Prctica: Calidad microbiolgica del aire MUESTREO Y ANALISIS DE LA CALIDAD MICROBIOLOGICA DEL AIRE Los aerosoles atmosfricos se definen

como la dispersin de sustancias slidas o lquidas en el aire, entre ellos se encuentran los bioaerosoles, partculas aero-transportables vivas o que se originan de organismos vivos, tales como, partculas cultivables, no cultivables y microorganismos muertos, fragmentos, txinas y productos de desechos de todas las variedades de seres vivientes. El tamao de partcula de los bioaerosoles puede oscilar entre 1 y 100, por supuesto las partculas ms grandes se depositan muy cerca al sitio donde se originan y las partculas ms pequeas permanecen por mayor tiempo pululando en el aire y son llevadas a grandes distancias a merced de los vientos. Teniendo en cuenta que diariamente una persona promedio inspira 10000 litros de aire, la exposicin a los bioaerosoles es permanente. Muchos ambientes interiores presentan condiciones fsicas y biolgicas que favorecen la propagacin de bioaerosoles y en consecuencia la posible asociacin con problemas de carcter infeccioso o alrgico. Por lo tanto los estudios que pretenden diagnosticar el estado biolgico del aire ambiente son cada vez ms comunes y estn encaminados a definir el carcter saludable o no de los edificios y de la atmsfera en general, en especial aquellas que estn influenciadas por diferentes sistemas de tratamiento biolgico. Toma de muestras de aire Al seleccionar un mtodo de muestreo se debe tener en cuenta: las caractersticas del ambiente a evaluar, la seleccin de los sitios de muestreo representativos de ese lugar, la seleccin y disponibilidad del mtodo de muestreo. Entre los mtodos por impactacin, el ms comnmente usado es el Impactador de cascada Andersen, que define la microbiota del aire por nmero y tamao de partculas viables. La concentracin de microorganismos en el aire est influenciada por la Temperatura y la Humedad Relativa, por lo tanto son parmetros de medida obligada al momento de tomar las muestras. Seleccin de sitios de muestreo La seleccin de los sitios de muestreo depende de la intencionalidad del estudio, de la extensin y distribucin del rea a muestrear. Cuando se pretende evaluar la calidad del aire interno se deber incluir un sitio de muestreo externo y una muestra de las superficies, debido a que ellas proveen de manera permanente partculas a la atmsfera, con estos datos se podrn dar algunas recomendaciones y posibles medidas de control. Tiempo de muestreo El tiempo de muestreo est directamente relacionado con la concentracin esperada de bioaerosoles, el flujo de aire del muestreador y el estrs del muestreo sobre los bioaerosoles. Aunque el impactador de cascada Andersen, est diseado para muestrear hasta 30 min, el tiempo recomendado de muestreo para atmosferas normales es de 5 minutos. Impactador de cascada Andersen Este equipo est fabricado en aluminio y consta de 6 fases, cada una con 400 orificios, cuyo tamao de poro es constante en cada fase pero son ms pequeos en cada fase subsecuente, el dimetro de poro va

