc A 0,98 abcd A 0,50 bcde A 1,37 ab A 1,44 ab A 0,14 de A 0,22 de A 0,00 e A 0,29 cde A 9,08 6,32

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Na anlise de perfis cromatrogrficos dos acessos de alecrim pimenta colhidos em 2005 e 2006, foram identificados os seguintes constituintes qumicos principais: tricicleno, mirceno, terpineno, terpineno, terpin-4-ol, timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno (Tabela 7). Para todos os constituintes qumicos observaram-se diferenas significativas entre os acessos em 2005 e 2006, exceto para o terpin 4-ol. Observaram-se tambm diferenas entre anos de colheita para todos os constituintes qumicos, exceto para teor de cariofileno (Tabela 7). A maior mdia de tricicleno foi encontrada nos acessos LSID-104 com 2,24 % em 2005; e 1,12 % em 2006. As mdias variaram de 2,24 a 0,73 % em 2005; e de 1,12 a 0,0 %, em 2006. Para o mirceno as maiores mdias foram encontradas nos acessos LSID-001 com 4,77 % em 2005; 2,78 % no acesso LSID-104 e 2,16 % no acesso LSID102, em 2006. Para o terpineno, a maior mdia foi encontrada nos acessos LSID-104 de 2,86 % em 2005 e de 2,08% em 2006. As mdias variaram de 2,86 a 0,72 % em 2005; 2,08 a 0,00 % em 2006. Para o para-cimeno foi observado nos acessos LSID-102 e 104 as maiores mdias com 21,48 e 13,79 % e 18,18 % e 15,06 % respectivamente em 2005 e em 2006 nos acessos LSID-102 (18,18 %) e LSID-104 (15,06 %), em 2006. Para o terpineno o acesso LSID-104 apresentou maior mdia (14,52 %) sendo superior em 2005; e, 9,87 %, em 2006 (Tabela 7). Em trabalho testando cinco acessos de mentrasto observou-se que existem variaes no nmero de compostos identificados, com destaque para dois constituintes majoritrios, ambos cromenos: precoceno I e II. O precoceno I foi majoritrio no acesso API, e o precoceno II nos demais acessos. Outros compostos encontrados em menores concentraes foram terpinen-4-ol, acetato de bornila, cariofileno, muroleno, cadineno, xido de cariofileno, cumarinas, entre outros (CASTRO et al., 2004). Para os constituintes qumicos timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno observaram-se que houve diferena significativa entre os acessos nos dois anos avaliados, sendo que para as variveis cariofileno no houve diferena significativa entre os anos (Tabela 7). Para o timol metil anisol as maiores mdias (9,73 % e 9,18 %) foram do acesso LSID-102, em 2005 e 2006 respectivamente embora no diferindo estatisticamente de outros acessos. As mdias variaram de 9,73 a 0,78%, em 2005; e, de 9,18 a 0,18%, em 2006. Para o timol as maiores mdias foram observadas nos acessos LSID-004

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(75,26%), LSID-002 (72,72%), LSID-103 (72,12%), LSID-005 (71,99%) LSID-003 (70,87%), LSID-105 (69,59%), LSID-001 (68,80%) e LSID-006 (66,46%), sendo superiores aos acessos LSID-102 e LSID-104 em 2005; e, no acesso LSID-003 (90,82%), em 2006. As maiores mdias variaram de 90,82 a 8,21% diferindo dos acessos LSID-102, LSID-104 e LSID-105, em 2006 (Tabela 7). Entre anos, observou-se que para o timol houve diferena significativa para todos os acessos, exceto para o acesso LSID-104. Para os demais caracteres avaliados houve variao entre os anos para todos os constituintes qumicos, exceto para o constituinte qumico cariofileno (Tabela 7). O constituinte qumico timol, majoritrio entre os acessos estudados, apresentou diferena significativa entre acessos. Os acessos LSID-003 (90,82 %), LSID-002 (86,18 %), e LSID-103 (86,11 %), LSID-004 (85,80 %), LSID-001 (83,73 %), LSID-005 (83,42 %), LSID-006 (81,06 %) apresentaram as maiores mdias de timol no ano de 2006 mas diferindo apenas doa acessos LSID-102 e LSID-104. Em 2005, verificou-se que as maiores mdias encontradas foram dos acessos LSID-004 (75,26 %), LSID-002 (72,72 %) e LSID-103 (72,12 %), LSID-005 (71,99 %), LSID-003 (70,87 %), LSID-105 (69,59), LSID-001 (68,80 %), LSID-006 (66,43 %) diferindo dos acessos LSID-102 e LSID-104 que tiveram os piores desempenho nos dois anos (Tabela 7). Para o -cariofileno as melhores mdias foram apresentadas pelos acessos LSID-005 (5,03 %), LSID-006 (4,79 %) e LSID-003 (4,68 %) em 2005 e do acesso LSID-006 (4,44 %) em 2006 sendo superiores aos acessos LSID-102, LSID-103, LSID104 e LSID-105. As mdias variaram de 5,03 a 0,09 %, em 2005 e de 4,44 a 0,10 % em 2006 (Tabela 7). Os resultados das anlises de leo essencial de alecrim-pimenta mostram que os constituintes majoritrios dos acessos so timol, que de forma geral, corresponde a 70% dos constituintes identificados, seguidos por para-cimeno que corresponde com cerca de 10%. O carvacrol corresponde em mdia de 0,5% dos constituintes qumicos, mas, para o acesso LSID-104 do Estado de Sergipe, observou-se 56% de carvacrol no leo essencial. Assim, verificou-se que todos os acessos apresentaram o timol como constituinte qumico majoritrio, exceto para o acesso LSID-104, que apresentou carvacrol como constituinte majoritrio. Constatou-se que os acessos se comportaram de maneira diferenciada para as caractersticas estudadas, indicando existncia de variabilidade gentica entre os acessos e influncia entre os anos de cultivo.

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No trabalho realizado por Tavares et al., (2005) na anlise do leo essencial de folhas de trs quimiotipos de Lippia alba (Mill.) N.E.Br. (Verbenaceae), cultivadas em diferentes regies geogrficas sob condies semelhantes, observou-se que a composio do leo essencial se manteve inalterada para os trs quimiotipos, ricos em citral, carvona e linalol e, tambm, que o teor de leo essencial no variou qualitativamente durante o crescimento vegetativo e que a diferena entre os acessos deve-se diversidade gentica das plantas. Souza (2007), estudando o comportamento de linhagens de manjerico (Ocimum basilicum L.) em dois anos de cultivo, encontrou diferenas significativas para o fator ano em todas as variveis analisadas, com exceo do teor de linalol. Para o fator linhagens, observaram-se diferenas significativas para teor e rendimento de leo essencial. Castro et al. (2004), avaliando o teor e composio qumica do leo essencial de cinco acessos de mentrasto, provenientes de diferentes origens geogrficas, mas cultivados sob as mesmas condies ambientais observaram que a constituio gentica das plantas influencia a produo de determinados metablitos, e diferentes variedades de espcies de plantas medicinais contm diferentes teores de leo essencial. Resultados semelhantes foram encontrados neste trabalho, confirmando a diferena do teor de leo essencial e a presena de compostos majoritrios observados entre os acessos estudados. 3.4. CONCLUSES Os acessos, nos dois anos de cultivo, apresentam variabilidade fenotpica para todas as variveis analisadas, exceto para teor de terpin 4-ol no leo essencial. O acesso LSID-104, oriundo do Estado de Sergipe, apresenta como constituinte qumico majoritrio o carvacrol. Os demais acessos tm o timol como constituinte qumico majoritrio. No houve efeito entre os dois anos de colheita para o constituinte qumico cariofileno entre os anos estudados.

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3.5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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CAPTULO 4 INFLUNCIA DAS POCAS SECA E CHUVOSA NO COMPORTAMENTO DE ACESSOS DE ALECRIM-PIMENTA (Lippia sidoides Cham.) OLIVEIRA, Tereza Cristina. Influncia das pocas seca e chuvosa no comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). In: Caracterizao e comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em So Cristvo - SE. 2008. Cap. IV. Dissertao de Mestrado em Agroecossistemas Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito das pocas seca e chuvosa, no comportamento de 11 acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). Utilizou-se o delineamento experimental de blocos casualizados, em esquema de parcelas subdivididas no tempo, com duas repeties. Nas parcelas colocaram-se os 11 acessos de alecrim-pimenta (LSID-001, LSID-002, LSID-003, LSID-004, LSID-005, LSID-006, LSID-102, LSID-103, LSID-104, LSID-105 e LSID-301) e nas sub parcelas o tempo das duas colheitas realizadas em dezembro de 2005 (poca seca) e julho de 2006 (poca chuvosa). As variveis analisadas foram massa fresca e seca de folha, teor e rendimento e teor dos constituintes qumicos no leo essencial. Concluiu-se que para a maioria dos acessos de alecrim-pimenta estudados o teor de timol maior na poca chuvosa do que na seca. O acesso LSID-102 apresentou alto rendimento de leo essencial, porm o teor de timol ficou entre 47,97 % e 64,95 %; o acesso LSID-003 apresentou rendimento de leo essencial de 10,06 mL planta-1 e teor de timol de 90,02 % e, o acesso LSID-104 mostrou alto teor de carvacrol e baixo teor de timol. Palavras-chaves: Lippia sidoides, germoplasma, planta medicinal e aromtica nativa, leo essencial, poca de colheita, timol.

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INFLUENCE OF DRY AND RAINY SEASONS ON THE BEHAVIOR OF PEPPER-ROSMARIN (Lippia sidoides Cham) OLIVEIRA, Tereza Cristina. Influence of dry and rainy seasons on the behavior of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions. In: Characterization and behavior of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions maintained in Active Germplasm Bank in the So Cristvo county, Sergipe State. 2008. Chap. IV. Thesis Master of Science in Agroecosystems - Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. ABSTRACT The aim of this work was to evaluate the effect of the dry and rainy seasons on the behavior of 11 pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions. The randomized block design was used in a split plot in time scheme, with two replications. In the plots we tested the 11 pepper-rosmarin accessions (LSID-001, LSID-002, LSID-003, LSID004, LSID-005, LSID-006, LSID-102, LSID-103, LSID-104, LSID-105 AND LSID301) and in the split plots we tested the time of the two harvests realized in December 2005 (dry season) and July 2006 (rainy season). The analyzed variables were: fresh and dry weight of leaves, content and yield of essential oil, and content of the chemical constituents of the essential oil. We concluded that for most of the studied pepperrosmarin accessions the thymol content in the essential oil is higher in the rainy season then in the dry season. The accession LSID-102 presented high essential oil yield, but its thymol content was between 47.97 % and 64.95 %; the accession LSID-003 presented yield of 10.06 mL plant-1 of essential oil and 90.02% of thymol content, and the accession LSID-104 have high carvacrol and low thymol content in its essential oil. Key words: Lippia sidoides, germplasm, native plants medicinal and aromatic plant, essential oil, harvest season, thymol.

