Actividad antibacteriana de los aceites esenciales de plantas contra Escherichia coli O157: H7 RESUMEN BURT SA Y Reinders RD. 2003.

Objetivos: Cuantificar las propiedades antibacterianas de cinco aceites esenciales (EO) en una cepa no toxignica de Escherichia coli O157: H7 en la presencia y la ausencia de un estabilizador y un emulsificante y en tres diferentes temperaturas. Mtodos y resultados: Cinco EO conocido para exhibir propiedades antibacterianas se pasar por la difusin de disco de ensayo y los ms activos fueron seleccionados para continuar sus estudios en microdilucin colorimtrica ensayos. Organo (Origanum vulgare) y el tomillo (Thymus vulgaris, la luz roja y las variedades) EO tuvo la ms fuerte propiedades bacteriostticas y bactericidas, seguido de la baha (Pimenta racemosa) y yemas de clavo (Eugenia caryophyllata sinnimo: Syzygium aromaticum) igualdad de oportunidades. Aceite de organo se colicidal a 625 ll l )1 a las 10, 20 y 37 C. La adicin de 005% (w / v) de agar como estabilizador reforzado las propiedades antibacterianas, sobre todo en los 10 C, mientras que 025% (w / v), lecitina reducida actividad antibacteriana. Micrografas de barrido electrnico mostr cambios morfolgicos de clulas tratadas. Conclusiones: El organo y el tomillo poseen igualdad de oportunidades significativas colicidal in vitro colistatic y propiedades, que son expuesto en un amplio rango de temperatura y sustancialmente mejorado con la adicin de agar como estabilizador. Bay y diente brote OE son menos activos. Lecitina disminuido propiedades antibacterianas. La concentracin bactericida de organo EO irreversiblemente daado E. coli O157: H7 de las clulas dentro de 1 min. Importancia e impacto del estudio: El organo y tomillo luz OE, en particular cuando por mayor de agar estabilizador, puede ser eficaz en la reduccin del nmero o impedir el crecimiento de E. coli O157: H7 en los alimentos. Palabras clave: alamarBlue TM , Bactericida, bacteriosttico, aceite esencial, Escherichia coli O157: H7, organo, tomillo. INTRODUCCIN Escherichia coli O157: H7 es una preocupacin para la salud pblica en un escala mundial (Mead y Griffin 1998) y se encuentra en una amplia variedad de productos alimenticios como la carne y productos crnicos, leche, yogurt, agua, ensalada de verduras, frutas, zumos de frutas y sidra (Buchanan y Doyle 1997; Mead y Griffin 1998). Pasteurizacin y la cocina son adecuados los mtodos de asegurar cin que se eliminan las clulas viables, pero no es un tratamiento trmico deseable que todos los alimentos y la contaminacin cruzada no puede siempre ser prevenida. El control de los nmeros y el crecimiento de E. coli O157: H7, por lo tanto, sigue siendo un objetivo importante