desde 1.81 mm en la primera fase a 0.25 mm en la fase 6. En cada fase se coloca una caja de petri con el medio de cultivo seleccionado. Cuando el aire pasa a travs del equipo, mediante una bomba de vaco cuya rata de flujo es de 28.3 L/min, mltiples chorros de aire son impactados directamente sobre la superficie del agar; cualquier partcula que no haya sido colectada en la primera fase sigue la corriente de aire alrededor de la caja de petri hacia la prxima fase. La captacin se basa en la inercia de las partculas, en el primer nivel se separan las partculas de mayor tamao; las de menor tamao, cuya inercia no es lo suficientemente grande, son arrastradas por la corriente de aire que pasa al siguiente nivel, al aumentar la velocidad tambin aumenta la inercia de las partculas arrastradas, algunas sern captadas en el segundo nivel mientras que otras seguirn en el aire pasando al tercer nivel, y as sucesivamente. El resultado final es una separacin por tamao de partcula. El tamao de poro y el rango de tamao de partcula en cada fase son: Fase del muestreador 1 2 3 4 5 6 Medios de cultivo: En este mtodo de impactacin, se utilizan medios de cultivo slidos de propsito general, tales como el agar soya tripticasa, agar nutritivo, agar plate count para el recuento de bacterias (suplementados con cicloheximida para inhibir el crecimiento de hongos) y agar saboureaud o extracto de malta para el recuento de hongos (suplementados con cloranfenicol para inhibir el crecimiento de bacterias). Los medios de cultivo selectivos no son recomendados porque inhiben la reparacin y crecimiento de las clulas injuriadas. Materiales Y Equipos 1. Impactador de cascada Andersen 2. Mechero 3. Alcohol isoproplico al 70 % 4. Gasa 5. Placas de petri con agar Plate count (6 por sitio de muestra) 6. Placas de petri con agar Sabouraud con cloranfenicol (6 por sitio de muestra) 7. Incubadora a 30 C Muestreo 1. Elegir el lugar donde se har el muestreo 2. Desinfectar el Impactador de cascada Andersen con una gasa impregnada de alcohol isoproplico. 3. Agotar el residuo de alcohol del impactador con el mechero 4. Colocar las placas de petri en cada fase del impactador de cascada Andersen Tamao de poro (mm) 1.81 0.91 0.71 0.53 0.34 0.25 Rango de tamao de partculas () 7.0 4.7 7.0 3.3 4.7 2.1 - 3.3 1.1 2.1 0.65 1.1

5. Muestrear el sitio durante 5 minutos. 6. Finalizado el tiempo de muestreo, marcar las placas e incubar segn se requiera (hongos: a temperatura ambiente de 5- 7 das, bacterias a 25 C por 24 48 horas) Anlisis e Interpretacin de Resultados Tiempo y temperatura de incubacin: para el recuento de bacterias mesfilas, se recomienda una incubacin de 24 48 horas a 30 C; en caso de buscar microorganismos patgenos la incubacin deber hacerse a una temperatura de 37 C en ambiente de CO 2 por 24 48 horas; para el recuento de hongos la incubacin deber hacerse a 25C por 5 7 das. Luego del tiempo de incubacin se examinan los cultivos y se hace el recuento de colonias dejando el respectivo registro por fase del muestreador y posteriormente la identificacin de hongos con azul de lactofenol. Los resultados de las pruebas se reportan en trminos del nmero promedio de partculas viables/ m 3 de aire, el cual se calcula con la siguiente ecuacin:
Pr omedio de Partculas Viables / m 3 = Numero Total de Colonias / Sitio de Muestreo Tiempo de Muestreo xVolumen de Aire Muestrado

Y en trminos del porcentaje de partculas viables por fase del muestreador, el cual se calcula con la siguiente ecuacin:
% partculas viables / Fase = N o Total partculas viables / fase x 100 N total de partculas viablestodaslasfases
o

INTERPRETACION DE RESULTADOS La concentracin de los microorganismos en la atmosfera es aleatoria y est influenciada por la poca estacional (invierno, verano, etc), por las actividades que se realizan en el ambiente, por el nmero de personas que se encuentran comnmente en el lugar, entre otros, por lo tanto la dificultad en establecer valores o criterios guas especficos para la calidad microbiolgica del aire. No obstante hay algunos criterios que permiten valorar la calidad del aire son los siguientes: Que la flora del aire normal interior sea similar a la del aire del ambiente exterior La existencia de organismos en niveles significativos y mayores a los del exterior significa que hay una fuente contaminante Algunos microorganismos no deben estar en ambientes interiores Algunos valores numricos importantes, han sido recomendados por algunas agencias internacionales, tales como: La ACGIH (American Conference of Governmental Industrial Hygienists) y son los siguientes: > a 50 UFC/m3 de aire es preocupante si solo existe una especie Hasta 150 UFC/ m3 de aire es Aceptable si las especies son similares a las del exterior Hasta 500 UFC/ m3 de aire es Aceptable en verano si las especies son similares a las del exterior. NIOSH (National Institute for Occupational Safety and Health) establece que concentraciones de bacterias o de hongos en el aire merecedores de atencin para definir acciones preventivas o de correccin es de: < a 1000 UFC/ m3 de aire de bacterias o de hongos.