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4.1. INTRODUO A Lippia sidoides Cham. (Verbenaceae), popularmente conhecida como alecrimpimenta, alecrim bravo ou alecrim-do-nordeste, um arbusto caduciflio de 2-3 m de altura, prprio da vegetao do semi-rido nordestino do Brasil. Apesar de muito utilizada, uma planta medicinal introduzida relativamente a pouco tempo em programas de fitoterapia cientfica, baseado nos altos teores de timol no seu leo essencial e dos resultados obtidos de estudos farmacolgicos que comprovam cientificamente seu uso medicinal (LEMOS et al., 1990; MATOS et al., 1999). As folhas so muito aromticas e picantes, a espcie pode ser multiplicada por estaquia usando-se, de preferncia, os ramos mais finos (LORENZI & MATOS, 2002). Nas folhas do alecrim-pimenta, que a parte medicinal, encontra-se at 4,5 % de leo essencial rico em timol, que seu princpio ativo principal e o responsvel pelo seu cheiro caracterstico (MATOS, 2002). O leo essencial apresenta forte ao antifngica, antimicrobiana, moluscida e larvicida, sendo um importante agente no controle de enfermidades orais (LEMOS et al., 1990; LACOSTE et al., 1996; MATOS, 2000; LORENZI & MATOS, 2002). A padronizao das pocas de colheita, da parte colhida e do cultivo sob as mesmas condies ambientais auxilia na identificao de variedades que apresentam diferenas na sua composio qumica (CASTRO et al., 2002; SILVA et al., 2003; BLANK et al.; CASTRO et al., 2004; CARVALHO FLHO et al., 2006). Assim, para Castro et al. (2002), a composio de leo essencial nas plantas resultado do balano entre a sua formao e transformao que ocorrem durante o seu crescimento em decorrncia de trs fatores principais: ambientais, tcnicas de cultivo e genticos. A qualidade de plantas medicinais e aromticas definida pela composio do leo essencial que, por sua vez, depende da tcnica de extrao do leo, da poca e horrio de colheita da planta, das condies de plantio e manejo, bem como das variveis edafoclimticas e do material gentico (MATOS, 1996; MARTINS et al., 1999; CASTRO et al., 2002; BLANK et al., TAIZ & ZEIGER; CASTRO et al., 2004; ARRIGONI-BLANK et al., 2005; CARVALHO-FILHO et al., 2006). A falta de informaes sobre tcnicas de cultivo, da caracterizao de germoplasma, da diversidade gentica e do comportamento das plantas medicinais e aromticas nativas perante as prticas agronmicas e as condies edafoclimticas dificultam a domesticao e o cultivo (CHAVES et al., 2002, 2003).

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Silva et al. (2006), no estudo de caracterizao qumica do leo essencial da erva cidreira (Lippia alba (Mill) N.E.Br.) cultivadas em Ilhus-BA, concluram que existem variaes de teores e constituintes qumicos de leo essencial nas diferentes estaes. Em alguns casos, devido diversidade gentica da espcie, identificou-se uma variedade de quimiotipos. Na poca do vero, as plantas apresentaram uma complexidade de compostos, com indicativos fortes de maior estresse devido ao calor. Os melhores resultados foram obtidos na primavera. Segundo Castro et al. (2002), os componentes qumicos do leo essencial de plantas medicinais podem variar de acordo com a estao do ano. Devido necessidade de informaes sobre a domesticao do alecrim-pimenta o presente trabalho visa avaliar o efeito das pocas seca e chuvosa no comportamento de 11 acessos de alecrim-pimenta do Banco Ativo de Germoplasma (BAG) da Universidade Federal de Sergipe cultivados em So Cristvo-SE. 4.2. MATERIAL E MTODOS Foram avaliadas amostras de leo essencial de 11 acessos de alecrim-pimenta do Banco Ativo de Germoplasma (BAG) da Universidade Federal de Sergipe, colhidos em dezembro de 2005 (poca seca) e julho de 2006 (poca chuvosa). O delineamento experimental empregado foi blocos casualizados em esquema de parcelas subdivididas no tempo, com 11 tratamentos e duas repeties, cada parcela foi constituda por trs plantas. O experimento foi realizado, sob condies de campo, na Fazenda Experimental "Campus Rural da UFS", no Municpio de So Cristvo, de latitude 11 00 S e longitude 37 12W. O espaamento utilizado foi 1,0 x 1,0m, em um Argissolo Vermelho-Amarelo distrfico, sob regime de irrigao diria por gotejamento. As variveis analisadas foram: massa fresca e seca de folha (g planta-1), teor (%) e rendimento (mL planta-1) e o teor (%) dos constituintes qumicos do leo essencial. Para a determinao da massa fresca e seca realizou-se a colheita s 09 horas, cortando as plantas a uma altura de 40 cm do solo. As folhas foram secas a 40 o C em estufa de secagem com fluxo de ar forado, por cinco dias (CARVALHO FILHO et al., 2006). O teor de leo essencial das folhas frescas foi determinado por hidrodestilao com aparelho tipo Clevenger (GUENTHER, 1972), acoplado a um balo de vidro de fundo redondo de 3000 mL. Utilizaram-se 100 g de folhas frescas em 2000 mL de gua destilada por um perodo de 160 minutos (EHLERT et al., 2006). O teor de leo essencial foi expresso em massa seca na folha. Foi utilizada uma manta como fonte de 53

calor. O rendimento de leo essencial foi obtido pela multiplicao do teor de leo essencial com a mdia da massa seca de folha por planta de cada parcela. Anlise e identificao dos constituintes qumicos - O teor dos constituintes qumicos dos leos essenciais (%) foi determinado por meio de anlise em cromatgrafo de fase gasoso, acoplado a um espectrmetro de massa (Shimadzu QP5050A-CG/EM), cujas condies operacionais utilizadas foram as seguintes: coluna capilar DB-5 (30m x 0,25mm x 0,25m) conectado em um detector operando em impacto eletrnico a 70 eV; gs de arraste Hlio (fluxo 1,2 mL/min) e programao: 50oC (2 min), seguindo de um aumento de 4oC min-1 at atingir 200oC, depois de 15oC min-1 at atingir 300oC, mantendo constante esta temperatura por 15 minutos; temperatura do detector (ou interface) de 280oC; foi injetado um volume de 0,5 microlitros em acetato de etila; taxa de partio do volume injetado de 1:100. A anlise quantitativa dos constituintes foi realizada em um cromatrgrafo gasoso Shimadzu GC-17 A equipado com detector de ionizao de chamas (FID), sob as seguintes condies operacionais: coluna capilar de slica fundida ZB-5MS (5 % dimetilpolisiloxane) com 30m x 0,25 mm i. d. x 0,25 m de filme, usando as mesmas condies do CG-EM. A quantificao de cada constituinte foi realizada pela normatizao da rea (%). As concentraes dos compostos foram calculadas pela rea e colocado em ordem de eluio do CG. As identificaes dos constituintes foram realizadas por comparao de seus espectros de massas com os espectros existentes na literatura (ADAMS, 2001) com espectros do banco de dados do cromatgrafo chamado de espectroteca (NIST 107 e NIST 21) e, tambm, pela comparao dos ndices de reteno calculados com aqueles da literatura. Os ndices de reteno de Kovats (IK) foram determinados utilizando uma srie homloga de nalcanos (C8-C18) injetados nas mesmas condies cromatrogrficas das amostras, utilizando a equao de Van den Dool & Kratz (1963). Os dados foram submetidos anlise de varincia e as mdias foram comparadas, utilizando-se o teste de Tukey a 5 % de probabilidade, com o auxlio do programa computacional SISVAR verso 4.6. 4.3. RESULTADOS E DISCUSSES Na poca seca, para a massa fresca e seca de folha e rendimento de leo essencial no se constataram diferena significativa entre os acessos estudados (Tabela 8). Entretanto para o teor de leo essencial houve diferena significativa entre os 54

acessos. Para o teor de leo essencial na poca seca, o acesso LSID-105 (3,35 %) foi superior aos acessos LSID-104, LSID-001, LSID-002 e LSID-003 e estatisticamente iguais aos demais (Tabela 8). Entretanto, na poca chuvosa, houve diferena significativa entre os acessos para todas as variveis analisadas (Tabela 8). Para a massa de folha fresca o acesso LSID-102 se destacou produzindo 1546,93 g planta-1, sendo superior aos acessos LSID-001, LSID-105 e LSID-301 e no divergindo dos demais acessos (Tabela 8). J em relao massa seca de folha, se destacaram os acessos LSID-005 com 399,70 e LSID-102 com 420,07 g planta-1, sendo superiores aos acessos LSID-001 com 88,07 g planta-1e LSID-105 com 51,59 g planta-1, e estatisticamente iguais aos demais acessos para essa varivel. Para o teor de leo essencial na poca chuvosa o acesso LSID-102 merece destaque que embora seja semelhante aos acessos LSID-104 (3,38 %) e LSID-103 (3,05 %), foi superior aos demais. Em relao ao rendimento de leo essencial observou-se variao de 56,46 mL planta -1 no acesso LSID-102 a 5,38 mL planta -1 no acesso LSID-005 (Tabela 8).