para los sectores de la industria de la produccin de alimentos. Durante mucho tiempo se ha reconocido que algunas instalaciones esenciales aceites (EO) presentan propiedades antimicrobianas (Finnemore 1926; Koedam 1977). Estudios recientes han demostrado que la igualdad de oportunidades de organo (Origanum vulgare), tomillo (Thymus vulgaris), la baha de (Pimenta racemosa) y clavo (Eugenia caryophyllata syno NYM: Syzygium aromaticum) se encuentran entre los ms activos en este respecto, en contra de cepas de E. coli (Smith-Palmer et al. 1998; Martillo et al. 1999; Decanos y Dorman 2000). Anlisis qumico de estos aceites ha demostrado a los mandantes principalmente el carvacrol, timol, citral, eugenol y sus precursores (Salzer 1977; Lattaoui y Tantaoui-Elaraki 1994; Juliano et al. 2000; Demetzos y Perdetzoglou 2001), aunque la composicin de la igualdad de oportunidades a partir de una especies de plantas pueden diferir entre las temporadas de cosecha (Arras Grella y 1992; McGimpsey y Douglas 1994) y geogrfica entre las fuentes (Cosentino et al. 1999; Juliano et al. 2000). Varios de los componentes de la igualdad de oportunidades exposicin importantes propiedades antimicrobianas cuando se prob por separado (Kim et al. 1995; Ultee et al. 1998; Lambert et al. 2001). Sin embargo, hay pruebas de que la igualdad de oportunidades con ms fuerza antimicrobianos que se explica por el efecto aditivo de sus principales componentes antimicrobianos; componentes menores aparecen, por lo tanto, desempean un papel importante (y Lattaoui Tantaoui-Elaraki 1994; Paster et al. 1995). Por esta razn, el presente estudio se llev a cabo utilizando toda la OE. Cuando una porcin de la igualdad de oportunidades se agita en el caldo, el aceite de la fase se separa de la fase de agua. Estabilizacin de la OE / caldo de mezcla podra mejorar la propiedades antimicrobianas. Un Otra ventaja de la utilizacin de un estabilizador podra ser inferior la concentracin de uso de la igualdad de oportunidades, reduciendo as la base de plantas aroma. A pesar de que el aroma del aceite de organo se encontr que era agradable cuando se aade a 005% (v / w) para los filetes de bacalao (Mejlholm Dalgaard y 2002) y aceptable hasta el 1% (v / w) en carne picada (Skandamis y Nychas 2001), pero puede ser menos aceptable en otras categoras de alimentos. Un aditivo inspido que mejora la eficacia de la igualdad de oportunidades, la reduccin de la concen cin necesaria para un efecto antimicrobiano, podra ampliar el perspectivas para la utilizacin de la igualdad de oportunidades como los antimicrobianos en los alimentos. El superioridad de agar bacteriolgico en comparacin con otros sustancias (DMSO, etanol, Tween-20 y Tween-80) como dispersin o agente estabilizador en la igualdad de oportunidades se ha demostrado (Remmal et al. 1993; Mann y Markham, 1998). Lecitina, un emulsionante, tambin fue elegido para la prueba como una ayuda para estabilizacin de la igualdad de oportunidades. Ambos agar y lecitina son internacionalmente

aprobadas como aditivos de determinados alimentos (http://europa. eu.int/eur-lex/en/consleg/pdf/1995/en_1995L0002_do_001. pdf, http://www.cfsan.fda.gov/dms/eafus.html). El objetivo de este estudio es seleccionar de la baha, clavo, organo y tomillo OE los ms pronunciada propiedades antibacterianas, para determinar la concentracin en la que se bacteriosttico y bactericida a E. coli O157: H7, y para evaluar el efecto de un estabilizador (agar), un emulsionante (lecitina) y de la temperatura sobre su desempeo. MATERIAL Y MTODOS Mantenimiento y preparacin de las culturas Culturas de E. coli O157: H7 cepa rr98089 fagos tipo 34 aislado de heces de bovinos se mantienen en tryptone caldo de soja agar (TSBA) sesgos a 4 C. El agar se sesgos realizado mediante la adicin de 1% (w / v) agar bacteriolgico n . 1 (Oxoid, Basingstoke, Reino Unido) a TSBA (Oxoid). Inculos se preparado por 16 h en la cultura Caldo Mueller-Hinton (MHB; Oxoid) a 37 C. La cepa de la EAE y los puertos ehly los genes y muestra enterohaemolysis en enterohaemolysin agar-agar, pero no lleva los genes de la toxina Shiga produccin. Aceites esenciales Aceites esenciales de la baha (Pimenta racemosa), clavo yema (Eugenia caryophyllata, sinnimo: Syzygium aromaticum) y el organo (Origanum vulgare) y la luz roja y tomillo aceites (tanto Thymus vulgaris) se obtuvieron a partir de C. Melchers Aceites Esenciales-Handels GmbH, Bremen, Alemania. Disco difusin de ensayo A 16-h cultura se diluye con suero fisiolgico estril solucin [PS; 085% (w / v) de cloruro de sodio] con referencia McFarland a la norma (bioMrieux, Marcy l'Etoile, Francia) para lograr un inculo de aproximadamente 10 6 UFC ml )1 . A 5 ml de este inculo se coloc sobre la superficie de pre-secado Mueller agar-Hinton (MHA; Oxoid) y placas de permanecer en contacto durante 1 min. Se elimin el exceso de inculo usando una jeringa estril y la placas se deja secar durante 20 minutos a temperatura ambiente. Estriles de 6 mm de discos de papel de filtro (Schleicher y Schuell, Dassel, Alemania) fueron colocados en las placas e inmediata mente 15-ll porciones de los aceites esenciales se han aadido. Estril PS se utiliz como control. Despus de permitir 1 h en la sala temperatura de los aceites esenciales para difundir a travs de la superficie, las placas fueron incubadas a 37 C durante 24 h. El zona de inhibicin se midi en milmetros y el ensayo se llev a cabo tres veces para cada aceite. A prueba de cualquier efecto aditivo entre los tres ms inhibitoria aceites (organo, tomillo luz, tomillo rojo) que se mezcla en el

