UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU - UFPI CENTRO DE CINCIAS DA SADE CCS DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E FARMACOLOGIA DISCIPLINA: BIOQUMICA PARA FARMCIA

A PROFESSORA: MARIA DAS GRAAS CASTELO BRANCO SOARES

RELATRIO DA PRTICA DE BIOQUMICA REAES DE CARACTERIZAO DOS LIPDIOS

AILSON SILVA LIMA 10S19410 GESA CAROLINA 10S12180 MARCELO PEREIRA 10S20817 MARCELO DUTRA 09S14361 MIGUEL EUSBIO 10S20841

TERESINA, ABRIL DE 2011

RESUMO Nos experimentos desenvolvidos, as caractersticas dos lipdios, foram postas em evidncia a partir de reaes de caracterizao desses compostos. Foi realizada reao de saponificao (hidrlise alcalina) para produo de sal de cidos graxos tpicos (Sabo) que pode ser originado tambm por redissoluo dos cidos graxos. Esses sais foram separados por meio de cido clordrico concentrado e por injeo de sal (NaCl). Os sabes comuns so solveis em gua, mas em dada parte pode-se form-lo com carter insolvel em gua por reao no alcalina com certos sais. Levando em conta a propriedade caracterstica dos lipdios de serem insolveis em solventes polares pode-se demonstrar sua solubilidade em solvente apolar como ter e pouca solubilidade em lcool.

INTRODUO Os lipdios biolgicos constituem um grupo de compostos que, apesar de quimicamente diferentes entre si, exibem, como caracterstica definidora e comum insolubilidade em gua. As funes biolgicas dos lipdios so to diversas quanto a sua qumica. Em muitos organismos, gorduras e leos so as principais formas de armazenamento de energia. Fosfolipdios e esteris so os principais elementos estruturais de membranas biolgicas. Outros lipdios, mesmo quando presentes em quantidades relativamente pequenas, tm papis cruciais como co-fatores enzimticos, transportadores de eltrons, pigmentos que absorvem radiaes luminosas, ncoras hidrofbicas, agentes emulsificantes, hormnios e mensageiros intracelulares. (LEHNINGER, 2006). As gorduras e leos usados quase universalmente como formas de armazenamento de energia nos organismos vivos so dos derivados de cidos graxos. cidos graxos so cidos carboxlicos com cadeias carbnicas de comprimento entre 4 e 36 carbonos. Em alguns a cadeia totalmente saturada e no-ramificada; em outros, a cadeia contm uma ou mais ligaes. Alguns poucos possuem anis de trs carbonos, grupos metila ou hidroxila como ramificao. (LEHNINGER, 2006). As propriedades fsicas e qumicas dos cidos graxos e dos compostos que os contm so principalmente determinadas pelo comprimento e pelo grau de insaturao da cadeia de hidrocarboneto. A cadeia hidrocarbnica no-polar responsvel pela pequena solubilidade

em gua, mas os cidos graxos so solveis em solventes apolares como o ter. (LEHNINGER, 2006). Os cidos graxos existentes em leos ou gorduras podem reagir com uma base forte (mais comuns de Sdio (Na) ou Potssio (K)) com aquecimento e como produto dessa reao conhecida como saponificao gera um sabo que um sal de cido carboxlico e por possuir uma longa cadeia carbnica em sua estrutura molecular, ele capaz de se solubilizar tanto em meios polares quanto em meios apolares. (LEHNINGER, 2006). Os lipdios mais simples, construdos a partir de cidos graxos, so os triacilgliceris, tambm chamados triglicerdeos, gorduras ou gorduras neutras. So compostos de trs cidos graxos, cada um em ligao ster com o mesmo glicerol. Como as hidroxilas polares do glicerol e os carboxilatos polares dos cidos graxos esto unidos em ligaes ster, os triacilgliceris so molculas hidrofbicas, no-polares, essencialmente insolveis em gua. (LEHNINGER, 2006). O presente trabalho tem por objetivo demonstrar as reaes de caracterizao de lipdios atravs da hidrlise alcalina de triacilgliceris com formao do sabo, formao de sabo insolvel, separao desses sabes e solubilidade dos cidos graxos em determinados solventes.