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TABELA 8. Mdias de massa fresca e seca de folha (g planta-1), teor (%) e rendimento (mL planta-1) de leo essencial de acessos de alecrim-pimenta, nas pocas seca (dez/2005) e chuvosa (Jul/2006). UFS. So Cristvo-SE, 2008.
Massa de Folha (g planta-1) Fresca leo Essencial

Acessos

Seca Teor (%) Rend. (mL. planta-1) poca Seca 575,38 a A 189,99 a A 2,55 bc A 14,58 a A LSID-001 LSID-002 905,48 a A 362,48 a A 2,58 bc A 23,16 a A LSID-003 819,79 a A 328,94 a A 2,40 c A 19,68 a A LSID-004 753,23 a A 298,43 a A 2,80 abc A 21,09 a A LSID-005 932,25 a A 370,98 a A 2,63 abc A 24,50 a A LSID-006 729,45 a A 296,86 a A 2,90 abc A 21,15 a A LSID-102 901,53 a A 384,58 a A 2,83 abc B 25,45 a B LSID-103 467,60 a A 168,99 a A 2,80 abc A 13,25 a A LSID-104 491,51 a A 197,81 a A 2,60 bc B 13,07 a A LSID-105 502,50 a A 165,65 a A 3,35 a A 16,85 a A LSID-301 388,16 a A 160,38 a A 3,20 ab A 12,42 a A poca Chuvosa LSID-001 381,13 cd A 88,07 b A 2,78 bcd A 10,38 b A LSID-002 1172,29 abc A 310,75 ab A 2,20 d A 25,68 ab A LSID-003 820,88 abcd A 257,71 ab A 2,20 d A 18,06 ab A LSID-004 1376,31 abc A 352,80 ab A 2,18 d B 30,43 ab A LSID-005 1430,57 ab A 399,70 a A 2,23 d B 32,95 b A LSID-006 1193,73 abc A 332,91 ab A 2,53 cd A 31,04 ab A LSID-102 1546,93 a A 420,07 a A 3,65 a A 56,46 a A LSID-103 836,11 abcd A 196,85 ab A 3,05 abc A 27,74 ab A LSID-104 707,51 abcd A 205,75 ab A 3,38 ab A 23,86 ab A LSID-105 185, 35 d A 51,59 b A 2,90 bcd B 5,38 b A LSID-301 424,05 bcd A 130,43 ab A 2,70 bcd B 11,50 b A CV a (%) 21,07 39,00 8,28 22,52 CV b (%) 15,63 22,56 6,49 17,63 Mdias seguidas das mesmas letras minsculas, nas colunas, e maisculas nas linhas, no diferem entre si, pelo teste de Tukey ( p 0,05).

De um modo geral, o acesso LSID-102 merece destaque, pois mostrou bom desempenho para todos os caracteres avaliados nas duas pocas. O acesso LSID-102 foi o nico que apresentou rendimento de leo essencial maior na poca chuvosa (Tabela 8). No houve diferenas entre as pocas seca e chuvosa para as variveis massas fresca e seca (Tabela 8). Em trabalho sobre a influncia do perodo de secagem nas estaes seca e chuvosa em Lippia alba (Mill) N.E.Br., nas condies do Cear, notou-se que as estaes seca e chuvosa tiveram uma forte influncia nos resultados para todas as variveis estudadas. O teor de leo essencial foi maior na estao seca do que na estao chuvosa (NAGAO et al., 2005). Resultados semelhantes foram constatados por Martins

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et al. (1999) estudando o efeito da poca em hortel rasteira (Mentha x vilosa Hunds), e Matos (2000) em hortel japonesa (Mentha arvensis L. var piperascens). Essa influncia foi confirmada por Tavares et al. (2005) quando analisaram o leo essencial de trs quimiotipos de Lippia alba (Mill) N.E.Br. (Verbenaceae), cultivados em condies semelhantes e provenientes de vrias regies do Pas, o teor de leo de Lippia alba varia com a poca, ocorrendo o maior rendimento fora do perodo de florao. Com relao ao rendimento de leo essencial, os resultados mostraram que houve diferena significativa entre os acessos e pocas. No estudo de caracterizao qumica do leo essencial de erva cidreira (Lippia alba (Mill.) N.E.Br.), cultivados nas diferentes estaes do ano em Ilhus-BA, observaram-se que na estao primavera a melhor poca para colheita dessa espcie (SILVA et al., 2006). De acordo com a Tabela 9, houve diferena significativa entre as pocas para todos os constituintes qumicos do leo essencial de acessos de alecrim-pimenta. Em relao aos acessos houve diferena significativa para a maioria dos constituintes qumicos com exceo dos constituintes terpin 4-ol nas duas pocas, e xido de cariofileno na poca seca (Tabela 9). O acesso LSID-104 apresentou os maiores teores mdios de tricicleno, terpineno, terpineno e carvacrol nas duas pocas estudadas (Tabela 9). Para o constituinte para cimeno observou-se variao entre 6,98 % a 26,26 % na poca seca e de 2,95 % a 18,18 % na poca chuvosa (Tabela 9). Observou-se, em geral para os acessos, baixos teores dos constituintes qumicos tricicleno, mirceno, terpineno, terpin 4-ol, cariofileno e xido de cariofileno, que podero ser chamados de minoritrios (Tabela 9). Para terpineno houve variao de zero a 9,87 % na poca chuvosa (Tabela 9). Em relao ao constituinte carvacrol, o acesso LSID-104 apresentou diferena significativa quando comparado aos demais acessos tanto na poca seca quanto na chuvosa, diferindo estatisticamente dos outros tratamentos com valores de 56,05 e 53,32 % nas pocas chuvosa e seca, respectivamente (Tabela 9). No trabalho sobre a influncia das estaes seca e chuvosa de Lippia alba (Mill) N.E.Br., nas condies do Cear, avaliando as caractersticas qualitativa e quantitativa do leo essencial de Lippia alba de quimiotipo citral/limoneno, observou-se que possvel identificar a melhor poca de colheita para se ter um maior teor de leo essencial rico em citral e limoneno. Tambm, que o perodo de secagem e a poca de colheita influenciaram no teor de leo essencial e a umidade e massa do material sofreu

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influncia da umidade relativa do ar quando secos em ambiente natural (NAGAO et al., 2005). Em trabalho de caracterizao morfolgica e agronmica de acessos de manjerico (Ocimum basilicum L.) BLANK et al. (2004) encontraram grande variao entre os gentipos quanto ao teor de leo essencial variando de 1,1 L.ha-1 a 21,8 L.ha-1. J em relao ao peso de matria seca da parte area esses autores encontraram valores variando de 8,45 g planta-1 a 92,95 g planta-1. Arrigoni-Blank et al. (2005) em estudo de caracterizao morfolgica, agronmica e farmacolgica de acessos de sambacait (Hiptis pectinata (L.) Poit encontrou valores de matria seca variando entre 3,02 g planta-1 a 28,50 g planta-1. Tambm, em outro trabalho de Blank et al. (2007) analisando a influncia das estaes do ano no rendimento de massa fresca e seca, teor e rendimento do leo essencial de Java citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) observaram que a massa fresca e seca apresentou diferena significativa entre as pocas estudadas (vero, inverno, primavera e outono), sendo que os maiores pesos frescos foram encontrados no vero, primavera e outono e o menor peso foi encontrado no inverno. J, para peso seco os maiores valores foram encontrados no vero e outono e o menor valor no inverno, sendo que na primavera observou-se valor intermedirio. Para teores de leo os maiores valores foram observados na primavera, enquanto que rendimento de leo, os menores valores foram da poca chuvosa.

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TABELA 9. Mdias dos teores (%) tricicleno, mirceno, terpineno, para-cimeno, terpineno, terpin-4-ol, timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno no leo essencial das folhas frescas de acessos alecrim-pimenta, colhidos nas pocas seca e chuvosa. So Cristvo-SE, 2008.
Acessos LSID Teores (%) dos constituintes qumicos Tricicleno 0,52 ab A 0,31 b A 0,62 ab A 0,62 ab A 0,81 ab A 0,43 b A 0,95 ab A 0,60 ab A 1,18 a A 0,51 ab A 0,38 b A 0,15 b A 0,11 b A 0,00 b B 0,07 b B 0,20 b B 0,14 b A 0,36 ab B 0,18 b B 1,12 a A 0,26 b A 0,20 b A 8,33 5,85 Mirceno 2,06 ab A 1,19 ab A 1,35 ab A 1,59 ab A 1,64 ab A 0,92 b A 3,24 ab A 4,06 a A 2,76 ab A 2,82 ab A 1,61 ab A 1,63 ab A 0,45 ab A 0,11 b B 0,25 b B 0,55 ab A 0,58 ab A 2,16 ab A 1,54 ab B 2,78 a A 1,79 ab A 0,72 ab A 14,86 12,72 Terpineno 0,59 b A 0,54 b A 0,84 b A 1,10 ab A 1,12 ab A 0,68 b A 1,45 ab A 0,93 b A 2,01 a A 0,59 b A 0,68 bA 0,01 b A 0,10 b A 0,00 b B 0,08 b B 0,20 b B 0,15 b A 0,63 b B 0,15 b B 2,08 a A 0,15 b A 0,19 b A 40,68 38,83 para-Cimeno 9,74 bc A 7,51 c A 9,30 c A 8,62 c A 8,65 c A 10,50 bc A 26,26 a A 10,50 bc A 14,18 b A 6,98 c A 7,99 c A 6,71 b B 6,15 b B 2,95 b B 6,89 b B 5,74 b B 7,11 b B 18,18 a B 6,57 b B 15,06 a B 7,06 b B 6,10 b B 12,65 14,36 Terpineno Terpin 4-ol Timol metil anisol 0,69 d A 0,59 d A 0,49 d A 1,04 cd A 0,91 cd A 0,49 d A 10,48 a A 1,87 c A 4,24 b A 10,22 a A 0,46 d A 0,85 c A 0,52 c A 0,18 c A 0,20 c B 0,55 c A 0,72 c A 9,18 a B 0,87 c B 4,93 b B 8,33 a B 0,65 c A 11,56 7,96 Timol 77,61 a B 81,74 a B 78,04 a B 75,05 a B 77,18 a B 75,50 a B 47,97 b B 73,86 a B 7,56 c A 74,13 a B 77,54 a A 83,74 abc A 86,18 ab A 90,82 a A 85,80 ab A 83,42 abc A 81,06 cd A 64,95 d A 86,12 ab A 8,21 e A 79,27 cd A 76,26 c A 3,62 2,52 Carvacrol 0,07 b A 0,10 b A 0,11 b A 0,13 b A 0,06 b B 0,12 b A 0,26 b A 0,06 b A 53,32 a B 0,07 b B 0,00 b A 0,24 b A 0,15 b A 0,00 b A 0,29 b A 0,34 b A 0,33 b A 0,12 b A 0,23 b A 56,05 a A 0,19 b A 0,25 b A 2,58 2,28 cariofileno 3,93 ab A 1,75 abcA 3,59 abc A 5,03 a A 3,09 abc A 1,67 abc B 0,45 bc A 0,41 bc A 0,09 c A 0,51 bc A 5,61 a A 2,45 abcd A 3,14 abcd A 3,76 abc A 1,75 bcd B 3,40 abcd A 4,44 ab A 0,25 cd A 0,27 cd A 0,10 d A 0,25 cd A 6,55 a A 15,88 19,53 xido de cariofileno 0,14 a B 0,20 a B 0,38 a B 0,37 a A 0,25 a B 0,18 a B 0,09 a A 0,05 a A 0,00 a A 0,05 a A 0,48 a B 1,56 ab A 1,19 abcd A 0,98 bcde A 0,50 cdef A 1,37 abc A 1,44 abc A 0,14 ef A 0,22 ef A 0,00 f A 0,29 def A 2,31 a A 8,26 9,03