proporciones de 1:1 y 1:1:1, y prueba de nuevo. Determinacin colorimtrica de bacteriosttico bactericida y concentraciones La igualdad de oportunidades que exhibi el mayor efecto antibacteriano en ensayo de difusin del disco (organo, tomillo luz, rojo tomillo) fueron probados para determinar las concentraciones en que fueron bacteriosttico y bactericida utilizando un microdilucin colorimtrica caldo tcnica (Salvat et al. 2001). Con el fin de las concentraciones de ensayo de 00078 al 1% (v / v) (78-10 000 ll l )1 ) 96-tres estril y microplacas con tapa (Greiner) se establecieron de la siguiente manera: en los pozos en la lnea A se colocaron 200 ll porciones del 2% de aceite esencial en estril MHB; pozos en las lneas B y H recibido 100 ll de MHB estril. Dos diluciones seriadas se llevaron a cabo a partir de la lnea A fila H y el exceso de caldo (100 ll) fue descartado de la fila H. A cada pocillo se aadir el 100 ll de inculo y Alamar Azul TM (Biosource International Inc., Camarillo, CA, EE.UU.) de acuerdo con el mtodo de Salvat et al. El inculo fue preparada con un 16-h cultura ajustar en funcin de las McFarland estndar y ms diluido con MHB a alcanzar aproximadamente el 10 6 UFC ml )1 . Un control positivo (con un contenido de inculo, pero no la igualdad de oportunidades) y un control negativo Organo inhibe la E. coli O157: H7 163 (que contiene la igualdad de oportunidades, pero no inculo) se incluyeron en cada microplaca. El contenido de los pozos fueron mixtos y la microplacas se incubaron a 10 C durante 96 h, a 20 C durante 24 horas o en 37 C durante 24 h. Un cambio de color del azul al rosa o malva era indicativo de crecimiento de las bacterias. En una extensin al mtodo de Salvat et al. alcuotas de 5 ll de los pozos restantes son de color azul en vanisado MHA y se incuba por 24 horas a 37 C. Tres repeticiones de cada microassay se y llevado a cabo el experimento se llev a cabo dos veces. La concentracin bacteriosttica se determin como la concentracin ms baja en la que las bacterias presentes en al menos cinco de los seis repeticiones, no crecen en MHB, pero fueron cultivadas cuando se siembran en MHA. La concentracin bactericida fue la concentracin ms baja en la que las bacterias presentes en al menos cinco de los seis repeticiones no crecen en MHB y no son cultivadas despus de forro en MHA. Estas definiciones han sido establecida por otros trabajadores (Smith-Palmer et al.

1998). El experimento se repiti con el uso de MHB Adems de agar bacteriolgico no. 1 (Oxoid) y con MHB la adicin de lecitina de soja (RIC Biomedicals Inc., Cleveland, OH, EE.UU.), con vistas a la estabilizacin de la igualdad de oportunidades en el caldo y, por ende, la mejora de la propiedad antibacterias vnculos. Antes de la experimentacin con el uso de dichos aditivos determina el mnimo de concentracin que se estabiliz OE en MHB (es decir, sin separacin visible de la igualdad de oportunidades dentro de las 24 h a 37 C) (datos no mostrados). La concentracin final en el microplaca pozos se 005% de agar (w / v) y 025% (w / v) lecitina. Curvas de supervivencia de E. coli O157: H7 en el presencia de organo EO A fin de evaluar el efecto bactericida de la igualdad de oportunidades con las ms bajas concentraciones bactericidas y bacteriostticos (organo) a travs del tiempo, de supervivencia (tiempo-matar) se trazan las curvas. A 16-h cultura se cosech por centrifugacin, se lava dos veces con PS y resuspendido en PS. La suspensin fue ajustada utilizando el estndar de McFarland y se diluye an ms en PS a alcanzar aproximadamente el 10 7 UFC ml )1 . EO es organo aadido a alcuotas de 9 ml, MHB en tubos en un bao de agua a 37 C en cantidades que alcanzar concentraciones de 0 (control), 78, 156, 312 y 625 l ll )1 despus de la adicin del inculo. Porciones de 1 ml de inculo se aade a continuacin a todos los tubos. Directamente despus de la adicin del inculo y despus de la incubacin para 1, 5, 10 y 15 minutos, 1 ml de una porcin de cada uno se ha retirado tubo para el conteo de colonias de dilucin decimal de peptona solucin salina fisiolgica que contengan 085% (w / v) de sodio y cloruro de 01% (w / v), peptona (Bacto TM Peptona; Becton Dickinson, Sparks, MD, EE.UU.) y enchapado en MHA. El experimento se llev a cabo dos veces. Microscopio electrnico de barrido observaciones Microscopio electrnico de barrido ( SEM ) Observaciones llevado a cabo en las clulas despus de 16 h de incubacin en MHB a 37 C. La suspensin fue dividida en dos partes y el organo EO se aadi una parte a fin de lograr una concentracin de 625 l ll