METODOLOGIA Na primeira etapa da prtica de reaes de caracterizao de lipdios foi realiza a hidrlise alcalina de triacilgliceris. Colocou-se em um tubo de ensaio de grosso calibre (Tubo A), 10g de manteiga, 10ml de soluo alcolica de hidrxido de potssio 5% ,aquecendo esses reagentes em banho-maria 100C durante 30 minutos.

Na segunda etapa fez-se a separao de cidos graxos. Adicionou-se ao tubo da reao A, 1 ml de cido clordrico concentrado, gota a gota, sob agitao. Colocou-se novamente em banho-maria at separao de uma camada oleosa na superfcie do lquido. Posteriormente os tubos foram esfriados em gua corrente e a seguir em banho de gelo. A terceira etapa foi marcada pelo teste de solubilidade dos cidos graxos, obtidos na segunda etapa, em tais solventes: ter, lcool etlico e gua destilada. Nessa experincia foi retirada uma alquota de cidos graxos, obtidos na etapa anterior e foi distribuda a trs tubos de ensaio (A, B, C), em seguida adicionou-se a cada um desses tubos, 1 ml de ter, 1 ml de gua destilada, 1 ml de lcool etlico, respectivamente. Na quarta etapa foi verificada a formao de sabes por redissoluao de cidos graxos. Adicionou-se ao tubo da segunda experincia, 10 ml de gua destilada e 6 ml de soluo de KOH 0,5 N e foi colocado em banho-maria 100C durante 5 minutos. Na quinta etapa da prtica foi realizada a separao de sabes por salinificao. Colocou-se numa proveta 3 ml da solues de sabes obitidos na etapa anterior.Acrescentou-se gua destilada at 20 ml e adicionou-se cloreto de sdio em espcie agitando com o basto. Finalmente na quinta etapa foi verificada a formao de sabes insolveis. Preparouse dois tubos de ensaio, (A, B) contendo, respectivamente, 2 ml da soluo de sabo obtido na quarta etapa da prtica + 3 gotas da soluo de cloreto de clcio 5% e 2 ml da soluo de sabo obtido na quarta etapa + 3 gotas de soluo de acetato de chumbo 5%.

DISCUSSO Hidrlise alcalina dos triacilglicerois Quando a hidrlise realizada em meio fortemente alcalino, haver liberao de glicerol e os respectivos sais de cidos graxos. Os sais metlicos dos cidos graxos, em contraste com os cidos graxos livres, so solveis em gua e so chamados se sabes. O processo de hidrlise alcalina chamado de saponificao (CHAVES FILHO, 1989). Esta parte inicial do experimento consistiu em adicionar a um tubo de ensaio de grosso calibre (Tubo A), 10g de manteiga, 10 ml de soluo alcolica de hidrxido de potssio (KOH) 5%. A reao foi realizada quente. A hidrlise dos triacilglicerois foi evidenciada a partir da observao da solubilidade de uma alquota da mistura formada em gua. Separao dos cidos graxos A separao dos cidos graxos a partir de uma reao de dupla-troca entre o cido clordrico e um carboxilato formando um sal inorgnico e o cido graxo. Esta reao foi executada utilizando a soluo obtida na experincia anterior. Foi adicionado ao tubo A 1 ml de cido clordrico concentrado, gota a gota, sob agitao e colocado em banho-maria a 100C. Aps o resfriamento do tubo A observou-se que a soluo apresentava duas fases, uma slida flutuante e uma lquida. A fase slida era formada por cidos graxos. Solubilidade dos solventes Segundo Chaves Filho (1989), cidos graxos so cidos presentes em quase todos os tipos de lipdios. De um modo geral so monocaboxlicos e de nmero par de tomos de carbono. Possuem uma cadeia hidrocarbonada (apolar, hidrofbica) e um grupo carboxlico (polar hidroflico). A solubilidade destes cidos orgnicos em solventes polares depende do