001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 301 001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 301 CV(a) CV(b)

poca Seca 1,98 b A 0,72 a A 1,86 b A 0,80 a A 1,80 b A 0,34 a B 3,75 ab A 0,73 a A 2,00 b A 0,68 a A 1,89 b A 0,44 a A 2,68 b A 0,68 a A 1,75 b A 0,83 a A 11,07 a A 0,74 a A 2,20 b A 0,50 a A 2,03 b A 0,68 a A poca Chuvosa 0,02 b A 1,09 a A 0,06 b A 0,57 a A 0,00 b A 0,94 a A 0,12 b B 0,29 a A 0,15 b A 0,78 a A 0,00 b A 1,01 a A 2,29 b A 0,42 a A 0,08 b A 0,84 a A 9,87 a A 0,75 a A 0,16 b A 0,73 a A 0,09 b A 1,00 a A 24,31 6,23 24,71 10,28

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Mdias seguidas das mesmas letras minsculas, nas colunas, e maisculas nas linhas, no diferem entre si, pelo teste de Tukey ( p 0,05).

4.4. CONCLUSES Para a maioria dos acessos de alecrim-pimenta estudados, o teor de timol maior na poca chuvosa do que na seca. O acesso LSID-102 apresenta alto rendimento de leo essencial, porm com teor de timol entre 47,97 % a 64,95 % na poca chuvosa. O acesso LSID-003 apresenta teor de timol de 90,02 % e o acesso LSID-104 apresenta alto teor de carvacrol (56,05 %) e baixo teor de timol (8,21 %).

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4.5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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CAPTULO 5 INFLUNCIA DA SECAGEM DAS FOLHAS NO LEO ESSENCIAL DE ACESSOS DE ALECRIM-PIMENTA (Lippia sidoides Cham) OLIVEIRA, Tereza Cristina. Influncia da secagem das folhas no leo essencial de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). In: Caracterizao e comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em So Cristvo - SE. 2008. Cap. V. Dissertao de Mestrado em Agroecossistemas Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influncia da secagem das folhas no leo essencial de 11 acessos de alecrim-pimenta colhidos nas pocas seca e chuvosa. Foi utilizado o delineamento de blocos ao acaso com duas repeties e cada parcela constitui-se de trs plantas. Testou-se a secagem das folhas a 40 C por cinco dias em 11 acessos de alecrim-pimenta, colhidas nas estaes seca e chuvosa. Avaliou-se o teor de leo essencial e os teores dos constituintes qumicos no leo essencial. A secagem proporcionou reduo de teor de leo essencial de alecrim-pimenta quando colhido na estao seca. Em geral, a secagem alterou os teores da maioria dos constituintes qumicos. Em relao aos constituintes qumicos majoritrios, a secagem alterou o teor de timol, mas no alterou o teor de carvacrol do leo essencial de acessos de alecrimpimenta. Palavras-chaves: Lippia sidoides, planta medicinal e aromtica nativa, ps-colheita, poca de colheita, timol, carvacrol.

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INFLUENCE OF DRYING OF LEAVES ON THE ESSENTIAL OIL OF PEPPER-ROSMARIN (Lippia sidoides Cham) ACCESSIONS OLIVEIRA, Tereza Cristina. Influence of drying of leaves on the essential oil of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions. In: Characterization and behavior of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham) accessions maintained in Active Germplasm Bank in the So Cristvo county, Sergipe State. 2008. Chap. V. Thesis Master of Science in Agroecosystems - Universidade Federal de Sergipe, So Cristvo. ABSTRACT The aim of this work was to evaluate the influence of drying of leaves on the essential oil of 11 pepper-rosmarin accessions harvested in the dry and rainy season. The randomized block design was used, with two replications, and every plot constituted three plants. We tested drying of leaves at 40oC for five days in 11 pepperrosmarin accessions, harvested in the dry and rainy season. We evaluated essential oil content and content of chemical constituents of the essential oils. Drying of pepperrosmarin leaves proportioned reduction of essential oil content when leaves were harvested in the dry season. Generally, drying of leaves modified the content of most of the chemical constituents. In relation of the major chemical constituents, drying modified thymol content, but did not modified the carvacrol content of the essential oil of the pepper-rosmarin accessions. Key words: Lippia sidoides, germplasm, native plants medicinal and aromatic plant, post harvest, harvest season, thymol, carvacrol.

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5.1. INTRODUO O uso de plantas medicinais e aromticas e seus diversos produtos so muito utilizados e conhecidos no tratamento e preveno de diversas doenas e disfunes orgnicas e nas indstrias de cosmticos e perfumarias, se constituindo numa crescente demanda (MARTINS & SANTOS, 1995). Lippia sidoides Cham., popularmente conhecida como alecrim-pimenta, alecrimbravo, alecrim-do-nordeste e estrepa-cavalo, uma planta tpica do semi-rido do Nordeste do Brasil, pertencente famlia Verbenaceae (LORENZI & MATOS, 2002). um arbusto caduciflio cujas folhas se extraem leo essencial rico em timol e carvacrol, dois compostos fenlicos de forte ao bactericida, fungicida, moluscida e larvicida. O leo essencial de alecrim-pimenta utilizado no combate infeco de garganta e boca, evitando crie dentria, aftas, previne e cura corrimento vaginal e micoses de pele como acne, sarna, panos brancos, impigem, caspa e mau-cheiro nos ps, axilas e virilhas (AGUIAR et al., 1983; MATOS et al., 1998; MATOS, 2002; LEAL et al., 2003). Tambm, possui forte ao moluscida contra o caramujo hospedeiro da esquistossomose Biomphalaria glabra, e ao larvicida contra o mosquito transmissor da dengue Aedes aegypti (LEMOS et al., 1990; LACOSTE et al., 1996; MATOS, 2000; LORENZI & MATOS, 2002; COSTA et al. 2002). Considerando cada vez maior a demanda e uso dos leos essenciais das plantas medicinais e aromticas, estudos tm sido desenvolvidos sobre as caractersticas qualitativas e quantitativas desses leos essenciais. A secagem das folhas pode alterar o rendimento e composio qumica dos leos essenciais (NAGAO et al., 2005; CARVALHO-FILHO et al., 2006; BLANK et al., 2007). E estudos devem ser realizados para verificar a necessidade e influncia deste processo O efeito da secagem sobre os constituintes dos leos essenciais de vrias plantas vem sendo estudado, visto que existem mudanas de concentrao dos constituintes quando associadas s caractersticas de mtodo de secagem e poca de colheita e, ainda, da planta sujeita secagem. A variabilidade fotoqumica em leo essencial tambm influenciada pela variabilidade gentica e alteraes na sntese bioqumica causadas pela interao dos fatores ambientais e ontogentico (NAGAO et al., 2005). Radnz et al. (2002) constataram um percentual de 2,93 % de leo essencial nas folhas de alecrim-pimenta e a depender da temperatura e do local de secagem este valor alterado. Em outro trabalho Radnz et al. (2001a), observaram que o processo de

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secagem das folhas desta espcie pode ser otimizado com o aumento da temperatura, sem que o mesmo implique em prejuzo qualitativo no teor do leo essencial. No estudo sobre a influncia da secagem das folhas de Lippia alba, nas estaes seca e chuvosa do Cear, avaliou-se que nas condies do experimento o perodo de secagem e a poca de colheita influenciaram o teor e a concentrao dos constituintes qumicos (NAGAO et al., 2005). Carvalho Filho et al. (2006), estudando a influncia do horrio de colheita, temperatura e tempo de secagem no leo essencial de manjerico, concluram que as plantas devem ser colhidas pela manh e a biomassa seca a 40 C por um perodo de cinco dias para a obteno de leo essencial rico em linalol. Todos esses trabalhos so de fundamental importncia para a realizao de estudos em melhoramento gentico de espcies medicinais visando a aplicao fitoteraputica visto que as qualidades dos leos essenciais esto ligadas as constituies qumicas e suas concentraes (MARTINS et al., 2006). Blank et al. (2005) avaliando a influncia da secagem de folhas no leo essencial de melissa (Melissa officinalis L.) observaram que a secagem influenciou no teor de leo essencial e teores dos constituintes qumicos, sendo que o maior teor de leo essencial foi obtido de folhas sem o tratamento de secagem colhidas s 17 horas. Entretanto, Blank et al. (2007), estudando a influncia da secagem no teor de leo de Java citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) observaram que a secagem influenciou positivamente. Em geral, houve aumento no teor de leo com o tratamento secagem. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influncia da secagem de folhas de alecrim-pimenta colhidas nas estaes seca e chuvosa. 5.2. MATERIAL E MTODOS Foram avaliadas amostras de leo essencial de 11 gentipos de alecrim-pimenta do Banco Ativo de Germoplasma (BAG) da Universidade Federal de Sergipe, colhidos em dezembro de 2005 e julho de 2006, nas estaes seca e chuvosa, respectivamente. O delineamento experimental foi blocos ao acaso com duas repeties, e cada parcela foi constituda por trs plantas. O experimento foi realizado, sob condies de campo, na Fazenda Experimental Campus Rural da UFS" no Municpio de So Cristvo, de latitude 11 00 S e longitude 37 12W. O espaamento utilizado foi 1,0 x 1,0m, em um Argissolo Vermelho-Amarelo distrfico, sob regime dirio de irrigao por gotejamento. 67