)1 . La otra porcin se deja sin tratamiento, como control. Despus de 1 min, las clulas de ambos tubos se cosechadas por centrifugacin, se lava dos veces y resuspendido en PS. Una gota de cada suspensin se filtra a travs de una membrana de policarbonato con dimetro de 1-lm poros (Costar, Cambridge, MA, EE.UU.) y las clulas se congelaron in situ utilizando nitrgeno lquido. Que se observaron con un campo emisin SEM equipado con una etapa de fro y un criopreservacin cmara de preparacin. RESULTADOS Disco difusin de ensayo La inhibicin del crecimiento medido por zonas de disco difusin mtodo se presentan en la Tabla 1. Aceite de tomillo, tanto la luz y variedades de color rojo, organo y aceite producido los ms fuertes efecto antibacteriano; baha y clavo yema activa la igualdad de oportunidades a una menor medida. El ensayo con las mezclas de los tres ms aceites inhibitoria (organo, tomillo y la luz roja tomillo) en el proporciones de 1:1 y 1:1:1 revela que no hay aparente efectos aditivos (datos no mostrados). Determinacin colorimtrica de bacteriosttico bactericida y concentraciones El bacteriosttico y bactericida concentraciones de esen aceites esenciales obtenidos por colorimtrica ensayo seguido de enchapado en MHA se presentan en la Tabla 2. Sin adicin de estabilizantes, aceite de organo expuestos los ms fuertes antibacterianos efecto de los tres aceites - tomillo luz era menos activo que organo y tomillo rojo es el menos activo. La inclusin de 005% de agar en el caldo de mejorar sustancialmente la actividad antibacteriana de los tres OE. Las diferencias en antibacterianos entre ellos se convirtieron en propiedades de menos pro Cuadro 1 propiedades antibacteriana de los aceites esenciales en contra de E. coli O157: H7 utilizando el mtodo de difusin en disco. El dimetro de la zona de incluye la inhibicin de papel disco (6 mm) Aceite esencial Dimetro de la inhibicin zona (en mm) (media SD ) Baha 187 15 Clavo yema 157 06 Organo 243 21 El tomillo, la luz 257 06 Tomillo, rojo

240 17 164 SA BURT Y RD Reinders 2003 La Sociedad para la microbiologa aplicada, las letras en Microbiologa Aplicada, 36, 162-167 Pgina 4 pero anunci la relativa actividad todava estaba en el orden organo> luz tomillo> tomillo rojo. La inclusin de lecitina redujo la actividad antibacteriana de los tres aceites muy notablemente. Un ligero efecto de temperatura se observ en caldo estabilizado por 005% de agar y, en particular, de tomillo -el bactericida y bacteriosttico concentraciones eran menores a 10 C que a 37 C. Curvas de supervivencia de E. coli O157: H7 en presencia de organo EO La supervivencia (tiempo-matar) curvas de E. coli O157: H7 en MHB en diferentes concentraciones de aceite de organo se muestran en la fig. 1. Una concentracin-efecto es evidente - 625 l ll )1 organo EO se bactericida (no se detectaron clulas viables) en 1 min. Concentraciones de 156 y 312 l ll )1 eran bactericida en 5 minutos. Con 78 l ll )1 el organo EO nmero de clulas viables se redujo en ms de 2 log factores dentro de los 5 minutos y, posteriormente, no ha cambiado en la duracin del experimento (15 min). SEM observaciones Las clulas tratadas con 625 ll l )1 aceite de organo se someti a consideracin rable alteraciones morfolgicas en comparacin con el control a la hora de observar una SEM (Fig. 2). La clula estructuras parece estar vaca de contenidos y los restos se flccida. Control de clulas en su conjunto. Si bien las muestras no estaban preparados en trminos cuantitativos, es evidente de observaciones en el poco aumento que el nmero de retenido en las clulas de la membrana fue significativamente mayor en el control que en la suspensin tratada con organo EO. DISCUSIN Organo y tomillo a la igualdad de oportunidades se encontraron exposicin ms fuerte propiedades antimicrobianas de clavo y laurel en el disco difusin de ensayo. Estudios de pruebas de la igualdad de oportunidades de la misma especie contra E. coli utilizando el mtodo de dilucin en agar (Martillo et al.