tamanho da cadeia hidrocarbonada. Diante disso os cidos graxos obtidos no experimento anterior fora distribudos em trs tubos contendo solventes diferentes. No tubo A que continha 1 ml de ter os cidos graxos solubilizaram completamente, pois o ter apolar; No tubo B que continha 1ml de gua destilada os cidos graxos no dissolveram, pois este solvente polar; No tubo C que continha 1 ml de lcool os cidos graxos solveram completamente. Formao de sabes por redissoluo dos cidos graxos Nesta etapa foi adicionado ao tubo da segunda experincia, 10 ml de gua destilada e 6 ml de hidrxido de potssio(KOH) 0,5 N. Aps retirar-se o tubo do banho-maria e agit-lo, observou-se a presena de espuma na superfcie da soluo, fato que evidencia a ocorrncia da reao. Separao dos sabes por salificao Esta etapa da prtica consistiu em saturar a soluo de sabes do experimento acima utilizando eletrfilos fortes (NaCl), para separar os sabes da soluo. Procedeu-se inicialmente adicionando 20 ml de gua destilada e cloreto de sdio (NaCl) em espcie e agitando com o basto at saturao. Observou-se aps agitao a presena de corpo de fundo, pois o sal adicionado ultrapassou o coeficiente de solubilidade da gua. J os sabes formavam um faze bem definida na superfcie da soluo. Formao de sabes insolveis A formao de carboxilatos insolveis ocorre a partir de reaes de dupla-troca entre sabes e sais como cloreto de clcio (CaCl2) e acetato de chumbo(CH3COO)2Pb. Neste experimento foram utilizados dois tubos (A, B), cada um contendo 2 ml de soluo de sabo obtida no experimento quatro. Tubo A: 2R-COOK + CaCl Tubo B: 2R-COOK + (CH3COO)2Pb (R-COO)2Ca + 2KCl (R-COO)2Pb + 2CH3COOK

RESULTADOS TABELA 1.0: HIDRLISE ALCALINA DOS TRIACILGLICERIS. TERESINA, 2010. SOLUO TEMPO MANTEIGA + SOLUO 30 MIN ALCOLICA DE FORMAO DO SABO SIM

HIRXIDO DE POTSSIO FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1 TABELA 2.0: SEPARAO DOS CIDOS GRAXOS. TERESINA, 2010. TUBO DA REAO 1.0 SOLUO SABO + CIDO OBSERVOU-SE CLORDRICO UMA CAMADA

CONCENTRADO

SLIDA OLEOSA

UMA

FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1 TABELA 3.0 : SOLUBILIDADE DOS SOLVENTES. TERESINA, 2010. TUBO A SOLUO C. GRAXOS + TER SOLUBILIDADE SOLVEL

FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1

TABELA 3.0 : SOLUBILIDADE DOS SOLVENTES. TERESINA, 2010. B C C. GRAXOS + GUA INSOLVEL DESTILADA C. GRAXOS + LCOOL POUCO SOLVEL

ETLICO FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1 TABELA 4.0: FORMAO DE SABES POR REDISSOLUO DOS CIDOS GRAXOS. TERESINA, 2010. SOLUO TUBO DA REAO 2.0 + GUA DESTILADA + TEMPO 5 MIN OBSERVOU-SE FORMAO DE UM

KOH

SLIDO

FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1 TABELA 5.0: SEPARAO DOS SABES POR SALIFICAO. TERESINA, 2010. SOLUO OBSERVOU-SE

DA REAO 4.0 + GUA PRECIPITAO DE NaCl DESTILADA + CLORETO DE SDIO FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1 TABELA 6.0: FORMAO DE SABES INSOLVEIS. TERESINA, 2010. TUBO A SOLUO REAO 4.0 + CaCl2 OBSERVOU-SE UM PRECIPITADO

FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1

TABELA 6.0: FORMAO DE SABES INSOLVEIS. TERESINA, 2010 B REAO 4.0 + ACETATO UM PRECIPITADO DE CHUMBO FONTE: LABORATRIO DE BIOQUMICA-UFPI, ALUNOS DE FARMCIA, 2010.1

CONCLUSO Atravs da prtica de reaes de caracterizao dos lipdios podemos identificar as propriedades fsicas (como solubilidade) e qumicas (reatividades e separaes) caractersticas desses compostos. Com a hidrlise alcalina dos triacilgliceris ocorreu formao de sabo (saponificao) que pode ser separado por cido clordrico concentrado ou por salificao. Esses cidos graxos aps a separao podem retornar a formar sabo atravs da redissoluo com outra base. Ainda tambm ocorreu formao de um sabo insolvel atravs de reao no alcalina.

REFERNCIAS CHAVES FILHO, Manoel. Apostila de bioqumica. Teresina: UFPI, 89. p. 36-60. NELSON, David L.; COX, Michael M. Princpios de bioqumica. 4 ed. So Paulo: Sarvier, 2006.p. 236.