EXTRACCIN DE ADN

OBJETIVOS Observacin de que la estructura de la cromatina es filamentosa, por lo que cuando aislamos ADN, este aparece a nuestros ojos como pequeos hilos.

La base material de la herencia es el ADN, sustancia cida que se encontr en el ncleo de las clulas eucariotas (de ah el nombre de cido nucleico). All, se asocia a protenas formando los filamentos de cromatina (visibles cuando la clula est en reposo) que se enrollan sobre s mismos para dar lugar a los cromosomas, que son visibles cuando la clula se divide. MATERIAL

Material de Laboratorio

Reactivos Material biolgico

Mortero Matraz pequeo Gasas Pipeta y propipeta Probeta Vaso de precipitado Varilla de vidrio, preferentemente de seccin cuadrada Gasa o tela para filtrar, tambin puede usar un filtro de caf. Arena lavada Cloruro sdico 2M SDS o Detergente de lavavajillas Etanol a 96 fro Hgado de pollo

1.

PROCEDIMIENTO
Corta un trozo de hgado de ternera o de pollo de unos tres centmetros de lado (unos l0 g de peso) y prtelo en fragmentos lo ms pequeos posible (figura1). Depostalos en un mortero, al que aadirs unos 50 ml de agua y unos gramos de arena lavada fina. Muele el material hasta que se transforme en una masa semilquida de aspecto homogneo (figura 2). Si dispones de batidora, es preferible obtener el extracto batiendo en ella el hgado y el agua; conseguirs romper las membranas celulares.

FIGURA 1

FIGURA 2

2.

Deja reposar la mezcla para que sedimenten las partculas de arena y los restos de tejido ms gruesos. Toma el sobrenadante y virtelo sobre un matraz pequeo, a travs de un embudo en el que habrs dispuesto como filtro un par de trozos de gasa o de tela. Repite la operacin de filtrado varias veces, pasando a otro matraz, hasta que queden separados todos los restos de partculas slidas del tejido y dispongas, al menos, de unos l0 ml de extracto filtrado (figura 3). Mide el volumen final de filtrado que has obtenido con la probeta (figura 4).

FIGURA 3
3.

FIGURA 4

Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M. Con ste medio hipertnico conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina (figura 5). Mezcla

y deja actuar unos minutos.

FIGURA 5
4.

FIGURA 6

A continuacin se aade 1 centmetro cbico de SDS (figura 6). (Nota: Si no se dispone de este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas, tipo Mistol o similar). La accin de este detergente inico es formar un complejo con las protenas y separarlas del ADN. As nos quedar el ADN libre de las protenas que tiene asociadas. Mezcla suavemente y deja en reposo cinco minutos. Observa la formacin de una fina telilla. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. Aadir 50 centrmetros cbicos de alcohol de 96 muy fro. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale despacio por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN (figura 7). Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin. En la fotografa nmero 9 se indica con mayor precisin las capas. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN (figura 8).

5.

6.

FIGURA 7

FIGURA 8

7.- Resuspender elADN obtenido en etanol en un tubo de ensayo. CUESTIONES Al finalizar la experiencia se obtiene un mucus blanco y fibroso que sera el ADN. Es posible que la molcula de ADN se visualice a simple vista? Por qu?. A partir de la respuesta anterior, qu se supone que contiene el ADN obtenido en la experiencia? Describe los resultados obtenidos y las estrategias seguidas en el proceso. De qu fuentes se puede extraer ADN? Encontrariamos diferencias si hubiesems extrado el ADN de una muestra vegetal?

FIGURA 9