1999) y prueba (Decanos y Dorman 2000) apoyan esta clasificacin. Las concentraciones en las que el aceite de organo, en particular, ejerce un efecto colistatic y colicidal en 10, 20 y 37 C indican que puede haber posibilidades de su uso como un aditivo a los alimentos que una reduccin en el nmero o prevencin del crecimiento de E. coli O157: H7 se desea. La mejora sustancial de estas propiedades en el presencia de agar como estabilizador se supone que es atribuible a la desaceleracin de la separacin de la igualdad de oportunidades a partir de la fase de agua, lo que permitira a la ms eficaz de inhibicin de bacterias 0 1 2 3 4 5 6 7 0 3 5 8 10 11 12 13 14 15 Tiempo (min) Sobrevivientes (promedio diario UFC ml -1 ) 12 4 67 9 Fig. 1 curvas de supervivencia de E. coli O157: H7 en caldo Mueller-Hinton a diferentes concentraciones de aceite de organo a 37 C: (d) 0 ll l )1 (control), (j) 78 ll l )1 , (M) 156 ll l )1 , (S) 312 ll l )1 , (H) 625 ll l )1 aceite de organo. El lmite de deteccin de clulas viables se 14 registro UFC ml )1 . En caso de que no se recuperaron clulas viables, es el lmite de deteccin indicado Cuadro 2 bacteriosttico y bactericida concentraciones de organo y tomillo EO contra E. coli O157: H7 en MHB en tres diferentes temperaturas y con la adicin de estabilizantes

MHB MHB + 005% de agar MHB + 025% lecitina de soja Bacteriosttico concentracin Bactericida concentracin Bacteriosttico concentracin Bactericida concentracin Bacteriosttico concentracin Bactericida concentracin Aceite esencial TC ll l )1 ll l )1 ll l )1 ll l )1 ll l )1 ll l )1 Aceite de organo 10 -* 625 78 156 1250 2500 20 -625 -156 1250 2500 37 -625 -156 --

1250 Aceite de tomillo, la luz 10 625 1250 78 156 -1250 20 625 1250 78 156 -1250 37 625 1250 156 312 -1250 Aceite de tomillo, de color rojo 10 1250 2500 78 156 1250 2500 20 1250 2500 156 312 -2500 37 -1250 -312 -2500 * En caso de que no se da bacteriosttico concentracin, la concentracin ms baja que exhibi un efecto antibacteriano bactericida. Organo inhibe la E. coli O157: H7 165