As variveis analisadas foram teor (%) de leo essencial e teores (%) dos constituintes qumicos do leo essencial. O teor de leo essencial foi determinado por hidrodestilao com aparelho tipo Clevenger (GUENTHER, 1972), acoplado a um balo de vidro de fundo redondo de 3000 mL. Foi utilizada uma manta como fonte de calor e foi pesado 100g de folhas frescas em 2000 mL de gua destilada condensados por um perodo de 160 minutos (EHLERT et al., 2006). O resultado foi expresso em % baseado em massa seca de folha. Os teores dos constituintes qumicos dos leos essenciais foram obtidos por anlise em cromatgrafo de fase gasoso, acoplado a um espectrmetro de massa (Shimadzu QP5050A-CG/EM), cujas condies operacionais utilizadas foram as seguintes: coluna capilar DB-5 (30 m x 0,25 mm x 0,25 m) conectado em um detector operando em impacto eletrnico a 70 eV; gs de arraste Hlio (fluxo 1,2 mL/min) e programao: 50oC (2 min), seguindo de um aumento de 4oC min-1 at atingir 200oC, depois de 15oC min-1 at atingir 300oC, mantendo constante esta temperatura por 15 minutos; temperatura do detector (ou interface) de 280oC; foi injetado um volume de 0,5 microlitros em acetato de etila; taxa de partio do volume injetado de 1:100. A anlise quantitativa dos constituintes foi realizada em um cromatrgrafo gasoso Shimadzu GC17 A equipado com detector de ionizao de chamas (FID), sob as seguintes condies operacionais: coluna capilar de slica fundida ZB-5MS (5 % dimetilpolisiloxane) com 30 m x 0,25 mm i. d. x 0,25 m de filme, usando as mesmas condies do CG-EM. A quantificao de cada constituinte foi realizada pela normatizao da rea (%). As concentraes dos compostos foram calculadas pela rea e colocado em ordem de eluio do CG. As identificaes dos constituintes foram realizadas por comparao de seus espectros de massas com os espectros existentes na literatura (ADAMS, 2001) com espectros do banco de dados do cromatgrafo chamado de espectroteca (NIST 107 e NIST 21) e, tambm, pela comparao dos ndices de reteno calculados com aqueles da literatura. O ndice de reteno de Kovats (IK) foi determinado utilizando uma srie homloga de nalcanos (C8-C18) injetados nas mesmas condies cromatrogrficas das amostras, utilizando a equao de Van den Dool & Kratz (1963). Os dados foram submetidos a uma anlise de varincia e as mdias foram comparadas, utilizando-se o teste de Tukey a 5 % de probabilidade, com o auxlio do programa computacional SISVAR verso 4.6.

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5.3. RESULTADOS E DISCUSSES Observou-se que a secagem proporcionou uma reduo significativa no teor de leo essencial de alecrim-pimenta na poca seca (Tabela 10). Notou-se tambm que, destilando folhas frescas na estao seca, o acesso LSID-102 apresentou maior mdia com 13,56 % se destacando dos demais acessos porm no divergindo de outros acessos. O acesso LSID-003 apresentou a menor mdia com 6,89 %, no diferindo estatisticamente de outros acessos (Tabela 10). Destilando folhas secas na estao seca, no se observaram diferenas entre os acessos para teor de leo essencial (Tabela 10). Essa perda de leo essencial durante o processo de secagem tambm foi observada em Lippia sidoides Cham. (RADNZ et al., 2001a); melissa (Melissa officinalis L.) (BLANK et al., 2005); Lippia alba (Mill) N.E. Br. (NAGAO et al., 2005); Ocimum basilicum L. (CARVALHO FILHO et al., 2006); e Lippia alba (Mill) N.E. Br.(BARBOSA & BARBOSA, 2006).

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TABELA 10. Teor de leo e constituintes qumicos tricicleno, mirceno, terpineno, para cimeno e terpineno de folhas frescas e secas de
alecrim-pimenta, nas estaes seca (dez/2005) e chuvosa (jul/2006), cultivados em 2005 e 2006. So Cristvo-SE, 2008.
Constituintes Qumicos (%) Acessos OE(%) Tricicleno Fresca 0,25 a A 0,32 a B 0,62 a A 0,62 a A 0,81 a A 0,43 a A 0,95 a A 0,60 a A 1,18 a A 0,51 a A 0,38 a A Seca 0,72 a A 1,06 a A 0,56 a A 0,68 a A 0,27 a A 0,77 a A 1,00 a A 0,32 a A 1,24 a A 0,76 a A 0,58 a A 8,98 0,25 cd A 0,33 bcd A 0,12 d A 0,33 bcd A 0,37 bcd A 0,31 bcd A 0,52 b A 0,43 bc A 0,87 a B 0,34 bcd A 0,26 cd A 22,91

Mirceno
Fresca 2,06 a B 1,19 a A 1,35 a A 1,59 a A 1,64 a A 0,92 a A 3,24 a A 4,06 a A 2,76 a A 2,82 a A 1,61 a A

Terpineno

para-Cimeno Fresca 9,74 bc B 7,51 c A 9,30 c A 8,62 c A 8,65 c B 10,50 bc A 26,26 a A 10,50 bc A 14,18 b A 6,98 c A 7,99 c B Seca 14,01 b A 8,05 cd A 10,4 bcd A 9,78 bcd A 12,01 bc A 8,44 cd A 24,12 a A 7,73 cd B 13,39 b A 5,74 d A 11,44 bc A 11,75 8,04 c A 7,25 c A 8,44 c A 8,14 c A 7,70 c A 8,01 c A 23,26 a A 8,19 c A 13,82 b A 7,68 c A 6,67 c A 11,88

Terpineno Fresca 1,98 b A 1,86 b A 1,80 b A 3,75 b A 2,0 b A 1,89 b A 2,68 b A 1,75 b A 11,07 a A 2,20 b A 2,04 b A Seca 2,96 b A 3,76 b A 2,77 b A 4,19 b A 4, 12 b A 3,39 b A 5,53 b A 1,65 b A 11,96 a A 2,00 b A 2,50 b A 38,93 0,37 d A 0,70 cd A 0,63 cd A 0,72 cd A 1,75 c A 0,57 cd A 3,58 b A 0,96 cd A 9,49 a A 0,41 d A 0,59 cd A 23,21

001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 301 Cva ( %) 001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 301 Cv b ( %)

Fresca Seca 9,44 ab A 3,50 a B 8,00 ab A 2,70 a B 6,89 b A 2,85 a B 7,90ab A 2,95 a B 7,73 ab A 2,85 a B 8,77 ab A 3,00 a B 13,56 a A 4,25 a B 10,75 ab A 3,60 a B 11,41 ab A 4,60 a B 7,81 ab A 5,10 a A 8,09 ab A 4,15 a B 28,44 7,11 abA 6,14 b A 5,66 b A 6,68 b A 6,35 b A 6,80 ab A 6,39 b A 7,08 ab A 6,03 b A 8,18 a A 7,02 abA 6,35 abc A 5,60 bc A 5,70 bc A 6,40 ab A 5,75 bc A 4,90 c B 6,15 abc A 6,70 ab A 5,50 bc A 7,40 a A 7,35 a A 6,36

0,15 bcd A 0,11 bcd B 0,00 d A 0,07 cd B 0,20 bcd B 0,14 bcd B 0,36 b B 0,18 bcd B 1,12 a A 0,26 bc A 0,20 bcd A

Folhas poca Seca Seca Fresca Seca 5,73 a A 0,59 b A 1,17 ab A 2,34 a A 0,54 b B 1,40 ab A 2,35 a A 0,84 ab A 0,73 ab A 1,52 a A 1,10 ab A 1,26 ab A 1,45 a A 1,12 ab A 0,51 b A 1,50 a A 0,68 b A 0,95 ab A 3,76 a A 1,45 ab A 0,67 ab B 2,11 b A 0,93 ab A 0,56 ab A 2,86 a A 2,02 a A 1,84 a A 3,04 a A 0,59 b A 0,63 ab A 1,50 a A 0,68 b A 0,57 ab A 16,68 38,63 Folhas poca Chuvosa 1,63 b B 2,30 a A 0,01 c A 0,17 d A 0,45 c A 0,86 b A 0,01 c B 0,52 bcd A 0,11 c A 0,44 b A 0,00 c B 0,40 cd A 0,25 c B 0,91 b A 0,00 c B 0,48 cd A 0,55 c B 1,04 b A 0,20 c B 0,71 bc A 0,58 c A 0,86 b A 0,15 c B 0,40 cd A 2,16 ab B 2,60 a A 0,63 b B 0,92 b A 1,54 b B 2,58 a A 0,15 c A 0,38 cd A 2,78 a B 2,45 a A 2,08 a B 1,47 a A 1,79 b B 2,30 a A 0,15 c A 0,23 d A 0,72 c A 0,88 b A 0,20 c A 0,40 cd A 15,37 25,85

70

6,71 bc A 6,15 bc A 2,95 c B 6,89 b A 5,74 bc A 7,11 b A 18,18 a B 6,57 bc A 15,06 a A 7,06 b A 6,10 bc A

0,02 c A 0,06 c A 0,00 c A 0,12 c A 0,15 c B 0,00 c A 2,29 b B 0,08 c B 9,87 a A 0,16 c A 0,09 c A

Mdias seguidas das mesmas letras minsculas, nas colunas, e maisculas nas linhas, no diferem entre si, pelo teste de Tukey ( p 0,05).

