AMONIO-L3K

Nmeros de catlogo: 233-10 Presentaciones: 2 x 20 mL + 1 x 15 mL

USO Para la determinacin cuantitativa in vitro de amonio en plasma. PRECAUCION S24/25: Evitar el contacto con la piel y ojos. REACTIVOS Reactivo Amonio-L3K: solucin que contiene un amortiguador (pH 8.0 a 25C), 10 mmol/L de -cetoglutarato, al menos 6 KU/L de GLDH (microbiano), 0.2 mmol/L de NADPH anlogo, estabilizadores y un conservador. Estndar de Amonio: 1 x 15 mL de una solucin de sulfato de amonio, (amonio) 294 mol/L (5.0 g/mL). RESUMEN DE LA PRUEBA El amonio circulante en personas normales es relativamente bajo, a pesar del hecho de que el amonio se produce continuamente a partir de la dieta y del metabolismo de los aminocidos. Las determinaciones sricas de amonio se han utilizado en el diagnstico de coma asociado con disfuncin heptica causada por cirrosis y neoplasmas. La determinacin de amonio es muy til en el diagnstico y pronstico de Sndrome de Reye. El anlisis de amonio en sangre siempre ha sido un proceso tedioso y que consume mucho tiempo. Los anlisis de amonio por lo general se han basado en dos enfoques: la difusin del amonio desde un medio alcalino con atrapamiento en cido (1) o la separacin del amonio de una muestra utilizando una resina de intercambio inico (2). El anlisis de DCL es un mtodo enzimtico (3) que no requiere de la preparacin de la muestra y emplea glutamato deshidrogenasa y un anlogo de NADPH estabilizado (4) que es fcil de usar y aplicable en analizadores de rutina. PRINCIPIO GLDH -Cetoglutarato + NH4+ + Cofactor reducido L-glutamato + cofactor + H2O El amonio reacciona con el -cetoglutarato y el cofactor reducido para formar L-glutamato y el cofactor. La reaccin es catalizada por la glutamato deshidrogenasa. La disminucin en absorbancia debida a la oxidacin del cofactor reducido puede medirse a 340 nm o 380 nm, y es proporcional a la concentracin de amonio. PREPARACION DEL REACTIVO Listos para su uso. ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO Los reactivos incluidos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas y almacenados a 2-8C. Amonio-L3K Pgina 1 de 4

DETERIORO DEL REACTIVO La solucin del reactivo debe ser clara. La turbidez indica deterioro. EQUIPO Y MATERIALES Materiales proporcionados Se proporcionan los reactivos para la determinacin de amonio. Materiales requeridos Espectrofotmetro o analizador capaz de leer la absorbancia con exactitud a 340 o 380 nm. RECOLECCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA Plasma fresco, claro, no bemolizado, con EDTA o heparinizado (no utilizar heparina con amonio) La exactitud de la determinacin de amonio depende en gran medida de la recoleccin de la muestra. El suero no es una muestra aceptable. Se recomienda recolectar el plasma de una vena sin estasis en un tubo al vaco con EDTA o heparina (no heparina con amonio). Libere el vaco residual inmediatamente, coloque la muestra en hielo y procselo en el laboratorio tan pronto como sea posible. Separe el plasma de la muestra sin dilacin. No use muestras hemolizadas. El anlisis de amonio debe llevarse a cabo antes de 30 minutos. Las muestras para amonio pueden almacenarse bien cerradas hasta por 2 horas a 2-8C o por 24 horas a -20C. (5) LIMITACIONES E INTERFERENCIAS Evite la contaminacin por amonio del ambiente del laboratorio. Los metales pesados interferirn en la reaccin al inhibir la GLDH. Se evaluaron las interferencias para este mtodo de amonio debidas a ictericia, lipemia y hemlisis en un analizador Hitachi 911 utilizando un criterio de importancia de variancia >10% a partir del control. No se encontr interferencia importante por ictericia a concentraciones de bilirrubina de 0-684 mol/L (0-40 mg/dL) en una muestra de amonio con 167 mol/L (2.8 g/mL). Se analizaron las concentraciones de intralpidos de 0-1000 mg/dL [0-33.87 mmol/L (0-3000 mg/dL) de triglicridos] con resultados aceptables a niveles de 250 mg/dL de intralpidos [8.46 mmol/L (750 mg/dL) de triglicridos] en una muestra de amonio con 154 mol/L (2.6 g/mL). No se encontr interferencia importante por cido ascrbico a concentraciones de ste a partir de 0-3000 g/dL en una muestra de amonio con 147 mol/L (2.5 g/mL). Las concentraciones plasmticas de piruvato de hasta 0.75 mmol/L (6.6 mg/dL) no causaron interferencia. No deben utilizarse muestras bemolizadas ya que los eritrocitos contienen cantidades ms grandes de amonio que las encontradas en el plasma (5). Puede consultar un resumen de la influencia de las drogas en las pruebas de laboratorio clnico consultando a Young, D.S. (6). PROCEDIMIENTO Condiciones Siga las instrucciones indicadas para la adaptacin de la tcnica a analizadores automatizados especficos o contacte al servicio tcnico de DCL para determinar los parmetros especficos del instrumento. Analizador automatizado Longitud de onda (Primaria) .....................................340 nm o 380 nm (Secundaria).................................660 nm Temperatura .......................................37C Paso de luz .........................................Depende del instrumento Tipo de reaccin .................................Punto final Tiempo de reaccin ............................10 min Volumen de muestra...........................20 L Volumen de reactivo ...........................230 L Volumen total ......................................250 L Relacin muestra/reactivo ..................1:11 Amonio-L3K Pgina 2 de 4