 2003 La Sociedad para la microbiologa aplicada, las letras en Microbiologa Aplicada, 36, 162-167 Pgina 5 clulas. La reduccin de la actividad en presencia de la lecitina se ha caracterizado. Una posible explicacin de esta observacin es que la lecitina, en la orientacin de la misma entre micelas y aceite la fase de agua, puede haber impedido fsicamente la interac entre la igualdad de oportunidades y la clulas bacterianas. Por otra parte, es posible que la igualdad de oportunidades ejercer su efecto antibacteriano en fosfolpidos en la capa exterior de la clula bacteriana membrana y, por tanto, efectivamente neutralizada en parte por la presencia de la lecitina, una fuente adicional de fosfolpidos. Esta ltima hiptesis se apoya en el trabajo en el carvacrol, un componente de la igualdad de oportunidades fenlicos, como el organo y tomillo, que fue encontrado para causar cambios en la grasa cido-y la cabeza de la composicin del grupo fosfolpido bilayer de Bacillus cereus. subletal clulas cultivadas en con ciones de carvacrol se encontraron para sintetizar dos fosfolpidos y falta uno de los fosfolpidos (Ultee et al. 2000). En otro estudio se demostr que E. coli K-12 aumentaron el nivel de saturacin de los lpidos cuando se crecen en las concentraciones subletales de fenol y la com libras. La administracin de suplementos de los medios de cultivo con Satur cin de cidos grasos o lecitina redujo el efecto de la inhibicin los fenoles. Se supone que los cidos grasos libres de impurezas en lecitina pueden estar disponibles a E. coli para la absorcin en la celda membrana, proporcionando as un nivel de proteccin de fenlicos (Keweloh et al. 1991). Esta observacin ha consecuencias para la posible aplicacin de la igualdad de oportunidades en los alimentos y puede que en parte de las reducciones observadas en actividad antibacteriana de la igualdad de oportunidades en los sistemas alimentarios en comparacin con los resultados in vitro (Ismaiel y Pierson, 1990). Thelack ofatemperature efecto entre 10and37 Con la propiedades antibacterianas de la igualdad de oportunidades en el caldo sin estabilizador es un el fomento de la observacin, teniendo en cuenta la amplia aplicacin de baja temperatura de almacenamiento en los alimentos. Que el aceite de tomillo conserva su bacteriosttico / efecto bactericida a bajas tempera ras tambin se ha demostrado en estudios con Listeria monocy togenes (Ting y Deibel 1991, Smith-Palmer et al. 1998). Como estabilizador de agar con un ligero efecto de la temperatura se observ, en particular para la igualdad de oportunidades de tomillo, en el que el agar inducida por la mejora en el rendimiento fue mayor a 10 C que a 37 C. El agar es la matriz presumiblemente ms firme a bajo temperaturas, lo que retarda an ms la separacin del aceite andwaterphases, therebyimprovingtheantibacterialproperties. El aceite de organo en el presente estudio aparece

particularmente eficaces en relacin con el tiempo necesario para ejercer su efecto bactericida. La concentracin bactericida de organo OE sin estabilizador (625 ll l )1 ) Fue un xito en matar> 10 4 UFC ml )1 dentro de 1 minuto (no hay clulas viables recupe cin). Otros investigadores encontraron organo OE a un bactericida diferentes cepas de E. coli O157: H7 en concentraciones mayores que 005% (v / v) (500 l ll )1 ). El tiempo de matar a los resultados Sin embargo, menos importante. Cuando un nmero similar de UFC por ml )1 fueron tratados con 005% organo OE en caldo, el nmero de clulas viables disminuy en aproximadamente 2 log factores durante un perodo de das a 37 C, pero fue un total matar al parecer no se logra (Skandamis et al. 2001). Desde el SEM observaciones se desprende que, despus de la prdida de contenido, E. coli O157: H7 en las clulas tratadas con organo EO se derrumb, lo que les permiti pasar ms fcilmente a travs de los poros de la membrana de la clulas control sin tratar. Lambert et al. (2001) confirma que el carvacrol y el timol (principales constituyentes de organo EO) hacen de clulas bacterianas membranas permeables. Como se mencion antes, la composicin de la igualdad de oportunidades a partir de la misma especie de planta puede variar con la temporada de cosecha y ubicacin geogrfica. Estudios llevados a cabo con un lote de igualdad de oportunidades, sin embargo, presentan una buena reproducibilidad. (a) (b) Fig. 2 imgenes de microscopio electrnico de barrido de E. coli O157: H7 cellsafter tratamiento con aceite esencial de organo (12 000). (a) sin tratar las clulas (de control). (b) Las clulas daadas despus del tratamiento con 625 ll l )1 aceite de organo 166 SA BURT Y RD Reinders 2003 La Sociedad para la microbiologa aplicada, las letras en Microbiologa Aplicada, 36, 162-167 Pgina 6 En resumen, este estudio muestra que el organo y tomillo OE posee importantes in vitro colicidal y colistatic propiedades, que se exhiben en una amplia temperatura

alcance y se amplifican mediante la adicin de agar como estabilizador, y se podra seguir investigando para su aplicacin en el sector de la alimentacin para mejorar la inocuidad de los alimentos por la parcial o eliminacin total de E. coli O157: H7. En particular interaccin ciones con otros ingredientes alimentarios exigen ms a fondo cin con la investigacin.