Na estao chuvosa, em geral a secagem no proporcionou reduo no teor de leo essencial (Tabela 10). Provavelmente, porque as estruturas de armazenamento de leo essencial pelas folhas na poca seca so mais superficiais do que na estao chuvosa. No trabalho de Radnz et al. (2001b) sobre secagem em camada delgada de folhas observaram-se que a secagem no apresentou diferena significativa quanto ao teor de leo essencial de alecrim-pimenta. Entretanto, no trabalho de Costa et al. (2005) analisando capim limo (Cymbopogon citratus (D. C.) Stapf) verificaram que o constituinte principal, o citral apresentou os maiores teores nas folhas secas em desumificador. Tambm Blank et al. (2007), estudando a influncia da secagem no teor de leo de Java citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) observaram que a secagem influenciou positivamente no teor de leo. Em geral, houve aumento no teor de leo com o tratamento secagem. Para os teores de constituintes qumicos, a secagem no alterou significativamente a concentrao no leo essencial de acessos de alecrim-pimenta na estao seca. Entretanto, na estao chuvosa houve diferena significativa entre os acessos e o tratamento secagem com exceo para o constituinte qumico carvacrol. Para o tricicleno, na estao chuvosa a maior mdia encontrada foi do acesso LSID-104 com 1,12 % na amostra fresca e 0,87 % na amostra seca. Em geral, observaram-se para os acessos, baixos teores dos constituintes qumicos tricicleno, mirceno, terpineno, terpin 4-ol, cariofileno e xido de cariofileno, que podero ser chamados de minoritrios (Tabela 10). Para o constituinte qumico mirceno no houve diferena significativa entre os acessos quando submetido ao tratamento secagem na estao seca. Porm, na estao chuvosa houve diferena significativa entre os tratamentos, sendo que o acesso LSID-104 apresentou o melhor desempenho com mdia de 2,78 % na amostra fresca. Na estao chuvosa, para o constituinte qumico mirceno os piores desempenhos foram apresentados pelos acessos LSID-003, LSID-004, LSID-005, LSID-006 e LSID-301 com mdias variando entre 0,11 a 0,72 % na amostra fresca e pelos acessos LSID-002, LSID-003, LSID-004, LSID-005, LSID-301 com mdias variando entre 0,44 a 1,04 %. As maiores mdias na amostra seca foram dos acessos LSID-001, LSID-102, LSID-103, LSID-104 e LSID105 com mdias variando entre 2,30 a 2,60 %. Na estao chuvosa, houve diferena

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significativa entre os acessos e o efeito da secagem, mostrando-se os melhores resultados nas amostras submetidas ao tratamento, exceto para o acesso LSID-104. Para o terpineno no houve diferena significativa entre as amostras submetidas ao tratamento secagem, exceto para o acesso LSID-002 e 102 na estao seca. Porm, na estao chuvosa, o terpineno apresentou maiores concentraes na amostra seca exceto para o acesso LSID-104. Os acessos LSID-001, LSID-103, LSID105 e LSID-301 no evidenciaram diferenas significativas entre as amostras seca e fresca. Para terpineno no houve diferena significativa entre as amostras secas e frescas na estao seca, apenas com destaque para o acesso LSID-104 que diferiu estatisticamente dos demais tanto na amostra fresca quanto na seca nas duas estaes, com mdias de 11,07 e 11,96 % na estao seca e 9,87 e 9,49 % na estao chuvosa respectivamente (Tabela 10). Para os constituintes qumicos secundrios tricicleno e terpineno houve diferena significativa entre as mdias de acessos das amostras secas na poca chuvosa. Nas plantas medicinais e aromticas, ricas em leos essenciais, as condies limitantes de solo na poca seca, podem influenciar na concentrao e rendimento de metablitos secundrios. O estresse osmtico tambm pode afetar o acmulo de leo essencial por meio dos efeitos da assimilao lquida e da partio de assimilados sobre o processo de crescimento e diferenciao. Assim, possvel uma alterao na estrutura molecular pela adio de carbonos surgindo novas estruturas, formulaes e acmulo de terpenos (CHARLES et al., 1990). Para o constituinte qumico para-cimeno, um dos trs constituintes qumicos majoritrios, a maior mdia de amostras de folhas frescas e secas foi observada no acesso LSID-102 com 26,26 e 24,12 % e 18,18 e 23,26 % na estao seca e chuvosa respectivamente. Esses acessos divergem estatisticamente dos demais acessos. As menores mdias foram apresentadas pelos acessos LSID-002, 003, 004, 005, 105 e 301 com mdias entre 7,00 a 9,30 % nas amostras frescas na estao seca, embora no divergindo de outros acessos. A menor mdia foi do acesso LSID-003 (2,95 %) nas amostras frescas, na estao chuvosa, mas semelhante a vrios outros acessos. Para o terpineno no houve diferena significativa em funo do efeito secagem na estao seca. Entretanto na chuvosa houve diferena significativa para o efeito secagem e entre os acessos onde as maiores mdias foram apresentados pelos

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acessos na amostra seca. O acesso LSID-104 se destacou com a maior mdia 11,07 e 9,87 % na amostra fresca e 11,96 % e 9,49 % na amostra seca nas duas estaes. Silva et al. (2006), observaram que a perda dos princpios ativos que ocorrem aps a colheita, deve-se a diversos fatores como degradao por processos metablitos, hidrlises, degradao pela luz, fermentao, calor e contaminao microbiolgica.

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TABELA 11. Mdias dos teores de terpin 4-ol, timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno no leo essencial de acessos de alecrim-pimenta colhidos nas estaes seca (dez/2005) e chuvosa (jul/2006). So Cristvo-SE, 2008.
Constituintes Qumicos (%) Timol Carvacrol Folhas Estao Seca Fresca Seca Fresca Seca 77,61 a A 64,83 b B 0,07 b A 0,00 b A 81,74 a A 71,73 ab B 0,01 b A 0,23 b A 78,04 a A 78,54 a A 0,11 b A 0,00 b A 75,05 a A 74,51 ab A 0,13 b A 0,00 b A 77,18 a A 76,58 ab A 0,06 b A 0,00 b A 75,50 a A 78,68 a A 0,12 b A 0,00 b A 47,97 b A 51,04 c A 0,26 b A 0,08,b A 73,86 a A 83,25 a A 0,06 b A 0,09 b A 7,56 c A 7,75 d A 53,32 a A 52,62 a A 74,13 a A 77,16 ab A 0,07 b A 0,20 b A 77,54 a A 76,52 ab A 0,00 b A 0,00 b A 5,17 7,09 Folhas Estao Chuvosa 83,74 b A 83,18 a A 0,24 b A 0,16 b A 86,18 ab A 77,95 a B 0,15 b A 0,31 b A 90,82 a A 79,81 a B 0,00 b A 0,22 b A 85,80 ab A 79,60 a B 0,29 b A 0,32 b A 83,41 b A 76,23 a B 0,34 b A 0,42 b A 81,06 bc A 80.92 a A 0,33 b A 0,12 b A 64,95 d A 56,66 b B 0,12 b A 0,19 b A 86,11 ab A 83,21 a A 0,23 b A 0,21 b A 8,21 e A 8,41 c A 56,05 a A 55,40 a A 79,27 bc A 77,40 a A 0,19 b A 0,34 b A 76,26 c A 76,71 a A 0,25 b A 0,21 b A 2,68 6,72

Acessos

Terpin 4-ol Fresca 0,72a A 0,80 a A 0,34 a A 0,73 a A 0,69 a A 0,44 a A 0,68 a A 0,83 a A 0,74 a A 0,50 a A 0,68 a A Seca 1,36 a A 1,13 a A 0,46 a A 0,65 a A 0,36 a A 0,37 a A 0,78 a A 0,42 a A 0,81 a A 0,59 a A 0,34 a A 9,59 0,61 a B 0,74 a A 0,67 a A 0,70 a A 0,87 a A 0,67 a A 0,70 a A 0,60 a A 0,82 a A 0,73 a A 0,78 a A 30,68

Timol metil anisol Fresca 0,69 c A 0,59 c A 0,49 c A 1,04 c A 0,91 c A 0,49 c A 10,48 a A 1,87 c A 4,24 b A 10,22 a A 0,46 c A Seca 1,13 c A 1,21 c A 0,75 c A 0,88 c A 0,50 c A 0,51 c A 11,09 a A 0,90 c A 4,15 b A 9,76 a A 0,20 c A 22,97 0,46 b A 0,66 b A 0,36 b A 0,58 b A 0,67 b A 0,52 b A 3,97 ab B 0,74 b A 3,97 ab A 8,14 a A 0,59 b A 19,02

Cariofileno Fresca Seca 3,93 ab B 5,73 a A 1,75 bcd B 4,91 a A 3,59 abc A 3,54 abc A 5,03 a A 4,04 a A 3,09 abcd A 4,00 a A 1,67 bcd B 3,56 ab A 0,45 d A 0,63 bcd A 0,41 d A 0,34 d A 0,09 d A 0,12 dA 0,51cd A 0,44 cd A 5,61 a A 5,95 a A 32,06 2,45 bcd A 3,14 bc B 3,76 bc B 1,75 cd B 3,40 bc B 4,44 ab A 0,25 d A 0,27 d A 0,10 d A 0,25 d A 6,55 a A 2,94 b A 4,74 ab A 5,24 ab A 4,87 ab A 5,21 ab A 4,82 ab A 0,42 c A 0,32 c A 0,08 c A 0,27 c A 6,85 a A 24,27

xido de Cariofileno Fresca 0,14 a A 0,20 a A 0,38 a A 0,37 a A 0,25 a A 0,18 a A 0,09 a A 0,05 a A 0,00 a A 0,05 a A 0,48 a A 8,71 1,56 ab A 0,55 abc B 1,19 abcde A 1,20 ab A 0,98 abcdef A 0,64 abc A 0,50 bcdef A 0,99 abc A 1,37 abcd A 1,19 b A 1,44 abc A 0,98 abc A 0,14 ef A 0,09 bc A 0,22 def A 0,15 bc A 0,00 e A 0,00 c A 0,29 cdef A 0,36 abc A 2,31 a A 1,55 a B 9,23 Seca 0,00 a A 0,41 a A 0,14 a A 0,20 a A 0,00 a A 0,19 a A 0,18 a A 0,00 a A 0,10 a A 0,28 a A 0,00 a B

001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 301 Cv ( %) 001 002 003 004 005 006 102 103 104 105 301 Cv ( %)

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1,09 a A 0,57 a A 0,94 a A 0,29 a A 0,78 a A 1,01 a A 0,42 a A 0,84 a A 0,75 a A 0,73 a A 1,00 a A

0,85 bc A 0,52 c A 0,18 c A 0,20 c A 0,55 c A 0,72 c A 9,18 a A 0,87 bc A 4,93 ab A 8,33 a A 0,65 c A

Mdias seguidas das mesmas letras minsculas, nas colunas, e maisculas nas linhas, no diferem entre si, pelo teste de Tukey (p 0,05)

Para o timol, principal constituinte qumico, houve diferena significativa entre os acessos e entre o tratamento de secagem (Tabela 11). O acesso LSID-104 apresentou pior desempenho, tanto nas amostras de folhas sem o tratamento de secagem (amostras frescas) quanto nas amostras submetidas secagem (amostras secas). Em geral, as maiores mdias foram identificadas nas amostras sem o tratamento secagem na estao chuvosa. O acesso LSID-003 se destacou por apresentar a maior mdia (90,82 %) no divergindo estatisticamente dos acessos LSID-001, LSID-002, LSID-003, LSID-004, LSID-005, LSID006, LSID-103, LSSID-105 e LSID-301 e o acesso LSID-104 a menor mdia (8,21 %) na estao chuvosa. Para o constituinte qumico carvacrol, um dos principais, no houve diferena significativa da secagem (Tabela 11). Observaram-se diferenas apenas entre acessos, onde o acesso LSID-104 se destacou. As maiores mdias foram encontradas no acesso LSID-104 com valores variando entre 55,40 a 56,05 % e 52,62 a 53,32 %, nas amostras com e sem o tratamento secagem nas duas estaes. O tratamento secagem teve influncia no teor de leo essencial e nos constituintes qumicos sua influncia foi para terpin 4-ol, terpineno, timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno (Tabela 10 e 11). O tratamento secagem reduziu na mdia de todos os acessos, 7,78 % na estao chuvosa a 60,53 % na estao seca. Para os teores de constituintes qumicos majoritrios timol e carvacrol, houve reduo apenas para o timol com valores variando em mdia de 0,74 % e 5,54 % para o timol nas estaes seca e chuvosa respectivamente. Para o carvacrol no houve diferena significativa no tratamento secagem.