CALIBRACION Se incluyen un estndar de amonio y debe usarse conforme a las instrucciones para calibrar el procedimiento. CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar dos niveles de control segn se requiera. Los resultados debern caer dentro de 2 desviaciones estndar del valor establecido. CALCULOS El analizador calcular la concentracin de amonio en cada muestra. VALORES DE REFERENCIA (7) 12-47 mol/L (0.20-0.80 g/mL) Se sugieren estos valores como referencia. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal para el rea donde est localizado. CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO Estas caractersticas de rendimiento se obtuvieron en los laboratorios de DCL procedimientos automatizados en un Hitachi 911, a menos que se indique los contrario. Resultados Las concentraciones de amonio se expresan en mol/L (g/mL). Para convertir g/mL a mol/L, multiplique por 58.71. Estudio de recuperacin Se agreg amonio a un grupo de plasmas humanos para aumentar la concentracin de amonio en 10.6 mol/L (0.18 g/mL) y 27.0 mol/L (0.46 g/mL). La recuperacin del amonio agregado promedi 102%. Rango de Linealidad (NCCLS EP6-P) La linealidad del procedimiento descrito es de 1175 mol/L (20 g/mL). El lmite inferior de deteccin del procedimiento descrito es de 5.8 mol/L (0.1 g/mL). Estos datos aportaron resultados en un rango reportable de 5.8-1175.0 mol/L (0.1-20.0 g/mL). Estudios de Precisin (NCCLS EP5-T2) Los datos fueron recopilados de 3 estndares acuosos en 40 corridas durante 20 das.
Nivel mol/L 48.01 125.23 337.29 g/dL 0.819 2.133 5.745 DE Total mol/L 3.76 4.40 5.81 g/dL 0.064 0.075 0.099 CV Total % 7.9 3.5 1.7 DE dentro de la corrida mol/L 2.64 2.64 2.58 g/dL 0.045 0.045 0.044 CV dentro de la corrida % 5.6 2.1 0.8

Exactitud (NCCLS EP9-P) Se hizo una comparacin del desempeo de este mtodo (y) en un HItachi 911 con el de un mtodo similar para amonio en un Cobas Mira. Las muestras de plasma de 40 pacientes oscilaron de 11.1-811.4 mol/L (0.1913.82 g/mL) dando un coeficiente de correlacin fue de 0.9990. El anlisis de regresin lineal dio la siguiente ecuacin: Este mtodo = 0.95 (mtodo similar de amonio) 0.8 mol/L (-0.01 g/mL) Estas caractersticas de rendimiento se obtuvieron en los laboratorios de DCL aplicando procedimientos automatizados Amonio-L3K Pgina 3 de 4

DESECHO Diluya con grandes volmenes de agua, deseche en el sistema de drenaje conforme a las regulaciones federales, provinciales, estatales y locales. REFERENCIAS 1. Conway, E.J., Biochem J. 29:27 (1935). 2. Kingsley, G.R., and Tager H.S., Standard Methods of Clinical Chemistry 6:115, Washington D.C. 1970, American Assoc. of Clinical Chemistry. 3. Ratcliff, C.R,, and Hall, F.F. Selected Methods of Clinical Chemistry 9:85, Edited by Willard R. Faulkner and Samual Meites, American Association for Clinical Chemistry, Washington D.C. (1982). U.S. Patent No. 5,801,006. 4. Tietz, N.W., Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd Edition, W.B. Saunders, Philadelphia, PA (1999). 5. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press, Washington, Third Edition, (1990). L3K es una marca registrada de Diagnostic Chemicals Limited.

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