Observou-se que a secagem em geral no influenciou os teores de nas variveis terpin 4-ol, timol metil anisol e xido de cariofileno (Tabela 11).
Innecco et al. (1999), estudando a planta medicinal hortel rasteira (Mentha x vilosa Huds) observaram que o perodo de secagem influenciou na extrao do leo essencial por arraste a vapor e no teor de xido de piperotina, porm no afetou a quantidade do leo, nas pocas seca e chuvosa. No trabalho de Nagao et al. (2005), sobre a influncia do perodo de secagem nas estaes seca e chuvosa no leo essencial de Lippia alba (Mill) N.E. Br., nas condies do Cear observou diferenas significativas para os caracteres percentagem de umidade, massa do material vegetal e teor de leo essencial entre os acessos estudados. O teor de leo essencial foi maior na estao seca do que na chuvosa, resultado semelhante ao encontrado neste trabalho. A concluso de Nagao et al. (2005) que o perodo de secagem e a poca de colheita influenciaram o teor de leo essencial e os constituintes qumicos citral e limoneno. Resultados semelhantes tm sido demonstrados por Ehlert (2000) em alfavaca-cravo

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(Ocimum gratssimum L.) e Matos (2000) em hortel japonesa (Mentha arvensis L. var piperascens). O efeito de secagem sobre os constituintes qumicos volteis das plantas medicinais e aromticas tem sido objeto de vrios estudos que vem demonstrando alteraes de concentraes em funo das caractersticas de secagem e das prprias variveis analisadas (PASCUAL et al., 2001). Em geral, a secagem no mostrou diferenas significativas para os constituintes qumicos analisados.

Carvalho Filho et al. (2006) estudando a influncia do perodo de secagem em manjerico (Ocimum basilicum L.) verificaram que em geral, houve reduo dos teores dos constituintes qumicos com esse tratamento. Com relao ao teor de leo essencial houve reduo quando submetido ao processo de secagem. Barbosa & Barbosa (2006) avaliando a influncia da secagem no teor e composio qumica do leo de erva cidreira (Lippia alba (Mill) N. E. Br) verificaram uma reduo entre 12 e 17 % no teor de leo essencial quando comparado ao obtido sem o tratamento da secagem. Nos teores de constituintes qumicos principais do leo essencial verificaram um aumento de 6,89 % do teor de citral em relao ao obtido sem tratamento. Blank et al. (2005) avaliando a influncia da secagem de Melissa oficinalis L. verificaram que o processo de secagem reduziu os teores de nerol e geranol. Recentemente, Blank et al. (2007) estudando a influncia da secagem no teor de leo de Java citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) observaram que a secagem influenciou positivamente e, em geral, houve aumento no teor de leo com o tratamento da secagem.
5.4. CONCLUSES A secagem proporciona reduo de teor de leo essencial de alecrim-pimenta quando colhido na poca seca. Na poca chuvosa, tambm houve reduo do teor de leo dos valores em todos os acessos inclusive no acesso LSID-006 a reduo foi significativa estatisticamente. Em geral, a secagem no altera o teor de constituintes qumicos do leo essencial de acessos de alecrim-pimenta com exceo do timol que apresentou reduo, principalmente na poca chuvosa.

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5.5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ADAMS, R. P. Identification of essential oil components by gas chromatography/mass spectroscopy. Allured: Carol Stream, 2001. 469 p. AGUIAR, L. B. M. A.; MATOS, F. J. A. Atividade antibitica de plantas da flora nordestina - II. Cincia e Cultura, v. 36, p. 464, 1983.

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ANEXOS

ANEXO A TABELA 1A Resumo da anlise de varincia para altura de planta, dimetro de copa, comprimento e largura de folha, relao comprimento/ largura (C/L) de folha, massa fresca de folha, massa seca de folha e caule, teor e rendimento de leo essencial de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) do Banco Ativo de Germoplasma da UFS. So Cristvo, UFS, 2008.................... Resumo da anlise de varincia para: altura de planta (cm), massa fresca (MFF) e seca (MSF) de folha, teor (%) e rendimento (mL planta-1) de leo essencial de acessos de alecrim-pimenta cultivados em 2005 e 2006. UFS, So Cristvo-SE, 2008............... Resumo da anlise de varincia dos constituintes qumicos tricicleno, mirceno, terpineno, orto- cimene, -terpineno e terpin 4-ol do leo essencial das folhas de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), colhidos em 2005 e 2006. UFS, So Cristvo-SE, 2008....................... Resumo da anlise de varincia das variveis: massa fresca (com transformao), massa seca, teor e rendimento (com transformao) de leo de alecrim-pimenta em duas pocas (seca e chuvosa) de cultivo. So Cristvo-SE. 2008...

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82

TABELA 2A

83

TABELA 3A

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TABELA 4A

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TABELA 5A

Resumo da anlise de varincia das variveis: massa fresca (com transformao) , massa seca, teor e rendimento (com transformao) de leo de alecrim-pimenta em duas pocas (seca e chuvosa) de cultivo. So Cristvo-SE. 2008....................... Resumo da anlise de varincia dos constituintes qumicos: tricicleno, mirceno, terpineno, para-cimeno, terpineno e terpin 4-ol do leo essencial de alecrimpimenta em duas pocas (seca e chuvosa) de cultivo. So Cristvo-SE, 2008....................... Resumo da anlise de varincia dos constituintes qumicos: timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido cariofileno, do leo essencial de alecrim-pimenta em duas pocas (seca e chuvosa) de cultivo. So Cristvo-SE.
2008..................................................

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TABELA 6A

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TABELA 7A

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TABELA 8A

Resumo da anlise de varincia de teor de leo e constituintes qumicos: tricicleno, mirceno, erpineno, para-cimeno e terpineno do leo essencial de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), nas pocas seca e chuvosa. So Cristvo-SE. 2008. Resumo da anlise de varincia de teor de leo e constituintes qumicos: terpin 4-ol, timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno do leo essencial de alecrimpimenta (Lippia sidoides Cham.), nas pocas seca e chuvosa. So Cristvo-SE, 2008.......................

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TABELA 9A

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ANEXO A TABELA 1A. Resumo da anlise de varincia para altura de planta, dimetro de copa, comprimento (C) e largura (L) de folha, relao comprimento/largura (C/L) de folha, massa fresca de folha, massa seca de folha e caule, teor e rendimento de leo essencial de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) do Banco Ativo de Germoplasma da UFS. So Cristvo, UFS, 2008. QM FV Bloco Acesso Resduo CV (%) GL 1 9 9 Teor de Altura Relao Massa fresca Massa seca de Massa seca Dimetro Comprimento Largura leo de C/L de de copa de folha de folha de folha folha de caule essencial planta folha 1238,74 252,19 0,279 0.262 0,043 10759,37 8,36 913,71 4,76 * ns ** * ** ** ns 390,97 893,17 1,514 0,282 0,065 62951,54 8702,458** 5835,051 3,318ns 114,64 591,25 0,198 0,053 0,009 10805,65 1578,61 1955,59 1,057 8,34 24,55 13,55 12,33 5,46 36,79 3634 42,93 18,40 Rendimento de leo essencial 2,660 13,007* 3,401 33,91

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TABELA 2A Resumo da anlise de varincia para: altura de planta (cm), massa fresca (MFF) e seca (MSF) de folha, teor (%) e rendimento (mL planta-1) de leo essencial de acessos de alecrim-pimenta colhidos em 2005 e 2006. UFS, So CristvoSE, 2008.
QM Altura 1849,60 1424,24* 382,62 53141,18** 553,07 ns 245,85 11,86 9,51 MFF 421002,07 173,16* 37,22 1863,70** 28,55ns 31,30 26,91 24,68 MSF 5755,63 53,61* 10,73 305,43** 9,02ns 4,39 25,82 16,61 OE (%) 1,71 3,04** 0,54 82,96** 0,84ns 0,83 17,72 21,97 OE (mLplanta-1) 396,21 3,13* 0,99 60,96** 1,27 ns 1,00 26,95 27,10

FV Blocos Acesso Resduo (a) Anos Acessos x Anos Resduo(b) CVa (%) CVb (%)

GL 1 9 9 1 9 10

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TABELA 3A Resumo da anlise de varincia dos constituintes qumicos tricicleno, mirceno, terpineno, para-cimeno, terpineno e terpin 4-ol do leo essencial das folhas de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), colhidos em 2005 e 2006. UFS, So Cristvo-SE, 2008.
QM
Tricicleno mirceno 0,0003 0,55** 0,03 7,40** 0,03 ns 0,02 24,41 20,36 0,02 4,65** 0,04 29,43** 0,42** 0,23 10,22 7,53 terpineno 0,01 1,66** 0,01 6,27** 0,03 ns 0,01 16,18 15,74 Paracimeno 5,86 84,21** 2,76 41,39* 4,19 ns 6,61 17,96 27,78 terpineno 0,06 48,29** 0,42 87,91** 1,13* 0,38 23,47 22,52 Terpin 4-ol 0,32 0,08 ns 0,09 0,28** 0,08* 0,02 37,89 18,35

FV Blocos Acessos Resduo (a) Anos) Acessos x Anos Resduo(b) CVa (%) CVb (%)

GL 1 9 9 1 9 10

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TABELA 4A Resumo da anlise de varincia dos constituintes qumicos: timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno do leo essencial das folhas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), cultivados em 2005 e 2006. UFS, So Cristvo-SE, 2008.
QM
Carvacrol 0,06 1017,25** 0,09 10,73** 11,74** 0,08 5,92 5,62 cariofileno 0,11 1,13** 0,01 0,14 ns 0,02 ns 0,15 4,32 23,29 xido de cariofileno 0,0325 0,14** 0,01 0,07** 0,03* 0,01 9,08 6,32

Timol metil Timol anisol Blocos 1 4,34 6,11 Acesso (A) 9 1,91** 2028,25** Resduo (a) 9 0,12 7,84 Anos (Anos) 1 0,05 ns 1603,77** Acessos x Anos 9 0,17ns 27, 12* Resduo(b) 10 0,12 7,75 CVa (%) 19,95 4,08 CVb (%) 19,99 4,06 * significativo pelo teste t a 5 % de probabilidade ** significativo pelo teste t a 1 % de probabilidade ns no significativo

FV

GL

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TABELA 5A Resumo da anlise de varincia das variveis: massa fresca (com transformao), massa seca, teor e rendimento (com transformao) de leo de alecrimpimenta em duas pocas (seca e chuvosa) de cultivo. So Cristvo-SE. 2008.
QM MSF (g) 21118,96 44091,95* 10108,66 2897,12 ns 3633,28 ns 3382,56 39,00 22,56 OE (%) 0,014 0,41** 0,05 0,06 ns 0,26** 0,03 8,28 6,49 OE (mL/planta) 7,47 3,26* 1,07 2,09ns 1,21 ns 0,65 22,52 17,63

MFF (g planta-1) Blocos 1 270,41 Acessos (A) 10 140,70* Resduo (a) 10 32,78 pocas (E) 1 100,23* AxE 10 33,49 ns Resduo b 11 18,03 CV (a) 21,07 CV (b) 15,63 * significativo pelo teste t a 5 % de probabilidade

FV

GL

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TABELA 6A Resumo da anlise de varincia dos constituintes qumicos: tricicleno, mirceno, terpineno, para-cimeno, terpineno e terpin 4-ol do leo essencial de alecrim-pimenta em duas pocas (seca e chuvosa) de cultivo. So Cristvo-SE, 2008.

QM FV GL Tricicleno mirceno terpineno , 0,3128 1,0263** 0,0700 4,0748** 0,0931ns 0,0638 40,68 38,83 Paracimeno 4,667 92,0491** 1,4392 91,4401** 6,7990* 1,8558 12,65 14,36 -terpineno Terpin-4-ol 0,884 1,502** 0,150 3,559** 0,090ns 0,155 24,31 24,71 0,023 0,009ns 0,006 0,019 ns 0,019 ns 0,01 6,23 10,28

Blocos 1 0,00243 0,1501 Acessos (A) 10 0,043* 0,289** Resduo (a) 10 0,009 0,055 pocas (E) 1 0,271** 0,954** AxE 10 0,007 ns 0,042 * Resduo b 11 0,004 0,040 CV (a) 8,33 14,86 CV (b) 5,85 12,72 * significativo pelo teste t a 5 % de probabilidade ** significativo pelo teste t a 1 % de probabilidade ns no significativo

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TABELA 7A Resumo da anlise de varincia dos constituintes qumicos: timol metil

anisol, timol, carvacrol, -cariofileno e xido cariofileno, do leo essencial de alecrimpimenta em duas pocas (seca e chuvosa) de cultivo. So Cristvo-SE. 2008.
QM Timol metil Timol anisol Blocos 1 0,0063 2,388 Acessos (A) 10 52,21** 2004,25** Resduo (a) 10 0,09 6,69 poca (E) 1 1,83** 576,66** AxE 10 0,59** 29,63** Resduo b 11 0,04 3,24 CV (a) 11,56 3,62 CV (b) 7,96 2,52 * significativo pelo teste t a 5 % de probabilidade ** significativo pelo teste t a 1 % de probabilidade ns no significativo FV GL Carvacrol 0,00014 1081,26** 0,02 1,39** 0,64 ** 0,01 2,58 2,28 -cariofileno 0,012 1,13** 0,07 0,001 ns 0,18 ns 0,11 15,88 19,53 xido de cariofileno 0,012 0,10** 0,01 0,77** 0,05* 0,01 8,26 9,03

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TABELA 8A Resumo da anlise de varincia de teor de leo e constituintes qumicos: tricicleno, mirceno, terpineno, para-cimeno e terpineno do leo essencial de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), nas pocas seca e chuvosa. So Cristvo-SE. 2008.
QM FV Blocos Acesso (A) Secagem (S) AxS Resduo a CV (a) GL 1 10 1 10 21 Teor de leo 18,0352 6,167ns 336,11** 3,227ns 3,271 28,44 Tricicleno mirceno terpineno 2,3831 0,542** 0,056 ns 0,234ns 0,133 38,63 0,0004 0,890** 0,458** 0,093** 0,013 25,85 Para-cimeno 2,2275 101,637** 2,165 ns 6,082** 1,716 11,75 7,0320 82,906** 31,739** 3,834** 1,116 11,88 terpineno 17,0751 30,201** 12,690* 0,893 ns 1,894 38,93 0,035 32,034** 4,353** 0,268* 0,118 23,21 poca Seca 0,0188 2,7750 0,028ns 0,229* ns 0,011 0,156ns 0,018ns 0,142ns 0,013 0,089 8,98 16,68 poca Chuvosa Blocos 0,1964 0,031 0,187 Acesso (A) 10 1,822** 0,238** 2,906** secagem (S) 1 2,912** 0,161** 1,944** ns ** AxS 10 0,323 0,019 0,118* Resduo a 21 0,167 0,005 0,043 CV (a) 6,36 22,91 15,37 * significativo pelo teste t a 5 % de probabilidade ** significativo pelo teste t a 1 % de probabilidade ns no significativo

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TABELA 9A Resumo da anlise de varincia de teor de leo e constituintes qumicos: terpin 4-ol, timol metil anisol, timol, carvacrol, cariofileno e xido de cariofileno do leo essencial de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), nas pocas seca e chuvosa. So Cristvo-SE, 2008.
FV Blocos Acesso (A) secagem (S) AxS Resduo a CV (a) GL 1 10 1 10 21 QM xido de Timol metil Timol Carvacrol cariofileno cariofleno anisol poca Seca 0,4893 57,0456 0,1265 5,8473 0,0050 60,19** 1853,27** 1017,15** 16,36** 0,007ns 0,013 ns 2,840 ns 0,100ns 0,05ns 0,112 7,09 0,2565 1119,79** 0,007 ns 0,058 ns 0,126 6,72 4,557** 1,42ns 0,748 32,06 1,95 20,54** 8,067 ** 1,023 ns 0,469 2,82 0,008ns 0,009ns 0,009 8,71 0,037 0,20** 0,054ns 0,022ns 0,015 9,23 0,24 ns 37,92** 0,42 12,19 22,97 5,17 poca Chuvosa 1,372 6,210 1,936** 2023,01 ** 190,403** 17,009 ** 3,819 2,68

Terpin-4-ol 0,2327 0,028ns 0,00 ns 0,014 ns 0,015 9,59

Blocos 0,071 Acesso (A) 10 0,063 ns secagem 1 0,026 ns 0,121ns (S) AxS 10 0,078 ns 0,0907ns Resduo a 21 0,051 0,097 CV (a) 30,68 19,02 * significativo pelo teste t a 5 % de probabilidade ** significativo pelo teste t a 1 % de probabilidade

ns no significativo

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ANEXO B FIGURA 1B Imagens que expressam as caractersticas morfolgicas dos acessos LSID-001 (A), LSID-002 (B), LSID-003 (C), LSID-004 (D), LSID-005 (E), LSID-006 (F), LSID102 (G), LSID-103 (H), LSID-104 (I), LSID-105 (J) de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) oriundos do Banco Ativo de Germoplasma da UFS. So Cristvo, UFS, 2008......... Alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). So Cristrovo, 2007............ Secagem na estufa. So Cristvo, UFS, 2007.......................................... Hidrodestilao em aparelhos tipo Clevenger. So Cristvo, UFS, 2007.................................................... Medio do teor de leo essencial. So Cristvo, UFS, 2007.................. Cromatgrafo CG/MS. So Cristvo, UFS, 2007......................... Laboratrio (Cromatgrafo CG/MS, So Cristvo, UFS, 2007.................. Estrutura qumica do constituinte do timol Estrutura qumica do constituinte do carvacrol

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92 93 93

FIGURA 2B FIGURA 3B FIGURA 4B

93 93 93 93 94 94

FIGURA 5B FIGURA 6B FIGURA 7B FIGURA 8B FIGURA 9B

91

ANEXO B

A)

B)

C)

D)

E)

F)

G)

H)

I)

J)

FIGURA 1B. Imagens que expressam as caractersticas morfolgicas dos acessos LSID-001 (A), LSID-002 (B), LSID-003 (C), LSID-004 (D), LSID-005 (E), LSID-006 (F), LSID-102 (G), LSID-103 (H), LSID-104 (I), LSID-105 (J) de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.) oriundos do Banco Ativo de Germoplasma da UFS. So Cristvo, UFS, 2008.

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FIGURA 2B. Alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). So Cristrovo, 2007.

FIGURA 3B. Secagem na estufa. So Cristvo, UFS, 2007.

FIGURA 4B. Hidrodestilao em aparelhos tipo Clevenger. So Cristvo, UFS, 2007.

FIGURA 5B. Medio do teor de leo essencial. So Cristvo, UFS, 2007.

FIGURA 6B. Cromatgrafo CG/MS. So Cristvo, UFS, 2007.

FIGURA 7B. Laboratrio (Cromatgrafo CG/MS, So Cristvo, UFS, 2007.

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FIGURA 8B. Estrutura qumica do constituinte do timol.

FIGURA 9B. Estrutura qumica do constituinte do carvacrol.

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